Name: ניתוח תפקוד אוטונומי של תאים של חלבון פיגור שכלי X שביר במעגל שמיעתי על ידי אלקטרופורציה של In Ovo (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 10 s
Description: חקור את הפונקציות האוטונומיות של תאים של חלבון FMRP במעגל השמיעה באמצעות אלקטרופורציה in ovo בגורי עופות. שיטה זו מאפשרת נוק-דאון סלקטיבי לחקר תסמונת X שביר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי: מענק של הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס '32000697); תוכנית המדע והטכנולוגיה של גואנגג'ואו (202102080139); קרן גואנגדונג למדעי הטבע (2019A1515110625, 2021A1515010619); קרנות המחקר הבסיסיות לאוניברסיטאות המרכזיות (11620324); מענק מחקר של מעבדת מפתח לרפואה רגנרטיבית, משרד החינוך, אוניברסיטת ג'ינאן (לא. ZSYXM202107); קרנות המחקר הבסיסיות של האוניברסיטאות המרכזיות של סין (21621054); וקרן המחקר המדעי הרפואי של מחוז גואנגדונג בסין (20191118142729581). אנו מודים למרכז הניסויים הרפואי של אוניברסיטת ג'ינאן. אנו מודים לד"ר טרה בראדלי על העריכה הקפדנית של כתב היד.

