Name: פרוטוקול השתלת לב הטרוטופי מורין מותאם לסטנדרטים עכשוויים של טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-28T13:20:00.000+00:00
Duration: 12 min 40 s
Description: למדו טכניקה מודרנית להשתלת לב הטרוטופי בעכברים עם שיפורי הרדמה ושיכוך כאבים. מודל זה מאפשר חקר חסינות השתלה ודחיית איברים בקנה מידה מיקרוסקופי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות על המאמצים המעולים של צוות הטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת מערב אוסטרליה ושל מכון הארי פרקינס למחקר רפואי, שמסירותם ומומחיותם תרמו להיתכנות ולהצלחה של ניתוחים אלה.

<ol><li>Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+the+intact+mammalian+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of the intact mammalian heart.</a> Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).</li>
<li>Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+homologous+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22A.M.A.+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Complete homologous heart transplantation.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).</li>
<li>Downie, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homotransplantation+of+the+dog+heart%5BTitle%5D)+AND+%22A.M.A.+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Homotransplantation of the dog heart.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).</li>
<li>Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+homotransplantation+of+canine+heart+and+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22A.M.A.+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Complete homotransplantation of canine heart and lungs.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).</li>
<li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li>
<li>Joffre, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+acute+and+chronic+allograft+rejection+with+CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+regulatory+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes.</a> Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).</li>
<li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+induced+by+1+alpha%2C25-dihydroxyvitamin+D3+and+mycophenolate+mofetil+treatment+mediate+transplantation+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance.</a> The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+Experience+of+3000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li>
<li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li>
<li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+in+aseptic+rodent+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).</li>
<li>Navarro, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+anesthesia%3A+The+art+and+science%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR Journal. , (2021).</li>
<li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+anesthesia+and+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Mouse+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).</li>
<li>Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes">https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes</a> (2013).</li>
<li>Prosser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+changes+to+tissue-resident+immunity+after+MHC-matched+and+MHC-mismatched+solid+organ+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation.</a> Cell Reports. 35 (7), 109141(2021).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

מודל השתלת הלב האורתוטופית של מורין הוא מודל פרה-קליני חזק המשמש בעיקר לחקר ההשפעות של חוסר התאמה MHC על רמת ואופי הדחייה החיסונית, ולאחרונה, השפעת ההשתלה על שימור חסינות תושב רקמת השתל16. בתחילה עקבנו מקרוב אחר פרוטוקול Corry et al.7 , אך שיפרנו את הפרוטוקול כך שישלב סטנדרטים של שיטות עבודה מומלצות של טכניקה אספטית, שיכוך כאבים והרדמה. עדכון שיטות עבודה חדשות אלה הושג באמצעות הכשרה נוספת, אספקת כפפות כירורגיות סטריליות, חלוקים ווילונות כירורגיים, יישום הרדמה נוספת ועדכון מ...

