ניתוח נוזלים סינוביאלי לזיהוי דלקת מפרקים ניוונית

ניתוח נוזל סינוביאלי יכול לחשוף את מידת הדלקת ואת נוכחותם של גבישים פתוגניים במהלך ההערכה הראשונית של המטופל עם תסמיני שרירים ושלד ועירוי משותף. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא הפשטות והאמינות שלה. בכמה צעדים, המטפל יכול לקבל מידע אבחוני חשוב על מחלתו של המטופל.

זיהוי גבישים ספציפיים חיוני לאבחון ולטיפול. גבישי אוראט מצביעים על שיגדון, בעוד שסידן פירופוספט וגבישי סידן אחרים מצביעים על ארתרופתיות הקשורות לסידן או צורה חמורה יותר של דלקת מפרקים ניוונית. כדי להתחיל, לקחת את הדגימה נוזל סינוביאלי שנאסף במהלך arthrocentesis של המפרקים נפוחים של חולים.

הוסף הערות לנפח הדגימה במיליליטרים והעבר אותה בנפרד לצינור המכיל EDTA נוגד קרישה וצינור נוסף ללא כל תוסף. במקרים החשודים של זיהום, יש להעביר כמה מיליליטרים מדגימת הנוזל הסינוביאלי לבקבוק תרבית לצורך בדיקה מיקרוביולוגית. כדי לבחון את הדגימה באופן מקרוסקופי, קחו צינור המכיל את הדגימה והגדירו את צבע הדגימה, שיכול לנוע בין צהוב בהיר לצהוב כהה.

רשום נוכחות של דם, אם בכלל. הגדר את מידת הבהירות של הדגימה על ידי התבוננות בה בתאורה האחורית ועל ידי קביעת קלות הקריאה של דף מודפס דרך הצינור המכיל את הדגימה. לאחר מכן להעריך את צמיגות הדגימה על ידי טפטוף אותו פיפטה חד פעמית.

בעוד המראה של מחרוזת ארוכה של נוזל מצביע על צמיגות גבוהה, היווצרות טיפות מעידה על צמיגות נמוכה. התבונן בדגימה דרך הצינור עם אור ברקע לנוכחות של חומרים חלקיקיים כלשהם כולל שברי רקמות או פיברין. כדי לקבוע את ספירת תאי הדם הלבנים הכוללת, ציירו 0.5 מיקרוליטר של הדגימה מהשפופרת המכילה EDTAA באמצעות פיפטה Malassez-Potain.

השתמש באותה פיפטה כדי לצייר 9.5 מיקרוליטר של 0.1% תמיסה כחולה מתילן. מערבבים את הדגימה ואת התמיסה הכחולה מתילן בפיפטה על ידי היפוך עדין. יש להשליך את הטיפות הראשונות לפני שיוצקים את התערובת לתא הספירה של המוציטומטר.

כעת ספרו את התאים בשני ריבועים רצופים מתוך תשעה והכפילו את המספר המתקבל ב-100. בטא את ספירת תאי הדם הלבנים הכוללת כמספר לויקוציטים למילימטר מעוקב. השתמש בדגימת הנוזל הסינוביאלי מהצינור ללא כל תוסף כדי לקבוע את ספירת תאי הדם הלבנים הדיפרנציאלית של דגימות הנוזל הסינוביאלי.

כדי לקבוע את ספירת התאים הדיפרנציאלית באמצעות צביעה על-חיונית, קח שקופית מוכנה לשימוש המצופה מראש בסגול קריסטל וכחול מתילן והנח טיפה אחת קטנה של דגימה במרכז השקופית. לאחר מכן, כסו את טיפת הדגימה עם תלוש כיסוי והניחו טיפה של שמן טבילה במיקרוסקופ על הכיסוי. כדי להשתמש בצביעה מסורתית להערכת ספירת התאים הדיפרנציאלית, התחל בהצבת טיפה קטנה של הדגימה בסוף שקופית נקייה.

כעת השתמש בשקופית שנייה או בהחלקת כיסוי כדי לפזר את הטיפה לאורך השקופית בתנועה קדימה. תנו לכתם להתייבש באוויר. בדוק את השקופית המכילה את המריחה המיובשת באוויר מתחת למטרה של טבילת שמן 1, 000X.

להעריך את ספירת התאים הדיפרנציאלית על ידי ספירת 100 תאים עוקבים תוך הבחנה בין התאים הפולימורפוגרעיניים, המונוציטים והלימפוציטים זה מזה. נקו שקופית זכוכית עם נייר אופטי או רך טבול באתנול. יש למרוח טיפה קטנה של הדגימה שאינה מעורבבת עם תוסף כלשהו על מגלשת הזכוכית ולכסות אותה בכיסוי לפני הנחת השקופית מתחת למיקרוסקופ.

מקדו את השקופית מתחת למיקרוסקופ באמצעות יעד הגדלה בעוצמה נמוכה ובחנו אותה בזהירות תחת שדה בהיר עם מטרה פי 40. הסתכלו פנימה והחוצה על התאים כדי לזהות את הגבישים על פי גודלם וצורתם, אשר עשויים להיות בצורת רומבואידים, בצורת מחט או בצורת מוט. לאחר מכן הכניסו את המסנן המקטב בין מקור האור לדגימה.

ליצירת רקע כהה, סובבו את המקטב עד שהציר האופטי שלו ניצב למנתח. לאחר זיהוי גביש דו-צדדי, הכניסו את המפצה בין המקטב לדגימה והזיזו אותו במקביל או בניצב לציר האופטי של הגביש. שימו לב לצבע המתגלה על ידי הקריסטל.

עבור צביעה אדומה של אליזרין, ערבבו טיפה של דגימת הנוזל הסינוביאלי עם נפח שווה של תמיסת Alizarin Red שהוכנה בעבר בשקופית נקייה. כסו את המגלשה בכיסוי ובחנו בהגדלה של 400X תחת מיקרוסקופ כדי לזהות את הגבישים. המאפיינים המקרוסקופיים של דגימות נוזל סינוביאלי הצביעו על מידת הדלקת.

דגימה עם צבע צהוב בהיר ובהירות רבה יותר קשורה בדרך כלל למצבים לא דלקתיים כגון דלקת מפרקים ניוונית. לעומת זאת, דגימה בעלת צבע צהוב כהה ומראה עכור מצביעה על נוכחות תאים, פסולת, חומצה היאלורונית ושברי פיברין הקשורים להתפרצויות דלקתיות. הלויקוציטים שנצפו בדגימות נוזל סינוביאלי מחולי אוסטאוארתריטיס היו בעיקר מונוציטים ותאים חד-גרעיניים אחרים כמו סינוביוציטים.

גבישי סידן פירופוספט התגלו בדגימות נוזל סינוביאלי המעידות על רמות גבוהות יחסית של ציטוקינים דלקתיים. יתר על כן, צביעה אדומה חיובית של אליזרין חשפה נוכחות של גבישי סידן פוספט בסיסיים בדגימות. חשוב מאוד לבחון היטב את המגלשה תחת אור רגיל בעת חיפוש גבישים.

זכור כי גבישי pyrophosphate הם לעתים קרובות birefringent חלש וניתן להחמיץ תחת אור מקוטב. נוכחותם של גבישי סידן בנוזל הסינוביאלי והקשר שלהם לצורה חמורה יותר של מחלה הובילו חוקרים לחקור מנגנונים חדשים בפתוגנזה ובהתקדמות של דלקת מפרקים ניוונית.