<ol><li>Hagerman, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragile+X+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Fragile X syndrome.</a> Nature Reviews Disease Primers. 3, 17065(2017).</li>
<li>Hinds, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+specific+expression+of+FMR-1+provides+evidence+for+a+functional+role+in+fragile+X+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Tissue specific expression of FMR-1 provides evidence for a functional role in fragile X syndrome.</a> Nature Genetics. 3 (1), 36-43 (1993).</li>
<li>Frederikse, P. H., Nandanoor, A., Kasinathan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragile+X+Syndrome+FMRP+co-localizes+with+regulatory+targets+PSD-95%2C+GABA+receptors%2C+CaMKIIalpha%2C+and+mGluR5+at+fiber+cell+membranes+in+the+eye+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemical+Research%22%5BJournal%5D)">Fragile X Syndrome FMRP co-localizes with regulatory targets PSD-95, GABA receptors, CaMKIIalpha, and mGluR5 at fiber cell membranes in the eye lens.</a> Neurochemical Research. 40 (11), 2167-2176 (2015).</li>
<li>Zorio, D. A., Jackson, C. M., Liu, Y., Rubel, E. W., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+distribution+of+the+fragile+X+mental+retardation+protein+in+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cellular distribution of the fragile X mental retardation protein in the mouse brain.</a> Journal of Comparative Neurology. 525 (4), 818-849 (2017).</li>
<li>Darnell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FMRP+stalls+ribosomal+translocation+on+mRNAs+linked+to+synaptic+function+and+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">FMRP stalls ribosomal translocation on mRNAs linked to synaptic function and autism.</a> Cell. 146 (2), 247-261 (2011).</li>
<li>Bakker, C. E., Oostra, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+fragile+X+syndrome%3A+insights+from+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cytogenetic+and+Genome+Research%22%5BJournal%5D)">Understanding fragile X syndrome: insights from animal models.</a> Cytogenetic and Genome Research. 100 (1-4), 111-123 (2003).</li>
<li>Hanson, J. E., Madison, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+FMR1+genotype+influences+the+degree+of+synaptic+connectivity+in+a+mosaic+mouse+model+of+fragile+X+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Presynaptic FMR1 genotype influences the degree of synaptic connectivity in a mosaic mouse model of fragile X syndrome.</a> Journal of Neuroscience. 27 (15), 4014-4018 (2007).</li>
<li>Deng, P. Y., Sojka, D., Klyachko, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+presynaptic+short-term+plasticity+and+information+processing+in+a+mouse+model+of+fragile+X+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Abnormal presynaptic short-term plasticity and information processing in a mouse model of fragile X syndrome.</a> Journal of Neuroscience. 31 (30), 10971-10982 (2011).</li>
<li>Patel, A. B., Hays, S. A., Bureau, I., Huber, K. M., Gibson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+target+cell-specific+role+for+presynaptic+Fmr1+in+regulating+glutamate+release+onto+neocortical+fast-spiking+inhibitory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A target cell-specific role for presynaptic Fmr1 in regulating glutamate release onto neocortical fast-spiking inhibitory neurons.</a> Journal of Neuroscience. 33 (6), 2593-2604 (2013).</li>
<li>Patel, A. B., Loerwald, K. W., Huber, K. M., Gibson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postsynaptic+FMRP+promotes+the+pruning+of+cell-to-cell+connections+among+pyramidal+neurons+in+the+L5A+neocortical+network%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Postsynaptic FMRP promotes the pruning of cell-to-cell connections among pyramidal neurons in the L5A neocortical network.</a> Journal of Neuroscience. 34 (9), 3413-3418 (2014).</li>
<li>Higashimori, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+deletion+of+astroglial+FMRP+dysregulates+glutamate+transporter+GLT1+and+contributes+to+Fragile+X+syndrome+phenotypes+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Selective deletion of astroglial FMRP dysregulates glutamate transporter GLT1 and contributes to Fragile X syndrome phenotypes in vivo.</a> Journal of Neuroscience. 36 (27), 7079-7094 (2016).</li>
<li>Hodges, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytic+contributions+to+synaptic+and+learning+abnormalities+in+a+mouse+model+of+Fragile+X+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Astrocytic contributions to synaptic and learning abnormalities in a mouse model of Fragile X syndrome.</a> Biological Psychiatry. 82 (2), 139-149 (2017).</li>
<li>Gonzalez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Audiogenic+seizures+in+the+Fmr1+knock-out+mouse+are+induced+by+Fmr1+deletion+in+subcortical%2C+VGlut2-expressing+excitatory+neurons+and+require+deletion+in+the+inferior+colliculus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Audiogenic seizures in the Fmr1 knock-out mouse are induced by Fmr1 deletion in subcortical, VGlut2-expressing excitatory neurons and require deletion in the inferior colliculus.</a> Journal of Neuroscience. 39 (49), 9852-9863 (2019).</li>
<li>Bland, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FMRP+regulates+the+subcellular+distribution+of+cortical+dendritic+spine+density+in+a+non-cell-autonomous+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">FMRP regulates the subcellular distribution of cortical dendritic spine density in a non-cell-autonomous manner.</a> Neurobiology of Disease. 150, 105253(2021).</li>
<li>Pfeiffer, B. E., Huber, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragile+X+mental+retardation+protein+induces+synapse+loss+through+acute+postsynaptic+translational+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Fragile X mental retardation protein induces synapse loss through acute postsynaptic translational regulation.</a> Journal of Neuroscience. 27 (12), 3120-3130 (2007).</li>
<li>Pfeiffer, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragile+X+mental+retardation+protein+is+required+for+synapse+elimination+by+the+activity-dependent+transcription+factor+MEF2%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Fragile X mental retardation protein is required for synapse elimination by the activity-dependent transcription factor MEF2.</a> Neuron. 66 (2), 191-197 (2010).</li>
<li>Deng, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FMRP+regulates+neurotransmitter+release+and+synaptic+information+transmission+by+modulating+action+potential+duration+via+BK+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">FMRP regulates neurotransmitter release and synaptic information transmission by modulating action potential duration via BK channels.</a> Neuron. 77 (4), 696-711 (2013).</li>
