Name: דגימת מומס מומס על פני ממשק קרקע-מים אוקסיק-אנוקסי באמצעות פרופילי מיקרודיאליזה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: למדו כיצד לבנות פרופיל מיקרודיאליזה לדגימת מומסים במי הניקוז של קרקעות בלתי מופרעות. שיטה זו מאפשרת ניטור בזמן אמת של שינויים בריכוזי מומסים בממשק קרקע-מים תחת תנאים אנאירוביים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו ממומנת על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (41977320, 41571305) והקרן המיוחדת של תוכנית המפתח של XJTLU (KSF-A-20).

1. הכנת דוגם מיקרודיאליזה פרטני
<ol><li>חיתוך מדויק של צינורות ננוממברנה טהורים (קוטר פנימי x קוטר חיצוני x אורך: 1.0 מ"מ x 1.7 מ"מ) לסך של 33 צינורות קצרים (58 מ"מ אורך).</li>
	<li>חותכים במדויק את צינור ה-PTFE ל-66 צינורות (באורך 180 מ"מ) בעזרת סכין קרמית. הערה: אין להשתמש בסכינים על בסיס מתכת כדי למנוע זיהום.</li>
	<li>ערבבו לחלוטין את דבק האפוקסי בעל שני החלקים (AB) על כל צלחת פלסטיק נקייה, והניחו לו לעמוד במשך 30 דקות עד שהוא הופך לדביק. יש למרוח בזהירות את דבק האפוקסי AB על המשטח החיצוני של החלק העליון של צינור ה-PTFE. ודא כי דבק אפוקסי AB מכסה רק את אורך 4 מ"מ של הצינור וכי אין צינורות חוסמי דבק נוספים.</li>
	<li>חבר את שני צינורות ה- PTFE שהוכנו בשלבים 1.2-1.4 עם כל צינור ננוממברנה שהוכנה בשלב 1.1 על ידי הברגה עדינה של צינורות ה- PTFE לתוך צינור הננוממברנה. הערה: אין לאפשר להצטברות עודפי דבק על המפרק. יש לוודא כי אין דבק המזהם את צינור הננוממברנה.</li>
	<li>חזור על שלב 1.4 כדי להרכיב באופן מלא את כל 33 דוגמי המיקרודיאליזה הבתוליים.</li>
	<li>תנו לדוגמים שהורכבו בשלב 1.6 לעמוד למשך הלילה כדי להבטיח ריפוי וייצוב מלא של הדבק.</li>
	<li>שפר את ההידרופיליות ונקה את דוגמי המיקרודיאליזה על ידי השרייתם באתנול (99.5% טוהר) למשך שעה אחת, ולאחר מכן ניקוי קולי (טמפרטורת החדר) עם HNO3 מדולל 2% ומים אולטרה-טהורים למשך 15 דקות כל אחד.</li>
	<li>בדוק את הפטנט ואת האטימות של דוגם מיקרודיאליזה על ידי בעבוע במים באמצעות מזרק 5 מ"ל.</li>
</ol>2. הרכבת פרופיל מיקרודיאליזה
<ol><li>השתמשו בקובץ CAD המצורף (קובץ משלים 1) כדי להדפיס את השלד המתוכנן מראש באמצעות חומר ניילון (איור 1C-2).</li>
	<li>חלול מיכל PVC (שטוף חומצה) עם שני חריצים מקבילים (מרווח של 5 ס"מ) כדי להתאים לגודל השלד. השתמש במודול החריטה במדפסת התלת-ממד לחריץ.</li>
	<li>בנה מחבר יחיד לרבים על ידי ייצוב דבק אפוקסי בצורת מכסה של צינור צנטריפוגה 50 מ"ל. הכניסו 33 פקקי סיליקון (1 ס"מ אורך) לדבק האפוקסי לפני הריפוי, והניחו לעמוד למשך הלילה.</li>
	<li>הוציאו את מחבר האחד לרבים ממכסה הצינור.</li>
	<li>השתמשו בסכין קרמית כדי לחתוך את דבק האפוקסי הנרפא כך שכל קצוות מכסה הסיליקון יהיו ללא הפרעה.</li>
	<li>שטפו היטב את המחבר האחד לרבים עם HNO3 מדולל ב-2% ומים אולטרה-טהורים במשך 15 דקות כל אחד. יבש את המחבר האחד לרבים בתנאי סביבה.</li>
	<li>חבר שסתום תלת-כיווני לתחתית הצינור כדי לשמש כמיכל חציצה.</li>
	<li>הרכיבו את מיכל האגירה על ידי התקנת מחבר יחיד לרבים לצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל באמצעות דבק אפוקסי AB.</li>
	<li>הרכיבו את דוגמי המיקרודיאליזה הבודדים שהוכנו בסעיף 1 על השלד (שלב 2.1). בשלב זה, השתמשו בדבק מותך חם כדי לסייע בקיבוע כך שכל דוגם יהיה מקביל לקצה העליון/תחתון של השלד.</li>
	<li>חזור על שלב 2.9 עד שכל דוגמי המיקרודיאליזה (n = 33) יותקנו על השלד.</li>
	<li>ודאו ש-33 הדוגלים משני צידי השלד עוברים דרך חריצי ה-PVC. אטמו את הרווחים במפרקי השלד והחריצים בדבק אפוקסי AB.</li>
	<li>חבר את 33 הדוגלים בצד אחד של השלד למיכל חציצה באופן אטום באמצעות שסתום חיבור אחד לרבים המותקן מראש בצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל (שלב 2.8)</li>
	<li>חבר שקית עירוי רפואית ממולאת מראש במים (18.3 MΩ) למיכל החיץ דרך השסתום התלת-כיווני.</li>
	<li>השתמשו במכסי סיליקון כדי לסגור את 33 הדגימות בצד הדגימה. בדוק שוב את הפטנט ואת האטימות של כל דוגם מיקרודיאליזה על ידי סיבוב המסתם התלת-כיווני, המאפשר למים לזרום משקית העירוי הרפואי אל הדוגם. לאחר השלמת כל הבדיקות, סגור וכבה את כל הדוגלים ואת השסתום במיכל האגירה.</li>
</ol>3. דגירה בקרקע
<ol><li>לפני הדגירה של קרקע מוצפת, degas את המים בשקית עירוי רפואי כדי להסיר חמצן. גז חנקן מבעבע בן לילה במסלול של קו גז חנקן בעל טוהר גבוה לשקית העירוי הרפואי (איור 1-C8).</li>
	<li>השתמש בשסתום תלת-כיווני כדי לסגור את החיבור בין הפרופיילר לבין השקית המפורקת.</li>
	<li>הוסיפו בזהירות 450 גרם אדמה מנופה ומיובשת באוויר (גודל חלקיקים < 2 מ"מ) למיכל PVC, המאפשר לחמישה דוגמי מיקרודיאליזה להישאר מעל פני הקרקע.</li>
	<li>השתמש ברקמה כדי לכסות את פני הקרקע, ולאחר מכן שפך מים טהורים במיוחד (18.3 MΩ) על הקרקע כדי להציף אותה. הסר את הרקמה כאשר הקרקע מוצפת במלואה על ידי 5 ס"מ מעל פני הקרקע.</li>
	<li>נקה את המערכת עם התמיסה הטעונה מראש מיד לאחר אתחול דגירה הקרקע. הפעל את החיבור בין השקית האנאירובית לבין דוגם הדיאליזה כדי לשטוף את מערכת הדגימה. השתמש פי 10 מהנפח הכולל של הדוגם בעת ניקוי כל דוגם במים.</li>
	<li>בסיום הניקוי של דוגם אחד, מכסים אותו באמצעות מכסה סיליקון נקי.</li>
	<li>חזור על שלב 3.6 עד שכל הדוגמים ינוקו. בשלב זה מוקמת מערכת דגירה ודיגום קרקע מוצפת אחת.</li>
	<li>התאימו את השקית האנאירובית לגובה פני המים.</li>
	<li>ודא שכל הצינורות מלאים במים. אם לא, הסירו את המכסה והורידו את ראש הצינור, כדי לאפשר למים לזרום החוצה מהשקית האנאירובית.</li>
	<li>סגור את כל הכובעים והשסתומים.</li>
	<li>כבו את החיבור בין השקית האנאירובית לדוגם הדיאליזה במהלך הדגירה למשך 7 ימים.</li>
</ol>4. דגימת פרופיל מיקרודיאליזה