אנו חייבים חלק גדול מהבנתנו באימונולוגיה ובהשתלות למחקר המבוסס על מודלים ניסיוניים של השתלת איברים מוצקים בבעלי חיים. מאז התיאור הראשון של השתלת לב וסקולרית ביונקים1, מודלים כאלה תרמו לידע בתחומים רחבים, כולל היישום הטיפולי של היפותרמיה2, היתרונות של שימוש בתפרים מיוחדים3, וטכניקותלהשתלות ריאה ולב 4. פיתוח מודלים להשתלות לב בחולדות 5,6 סיפק טווח רחב יותר לניסויים אימונולוגיים בשל זמינותם של קווי רבייה שונים. הטווח הרחב משמעותית של זני עכברים מוטנטיים ומוטנטיים זמינים הוביל את Corry et al.7 לפתח טכניקה של השתלת לב הטרוטופית מורין בשל היתרונות הניכרים שטווח זה מביא למחקר ההשתלות. מודל זה נמצא בשימוש נרחב ותרם להבנה טובה יותר של דחיית השתל8 וטיפולים9. עם זאת, מאז תיאורה הראשון, הטכניקה נותרה כמעט ללא שינוי מלבד כמה פרטים טכניים קטנים כגון התאמות למיקום של אתרים אנסטומטיים10,11.
מאז שילוב הטכניקה של Corry et al.7 בניסויים שלנו, זיהינו תחומים מבטיחים לשיפור הפרוטוקול, כלומר אלה של טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים. שיפורים בתחומים אלה היו צפויים להציע השפעה חיובית על תוצאות הניסויים ולשפר את רווחת בעלי החיים. זה הוכח בעבר כאשר טכניקה אספטית משמשת בניתוחים בבעלי חיים קטנים כפי שהוא מסייע בהפחתת זיהומים לאחר הניתוח12, אשר לא רק משפיע על תחלואה ותמותה, אבל יכול גם לפגוע ניסויים שנועדו להעריך את התגובה החיסונית לאחר ניתוח השתלה. מנקודת מבט של הרדמה ומשכך כאבים, השימוש במשטר מעודן מסייע להפחית את העלות לבעלי חיים ולאזן את הטיעון האתי של מודל כירורגי זה על ידי הפחתת הכאב והסבל של נבדקים ניסיוניים. יתר על כן, הרדמה מתאימה ושיכוך כאבים מגבילים את תגובת הלחץ הקשורה לכאב, משפרים את איכות ההתאוששות לאחר הניתוח, ובסופו של דבר, מגדילים את שיעור ההצלחה הניתוחית13.
במטרה לשפר הן את רווחת בעלי החיים והן את תוצאות הניסויים, פותח פרוטוקול עם התאמות כדי לגשר על פערים אלה. פרוטוקול זה הותאם מזה שתואר במקור על ידי Corry et al.7 תוך התייעצות עם רופא מרדים וטרינרי ותוך התחשבות נאותה הן בהשפעות והן במשך ההשפעות של ההתערבויות הפרמקולוגיות המשמשות במשטר ההרדמה ומשככי הכאבים. הגישה התבססה על עקרונות של הרדמה מאוזנת ושיכוך כאבים מולטימודאלי כדי להבטיח טיפול פריאופרטיבי מתאים14. בנוסף ליישום של טכניקה אספטית, אופיואיד buprenorphine ואת bupivacaine הרדמה מקומית ניתנו מראש. הרדמה כללית בוצעה באמצעות חומר הרדמה ממסים נדיפים isoflurane.