<li>Yang, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+molecular+locus+for+normalizing+dysregulated+GABA+release+from+interneurons+in+the+Fragile+X+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Identification of a molecular locus for normalizing dysregulated GABA release from interneurons in the Fragile X brain.</a> Molecular Psychiatry. 25 (9), 2017-2035 (2020).</li>
<li>Razak, K. A., Dominick, K. C., Erickson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+studies+in+fragile+X+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurodevelopmental+Disorders%22%5BJournal%5D)">Developmental studies in fragile X syndrome.</a> Journal of Neurodevelopmental Disorders. 12 (1), 13(2020).</li>
<li>Wang, X., Zorio, D. A. R., Schecterson, L., Lu, Y., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postsynaptic+FMRP+regulates+synaptogenesis+in+vivo+in+the+developing+cochlear+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Postsynaptic FMRP regulates synaptogenesis in vivo in the developing cochlear nucleus.</a> Journal of Neuroscience. 38 (29), 6445-6460 (2018).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal-specific+roles+of+fragile+X+mental+retardation+protein+in+the+development+of+the+hindbrain+auditory+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Temporal-specific roles of fragile X mental retardation protein in the development of the hindbrain auditory circuit.</a> Development. 147 (21), (2020).</li>
<li>Rubel, E. W., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+system+development%3A+primary+auditory+neurons+and+their+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Auditory system development: primary auditory neurons and their targets.</a> Annual Review of Neuroscience. 25, 51-101 (2002).</li>
<li>Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+origins+of+auditory+brain-stem+nuclei+in+the+chick+hindbrain%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Embryonic origins of auditory brain-stem nuclei in the chick hindbrain.</a> Developmental Biology. 224 (2), 138-151 (2000).</li>
<li>Chervenak, A. P., Hakim, I. S., Barald, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+expression+of+Zic+genes+during+vertebrate+inner+ear+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal expression of Zic genes during vertebrate inner ear development.</a> Developmental Dynamics. 242 (7), 897-908 (2013).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li>
<li>Lu, T., Cohen, A. L., Sanchez, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+ovo+electroporation+in+the+chicken+auditory+brainstem%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">In ovo electroporation in the chicken auditory brainstem.</a> Journal of Visualized Experiments. (124), e56628(2017).</li>
<li>Evsen, L., Doetzlhofer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+into+the+chicken+auditory+organ+by+in+ovo+micro-electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Gene transfer into the chicken auditory organ by in ovo micro-electroporation.</a> Journal of Visualized Experiments. (110), e53864(2016).</li>
<li>Schecterson, L. C., Sanchez, J. T., Rubel, E. W., Bothwell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TrkB+downregulation+is+required+for+dendrite+retraction+in+developing+neurons+of+chicken+nucleus+magnocellularis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">TrkB downregulation is required for dendrite retraction in developing neurons of chicken nucleus magnocellularis.</a> Journal of Neuroscience. 32 (40), 14000-14009 (2012).</li>
<li>Wang, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+glucose+environment+inhibits+cranial+neural+crest+survival+by+activating+excessive+autophagy+in+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">High glucose environment inhibits cranial neural crest survival by activating excessive autophagy in the chick embryo.</a> Scientific Reports. 5, 18321(2015).</li>
<li>Yu, X., Wang, X., Sakano, H., Zorio, D. A. R., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+the+fragile+X+mental+retardation+protein+correlates+with+cellular+and+synaptic+properties+in+primary+auditory+neurons+following+afferent+deprivation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Dynamics of the fragile X mental retardation protein correlates with cellular and synaptic properties in primary auditory neurons following afferent deprivation.</a> Journal of Comparative Neurology. 529 (3), 481-500 (2021).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet-1+expression+in+the+developing+chicken+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Islet-1 expression in the developing chicken inner ear.</a> Journal of Comparative Neurology. 477 (1), 1-10 (2004).</li>
<li>Carr, C. E., Boudreau, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+projections+of+auditory+nerve+fibers+in+the+barn+owl%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Central projections of auditory nerve fibers in the barn owl.</a> Journal of Comparative Neurology. 314 (2), 306-318 (1991).</li>
<li>Sandell, L. L., Butler Tjaden, N. E., Barlow, A. J., Trainor, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cochleovestibular+nerve+development+is+integrated+with+migratory+neural+crest+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Cochleovestibular nerve development is integrated with migratory neural crest cells.</a> Developmental Biology. 385 (2), 200-210 (2014).</li>
<li>Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EphA4+signaling+promotes+axon+segregation+in+the+developing+auditory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">EphA4 signaling promotes axon segregation in the developing auditory system.</a> Developmental Biology. 269 (1), 26-35 (2004).</li>
<li>Evsen, L., Sugahara, S., Uchikawa, M., Kondoh, H., Wu, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progression+of+neurogenesis+in+the+inner+ear+requires+inhibition+of+Sox2+transcription+by+neurogenin1+and+neurod1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Progression of neurogenesis in the inner ear requires inhibition of Sox2 transcription by neurogenin1 and neurod1.</a> Journal of Neuroscience. 33 (9), 3879-3890 (2013).</li>
<li>Curnow, E., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+animal+models+for+understanding+FMRP+functions+and+FXS+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">New animal models for understanding FMRP functions and FXS pathology.</a> Cells. 11 (10), 1628(2022).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