<ol><li>לפני הדגימה, התאימו את מפלסי המים במיכל הקרקע, בראשי הדגימה ובשקית האנאירובית לגובה דומה כדי למנוע פוטנציאל מים שונה במידה ניכרת. תמיד לשמור על נוהג זה לאורך תקופת הדגירה הקרקע.</li>
	<li>הפעל את החיבור בין השקית האנאירובית למיכל החיץ.</li>
	<li>הסר את מכסה הדוגם הראשון מלמעלה למטה.</li>
	<li>השתמש פיפטה כדי לשאוף במדויק 133 μL מן הדוגם לבקבוקון (0.6 מ"ל) כי הוא מראש עם 133 μL של 2% HNO3 לשימור.</li>
	<li>במהלך תהליך הדגימה, שימו לב לזרימה איטית אך אחידה של טיפות מים לכיוון דוגם המיקרודיאליזה בתא התצפית (איור 1A-9) של השקית האנאירובית.</li>
	<li>סגור את ראש הצינור עם מכסה סיליקון. מעבר לצינור הדגימה הבא. הערה: לצורך ניתוח של אלמנטים רגישים לחמצון-חיזור כגון ברזל Fe, יש להשתמש בשיטת שימור שונה כגון תמיסת EDTA נטולת גז (10 מילימטר), ולבצע את הדגימה בתנאי טיהור חנקן.</li>
	<li>חזור על שלב 4.6 עד שכל 33 הדגימות נאספו. כבה את החיבור בין השקית האנאירובית למיכל החיץ. הערה: בדרך כלל ניתן לסיים את הדגימה תוך 15 דקות. עם העיצוב הנוכחי, הדגימה מתבצעת על בסיס יומי כדי למנוע זיהום צולב בין צינורות. למרות שהדיפוזיה המומסה לאורך הצינור איטית, היא תתפזר לתוך מיכל החיץ ותדהם צינורות אחרים.</li>
	<li>מיד לאחר הדיגום ביום 6, יש לחדש את המים המוצפים, אשר יגרמו להפרעה על פני הקרקע.</li>
	<li>חשב את שחזור נפח הדגימה על ידי שקילת בקבוקון הדגימה לפני ואחרי העברת דגימת מי הנקבוביות.</li>
	<li>השתמש בספקטרומטריית מסה פלזמה מצומדת אינדוקטיבית (ICP-MS) כדי למדוד את הריכוזים המומסים הכוללים של יסודות במי הנקבוביות. הערה: עקומת תקן חיצונית שימשה לכימות הריכוז, ואילו התקן הפנימי Rh שימש לניטור היציבות התפעולית של ICP-MS.</li>
</ol>

<ol><li>Brune, A., Frenzel, P., Cypionka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+at+the+oxic-anoxic+interface%3A+Microbial+activities+and+adaptations%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Life at the oxic-anoxic interface: Microbial activities and adaptations.</a> FEMS Microbiology Reviews. 24 (5), 691-710 (2000).</li>
<li>Yuan, Z. -F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracing+the+dynamic+changes+of+element+profiles+by+novel+soil+porewater+samplers+with+ultralow+disturbance+to+soil-water+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Tracing the dynamic changes of element profiles by novel soil porewater samplers with ultralow disturbance to soil-water interface.</a> Environmental Science & Technology. 53 (9), 5124-5132 (2019).</li>
<li>Henkel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagenetic+barium+cycling+in+Black+Sea+sediments+-+A+case+study+for+anoxic+marine+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Geochimica+et+Cosmochimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Diagenetic barium cycling in Black Sea sediments - A case study for anoxic marine environments.</a> Geochimica et Cosmochimica Acta. 88, 88-105 (2012).</li>
<li>Zhong, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+insights+into+the+Thaumarchaeota+in+the+deepest+oceans%3A+Their+metabolism+and+potential+adaptation+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Novel insights into the Thaumarchaeota in the deepest oceans: Their metabolism and potential adaptation mechanisms.</a> Microbiome. 8 (1), 78(2020).</li>
<li>Lueder, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+physical+perturbation+on+Fe%28II%29+supply+in+coastal+marine+sediments%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Influence of physical perturbation on Fe(II) supply in coastal marine sediments.</a> Environmental Science & Technology. 54 (6), 3209-3218 (2020).</li>
<li>Sharma, N., Wang, Z., Catalano, J. G., Giammar, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+responses+of+trace+metal+bioaccessibility+to+fluctuating+redox+conditions+in+wetland+soils+and+stream+sediments%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Earth+and+Space+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Dynamic responses of trace metal bioaccessibility to fluctuating redox conditions in wetland soils and stream sediments.</a> ACS Earth and Space Chemistry. 6 (5), 1331-1344 (2022).</li>
<li>Vrana, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passive+sampling+techniques+for+monitoring+pollutants+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22TrAC+Trends+in+Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Passive sampling techniques for monitoring pollutants in water.</a> TrAC Trends in Analytical Chemistry. 24 (10), 845-868 (2005).</li>
<li>VanOploo, P., White, I., Macdonald, B. C. T., Ford, P., Melville, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+peepers+to+sample+pore+water+in+acid+sulphate+soils%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Soil+Science%22%5BJournal%5D)">The use of peepers to sample pore water in acid sulphate soils.</a> European Journal of Soil Science. 59 (4), 762-770 (2008).</li>
<li>Harper, M. P., Davison, W., Tych, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal%2C+spatial%2C+and+resolution+constraints+for+in+situ+sampling+devices+using+diffusional+equilibration%3A+Dialysis+and+DET%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Temporal, spatial, and resolution constraints for in situ sampling devices using diffusional equilibration: Dialysis and DET.</a> Environmental Science & Technology. 31 (11), 3110-3119 (1997).</li>