<table><tbody><tr><td>2030 צינורית השקיה Rycroft 30 G</td><td>McFarlane</td><td>56005HU</td><td></td></tr><tr><td>משי כירורגי קלוע 7-0</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מהדק בולדוג מעוקל - 35 מ"מ&nbsp;</td><td>רובוז</td><td>RS-7441-5</td><td></td></tr><tr><td>בופיבקאין 0.25%&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo מחזיק מחט לתפוס מעוקל -&nbsp; 145 מ"מ</td><td>Haag-Streit</td><td>11.62.15</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת כלורהקסידין 5%</td><td>אבוס</td><td>JJ61371</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטור עם קצה כותנה - 7.5 ס"מ</td><td>יונה</td><td>SN109510</td><td></td></tr><tr><td>אתנול 70% תמיסת</td><td>Ebos</td><td>WH130192EE</td><td></td></tr><tr><td>גזה 5 x 5 ס"מ לבן</td><td>Aero</td><td>AGS50</td><td></td></tr><tr><td>Gelfoam 80 מ"מ x 125 מ"מ&nbsp;</td><td>פייזר</td><td>7481D</td><td></td></tr><tr><td>קוצץ שיער</td><td>Wahl</td><td>9860L</td><td></td></tr><tr><td>הפרין 1,000 יחב"ל ב -1 מ"ל</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>איריס מספריים SuperCut ישר - 11.5 ס"מ&nbsp; &nbsp;</td><td>אינקה כירורגית&nbsp;</td><td>11550.11</td><td></td></tr> מכשיר <tr><td>אידוי איזופלורן</td><td>Darvall</td><td>9176</td><td></td></tr><tr><td>מהדק מיקרו בולדוג - 3.7 ס"מ</td><td>Greman</td><td>14119-G</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיקרו מעוקלים 105 מ"מ&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>סרט כירורגי מנייר רגיל Micropore - רוחב 2.5 ס"מ</td><td>Ebos</td><td>7810L</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיקרוכירורגיים - קצה</td><td></td><td></td><td></td>מעוקל</tr><tr><td>תפר פוליפרולן מונופילמנט - 5/0</td><td>Surgipro</td><td>P-205-X</td><td></td></tr><tr><td>Myweigh i101 משקל דיוק 100 גרם x 0.005 גרם</td><td>Myweigh</td><td>Kit00053</td><td></td></tr><tr><td>מחט - 30 גרם x 0.5 אינץ'</td><td>BD</td><td>BD304000</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט 15 ס"מ מעוקל "סופר עדין"</td> <td>מומחים כירורגיים</td><td>ST-B-15-8.2</td><td></td></tr><tr><td>נילן 10/0 x 15 ס"מ על 3.8 מ"מ 3/8 עיגול גוף עגול מתחדד (קוטר 0.07 מ"מ) CV300</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עגולים לתפר גוף מעוקל 0.3 מ"מ 120 מ"מ</td><td>B. בראון</td><td>FD281R</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עגולים לתפר גוף ישר 0.3 מ"מ 120 מ"מ</td><td>B. בראון</td><td>FD280R</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קפיציים עם ידית עגולה-str/12.5 ס"מ</td><td></td><td>15400-12</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קפיציים-להבי Cvd Sm</td><td>15001-08</td><td></td>מספריים Stevens ישרים קהים 110 מ"מ לוח אחורי כירורגי קרטון למינציה קשיח. 15 x 15 ס"מ וילונות כירורגיים חתוכים לשני גדלים. 25 ס"מ על 25 ס"מ, ו-25 ס"מ על 40 ס"מ&nbsp;<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>מזרק <tr><td>מיקרוסקופ</td><td></td><td></td><td></td>כירורגי</tr><tr><td>- מזרק</td><td>592696</td><td></td><td>BD</td></tr><tr><td>1 מ"ל - 3 מ"ל</td><td>Leica</td><td>M651</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עם שיניים</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>אוניברסיטת ויסקונסין</td> כרית חימום תמיסות <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>כרית חימום אינפרא אדום רחוק 20 x 25 ס"מ</td>מספריים קפיציים של Westcott <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yasargil קליפ אפליקציה כידון</td><td>Aesculap</td><td>FE582K</td><td></td></tr><tr><td>Yasargil טיטניום קליפ סלסול 6.6 מ"מ</td><td>Aesculap</td><td>A19FT222T</td><td></td></tr><tr><td><חזק>שימוש בעכבר</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><חזק>מתח/מין/משקל</חזק></td><td><חזק>תורם</חזק></td><td><חזק>מתכון</חזק></td><td></td></tr><tr><td>BALB/c, נקבה, 19-23 גרם</td><td>7</td><td>21</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6, נקבה, 17-20 גרם</td><td>7</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD45.1 BALB/c, נקבה, 17-21 גרם</td><td>5</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

פרוטוקול השתלת לב הטרוטופי מורין מותאם לסטנדרטים עכשוויים של טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

פיתוח מודלים ניסיוניים של השתלות לב בבעלי חיים תרם להתקדמות רבה בתחומי האימונולוגיה והשתלות איברים מוצקים. בעוד שמודל השתלת הלב ההטרוטופית של כלי הדם ההמוניים שימש בתחילה במחקרים על דחיית שתלים באמצעות שילובים של זני עכברים מולדים שאינם תואמים, גישה לזנים מהונדסים גנטית ולשיטות טיפוליות יכולה לספק תובנות פרה-קליניות חדשות ועוצמתיות. ביסודו של דבר, המתודולוגיה הכירורגית של טכניקה זו לא השתנתה מאז התפתחותה, במיוחד ביחס לגורמים חשובים כגון טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים, אשר משפיעים באופן מהותי על תחלואה ותמותה לאחר ניתוח. בנוסף, שיפורים בניהול הפריאופרטיבי צפויים לספק שיפורים הן ברווחת בעלי החיים והן בתוצאות הניסויים. מאמר זה מדווח על פרוטוקול שפותח בשיתוף פעולה עם מומחה בתחום ההרדמה הווטרינרית ומתאר את הטכניקה הכירורגית בדגש על ניהול פריאופרטיבי. בנוסף, אנו דנים בהשלכות של חידודים אלה ומספקים פרטים על פתרון בעיות בשלבים כירורגיים קריטיים עבור הליך זה.