כדי לקבוע את הפונקציה התאית-אוטונומית של FMRP, יש צורך במניפולציה של הביטוי שלה בקבוצות תאים בודדות או בסוגי תאים. מכיוון שאחד התפקידים העיקריים של FMRP הוא לווסת את ההיווצרות והפלסטיות הסינפטית, מניפולציה סלקטיבית של כל רכיב סינפטי של מעגל מסוים היא תנאי מוקדם להבנה מלאה של מנגנון FMRP בתקשורת סינפטית. באמצעות אלקטרופורציה של עופות ב-ovo, הדגמנו שיטה למיקוד ביטוי FMRP במעגל AG-NM, בין אם בנוירוני AG קדם-סינפטיים או בנוירוני NM פוסט-סינפטיים. כדי להשיג זאת, בחירת שלבי התפתחות מתא...

תסמונת X שביר (FXS) היא הפרעה נוירו-התפתחותית המאופיינת על ידי מוגבלות אינטלקטואלית, הפרעות חושיות והתנהגויות אוטיסטיות. ברוב המקרים, FXS נגרמת על ידי אובדן גלובלי של חלבון פיגור שכלי X שביר (FMRP; מקודד על ידי הגן Fmr1) החל משלבים עובריים מוקדמים1. FMRP הוא חלבון קושר RNA המתבטא בדרך כלל ברוב תאי העצב ותאי הגליה במוח, כמו גם באיברי החישה 2,3,4. במוחות של יונקים, FMRP קשור ככל הנראה למאות mRNA המקודדים חלבונים החשובים לפעילויות עצביות שונות5. מחקרים על חיות נוקאאוט Fmr1 קונבנציונליות הראו כי ביטוי FMRP חשוב במיוחד להרכבה ולפלסטיות של העברה עצבית סינפטית6. מספר מודלים של נוקאאוט מותנה ופסיפס הראו עוד כי פעולות ואותות FMRP משתנים בין אזורי מוח, סוגי תאים ואתרים סינפטיים במהלך מספר אירועים התפתחותיים, כולל הקרנה אקסונלית, דפוס דנדריטי ופלסטיות סינפטית 7,8,9,10,11,12,13,14 . תפקוד חריף של FMRP בוויסות ההעברה הסינפטית נחקר על ידי העברה תוך תאית של נוגדני FMRP מעכבים או FMRP עצמו בפרוסות מוח או נוירונים בתרבית15,16,17,18. עם זאת, שיטות אלה אינן מציעות את היכולת לעקוב אחר ההשלכות הנגרמות על ידי ביטוי שגוי של FMRP במהלך הפיתוח. לפיכך, פיתוח שיטות in vivo כדי לחקור את הפונקציות התאיות-אוטונומיות של FMRP הוא נחוץ מאוד, וצפוי לעזור לקבוע אם האנומליות המדווחות בחולי FXS הן השלכות ישירות של אובדן FMRP בנוירונים ובמעגלים הקשורים, או השלכות משניות הנגזרות משינויים ברחבי הרשת במהלך הפיתוח19.
גזע המוח השמיעתי של עוברי עוף מציע מודל בעל יתרון ייחודי לניתוחים תפקודיים מעמיקים של ויסות FMRP בהתפתחות מעגלים וסינפסות. הגישה הקלה למוחות של תרנגולות עובריות והטכניקה המבוססת היטב של אלקטרופורציה של אובו למניפולציה גנטית תרמו רבות להבנתנו את התפתחות המוח בשלבים עובריים מוקדמים. במחקר שפורסם לאחרונה, טכניקה זו שולבה עם כלים מולקולריים מתקדמים המאפשרים שליטה זמנית של ביטוי שגוי של FMRP20,21. כאן, המתודולוגיה מתקדמת כדי לגרום למניפולציות סלקטיביות של נוירונים קדם-סינפטיים ופוסט-סינפטיים בנפרד. שיטה זו פותחה במעגל גזע המוח השמיעתי. אות אקוסטי מזוהה על ידי תאי שערה באוזן הפנימית השמיעתית ולאחר מכן מועבר לגנגליון השמיעתי (AG; נקרא גם גנגליון ספירלי ביונקים). נוירונים דו-קוטביים ב-AG innervates את תאי השערה עם התהליכים ההיקפיים שלהם, ובתורם שולחים הקרנה מרכזית (עצב השמיעה) לגזע המוח, שם הם מסתיימים בשני גרעיני שבלול עיקריים, הגרעין מגנוצלולריס (NM) והגרעין הזוויתי (NA). תאי עצב ב-NM דומים מבחינה מבנית ותפקודית לתאי השיח הכדוריים של גרעין השבלול האנטרו-בנטרלי של היונקים. בתוך ה-NM, סיבי עצב השמיעה (ANFs) סינפסה על הסומטה של נוירוני NM דרך הקצה הגדול של הדקים22. במהלך ההתפתחות, נוירונים NM נובעים מרומבומרים 5 ו -6 (r5/6) במוח האחורי23, בעוד נוירונים AG נגזרים נוירובלסטים השוכנים באוטוציסט24. כאן אנו מתארים את הפרוצדורה לדיכוי סלקטיבי של ביטוי FMRP בנוירוני AG הקדם-סינפטיים ובנוירוני NM הפוסט-סינפטיים בנפרד.