<li>Harper, M. P., Davison, W., Tych, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+pore+water+concentrations+from+DGT+profiles%3A+a+modelling+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Aquatic+Geochemistry%22%5BJournal%5D)">Estimation of pore water concentrations from DGT profiles: a modelling approach.</a> Aquatic Geochemistry. 5 (4), 337-355 (1999).</li>
<li>Gao, S., DeLuca, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+microdialysis+to+assess+short-term+soil+soluble+N+dynamics+with+biochar+additions%5BTitle%5D)+AND+%22Soil+Biology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Use of microdialysis to assess short-term soil soluble N dynamics with biochar additions.</a> Soil Biology and Biochemistry. 136, 107512(2019).</li>
<li>Buckley, S., Brackin, R., Jämtgård, S., Näsholm, T., Schmidt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+in+soil+environments%3A+Current+practice+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Soil+Biology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Microdialysis in soil environments: Current practice and future perspectives.</a> Soil Biology and Biochemistry. 143, 107743(2020).</li>
<li>Miró, M., Jimoh, M., Frenzel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+dynamic+approach+for+automatic+microsampling+and+continuous+monitoring+of+metal+ion+release+from+soils+exploiting+a+dedicated+flow-through+microdialyser%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A novel dynamic approach for automatic microsampling and continuous monitoring of metal ion release from soils exploiting a dedicated flow-through microdialyser.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 382 (2), 396-404 (2005).</li>
<li>Maddala, S., Savin, M. C., Stenken, J. A., Wood, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrogen+dynamics%3A+Quantifying+and+differentiating+fluxes+in+a+riparian+wetland+soil%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Earth+and+Space+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Nitrogen dynamics: Quantifying and differentiating fluxes in a riparian wetland soil.</a> ACS Earth and Space Chemistry. 5 (5), 1254-1264 (2021).</li>
<li>Yuan, Z. -F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+measurement+of+aqueous+redox-sensitive+elements+and+their+species+across+the+soil-water+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Environmental+Sciences%22%5BJournal%5D)">Simultaneous measurement of aqueous redox-sensitive elements and their species across the soil-water interface.</a> Journal of Environmental Sciences. 102, 1-10 (2021).</li>
<li>Hamilton, E. M., Young, S. D., Bailey, E. H., Humphrey, O. S., Watts, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Online+microdialysis-high-performance+liquid+chromatography-inductively+coupled+plasma+mass+spectrometry+%28MD-HPLC-ICP-MS%29+as+a+novel+tool+for+sampling+hexavalent+chromium+in+soil+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Online microdialysis-high-performance liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry (MD-HPLC-ICP-MS) as a novel tool for sampling hexavalent chromium in soil solution.</a> Environmental Science & Technology. 55 (4), 2422-2429 (2021).</li>
<li>Yuan, Z. -F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+and+dynamic+distributions+of+multiple+elements+and+their+species+in+the+rice+rhizosphere%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+and+Soil%22%5BJournal%5D)">Distinct and dynamic distributions of multiple elements and their species in the rice rhizosphere.</a> Plant and Soil. 471 (1), 47-60 (2022).</li>
<li>Teasdale, P. R., Batley, G. E., Apte, S. C., Webster, I. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pore+water+sampling+with+sediment+peepers%5BTitle%5D)+AND+%22TrAC+Trends+in+Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Pore water sampling with sediment peepers.</a> TrAC Trends in Analytical Chemistry. 14 (6), 250-256 (1995).</li>
<li>Wey, H., Hunkeler, D., Bischoff, W. -A., Bünemann, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field-scale+monitoring+of+nitrate+leaching+in+agriculture%3A+assessment+of+three+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Monitoring+and+Assessment%22%5BJournal%5D)">Field-scale monitoring of nitrate leaching in agriculture: assessment of three methods.</a> Environmental Monitoring and Assessment. 194 (1), (2021).</li>
<li>Cai, Y. -J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+community+structure+is+stratified+at+the+millimeter-scale+across+the+soil-water+interface%5BTitle%5D)+AND+%22ISME+Communications%22%5BJournal%5D)">Microbial community structure is stratified at the millimeter-scale across the soil-water interface.</a> ISME Communications. 2 (1), 53(2022).</li>
<li>Jones, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manganese-driven+carbon+oxidation+at+oxic-anoxic+interfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Manganese-driven carbon oxidation at oxic-anoxic interfaces.</a> Environmental Science & Technology. 52 (21), 12349-12357 (2018).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין ניגודי עניינים.