כדי לקבוע את יעילות הטכניקה הכירורגית בקידום תוצאות טובות של ריפוי פצעים והתאוששות עכבר, ניסויים מוקדמים במעבדה קבעו את מאפייני ההישרדות של מגוון שתלי לב בעלי אימונוגניות משתנה לנמען. אלה כללו שתלים קונגניים (n = 5) וסינגנים (n = 5), החולקים את אותם סמנים מורכבים היסטו-תאימות עיקריים (MHC) כמו הנמען, ושתלים אי-התאמה עיקריים (n = 9), שבהם לשתל ולמקבל יש סמני MHC שונים. השתמשנו במישוש ישיר של פעימות הלב ההטרוטופיות של הבטן כדי להעריך את תפקוד השתל המתמשך ואת כדאיותו, המשמש כסמן פרוקסי של דחייה לעומת סבילות.
<p class="j...

המאמר הנוכחי מתאר טכניקה שונה להשתלת לב הטרוטופית וסקולרית עם טכניקה אספטית מעודכנת, שיכוך כאבים והרדמה.

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

זהו מודל חסכוני וניתן לשחזור של השתלת לב. ניתן להשתמש בו הן כדי לשפר מיומנויות מיקרוכירורגיות והן כדי לאפשר שימוש בזני עכברים מהונדסים גנטית כתורמים או כמושתלים. הטכניקה כוללת באופן רחב את כל מורכבות הטיפול בכאב וההרדמה של ניתוח אנושי רגיל כדי להגביל את התחלואה לאחר הניתוח.מודל זה הוא קריטי לחקר חסינות הנגרמת על ידי ניתוח, ההשפעה של חוסר התאמה על דחיית השתלה, ואריכות ימים של השתלות. הגישות הכירורגיות הכלליות של מודל זה יכולות להיות מיושמות בצורה שונה להשתלות איברים מוצקים אחרות בעכבר. קנה מידה מיקרוסקופי ואילוצי זמן נלווים משאירים מרווח טעות קטן.המפתח להצלחה הוא תרגול קבוע עם פיקוח מקצועי, מתן משוב ספציפי על תחומי קושי. מי שתדגים את ההליך תהיה גב' ליו ליו, עוזרת מחקר מהמעבדה שלי. מי שיסייעו להליכים הכירורגיים יהיו ד"ר וון הואה הואנג, גב' ג'אס קאור וגב' שיאו ג'אנג.לאחר הרדמה והוצאת העכבר מתא ההשראה, יש להסיר שיער על ידי גילוח הדוק של הבטן הגחונית באמצעות קוצצים. במקרה של התורם, יש לגלח את האזור המשתרע מאיבר המין ועד לשוליים העליונים של בית החזה הגחוני. יש לוודא שהאזור המגולח מגיע לקו אמצע בית השחי לרוחב.עקוב אחר הטמפרטורה על ידי החדרת בדיקה רקטלית משומנת נקייה לתוך פי הטבעת של בעל החיים ולאחר מכן לאבטח אותו ללוח הניתוח באמצעות סרט מיקרו-נקבוביות. להעריך את עומק ההרדמה על ידי התבוננות בתגובות לגירוי של הכף או הזנב מלחץ המופעל על ידי מלקחיים טראומטיים, רפלקס palpebral, טונוס שרירים. למדוד את קצב הנשימה על ידי התבוננות בתנועת דופן בית החזה תוך התבוננות במאמץ הנשימתי כדי להעריך את נפח הגאות, ולאחר מכן לחשב את קצב הנשימה כמתואר בכתב היד.לאחר חיטוי אתר הניתוח באמצעות אפליקטורים סטריליים עם קצוות כותנה, יש למרוח כלורהקסידין בתנועה מעגלית ממרכז אתר הניתוח לקצוות שלוש פעמים, ולאחר מכן שילוב של כלורהקסידין ואתנול באותה תבנית. הכינו את שדה הניתוח על ידי הצבת וילונות כירורגיים סטריליים משני צדי לוח הניתוחים כאתר להנחת מכשירים סטריליים. לאחר יצירת פתח קטן בצורת אליפסה בשפשוף, מניחים את הווילונות המנומרים באתר החתך המוצע.