<table><tbody><tr><td><חזק>דגירה של ביצים</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>16 & מעלות; C מקרר</td><td>MAGAT</td><td></td><td>משמש לאחסון ביציות מופרות.</td></tr><tr><td>חממת ביצים</td><td>SHANGHAI BOXUN</td><td>GZX-9240MBE</td><td></td></tr><tr><td>ביצים מופרות</td><td>חוות האוניברסיטה</td><td></td> החקלאית של דרום סין <td>יש להשתמש בביצים תוך שבוע אחד לצורך כדאיות אופטימלית.</td></tr><tr><td><תכשיר פלסמיד>חזק</צנטריפוגה חזק>ה</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma</td><td>10016</td><td></td></tr><tr><td>Fast Green</td><td>Solarbio</td><td>G1661</td><td>הכינו תמיסת עבודה של 0.1% במים מזוקקים ובחיטוי.</td></tr><tr><td>ערכת הכנה מקסי פלסמיד</td><td>QIAGEN</td><td>12162</td><td>ממיסים DNA פלסמיד במאגר Tris-EDTA (TE); ערכת הכנה ללא אנדוטוקסין</td></tr><tr><td>נתרן אצטט</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>S2889</td><td>הכינו תמיסת עבודה של 7.5M במים נטולי נוקלז.</td></tr><tr><td><חזק>אלקטרופורציה ומתן דוקסיציקלין</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אלקטרופורטור</td><td>BTX</td><td>ECM399</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל / 5 מ"ל</td><td>גואנגג'ואו KANGFULAI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ ניתוח</td><td>CNOPTEC</td><td>SZM-42</td><td></td></tr><tr><td>Doxcycline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9891</td><td>השתמש בכמויות טריות לכל מנה ואחסן ב -20 & deg;C.</td></tr><tr><td>נימי זכוכית</td><td>BEIBOBOMEI</td><td>RD0910</td><td>0.9-1.1 מ"מ*100 מ"מ</td></tr><tr><td>פרפילם מעבדה</td><td>PARAFILM</td><td>PM996</td><td>סרט שקוף</td></tr><tr><td>חולץ פיפטה</td><td>צ'נגדו מפעל מכשירים</td><td>WD-2</td><td>מצב משיכה: 500 & deg; C עבור 15 שניות</td></tr><tr><td>אלקטרודות פלטינה</td><td>תוצרת</td><td></td> בית <td>קוטר 0.5 מ"מ, מרווח של 1.5 מ"מ.</td></tr><tr><td>צינור גומי</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5177</td><td></td></tr><tr><td><חיתוך וקיבוע רקמות חזק<>/חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>RWD</td><td>F11020-11</td><td>גודל קצה: 0.05*0.01 מ"מ</td></tr><tr><td>כלי ניתוח אחרים</td><td>RWD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td>ניתן לאחסן תמיסת PFA טרייה של 4% במי מלח עם חוצץ פוספט ב-4 מעלות; C עד שבוע.</td></tr><tr><td>ערכת אלסטומר סיליקון SYLGARD 184</td><td>DOW</td><td>01673921</td><td>עבור צלחות רקע שחורות, מורחים אבקת פחמן באיכות מזון.</td></tr><tr><td><חתך חזק></חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>LEICA</td><td>CM1850</td><td></td></tr><tr><td>ג'לטין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G9391</td><td>מעור בקר.</td></tr><tr><td>מיקרוטום הזזה</td><td>LEICA</td><td>SM2010</td><td></td></tr><tr><td><חזק>צביעה חיסונית</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 עז נגד עכבר</td><td>Abcam</td><td>ab150113</td><td>1:500 דילול, RRID: AB_2576208</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555 עז אנטי-ארנב</td><td>Abcam</td><td>ab150078</td><td>1:500 דילול, RRID: AB_2722519</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Abcam</td><td>ab285390</td><td>1: 1000 דילול</td></tr><tr><td>Fluoromount-G בינוני הרכבה</td><td>דרומי&nbsp; Biotech</td><td>Sb-0100-01</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן FMRP</td><td>Y. Wang, אוניברסיטת פלורידה סטייט</td> <td>#8263</td><td>1:1000 דילול, RRID: נוגדן AB_2861242</td></tr><tr><td>Islet-1</td><td>DSHB</td><td>39.3F7</td><td>1:100 דילול, RRID: AB_1157901</td></tr><tr><td>צלחת Netwell</td><td>קורנינג</td><td>3478</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן נוירופילמנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4142</td><td>1:1000 דילול, RRID: AB_477272</td></tr><tr><td>נוגדן Parvalbumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3088</td><td>דילול 1:10000, RRID: נוגדן</td></tr><tr><td>AB_477329 SNAP25</td><td>Abcam</td><td>ab66066</td><td>דילול 1:1000, RRID: AB_2192052</td></tr><tr><td><חזק>הדמיה</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adobe פוטושופ</td><td>תוכנת עריכת תמונות</td><td>ADOBE</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>LEICA</td><td>SP8</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ פלואורסצנטי</td><td>OLYMPUS</td><td>MVX10</td><td></td></tr><tr><td>Olympus Image-Pro Plus 7.0</td><td>OlYMPUS</td><td></td><td>חבילת תוכנה לעיבוד תמונה מסחרית</td></tr></tbody></table>