בהתבסס על ניסויים ושיטות קודמות2, חלק מהשיקולים דורשים תשומת לב מיוחדת במהלך הרכבת פרופיל מיקרודיאליזה ודגימת מי נקבוביות. ראשית, יש לחבר בזהירות את צינור הננוממברנה ואת צינור החיבור כדי למנוע סתימות או דליפות בחיבור. כאשר הקרקע מודגרת בתנאים מוצפים, החדרת חמצן תחמצן במהירות ותזרז ברזל ברזלי בצינורות הדיאליזה (איור 4). מסיבה זו, לפני הרכבת פרופיל המיקרודיאליזה, יש לבדוק את תקינות כל צינור מיקרודיאליזה (ללא נזק), את אטימות החיבורים ואת הפטנט של הצינור. באופן דומה, חיבור מסגרת התמיכה לדופן הצדדית של מיכל הדגירה צריך להיעשות בזהירות כדי למנוע דליפה. לפני ניסויים רשמיים, בדיקות דליפה במיקומי החיבור השונים הן תמיד בראש סדר העדיפויות. שנית, הפרבוסט בשקית האנאירובית חייב להיות מחומצן כראוי. אחרת, ברזל ברזל במי נקבוביות יגיב עם החמצן שבפרפוזט ליצירת משקעים בלתי מסיסים (איור 4). זה ישנה באופן חמור את ההתמיינות והריכוז של המומסים ואת תהליכי הדיפוזיה לכיוון צינורות הננוממברנה. שלישית, תדירות דגימה נמוכה (ימים ושבועות) תגרום למומס להתפזר לאזור החיץ. הדבר עלול לזהם את כל דגימת הפרופיל. כדי להתמודד עם בעיה זו, ניתן לשקול שלושה פתרונות אפשריים: (1) דגימה בתדירות גבוהה, כגון פעם ביום (עם זאת, הדבר עלול להוביל לדלדול מומסים ליד דוגם הדיאליזה כאשר מבוצעות דגימות מרובות); (2) הארכת אורך הצינור המחבר באזור ההזרקה כנדרש; (3) תכנון מחדש של צינור הדגימה כך שישיג שליטה יחידה על צינור יחיד. אלה גם כיוונים לשיפור המכשיר בעתיד. רביעית, בתהליך הדיגום, יש לוודא כי מפלס פני המים בשקית האנאירובית, הקרקע המוצפת וצינור הדיגום נמצאים בערך באותו גובה כדי לאזן את לחץ המים. אחרת, הפרש פוטנציאלי מים בתוך צינור הממברנה ומחוצה לו יגרום לירידה או עלייה בדיפוזיה המומסה.
מגבלות ראשית, מכיוון שפרופיל המיקרודיאליזה אינו זמין מסחרית, השיטה נשארת גוזלת זמן מבחינת הכנת המכשיר. נדרשו ימים להכנת צינור דיאליזה יחיד, כולל הדפסת שלד התמיכה, הרכבת המכשיר וניקוי. אבל התכונות הבאות לשימוש חוזר מגשרות לחלוטין על הפער הזה. שנית, ישנן מגבלות מסוימות ביישום המכשיר על תרחישי קרקע שאינם מוצפים, בהם ניתן להשתמש במציציםעבור 18. בשל ההבדל המשמעותי בפוטנציאל המים בין החלק הפנימי והחיצוני של צינור הממברנה בקרקע יבשה, התמיסה הטעונה מראש חווה אובדן דיפוזיה; ואכן, בבדיקה הראשונית נצפו שחזורים בהיקפי דגימה שונים בטווח של 10%-36% (נתונים מפורטים לא מוצגים), מה שיוצר אי ודאות לגבי התוצאות.
השוואת השיטה לשיטות קיימות או חלופיות השיטה מתייחסת חלקית לעובדה שהדוגלים הפסיביים הקיימים אינם יכולים לדגום שוב ושוב וממזערת את עומס העבודה של הכנת הדגימה, במיוחד עבור דגימה ושימור של מי נקבוביות אנוקסיים2. השינויים המיידיים בריכוז ובאפיון של מומסים דיאליסטיים יכולים לשקף ברגישות את תגובת הממשק האוקסיק-אנוקסי לכל הפרעה סביבתית. תיאורטית, דגימה בתדירות של דקות, שעות או ימים מאפשרת ללכוד את התהליכים המשתנים במהירות בממשק. עבור דוגמים פסיביים שצריכים להיות בפריסה במשך ימים, כמה רגעים חמים ונקודות חמות ניתן להחמיץ 6,19.
חשיבות ויישומים פוטנציאליים במדעי הסביבה גישה זו יכולה לקדם מחקרים ביו-גיאוכימיים בממשקים אוקסיק-אנוקסיים, למשל, כדי למצוא רגעים חמים ונקודות חמות של תהליכים ביו-גיאוכימיים בתנאי Eh-pH ספציפיים. תהליך החיזור הוא התהליך הבסיסי של פעילויות החיים1. מיקרואורגניזמים, במיוחד, זקוקים לתנאי סביבת חיים אופטימליים ורגישים מאוד להפרעות סביבתיות1. התוצאה היא התפתחות דינמית ביותר של קהילות מיקרוביאליות ותהליכים ביו-גיאוכימיים בסביבות הטרוגניות20. דגימה ישירה, מבלי לקחת בחשבון את ההטרוגניות הגבוהה, נוטה לקבל דגימה מעורבת מתנאי סביבה שונים. זה גורם לאי-התאמה בין המידע הכימי שנמדד לבין מיקרואורגניזמים מרכזיים20. במרחק של סנטימטרים ספורים משכבת פני השטח של אדמה או משקעים בשדה אורז מוצף טיפוסי, ישנם שיפועי חמצון-חיזור תלולים, כמו גם שיפועים פיזיקליים, כימיים21 וביולוגיים שונים1. הטכנולוגיה חייבת להיות מסוגלת ללכוד אותות ביו-גיאוכימיים בקנה מידה מילימטרי; אחרת, נתונים שאינם תואמים את קנה המידה בפועל עלולים להוביל למסקנות מעורפלות. פרופיל המיקרודיאליזה מסוגל לנטר אותות ביוכימיים בקנה מידה מילימטרי בממשק קרקע-מים תוך ימים או שעות עם הפרעה מינימלית. במחקר זה נצפתה דינמיקה מרחבית-זמנית של אלמנטים שונים במשך 48 שעות, שייתכן שהיא קשורה להפרעה בחידוש המים. לכן, יישום רחב יותר של פרופיל מיקרודיאליזה עשוי לעזור להבין כיצד הפרעות משפיעות על תהליכים ביו-גיאוכימיים מרכזיים בעולם משתנה.

