שימוש באלקטרודה דו-קוטבית ליצירת מודל עכבר אפילפסיה של האונה הרקתית על ידי הצתה חשמלית של האמיגדלה

פרוטוקול זה הציע מודל של אפילפסיה עם אמיגדלה כמקור. זה סולל את הדרך לחקר מבני האונה הרקתית mesial. מודל זה יכול להתפרש כבסיס לניסוי.

מכיוון שפרוטוקול זה הוא שיטה זולה ויעילה, כך שניתן לבצע אותו במהירות ברוב המעבדות. מי שידגים את ההליך יהיה יונגצ'אנג לו, סטודנט לתואר שני במעבדה שלנו. התחילו באיסוף הרכיבים שהוכנו מראש, החל מחתיכות באורך שני סנטימטרים של חוט טונגסטן מצופה טפלון בקוטר דוב של 76.2 מיקרומטר.

חתיכה אחת של חוט כסף בקוטר דוב של 127 מיקרומטר באותו אורך וסט אחד של שניים על ידי שני סיכות חבל מדידים. השתמש במצית כדי לשרוף קצה אחד של כל חוט טונגסטן כדי להסיר חמישה מילימטרים מציפוי הבידוד. מקלפים קטע של חוט רב-גדילי דק במיוחד.

שחררו את העטיפה מהקצה התחתון לקצה העליון, שם מתחיל להחשיך, והמשיכו למעלה. שלבו את החוט הדק במיוחד הזה עם חוט הטונגסטן על ידי צביטה של קצה אחד וסיבוב עדין של השני, מה שמאפשר לחבר בקלות את שני החומרים זה לזה. משוך בעדינות כדי לוודא שהחוטים עטופים היטב וחתך את החוט הדק במיוחד.

נסו לשמור על חוט טונגסטן ישר לאורך כל התהליך. קבע את סיכת החבל למהדק על שולחן הריתוך כאשר הצד הארוך יותר של הפינים פונה כלפי חוץ. השתמש במחט המזרק כדי להרים משחת הלחמה ולמרוח אותה על הסיכות.

מחממים את לפיד הריתוך ל 320 מעלות צלזיוס. המיסו ומרחו חוט פח נטול עופרת עם קצה הלפיד. חפפו את הקצה העליון של חוט הטונגסטן עם מחט אחת של סיכות החבל והשתמשו בהלחמה שעל הפנס כדי לחבר את חוט הטונגסטן לסיכה.

רתכו חוט טונגסטן נוסף ועוד חוט כסף לסיכת החבל באותו אופן, כך שכל חוט יתאים למחט. חותכים שני צינורות מתכווצים בחום מעט יותר מהקצה העליון של חוט הטונגסטן. הניחו אותם על מפרק ההלחמה של שני חוטי טונגסטן וודאו שהחלק המוליך מכוסה במלואו בצינור, כך שהמעגל של שני חוטי הטונגסטן אינו ממוקם בסדרה.

הסר את האלקטרודה ממהדק שולחן הריתוך והחזק את האלקטרודה בעדינות עם צבת גדולה מכיוון שקל לאלקטרודות לאבד את צורתן בעת חימום הצינור המתכווץ. השתמש מהדק מוליכות תרמית טוב עם קצת יותר כוח. הפעל את צינור האוויר וחמם עד שמגיעים לטמפרטורה של 320 מעלות צלזיוס.

פוצצו את הצינור המתכווץ בחום למשך מספר שניות עד שהוא מהודק. חזקו את האלקטרודה בדבק נמס חם. החזיקו את שני חוטי הטונגסטן וסובבו אותם זה לזה, תוך שמירה על קצותיהם בנפרד.

חתוך את חוטי הטונגסטן המעוותים לאורך של כ -10 מ"מ כך שההפרדה בקצוות לא תעלה על 0.5 מילימטר. בדוק את האלקטרודות עם רב מטר על ידי הנחת מוט אחד של רב מטר על הצד הלא מרותך של פיני החבל ולגעת בעדינות בקצה חוט טונגסטן או חוט כסף למוט השני. בדיקה אם המעגל חלק.

ודא שהקווים אינם ממוקמים בסדרות. יש לקלף חמישה מילימטרים מעור הבידוד בכל קצה ולחשוף את חוט המתכת שבתוכו. הוסף קטע של צינורות מתכווצים בחום לכל חוט מתנע.

רתך כל חוט באמצעות תקע מחבר התקן EEG. כווצו את הצינור המתכווץ בחום עם אוויר חם. הוסף קטע של צינור מתכווץ בחום לכל חוט רוטור.

הבריגו יחד את החלקים המוליכים של החוטים האדומים והכתומים וריתכו אותם למפרק ולראש כך שיתאים לסיכת החבל. רתכו את שני החוטים האחרים על הכותרת לכל מפרק. שקלו את העכבר.

כאשר העכבר מורדם לחלוטין, יש לגלח את השיער מהעין לאזור האוזן בעזרת סכין גילוח. תקן את העכבר על המסגרת הסטריאוטקסית. הכניסו את השיניים העליונות הקדמיות למוט החותכות והכניסו את שתי מוטות האוזניים לעומקים שווים לתוך האוזניים.