ניתוח תפקוד אוטונומי של תאים של חלבון פיגור שכלי x שביר במעגל שמיעתי על ידי אלקטרופורציה של in ovo

Dissecting Cell-Autonomous Function of Fragile X Mental Retardation Protein in an Auditory Circuit by In Ovo Electroporation

חלבון פיגור שכלי X שביר (FMRP) הוא חלבון קושר mRNA המווסת את תרגום החלבון המקומי. אובדן FMRP או תפקוד לקוי מוביל לפעילות עצבית וסינפטית חריגה בתסמונת X שביר (FXS), המאופיינת במוגבלות אינטלקטואלית, הפרעות חושיות ובעיות תקשורת חברתית. מחקרים על תפקוד FMRP ופתוגנזה של FXS נערכו בעיקר עם Fmr1 (הנוקאאוט של FMRP המקודד גנים בבעלי חיים מהונדסים. כאן אנו מדווחים על שיטת in vivo לקביעת התפקוד האוטונומי של FMRP במהלך תקופת הרכבת המעגלים והיווצרות סינפטית באמצעות עוברי עוף. שיטה זו משתמשת באלקטרופורציה ספציפית לשלב, לאתר ולכיוון של מערכת וקטורית הניתנת להשראה לתרופות המכילה Fmr1 RNA קטן של סיכות שיער (shRNA) וכתב EGFP. בשיטה זו, השגנו נוק-דאון סלקטיבי של FMRP בגנגליון השמיעתי (AG) ובאחת ממטרות גזע המוח שלו, הגרעין מגנוצלולריס (NM), ובכך סיפקנו מניפולציה ספציפית לרכיב בתוך מעגל AG-NM. בנוסף, תבנית הפסיפס של ההעברה מאפשרת בקרות בתוך בעלי חיים והשוואות נוירונים/סיבים שכנים לאמינות ורגישות משופרות בניתוח נתונים. מערכת הווקטורים האינדוקטיביים מספקת בקרה זמנית על הופעת עריכת גנים כדי למזער את ההשפעות ההתפתחותיות המצטברות. השילוב של אסטרטגיות אלה מספק כלי חדשני לנתח את הפונקציה התאית-אוטונומית של FMRP בפיתוח סינפטי ומעגלים.

על ידי ביצוע אלקטרופורציה של ovo באתרים שונים ובשלבי התפתחות שונים, השגנו נפילת FMRP סלקטיבית בפריפריה השמיעתית או בגזע המוח השמיעתי.
נוק-דאון של FMRP ב-NM RNA סיכת שיער קטנה (shRNA) כנגד התרנגולת Fmr1 תוכנן ושוכפל למערכת הווקטורית Tet-On כפי שתואר קודםלכן 20. ההגדרה לאלקטרופורציה של אובו מוצגת באיור 1A. הדנ"א הפלסמיד הצבוע בירוק מהיר הוזרק לתעלה העצבית ברמת r5/r6 ב-HH12 (א...

תוך שימוש באלקטרופורציה של ovo , פיתחנו שיטה לטרנספציה סלקטיבית של האוזן הפנימית השמיעתית וגרעין השבלול בעוברי עוף כדי להשיג פגיעה ספציפית לקבוצת התאים של חלבון פיגור שכלי X שביר במהלך תקופות בדידות של הרכבת מעגלים.