ממשק אוקסיק-אנוקסי הוא תכונה כללית אחת בביוספרה החיונית למחזור הביוגאוכימי1. ממשק זה הוא הטרוגני מאוד, כאשר הטווח המרחבי משתרע ממילימטרים בממשק משקעים/קרקע-מים 1,2 ועד אלפי מטרים באזור האנוקסי האוקייני 3,4. ממשק זה הוא בית גידול אידיאלי לחקר המורכבות של ביוגאוכימיה אלמנטאלית.
לממשקי קרקע-מים יש תכונת שיפוע אוקסיק-אנוקסית טיפוסית בתוך סנטימטרים והם נקבעים בקלות בניסויי מזוקוסמוס. החל מצריכת חמצן מולקולרי ממים עיליים, הקהילות המיקרוביאליות המתפקדות המרובדות מניעות את התפתחותם של שיפועים שונים, כגון שיפועים O2, pH ו-Eh, בקנה מידה מילימטרי1. מחזור ביוגאוכימי בממשק אוקסיק-אנוקסי רגיש להפרעות שונות בטבע 5,6. במקרה של משקעים ושדות אורז, קלט של חומר אורגני טרי כגון פסולת וקש, הצפות וניקוז תקופתיים, תנודות טמפרטורה וקיצוניות, וביוטורבציה יכולים לגרום לשינויים במחזור הביו-גיאוכימי בממשק אוקסיק-אנוקסי, וככל הנראה לגרום להשפעות מתמשכות, כגון פליטת גזי חממה, אטרופיקציה וזיהום במיקום נתון. לכן, השיפוע האוקסיק-אנוקסי בממשק קרקע-מים מספק חלון לחקר מחזורים ביו-גיאוכימיים גלובליים, בקנה מידה גדול. הדגימה המרחבית-זמנית והניתוח של חומרים מומסים לאורך ממשק קרקע-מים ברזולוציה גבוהה תמיד היו מעניינים; עם זאת, חלה התקדמות מוגבלת במתודולוגיה.
תוך עקיפת החסרונות של מיצוי מי נקבוביות הרסניים, נעשה שימוש הולך וגובר בדגימה פסיבית לא הרסנית כדי למנוע שינויים בכימיה של מי נקבוביות ולטפל במורכבות של הכנת הדגימה7. מספר מכשירים שיכולים לבצע דגימה מדויקת באתרו (מקנה מידה של מיקרומטר עד סנטימטר) היו בשימוש נרחב, כולל דוגמי דיאליזה באתרם (המכונים מציצים)8, שיווי משקל דיפוזי בשכבות דקות (DET)9, ושיפוע דיפוזי בשכבות דקות (DGT)10. חומרים מומסים נדגמים באופן פסיבי באמצעות מנגנון של תהליכי דיפוזיה וספיחה. למרות שהם הוכחו כיעילים בתיאור פרופילים כימיים אוקסיק-אנוקסיים, הם עדיין חד-פעמיים, מה שמגביל את היישום הרחב שלהם.
לאחרונה, טכניקת המיקרודיאליזה התפתחה ככלי רגיש שניתן להשתמש בו כדי לעקוב אחר דינמיקה של תרכובות מסיסות בקרקע בקנה מידה זמני של דקות עד ימים11,12,13,14. עבור תרחיש טיפוסי באמצעות מיקרודיאליזה במדעי הרפואה והסביבה, בדיקה זעירה, מסוג קונצנטרי המורכבת מקרום צינורי חדיר למחצה (כלומר, מיקרודיאלייזר) משמשת לבדיקת נוזל אינטרסטיציאלי או תמיסות קרקע כדי למנוע הפרעות משמעותיות על, תהליכים מטבוליים ודגימה כימית15,16. אחד היתרונות הגדולים ביותר של מיקרודיאליזה הוא לכידה באתרו של שינויי ריכוז תלויי זמן בקרקע או ברקמות ביולוגיות15,16.
בהתבסס על רעיון המיקרודיאליזה, פיתחנו פרופיילר מיקרודיאליזה קל יותר לשימוש, שנקרא בעבר פרופיילר הזרקת מי נקבוביות משולב (IPI), שיכול לבצע דיאליזה בשיווי משקל רציף של מומסים במי נקבוביות בהתבסס על עקרון דיפוזיית שיפוע ריכוז2. מכשיר המיקרודיאליזה משתמש בצינורות ננוממברנה חלולים לטעינה מקדימה אקטיבית של הפרפוזט ולדיפוזיה פסיבית של המומסים המומסים, השונה מדיפוזיית מי נקבוביות בתפזורת המשמשת במציצים, מסנני לחץ כגון דוגם ריזון, ו- DGT מבוסס הצטברות. המכשיר נבדק ואומת בדגימה הרקתית והמרחבית של יסודות קטיוניים ואניונים הן בקרקעות הרריות והן בקרקעות מוצפות (איור 1A-1)13,15,16. מיקרודיאליזה פשוטה של משאבה פנימה והחוצה ממזערת את מספר השלבים בהכנת הדגימה 2,15.