לאחר הכנת בעל החיים כפי שהודגם קודם לכן, יש למרוח חומר סיכה לעיניים. באמצעות מזרק אינסולין בעל 29 מד לאורך אתר החתך המתוכנן, מזריקים תת עורית מנה מבוססת משקל של bupivacaine לתוך הבטן הגחונית ומחפשים קו ישר של blebbing גלוי המכסה את היקף החתך המתוכנן. לאחר מכן, השתמש בלהב אזמל כירורגי סטרילי כדי לבצע חתך עור בקו האמצע הגחוני תחת הגדלה של פי שמונה.יש לוודא כי הלפרטומיה משתרעת על פני הבטן התחתונה עד לשוליים הקוסטליים. ולהכניס retractor כדי למקסם את שדה הניתוח. להרטיב את קטע הגזה הסטרילית עם תמיסת נתרן כלורי מחומם 0.9% ולמקם אותו בהיבט העליון של אתר הניתוח.כעת, השתמשו בצמר גפן סטרילי לח כדי לסלק בעדינות את המעיים. מקם אותם על גבי גזה זו ולעטוף את הגזה סביב האיבר. באמצעות שילוב של אפליקטורים בעלי קצוות כותנה ומלקחיים לתפרי גוף עגולים, שחררו וגייסו את אבי העורקים הבטני ואת הווריד הנבוב התחתון מהרקמות הסובבות בטכניקת דיסקציה קהה.ודא כי שטח הפינוי הוא בין ההיבט האינפרא כלייתי של כלי הדם ומעל הביפורקציה של אבי העורקים. לאחר זיהוי כלי הדם האחוריים, משכו בעדינות את אבי העורקים לכיוון הרחק מעמוד השדרה באמצעות מלקחיים. צור תעלה משני צדי כלי הדם הללו על ידי העברת המלקחיים המעוקלים אחוריים לכלי הבטן.קשרו כל כלי שיט שזוהה וגייס באזור האנסטומוטי המתוכנן באמצעות אורכים של ניילון 10-O הקשורים במכשירים לקשרי המנתח בזריקה אחת נוספת. בודד את האתר האנסטומוטי ממחזור הדם על ידי התקנת מהדק כירורגי בראש כלי הבטן ובקצות הזרוע. ודא כי מלחציים לחצות את שני הכלים במידה מספקת כדי להבטיח חסימה מוחלטת.השתמש במלקחיים ביד הלא דומיננטית כדי לייצב את אבי העורקים. בצע אאורוטוטומיה באמצעות מחט 30 מד באספקט הקדמי של אבי העורקים. האריכו את אבי העורקים באמצעות מספריים מיקרוכירורגיים ישרים.כדי לבצע אדנוטומיה, השתמש במלקחיים ישרים והחל מתיחה קדמית עדינה על הווריד הנבוב התחתון בנקודה בקו אחד עם אמצע אבי העורקים. השתמש מספריים microsurgical מעוקל עם הצד הקעור פונה קדימה כדי להסיר קטע של נבוב ורידי נחות באורך שווה לאבי העורקים. לשטוף את הפנים של כלי פתוח של הדם הנותר עם תמיסת נתרן כלורי heparinized.הכניסו את הלב התורם לבטן וודאו שאבי העורקים העולה נמצא ישירות לצד אבי העורקים הבטני והלב מסובב, כך שניתן יהיה למשוך את עורק הריאה לרוחב האנסטומוזה השנייה. באמצעות ניילון 10-O, מניחים תפר שהייה בין המיקום 12:00 של אבי העורקים לבין הגפיים המקבילות של לומן של אבי העורקים העולה. בעזרת מלקחיים ישרים במחזיק מחט מיקרוכירורגי, קשרו אותו בשלוש זריקות עוקבות של קשר מנתח וחתכו את הקצוות כדי להשאיר כשני מילימטרים של תפר.