מדידת תרמוגנזה של שרירי השלד בעכברים ובחולדות

פרוטוקול זה הוא משמעותי, שכן הוא מספק שיטה ישירה וחסכונית למדידת טמפרטורת שרירי השלד. יתר על כן, ניתן להשתמש בו בהקשרים שונים ותחת גירוי של סוכנים פרמקולוגיים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא מספר בעלי החיים שניתן לבדוק בו זמנית.

ההפרעה המינימלית לבעלי חיים המתוארת כאן, מונעת את הצורך בשיטות היי-טק כמו תרמוגרפיה אינפרא אדומה. אנשים עשויים להתקשות למדוד את הטמפרטורה של בעלי החיים בתוך הכלוב הביתי או על הליכונים בזמן תנועה. ניתן למתן זאת על ידי תרגול טכניקות מדידה במהלך ניסויי ההרגלה.

התחילו בחימום המשדרים הסגורים בין הידיים עם הכפפות והקפידו לשמור על סטריליות, תוך כדי עבודה עם משדרים. מדוד את הטמפרטורה באמצעות סורק טמפרטורה ובדוק אם המשדר קורא את שינויי הטמפרטורה. לאחר הרדמת העכבר כמתואר בכתב היד, השתמש במספריים כירורגיים כדי לבצע חתך רדוד דרך העור על הגפה האחורית הימנית.

מניחים את הקצה החד של משדר סטרילי מתוכנת מראש ולא מתוכנת לתוך החתך, במקביל לגסטרוקנמיוס. ודא שהבוכנה הירוקה פונה כלפי מעלה ונראית לעין. המשיכו לדחוף את המוליך המשדר לתוך החתך עד שפתח המוליך המשדר לא נראה עוד.

סובבו את המוליך ב-180 מעלות, כך שהבוכנה הירוקה פונה כלפי מטה לכיוון איבר העכבר ואינה נראית עוד לנסיין. לאחר שהמוליך המשדר ממוקם בצמוד לגסטרוקנמיוס או סגור חלקית בו, דחפו את הבוכנה הירוקה, כדי לאפשר ללחץ של המוליך להנחות את ידו של החוקר הרחק מהעכבר. בעזרת מלקחיים, החזיקו את העור הפתוח יחד.

מניחים קליפס פצע עם אוטוקליפס סטרילי, מכופפים במידת הצורך. השתמשו בתפרים נספגים לפני האוטוקליפס הסטרילי כדי לסגור את שכבת החיתולית. באמצעות קורא המשדר, בדוק את הטמפרטורה של שריר העכבר.

לאחר הסרת העכבר מההרדמה, הניחו אותו בכלוב ביתי נקי על גבי כרית חימום וודאו כי הכלוב הביתי כולל כדור תה עם מגבת חסרת ריח כדי להתחיל בהרגלה. הקצה מיקום להגבהה בחדר הבדיקה, וכדי להימנע ממשתנים מבלבלים, הפרד את ההגבהים שנקבעו לקבלת גירויים הקשריים שונים בשני מטרים לפחות. באמצעות פסים מגנטיים, חברו יריעות כירורגיות לרוחב ההגבהה וצרו מחסום חזותי כדי למזער את תנודות הטמפרטורה כתוצאה מפעילות העכבר, בתגובה לתנועת הנסיין.

הכינו כדורי תה עם מגבות שליטה וריח טורף. העבירו את בעל החיים לחדר הניסויים המוכן. מקם את בעל החיים במיקום שהוקצה מראש על ההגבהה והימנע משינוי מיקום ההגבהה בין נהלי ההרגלה להליכי הבדיקה.

הסר את כדור הכלוב הביתי מהכלוב הביתי של העכבר. לשחזר את הכלוב עם בד או גיליון כירורגי ולאפשר לעכבר להתאקלם לחלל הבדיקה במשך שעה עד שעתיים. לאחר השלמת ההתאקלמות, השתמש בסורק כדי למדוד ולתעד את טמפרטורת הבסיס של הנושא.

חשפו את הכלוב והניחו את כדור התה על רצפת הכלוב הביתי. החלף את מכסה הכלוב ואת כיסוי הבד. הפעל את שעון העצר ומדוד את הטמפרטורות של הנבדקים באותו סדר של מיקום כדורי תה.

רשום את הטמפרטורות ואת זמן השעון של המדידות, בהתאם לנקודות הזמן הרצויות. הכינו את ההליכונים לבדיקה, וודאו שהזעזועים מתפקדים. ודאו שבעלי החיים משתמשים באותו הליכון להליכי הרגלה ובדיקה.

הזיזו את העכבר לחדר הבדיקות, ואפשרו לו להתאקלם במשך שעה עד שעתיים בכלוב הביתי שלו. לפני הזזת העכבר להליכון, מדוד ורשום את טמפרטורת הבסיס שלו. למיקום והסרה קלים, הדביקו את מגבות הבקרה או ריח הטורף לתקרה או מתחת לקדמת ההליכון.

הדרך את העכבר אל ההליכון שהוקצה. הפעילו את חגורת ההליכון ואת השוק, הפעילו את שעון העצר ובצעו מדידות של הנבדקים באותו סדר שבו הם הוצבו בהליכונים. רשום את הטמפרטורות ואת זמן השעון של המדידות, בהתאם לנקודות הזמן הרצויות.

לאחר השלמת הבדיקה, כבו את הזעזוע וההליכון והחזירו את העכבר לכלוב הביתי שלו. נקו את ההליכון באמצעות חומר ניקוי נוזלי ומים והסירו כל שאריות ריח של טורף. ניסויי הרגלה חוזרים ונשנים הפחיתו באופן משמעותי את טמפרטורת השרירים של עכברים, והראו שהעכברים התרגלו לסביבת הבדיקה ולפרוטוקול.

ניתוח המין המשולב של ניסוי 4 לא הראה הבדל משמעותי בין מדידות הטמפרטורה לפני המעבר לבין מדידות הטמפרטורה הבסיסיות, והדגים את היעילות של התאקלמות של שעה אחת להקשר הבדיקה. גירוי פרמקולוגי באמצעות אוקסיטוצין בעכברים הראה ירידה בטמפרטורת השרירים ביחס לנקודת ההתחלה עם ירידה מקסימלית לאחר 30 דקות. טמפרטורות השרירים נורמלו 60 דקות לאחר הזרקת האוקסיטוצין.

עלייה מתמשכת בטמפרטורת השרירים נצפתה בחולדות ספראג דאולי, לאחר הסרת ריח טורף כגירויים הקשריים. חולדות ספראג דאולי הציגו עלייה חזקה בטמפרטורה בתגובה לריח חמוס, בהשוואה לריח בקרה. בנוכחות ריחות מרתיעים אחרים, ריח החמוס מייצר ושומר על שינוי תרמוגני חזק בהשוואה לכל התנאים האחרים.

בעת ניסיון הליך זה, חשוב מאוד להרגיל את בעלי החיים לפרוטוקול הבדיקה ולקבוע שעה עד שעתיים של התאקלמות בכל יום של הניסוי.