יצרנו פרופיילר מיקרודיאליזה על ידי שילוב קבוצה של דוגמים על שלד תמיכה חד-ממדי, ופרופיילר זה השיג דגימה ברזולוציה גבוהה בממשק קרקע-מים וריזוספרה 2,15,17. במחקר זה בוצעו שינויים ניכרים במכשיר הדגימה ובשיטת הדגימה כדי לאפשר איסוף של 33 דגימות מים נקבוביות בממשק קרקע-מים (עומק אנכי של 60 מ"מ) עם הפרעה מינימלית לניתוח יסודות במורד הזרם. כל הליך הדגימה לוקח ~ 15 דקות. מכיוון שפרופיל המיקרודיאליזה חדש בקהילת מדעי הסביבה, אנו מציגים פרטים על רכיבי המכשיר ונהלי הדגימה כדי להצביע על הפוטנציאל של מיקרודיאליזה בניטור השינויים באותות כימיים בממשק קרקע-מים.
תיאור של פרופיל מיקרודיאליזה מכשיר המיקרודיאליזה פרופיילר, עם שינויים נכונים בעיצוב הקודם2, מוצג באיור 1. גודל הנקבוביות האפקטיבי של הננוממברנה (איור 1C-1) מוערך כננומטרים ספורים בלבד כדי למנוע דיפוזיה של מולקולות גדולות ותאים מיקרוביאליים. בדיקה קודמת הצביעה על כך שדגירה מוצפת של 6 חודשים לא גרמה למשקעי ברזל בחלק הפנימי או החיצוני של משטח הצינור15. שלד מעוקל וחלול תוכנן (איור 1C-2) והודפס בתלת-ממד באמצעות חומר ניילון יציב. בסך הכל הותקנו 33 צינורות ננוממברנות (פוליאתרסולפון; גודל נקבוביות פני השטח: 0-20 ננומטר; קוטר פנימי x קוטר חיצוני x אורך דגימה אפקטיבי: 1.0 מ"מ x 1.7 מ"מ x 54 מ"מ; נפח תיאורטי: 42.4 מיקרוליטר) המחוברים לצינורות פוליטטרה-פלואוראתילן תואמים (PTFE) (אורך: 18 ס"מ x 2 ס"מ קוטר איור 1C-1) הותקנו על השלד ובצד אחד של מכל PVC (איור 1B). עבור התקן זה, רכיב הדגימה (איור 1B-1) נמצא במרחק של 2 ס"מ מהדופן הצדדית של מכל PVC. עבור צד ההזרקה (איור 1B-4), כל הצינורות חוברו למחבר יחיד לרבים, שהיה מקובע למיכל חציצה באופן אטום (איור 1B-7). שקית עירוי רפואית (איור 1B-11) שימשה לחיבור עם מיכל האגירה באמצעות שסתום תלת-כיווני. אטימות המערכת נבדקה בקפידה במים לפני פעולות ניסוי נוספות. המים הטעונים מראש (18.2 MΩ, 500 מ"ל) בשקית העירוי הרפואי הם תמיד נטולי חמצן (איור 1C-8). הגדרת התקן מפורטת ודגימת מי נקבוביות מתוארות כדלקמן.

<table><tbody><tr><td>מדפסת תלת מימד</td><td>Snapmaker, ארצות הברית</td><td>Snapmaker 2.0</td><td>&nbsp; דגם: A250</td></tr><tr><td>3M DP190 סקוץ'-ריתוך אפור</td><td>&nbsp; 3M ארצות הברית</td><td>489-483</td><td></td></tr><tr><td>צינור צנטריפוגה</td> אפור <td>טיטאן, סין</td><td>SWLX-JZ050-ZX</td><td>50 מ"ל, סכין קרמיקה מעוקרת ללא DNASE / RNASE / פרוטאז / פירוגן</td></tr><tr><td></td><td>R felngli, סין</td><td>NA</td><td>כללי</td></tr><tr><td>חומצה ללא EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CAS 60-00-4</td><td>Sigma-Aldrich#EDS-1KG</td></tr><tr><td>אתנול</td><td>אדמאס</td><td>CAS 64-17-5</td><td>מים ו-50 חל"מ (על ידי K.F.), 99.5%, SafeDry, עם מסננות מולקולריות,</td></tr><tr><td>דבק נמס חם Safeseal&nbsp;</td><td>מג'יק דרקון, סין</td><td>נ.א.</td><td>JTWJRRJB001</td></tr><tr><td>ספקטרומטריית מסה פלזמה בצימוד אינדוקטיבי&nbsp;</td><td>פרקין אלמר, בע"מ, שלטון, קונטיקט ארה"ב</td><td>נ.א.</td><td>דגם: NexION 350X</td></tr><tr><td>שקית אינפוזיה רפואית&nbsp;</td><td>הונאן קנגלילאי ציוד רפואי ושות', בע"מ</td><td>נ.א.</td><td>250 מ"ל, מעוקר</td></tr><tr><td>מערכת מים Milli-Q</td><td>Mingche, Inc., סין</td><td>NA</td><td>18.3 M&Omega;, דגם מערכת טיהור מים: 24UV</td></tr><tr><td>צינור ננו-ממברנה (פוליאתרסולפון)</td> <td>Motimo ממברנה טכנולוגיה ושות', בע"מ, טיאנג'ין, סין</td><td>NA</td><td>פוליאתרסולפון, קוטר פנימי 1 מ"מ, גודל נקבוביות < 20 ננומטר, מטופל מראש באתנול (99.5%)</td></tr><tr><td>גז חנקן</td><td>Suzhou Gas, Chuina</td><td>N.A.</td><td>טוהר גבוה</td></tr><tr><td>חומצה ניטרוטית (מרוכזת)</td> <td>Adamas</td><td>CAS 7697-37-2</td><td>69%, מתכת בודדת < 50 ppt, בקבוק PFA</td></tr><tr><td>סיבי ניילון</td><td>Soumiety</td><td>10052076600273</td><td>להדפסת תלת מימד</td></tr><tr><td>פיפטה&nbsp;</td><td>בונד A3 פיפטה</td><td>נ.א.