מניחים תפר שהייה שני בין מיקום 6:00 של אבי העורקים לבין ההיבט המתאים של אבי העורקים העולה. מכיוון שתפר זה ישמש גם כבסיס לתפרי הריצה הבאים, השאירו לפחות 10 מילימטרים מהזנב לקשירה הסופית. מניחים תפר ריצה רציף של ניילון 10-O בצורה עולה כדי להתנגד לקצה הימני האנטומי של אבי העורקים ולקצה החופשי המתאים של אבי העורקים העולה.בצע הליך זה בזהירות והשתמש בכארבע זריקות עבור קו זה. מעבירים את הקצה החופשי של התפר סביב תפר השהייה הדיסטלי לפני הנחת תפר ריצה רציף שני בצד שמאל אנטומי כדי להשפיע על האפפוזיציה עם הקצה החופשי הנותר של אבי העורקים. קשרו את התפר לזנב באמצעות קשר מנתח עם שתי זריקות נוספות.מניחים תפר שהייה בין המיקום 12:00 של הווריד הנבוב הנחות, הוורידים, והקיצוניות המתאימה של לומן של עורק הריאה. מנקודת עיגון זו, מניחים תפר רץ רציף באופן מובחן בין הקצה השמאלי האנטומי של עורק הריאה לבין הקצה המתאים של הוורידיה. להעביר את המחט דרך המיקום 6: 00 של venotomy ואת הגפיים המקבילות של לומן עורק ריאתי.באופן עולה, להעביר את המחט דרך הקצה החופשי הנותר של עורק הריאה ואת הזכות האנטומית של הווריד. השתמש בממוצע של ארבע זריקות עבור קו זה ולאחר מכן צייר את הקצוות החופשיים הסופיים של עורק הריאה ו venotomy יחד. קושרים את הקצה החופשי של התפר לעוגן ובעזרת מכשיר קושרים את קשר המנתח בשתי זריקות נוספות וחותכים את החוט הנוסף.בדוק את כלי הדם עבור פיתול, אשר יפריע זרימת הדם. מניחים קצף ג'ל מעל קו התפרים. מניחים סביבם שתי חתיכות של קצף ג'ל בקוטר של כשני מילימטר ומעצבים כך שכל קווי התפרים הנראים לעין יהיו מכוסים.שחררו את מהדקי כלי הדם החל מהדק ההנעה ולאחר מכן מהדק הצפלו. מכיוון שצפויה כמות קטנה של דימום, מקם מראש אפליקטורים עם קצוות כותנה מעל האתרים האנסטומטיים כדי לספק לחץ. לאחר תיקון הנזילות הגלויות, בדוק את הלב לפעימה.אם הוא נעדר, בדוק את כלי הלב עבור פיתול, ולאחר מכן למקם מחדש את המעיים מעל ומסביב ללב, ולהרטיב את חלל הצפק עם תמיסת נתרן כלורי מחומם אם נראה יבש. באמצעות טכניקה רציפה ללא הפרעה, סגור את חלל הבטן באמצעות מונופילמנט פרולן 6-O שאינו נספג על ידי תפירת שכבת השרירים תחילה, ולאחר מכן העור. לאחר הוצאת המושתל מלוח הניתוחים ומחוץ לחומר ההרדמה, יש לתת מיליליטר אחד של מלח חם תת עורית ולשים את המושתל בכלוב מוכן עם חימום להשגחה בהתאם לפרוטוקולי ההתאוששות לאחר הניתוח.החלמה מלאה וקבלה נצפו במקרה של השתלות לב מורין הטרוטופיות סינגניות וקוגנטיות במשך 100 ימים לאחר הניתוח. עם זאת, דחייה מהירה נצפתה כבר שבעה ימים לאחר הניתוח במקרה של השתלות לב הטרוטופיות הטרוטופיות גדולות. במהלך האנסטומוזות, עליך לשמור על מודעות למקום שבו התפר שלך נמצא בתחום הניתוח.אי ביצוע פעולה זו עלול להוביל לנזק קריטי למבנים או לסבך של התפר. טכניקות מיקרוכירורגיות אלה של דיסקציה ואנסטומוזה ישימות מאוד למודלים כירורגיים אחרים של יונקים קטנים, כולל השתלת כליה הטרוטופית והשתלת כבד אורתוטופית, ומאפשרות לחוקרים לחקור דחיית שתלים.

