רכיבים חיוניים של Borreliella (Borrelia) burgdorferi בדיקות תמלול חוץ גופי

מערכת בדיקת השעתוק במבחנה עבור Borreliella burgdorferi מספקת כלי ביוכימי לחוקרים לחקור מנגנוני בקרה גנטיים וגורמים השולטים בפעילות האנזימטית של RNA פולימראז. המערכת מאפשרת לנו לבחון כיצד גורמי שעתוק, קו-פקטורים, ריכוזי מלחים ו-pH משפיעים על תפקוד ה-RNA פולימראז Borreliella burgdorferi, מה שתורם להבנה הכוללת שלנו של מנגנוני בקרת גנים. טכניקה רבת עוצמה זו יכולה גם לאפשר לנו לסנן תרופות המעכבות באופן סלקטיבי RNA פולימראז, ולפתוח את הדלת לפיתוח תרופות חדשניות לטיפול בבורליוזיס ליים.

כדי להתחיל, לאסוף את גלולת התא מ שניים עד ארבעה ליטר של Borreliella burgdorferi RpoC-His10X תרבית בתווך BSKII בסביבה microaerophilic לצפיפות של שניים עד ארבעה פעמים 10 קבוע למיליליטר. גלולה את התאים ב 10, 000 פעמים G במשך 30 דקות בארבע מעלות צלזיוס בבקבוקים צנטריפוגליים 500 מיליליטר ולהשליך את supernatant. לאחר מכן, השהה מחדש את התאים ב -30 מיליליטר של חיץ HN קר כקרח, חזור על שלב הצנטריפוגה, ונטרל את הסופרנטנט.