</td><td>200 &mu; L</td></tr><tr><td>קצה פיפטה</td><td>טיטאן</td><td>T2-H-T0200</td><td>200 &mu; L, 300 &mu; L Tip Box לא סטרילי|200 &mu; L|טיטאן</td></tr><tr><td>צינור פוליטטרפלואורואתילן</td><td>ROHS, סין</td><td>CJ-TTL</td><td>קוטר החוצה 1 מ"מ</td></tr><tr><td>בקבוקון דגימה</td><td>טיטאן, סין</td><td>EP0060-B-N</td><td>0.6 מ"ל, מכסה סיליקון מעוקר DNASE / RNASE / פרוטאז / פירוגן</td></tr><tr><td></td><td>Fuchenxiangsu, סין</td><td>NA</td><td>קוטר פנימי 1 מ"מ, אורך 1 ס"מ</td></tr><tr><td>סוניקטור</td><td>אלמה</td><td>נ.א.</td><td>דגם: E120H</td></tr><tr><td>צינור מים PVC מרובע</td><td>Taobao.com</td><td>NA</td><td>גובה X רוחב, 12 ס"מ x 15 ס"מ</td></tr><tr><td>שסתום תלת כיווני לעירוי</td><td>OEM, סין</td><td>NA</td><td>רמה רפואית; גוף שסתום: חומר מחשב; ליבת שסתום: חומר PE; מכסה בורג: חומר ABS</td></tr></tbody></table>

דגימת מומס מומס על פני ממשק קרקע-מים אוקסיק-אנוקסי באמצעות פרופילי מיקרודיאליזה

Dissolved Solute Sampling Across an Oxic-Anoxic Soil-Water Interface Using Microdialysis Profilers

תהליכים ביוגאוכימיים משתנים במהירות הן בממדים מרחביים (בקנה מידה מילימטרי) והן בממדים טמפורליים (סקאלה של שעות עד קנה מידה יומי) בממשק אוקסיק-אנוקסי בתגובה להפרעות. פענוח השינויים הביו-גיאוכימיים המהירים דורש באתרם, כלים זעיר פולשניים ברזולוציית דגימה מרחבית וזמנית גבוהה. עם זאת, מכשירי הדגימה הפסיביים הזמינים אינם שימושיים במיוחד במקרים רבים בשל אופיים החד פעמי או בשל המורכבות ועומס העבודה הרב להכנת הדגימה.
כדי לטפל בבעיה זו, הוקם פרופיילר מיקרודיאליזה עם 33 צינורות ננוממברנה פוליאתרסולפון בודדים (חדירים למחצה, בגודל נקבוביות <20 ננומטר) המשולבים בשלד החד-ממדי (60 מ"מ) כדי לדגום באופן איטרטיבי את התרכובות המומסות במי נקבוביות על פני ממשק הקרקע-מים ברזולוציה גבוהה של 1.8 מ"מ (קוטר חיצוני בתוספת מרווח אחד, כלומר 0.1 מ"מ בין בדיקות). מנגנון הדגימה מבוסס על עקרון דיפוזיית שיפוע הריכוז. הטעינה האוטומטית של מים שעברו גזים מאפשרת הפרעה מינימלית למינים הכימיים על פני הממשק האוקסיק-אנוקסי.
מאמר זה מתאר את ההליכים של הגדרת המכשיר ודיגום מתמשך של מי נקבוביות על פני ממשק הקרקע-מים על בסיס יומי. פרופילי עומק ריכוז נמדדו באופן סלקטיבי לפני (ביום 6) ואחרי (ביום 7) הפרעות הנגרמות על ידי השקיה. התוצאות הראו כי פרופילי עומק הריכוז עברו שינויים מהירים, במיוחד עבור יסודות רגישים לחמצון-חיזור (כלומר, ברזל וארסן). פרוטוקולים אלה יכולים לסייע בחקירת התגובות הביו-גיאוכימיות בממשק קרקע-מים תחת הפרעות שונות הנגרמות על ידי גורמים פיזיקליים, כימיים וביולוגיים. המאמר דן ביסודיות ביתרונות ובחסרונות של שיטה זו לשימוש פוטנציאלי במדעי הסביבה.

בעקבות פרוטוקול זה הוקמה מערכת מיקרודיאליזה פרופיילר, כמתואר באיור 1. דגירה על הקרקע בוצעה בתנאי הצפה (24 מעלות צלזיוס, חשופים מאור). דגימות ביום 6 וביום 7 נמדדו באופן סלקטיבי כדי להצביע על הפרעה פוטנציאלית על פני הקרקע עקב הנוהג לחדש את מלאי המים המוצפים.
במהלך כל דגימה נצפה מספר עקבי של טיפות מים בחדר התצפית הזורמות לעבר דוגם המיקרודיאליזה, דבר המעיד על כך שתמיסת הדגימה המועברת חודשה ברציפות על ידי התמיסה בשקית האנאירובית. כפי שניתן לראות בתרשים 2, אחוז ההחלמה מנפח המדגם עמד בממוצע על 101.4% ±-0.9% ונע בין 100.2% ל-103.6%. התאוששות מעט גבוהה יותר של נפח הדגימה עשויה להצביע על הפרש מפלס מים בין השקית האנאירובית לבין החלק העליון של צינור הדגימה.
באמצעות הדגימות על פני ממשק הקרקע-מים שנאספו ביום 6 וביום 7, נקבעו הריכוזים המומסים הכוללים של ברזל (Fe), מנגן (Mn), ארסן (As), קדמיום (Cd), נחושת (Cu), עופרת (Pb), ניקל (Ni) ואבץ (Zn) במי הנקבוביות (איור 3). פרופילי עומק הריכוז השתנו מאוד בהתאם לסוג היסוד ולפני ואחרי התרגול של חידוש המים המוצפים. למרות שלא ביצענו כאן שכפולים מכיוון שמחקר זה השתמש בתכנון ניסויי מבוסס שיפוע, המחקר הקודם שלנו הראה שכפולים טובים של שינויים באותות כימיים תלויי עומק18.