ניתוח תפקוד אוטונומי של תאים של חלבון פיגור שכלי X שביר במעגל שמיעתי על ידי אלקטרופורציה של In Ovo

Fragile X mental retardation protein (FMRP) is an mRNA-binding protein that regulates local protein translation. FMRP loss or dysfunction leads to ...

הפרוטוקול שלנו הוא שיטת in vivo כדי לחקור את הפונקציות האוטונומיות התאיות של FMRP במהלך הפיתוח. זה יכול לעזור להבין את הפתופיזיולוגיה הספציפית לסוג התא של תסמונת X שביר. שיטה זו משתמשת באלקטרופורציה ספציפית לשלב, לאתר ולכיוון של מערכת וקטורית הניתנת להשראה של תרופה המכילה RNA קטן של סיכות שיער Fmr1.בשיטה זו, אנו משיגים את ההדחה הסלקטיבית של FMRP במעגל השמיעתי. שיטה זו יכולה להיות מיושמת גם כדי לחקור את תפקודם של גנים אחרים במעגל השמיעה או במערכת שיווי המשקל. מתחילים בהנחת הביציות בצורה אופקית כדי למקם את העובר על החלק העליון של הביצית למניפולציה קלה.דגירה ב 38 מעלות צלזיוס במשך 46 עד 48 שעות עד המבורגר והמילטון, או HH שלב 12, עבור transfection של התעלה העצבית או במשך 54 עד 56 שעות עד HH 13 עבור transfection otocyst. מוציאים את הביצים מהאינקובטור, תריסר ביצים בכל פעם. הרחקת ביצים מהאינקובטור שלהן למשך יותר משעה יוצרת שינויים התפתחותיים ומפחיתה את הכדאיות.השתמשו בפנס כדי להטיל אור מתחתית הביצה. מיקום העובר מופיע כאזור כהה על קליפת הביצה. סמן את מיקום העובר על קליפת הביצה בעיפרון.נגבו את הביצים בגזה המכילה 75% אתנול וקדחו חור בקצה המחודד של הביצים בעזרת קצה המספריים. לאחר מכן, הסר שני מיליליטר של אלבומין עם מזרק מחט 18 מד. ודא שהחור גדול מספיק כדי לאפשר את החדרת המחט.נגבו כל אלבומין דולף עם גזה וסתום את החור בנייר דבק שקוף. מכסים את החלק העליון של הביצים בנייר דבק שקוף, במרכזו האזור הכהה המסומן בעיפרון כדי למזער סדקים ולמנוע נפילת פסולת קליפה במהלך החלון. נגב את כל כלי הניתוח עם גזה המכילה 75% אתנול ונגב את האזור המכוסה בסרט עם 75% אתנול.השתמש בזוג מספריים קטן כדי לחתוך חלון של סנטימטר מרובע אחד עד שניים סביב היקף סימן העיפרון. החזיקו את המספריים שטוחים כדי למנוע פגיעה בעובר שמתחת. הניחו את ביצת החלון מתחת לסטריאומיקרוסקופ עם חתיכת עין 10X וזום 2X.מלא מזרק של מיליליטר אחד בתמיסת הדיו ולאחר מכן התאם מחט של 27 מדים. כופפו את המחט לזווית של 45 מעלות בעזרת מלקחיים. מתחת למיקרוסקופ, לתקוע בזהירות מקצה האזור opaqua ולהחדיר את המחט מתחת לעובר.להזריק כ-50 מיקרוליטרים של דיו, שיתפזרו מתחת לאזור פלוצ'ידה, להדמיית עוברים. הדיו יהווה רקע כהה להדמיה ברורה של העובר. משוך נימי זכוכית לתוך פיפטות באמצעות מושך פיפטה.תחת מיקרוסקופ גזירה, יש לפתוח בזהירות את קצה המחט הנימית לקוטר של 10 עד 20 מיקרומטר בעזרת מלקחיים. אחסנו את הפיפטות בקופסת אחסון עד לשימוש. לאחר מכן, למלא פיפטה נימי עם 0.5 עד 1 microliters של תערובת פלסמיד על ידי הפעלת לחץ שלילי דרך צינור גומי בסוף פיפטה עם מזרק.מניחים את הביצית מתחת למיקרוסקופ כך שהעובר מכוון אנכית עם הזנב קרוב אליך. החזיקו את הפיפטה הנימית ביד אחת או עם מניפולטור שלושת הצירים והניעו את קצה הפיפטה לרמבומר 5 עד 6. בכיוון זנב-אל-ראש.בעדינות לדחוף את הקצה דרך קרום ויטלין לתוך הצינור העצבי הגבי, ולאחר מכן למשוך את פיפטה קצת כך הקצה הוא לומן של הצינור העצבי. הזריקו את תערובת הפלסמיד על ידי הפעלת לחץ אוויר עד שהפלסמיד הכהה מתפזר במלואו לתוך רומבומרים 5 עד 6 ומתרחב לתוך רומבומר 3 ורומבומר 4. בדוק הזרקה מוצלחת, אשר מושגת כאשר תמיסת הפלסמיד הכחולה מתפזרת במהירות במורד הצינור העצבי מבלי לדלוף.כאשר מתרחשת דליפה, הכחול דוהה במהירות. מיד לאחר ההזרקה, מניחים אלקטרודה דו קוטבית פלטינה משני צדי הצינור העצבי. ספק שתי פעימות של 12 וולט ומשך 50 אלפיות השנייה עם אלקטרופורטור.שימו לב לבועות אוויר בקצות האלקטרודה הדו קוטבית, עם יותר בצד השלילי. בדוק אם אלקטרופורציה מוצלחת, אשר מושגת כאשר תערובת פלסמיד כהה נכנס לרקמת הצינור העצבי ליד הצד החיובי של האלקטרודה. לאחר אלקטרופורציה, להסיר בזהירות את האלקטרודה דו קוטבית.מכסים את החלון על קליפת הביצה בחתיכת סרט שקוף שנחתכים מראש לריבועים של שני סנטימטרים ומרוססים ב-75% אתנול. החזירו את הביצה לאינקובטור שלה. נקו את האלקטרודה הדו קוטבית על ידי העברת 10 עד 20 פולסים של 12 וולט ומשך 50 אלפיות השנייה במלח לפני שתמשיכו לביצה הבאה.מתחת למיקרוסקופ, מניחים את הביצית באופן כזה שהעובר אנכי עם הזנב לידך. החזיקו את הפיפטה הנימית ותקעו בעדינות את האוטוציסטה הימנית בכיוון הדורסולטרלי. להזריק את תערובת פלסמיד עם לחץ אוויר עד otocyst מתמלא תמיסה כחולה.בדוק אם יש הזרקה מוצלחת, אשר מושגת כאשר תערובת הפלסמיד הכחול כלואה בתוך האוטוציסט ואינה דולפת. מיד לאחר ההזרקה, מניחים את האלקטרודה הדו קוטבית על האוטוציסט ומניחים את הצדדים החיוביים והשליליים הקדמיים והאחוריים לאוטוציסט, בהתאמה. ספק שתי פעימות של 12 וולט ומשך 50 אלפיות השנייה עם האלקטרופורטור.בדוק אם אלקטרופורציה מוצלחת, אשר מושגת כאשר תערובת פלסמיד כחול נכנס לרקמה של otocyst ליד הצד החיובי של האלקטרודה. לאחר electroporation, בזהירות להסיר את האלקטרודה דו קוטבית לכסות את החלון על קליפת הביצה עם סרט שקוף. לבסוף, להחזיר את הביצה לאינקובטור.התמונה המייצגת מציגה דוגמה ליום העוברי השלישי, או E3, לאחר העברת צינורית נוירו וטיפול דוקס ביום העוברי השני, או E2. תאים שעברו טרנספקציה עם Fmr1 shRNA ו- EGFP בחתך מוצגים כאן. תאים המבטאים EGFP היו מוגבלים לצד אחד של התעלה העצבית וגזע המוח. חתך רוחב ב-E15 עם גרעין מגנוצלולריס המבטא EGFP, או נוירוני NM, בצד הטרנספקטיבי מוצג כאן.בצד הנגדי, אקסונים המכילים EGFP נצפו בחלק הגחוני של גרעין הלמינריס, או NL. ההשפעה של Fmr1 shRNA אומתה על-ידי הפחתה ניכרת בפעילות החיסונית של FMRP בנוירוני NM שעברו טרנספקציה בהשוואה לנוירונים שכנים שאינם מותמרים. הגנגליון השמיעתי ב- E19 עם פעילות חיסונית FMRP מוצג כאן. נוירונים של גנגליון שמיעתי לא הועתקו.חלק מתאי הגליה שמקורם בתאי הצמרת העצבית הגולגולתית עברו טרנספקציה. התמונות המייצגות מראות נפילת FMRP בצינור השמיעה לאחר העברת אוטוציסט. צינורות השמיעה ב- E9 הציגו פלואורסצנציה נרחבת של EGFP.בקטעים רוחביים, תאים המבטאים EGFP היו ממוקמים בפפילה הבזילרית ובגנגליון השמיעתי. ההשפעה של Fmr1 shRNA אומתה על ידי פעילות חיסונית מופחתת של FMRP בתאי שערה שעברו טרנספקציה, בהשוואה לתאי שיער שכנים שאינם מותמרים. באופן דומה, הפעילות החיסונית של FMRP פחתה במידה רבה בתאי עצב של גנגליון שמיעתי.ההקרנה המרכזית של נוירוני הגנגליון השמיעתי הטרנספקטיביים הייתה במעקב אחר גזע המוח דרך עצב השמיעה עם מסופי אנדבולב מאופיינים. בעת ניסיון הליך זה, הדבר החשוב ביותר הוא לשלוט על האתר ואת הכיוון של electroporation עבור transfection סלקטיבי. לאחר הליך זה, ניתן לבצע מילוי מסוג תא בודד, אימונוסטינינג, מיון תאים ואחריו ספקטרום מסה, או ריצוף של תא בודד כדי לחשוף את השינויים ברמות המורפולוגיות והביוכימיות.טכניקה זו מאפשרת גם עריכה סלקטיבית של גנים אחרים עם בקרה טמפורלית וספציפיות רכיבים באוזן השמיעתית עבור מעגלי גזע וניתן לשנות אותה כדי לתפעל את מערכת שיווי המשקל.