החל משחת עיניים אריתרומיצין על העיניים כדי למנוע יובש ועיוורון הנגרמים על ידי אור בהיר במהלך הניתוח. לחטא את אזור הניתוח לפחות שלוש פעמים עם מקלונים לסירוגין של יודופור ו 75% אלכוהול. בצע חתך אורכי כדי לחשוף באופן מלא את אזור הניתוח או לבצע חתך משולש כל עוד הוא חושף את הפונטנלים הקדמיים והאחוריים ואת אתרי השתלת האלקטרודות.

גלגלו חתיכת כותנה קטנה לכדור והרטיבו אותה במי חמצן 3%. הסר את הרקמה הרכה המחוברת לגולגולת על ידי שפשוף עדין של האזור החשוף עם כדור צמר גפן קטן עד למראה הפונטנל הקדמי והאחורי. כוונן את הגבהים הקדמי והאחורי כך שהפונטנל הקדמי והאחורי יהיה אופקי.

שקול את המיקום של פונטנל קדמי להיות המקור של הצירים. קבע בורג נירוסטה לגולגולת המוח הקטן השמאלית. הגדר את הקואורדינטות להדלקת האמיגדלה מהברגמה וכוונן את המכשיר הסטריאוטקסי כדי לאתר נקודה זו ולסמן אותה.

קדח חור במקום הצעדה עם מקדח גולגולת בקוטר 0.5 מילימטר. תקן את האלקטרודות למוט האיתור של המכשיר הסטריאוטקסי. הניחו את האלקטרודה אנכית מעל החור והורידו את המיקום למינוס 4.9 מילימטרים באיטיות.

עטפו את חוט הכסף סביב הבורג שלוש פעמים. מקפידים לא לטלטל את גוף האלקטרודה במהלך הפעולה. מערבבים מלט דנטלי ומורחים אותו בעדינות על האלקטרודה ומשטח הגולגולת.

כאשר המלט הדנטלי מתקשה, שנו את החלק החיצוני עד שהמלט התוחם את האלקטרודה הקבועה יהפוך לחרוט. לאחר מכן שחרר את האלקטרודה מהמכשיר הסטריאוטקסי. הסר את העכבר והחזיר אותו לכלוב.

שמירה על הפרדה משאר העכברים. שים את העכבר בקופסה מותאמת אישית עם כבלים מחליקים המחברים את האלקטרודה על ראש העכבר ואת מכשיר ה- EEG. העבר את הכבל דרך חור במכסה הקופסה והתאם את האורך שנותר בתיבה כדי לאפשר לעכבר לנוע בחופשיות.

הפעל את מכשיר ה- EEG וודא שהוא פועל כראוי. הגדר את פרמטרי הממריץ כך שיספקו פעימות גל מונופאזיות מרובעות של אלפית שנייה אחת ב- 60 הרץ למשך רכבת של שנייה אחת למשך 10 מחזורי גירוי. התחל עם עוצמת זרם של 50 מיקרואמפר לגירוי הראשון.

עקוב אחר ה- EEG לאחר פריקה המאופיינת בדוקרנים בתדר גבוה. אם לא נצפתה הפרשה לאחר הפריקה, יש להוסיף 25 מיקרואמפר לגירוי הבא ולהמשיך בתהליך זה כל 10 דקות עד שנצפתה הפרשה לאחר מכן ונמשכת חמש שניות. לעורר את העכבר עם עוצמת הנוכחי שנקבעה כל 15 דקות, לא יותר מ 20 פעמים ביום.

עקוב אחר התגובות ההתנהגותיות לגירוי. ניתוח השתלת האלקטרודות בוצע בשישה זכרים בוגרים בריאים C57 6 עכברים שחורים וגירוי חשמלי בוצע שבועיים לאחר הניתוח. רמת ההתקפים ההתנהגותיים עלתה בהדרגה ככל שמספר הגירויים גדל ונרשם מספר הגירויים הדרושים להדלקה מלאה.

בדיקת EEG לאחר הפרשות נמשכה חמש עד 15 שניות. לאחר מכן התגברו ההפרשות הספונטניות התוך גולגולתיות והחלו תסמינים התנהגותיים. משך ההתקפים היה בדרך כלל פחות מדקה, מה שמקטין את הסיכון למוות מעוויתות קשות וכתוצאה מכך מדום נשימה.

הביטוי של c-Fos ברקמת המוח זוהה על ידי אימונוהיסטוכימיה שעתיים לאחר הדלקה מלאה. התוצאות מראות כי הביטוי של c-Fos באמיגדלה ipsilateral גדל באופן משמעותי אימות ההיתכנות של מודל זה. ההפרדה של קצות חוטי טונגסטן לא תעלה על חצי מילימטרים, אחרת זה לא יעבור דרך חור המוח.

אורך האלקטרודה לא צריך להיות ארוך מדי, אחרת זה ישפיע על הפעילות של עכברים.