a-modified-murine-heterotopic-heart-transplant-protocol-matching

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

הלב heterotopic העכבר מודל השתלת הוכח על ידי חוקרים רבים להיות שיטה חשובה לחקר המנגנונים של דחייה התגובה החיסונית. עם זאת, טכניקות מעורבות עדיין מאתגרת. על ידי שינוי שיטות סטנדרטיות יש לנו הצלחה עם יותר מ 1000 השתלות.

השתלת הלב Heterotopic ב עכברים

מודל השתלת לב בצוואר הרחם העכברי הוא גם מתאים חיסוני, כמו גם מחקרי פציעת reperfusion איסכמיה. שינינו את התהליך תוך שימוש בטכניקת שרוול שאינו תפר וביצעו יותר מ 1,000 השתלות מוצלחות עם גישה זו.  במסמך זה, אנו מספקים פרטים נוספים בטכניקה זו כדי להשלים את הווידאו.

עכברי צוואר הרחם לב השתלת דגם שימוש בטכניקת חפתים השתנה

טכניקה מודגמת עבור ההליך המיקרו-כירורגי להשתלה הטרוטופית של לבבות בעכברים, כולל שיטות פשוטות לקצירת תורם ואנסטומוזיס של כלי הדם המקבל.

שיטה שונה לHeterotopic מאוס לב Transplantion

כתב היד מתארת ​​את הצעדים הנדרשים כדי לבצע את השתלת לב heterotopic בעכבר.

טכניקת השתלות Murine Heterotopic לב

טכניקת השרוול מקצרת ומקלה על המודל של השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית בעכברים על ידי הימנעות מאנסטומוזות תפרים מאתגרות מבחינה טכנית של כלי דם קטנים. הפרטים הטכניים המוצגים במאמר וידאו זה אמורים לאפשר לחוקרים לבסס מודל זה במעבדותיהם.

Heterotopic צוואר הרחם לב השתלה בעכברים

אנו מתארים מודל של הטרוהנושא השתלת לב הבטן בחולדות, רומז שינויים של אסטרטגיות נוכחיות, אשר להוביל גישה כירורגית פשוטה. בנוסף, אנו מתארים מודל דחייה הרומן על-ידי הזרקה באוזן של תאים חיוניים שרירי הלב, המאפשר ניתוח נוסף השתלת אימונולוגיים בחולדות.

מודל אימונוולוגי עבור הלב הטרוולפית ושריר הלב השתלת תא בחולדות

אנו מציגים גישה הצינור הפנימי לטכניקת השרוול של העכבר צוואר הרחם הטרוסקסואלים השתלת לב כדי לעזור אוורט הספינה על השרוול. שיתוף פעולה בין שני מנתחים. מנוסים מקצר את זמן...

אופטימיזציה של טכניקת השרוול עבור השתלת לב מוריין

אנו מציגים פרוטוקול לשימוש במערכת זלוף סנגווינית נורמותרמית ex vivo להעברת טיפולים לאלוגרפט לב שלם במודל השתלת לב הטרוטופית חזירית.

פרוטוקול השתלת לב הטרוטופית חזירית להעברת טיפולים לאלוגרפט לבבי

בפרוטוקול הנוכחי, מודל השתלת לב עכבר משמש לחקירת מנגנון דחיית אלוגרפט לבבי. במודל השתלת לב הטרוטופי זה, יעילות הניתוח משופרת, והישרדותם של שתלי לב מובטחת על ידי אנסטומוזה מקצה לקצה של צוואר הרחם של השתלת לב באמצעות טכניקת שרוול שונה.

טכניקת שרוול שונה למודל השתלת לב הטרוטופי של עכבר צוואר הרחם

מודלים להשתלת לב עכברים מייצגים כלי מחקר חשובים לחקר אימונולוגיה של השתלות. הפרוטוקול הנוכחי מפרט השתלת לב צווארית הטרוטופית של עכברים הכוללת מיקום של אזיקים על עורק הצוואר המשותף של המושתל ועל גזע עורק הריאה של התורם כדי לאפשר זרימת דם למינרית.

השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית בעכבר תוך שימוש באזיקי כלי דם

פרוטוקול זה מציג טכניקת אנסטומוזה פשוטה מקצה לצד להשתלת לב צוואר הרחם בעכברים, ומספק מודל חזק וניתן לשחזור ללימוד אימונולוגיה של השתלות.

השתלת לב עכבר הטרוטופית צווארית באמצעות טכניקת אנסטומוזה מקצה לצד לחקר אימונולוגיה של השתלות

למדו טכניקה מודרנית להשתלת לב הטרוטופי בעכברים עם שיפורי הרדמה ושיכוך כאבים. מודל זה מאפשר חקר חסינות השתלה ודחיית איברים בקנה מידה מיקרוסקופי.

פרוטוקול השתלת לב הטרוטופי מורין מותאם לסטנדרטים עכשוויים של טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים

גלה סרטונים נוספים