dissecting-cell-autonomous-function-fragile-x-mental-retardation

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

העברת גן שיטה למוח עכבר בפיתוח מתואר באמצעות שיטה ניתוחית ייחודית צורה מיוחדת של אלקטרודות. זו טכניקה ייחודית זו מאפשרת transfection של DNA פלסמיד temporally מרחבית, אשר יסייעו מדעני מוח רבים בחקר התפתחות המוח.

עכבר בתוך הרחם Electroporation: ג&#39;ין מבוקרת transfection Spatiotemporal

נדידת נוירונים מווסתת על ידי מספר רב של גורמים אוטונומיים תאיים ולא תאים.  פרוטוקול זה מראה כיצד ניתן להשתמש באלקטרופורציה ברחם כדי לקבוע אם פנוטיפ בעכבר טרנסגני נובע משיבוש במנגנון הפנימי של התא או מפגיעה באינטראקציה בין הנוירון לסביבתו.

אינדוקציה של חלבונים באמצעות מחיקה ברחם Electroporation להגדיר גירעונות בעצביים הגירה במודלים מהונדסים

אנו מציגים שיטה המתארת בידוד ותרבית של צמחי שבלול מהאוזן הפנימית של עכבר עוברי.  אנו גם מדגימים שיטה להעברת גנים לתוך צמחי שבלול באמצעות אלקטרופורציה של גל מרובע. תרבית הצמח במבחנה יחד עם טכניקת העברת גנים מאפשרת לחוקרים לחקור את ההשפעות של שינוי ביטוי גנים במהלך ההתפתחות.

תרבות של עוברי Explants שבלול העכבר וג&#39;ין העברה על ידי Electroporation

כאן אנו מציגים פרוטוקול המספק כלי לבחינת מנגנוני ויסות של גנים ספציפיים במהלך התפתחות ההיפוקמפוס. שימוש באלקטרופורציה מחוץ לרחם ותרבית פרוסות אורגנוטיפית מאפשר ויסות למעלה ולמטה של ביטוי הגנים המעניינים בתאים בודדים ולעקוב אחר גורלם במהלך ההתפתחות.

Ex הרחם Electroporation וOrganotypic Slice תרבות של רקמות העכבר בהיפוקמפוס

Periventricular קשרי הטרוטופיה (PNH) היא הצורה הנפוצה ביותר של מום ההתפתחות בקליפת המוח (MCD) בבגרות אבל את הבסיס הגנטי שלה אינו ידוע במקרים ספורדיים ביותר. לאחרונה פיתחנו אסטרטגיה לזיהוי גנים מועמדים חדשניים עבור MCDs וכדי לאשר ישירות שלהם תפקיד סיבתי בתוך vivo.

אסטרטגיה רומן המשלב מערך-CGH, רצף שלם-exome and בתוך הרחם אלקטרופורציה בחולדות לזיהוי גנים סיבתי של מומים המוח

איבר השמיעה מתווך את השמיעה. כאן אנו מציגים שיטת מיקרו-אלקטרופורציה שונה בביצית המותאמת לחקר התפשטות והתמיינות של תאי אב שמיעתיים באיבר השמיעה המתפתח.

העברת גנים לתוך האיברים השמיעתיים עוף ידי<em&gt; ב אובו</em&gt; מיקרו electroporation

כתב יד זה מספק פרוטוקולים המשתמשים ב electroporation ברחם (IUE) כדי לתאר את הקישוריות המבנית של נוירונים ברמת התא בודד ועל הרגישויות של נוירונים שכותרתו fluorescently. היסטולוגיה משמש כדי לאפיין הדנדריטים ותחזיות axonal. הקלטה כל התא פרוס חריפה משמשת לחקור רגישות.

ברחם Electroporation גישות לחקר רגישות של העצבית subpopulations וקישוריות תא יחיד

נוירונים גזעיים של גזע המוח של avians ויונקים הם מיוחדים עבור קידוד עצבי מהיר, תהליך בסיסי עבור פונקציות השמיעה הרגילה. נוירונים אלה נובעים מבשרי ברורים של המוח האחורי עובריים. אנו מציגים טכניקות ניצול electroporation להביע גנים במוח האחורי של עוברים עוף ללמוד תפקוד הגן במהלך פיתוח השמיעה.

ב Electrooration Ovo ב המוח עוף שמיעה

כפול בתוך הרחם מאפשר מיקוד אוכלוסיות תאים כי הם מופרדים באופן זמני. טכניקה זו שימושית כדי להמחיש אינטראקציות בין אוכלוסיות תאים אלה באמצעות חלבונים פלורסנט בתנאים נורמליים, אך גם לאחר ניסויים פונקציונליים כדי perturb גנים של עניין.

כפול ברחם באמצעות אלקטרופורציה ועד לאוכלוסיית היעד באופן זמני ולאוכלוסיות שאינן מופרדות

הגוזל הוא אורגניזם מודל חסכוני, נגיש וזמין באופן נרחב למגוון מחקרים. כאן מפורטת סדרה של פרוטוקולים להבנת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס ההתפתחות וההתחדשות של האוזן הפנימית של העופות.

בשיטות אובו ואקס אובו לחקר התפתחות האוזן הפנימית של העופות

חקור את הפונקציות האוטונומיות של תאים של חלבון FMRP במעגל השמיעה באמצעות אלקטרופורציה in ovo בגורי עופות. שיטה זו מאפשרת נוק-דאון סלקטיבי לחקר תסמונת X שביר.

ניתוח תפקוד אוטונומי של תאים של חלבון פיגור שכלי X שביר במעגל שמיעתי על ידי אלקטרופורציה של In Ovo

גלה סרטונים נוספים