ביום 6, הריכוזים המומסים של Mn, Fe ו- As גדלו יחד עם עומק הקרקע, ואילו אלה של Cu ו- Pb ירדו עם עליית עומק הקרקע. התוצאות עולות בקנה אחד עם העקרונות הכלליים והתצפיות בממשקי קרקע-מים; באופן ספציפי, סביבה מופחתת יותר בקרקע עמוקה יותר תגרום לשחרור רדוקטיבי משופר של Mn15, Fe ו- As תוך עיכוב שחרור של מתכות קטיוניות עקב היווצרות מינרלים פחות מסיסים. עם זאת, עבור Cd, Ni ו-Zn, פרופילי עומק הריכוז הצביעו על דפוס שונה, שכן לריכוזים המומסים הייתה מגמת עלייה מעומק של כ-20- מ"מ למקומות עמוקים יותר.
בהשוואה לפרופילי עומק הריכוז של Fe (4.95 מ"ג· L−1) ו- As (3.3 מיקרוגרם· L−1) בעומק של -12 מ"מ ביום 6, ריכוזי Fe (1.46 מ"ג· L−1) ו- As (0.8 מיקרוגרם· L−1) היו נמוכים משמעותית ביום 7; עם זאת, ריכוזי Fe ו-A היו גבוהים משמעותית (שיפוע תלוי עומק, p &lt; 0.001) מעומקים של -18 מ"מ עד -50 מ"מ. עבור רוב היסודות שנקבעו, למעט Mn, הריכוזים המומסים במים העיליים ובקרקע העילית האחידה בעומק של 15- מ"מ היו נמוכים משמעותית, בדרגות שונות, לאחר חידוש המים האירובי. צוין כי היה שיא ריכוז עבור Pb בעומק של כ -10 מ"מ ביום 7, מראה דפוס מנוגד לזה שנצפה ביום 6. תוצאות לא עקביות אלה נגרמות ככל הנראה על ידי הפרעה של חידוש המים והאבולוציה הזמנית של ביוגאוכימיה על פני ממשק קרקע-מים. בכל מקרה, פרופיל המיקרודיאליזה הצביע על הפוטנציאל הגדול שלו לעקוב אחר השינויים הרקתיים מרחביים בפרופילים כימיים על פני ממשק הקרקע-מים.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64358/64358fig01.jpg"> איור 1: מערך פרופילר מיקרודיאליזה לניטור דינמיקה כימית בממשקי קרקע-מים לעומק הקרקע של 50 מ"מ. (A) עבור פרופיילר הנמצא בשימוש בעומק 50 מ"מ, ראו גם איור משלים S1. המרכיבים העיקריים כוללים (B1,C1) 33 דוגמי מיקרודיאליזה (B2,C2) המותקנים על שלד מודפס בתלת-ממד, המותקן גם על מיכל דגירה (B3) (צינור דגימה של 50 מ"ל), (B4,B7,C4) מיכל אגירה של יחיד לרבים, (B9-B12) שקית עירוי רפואית המשמשת כספק מים מפורקים, ו-(C5) פיפטה דגימה לא מקוונת. (ב5) מיקומי הדגימה של כל 33 הדוגלים מיושרים לאותו גובה עם (B6) פס פלסטיק. מים לא מחומצנים מוכנים על ידי (C8) חנקן מבעבע בכיוון הפוך לאספקת המים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64358/64358fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64358/64358fig02.jpg"> איור 2: שחזור נפח הדגימה באמצעות H2O כמפרבל. קווי השגיאה מציינים את סטיית התקן של שתי דגימות פרופיל בלתי תלויות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64358/64358fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64358/64358fig03.jpg"> איור 3: פרופילי עומק ריכוז . (A) מנגן, (B) ברזל, (C) ארסן, (D) קדמיום, (E) נחושת, (F) עופרת, (G) ניקל ו-(H) אבץ שנמדדו ביום 6 וביום 7. תוויות הקרציות השליליות על ציר ה-Y מציינות את המעמקים מתחת לגבול מים-קרקע. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64358/64358fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64358/64358fig04.jpg"> איור 4: מקרה כשל של דליפה שגרמה למשקעי ברזל בתוך הדגימות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64358/64358fig04large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
קובץ משלים 1: קובץ תכנון בעזרת מחשב לתדפיס השלד המתוכנן מראש. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64358/3D%20printing%20file.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>
איור משלים S1: הפרופיילר בשימוש. (א) על קרקע מוצפת. (ב-ה) תמונות של תצוגות עליונות וצדדיות ופרטי חיבור מוצגים בנפרד. (ה) שסתומים תלת-כיווניים משמשים לחיבור מיכל החיץ ושקית העירוי הרפואי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64358/64358_Supplemental%20Fig%20S1.pdf" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>

פרופיל מיקרודיאליזה מתואר כדי לדגום מומסים של מי נקבוביות מומסים על פני ממשק קרקע-מים אוקסיק-אנוקסי באתרו עם הפרעה מינימלית. מכשיר זה נועד ללכוד שינויים מהירים בפרופילי עומק ריכוז הנגרמים על ידי הפרעות בממשק קרקע-מים ומעבר לו.

Biogeochemical processes shift rapidly in both spatial (millimeter scale) and temporal (hour scale to day scale) dimensions at the oxic-anoxic interface ...

כמדען קרקע, אנחנו תמיד צריכים לקחת אבקת מים לניתוח. עם זאת, זה לא קל מאוד, במיוחד כאשר הכימיקלים במי האבקה רגישים מאוד לחמצן. זוהי טכנולוגיה חדשה.אנחנו קוראים לזה API sampler. על ידי שימוש בדוגם, אנו יכולים לקחת את אבקת הקרקע כל שני מיליליטר עם הפרעה עומס בפועל לקרקע. התלמידים שלי ג'אנג שה, יו-ג'יה, ליו דזה-יאן וליו האו הולכים להדגים איך לבנות את הדוגם ולהשתמש בו כדי לקחת אבקת מים.התחל על ידי חיתוך מדויק של צינורות ננו קרום טהור לתוך 33 צינורות קצרים, בעלי אורך 58 מילימטר. לאחר מכן לחתוך את polytetrafluoroethylene או צינור PTFE לתוך 66 צינורות, בעל אורכים 180 מ"מ עם סכין קרמיקה. לאחר מכן, ערבבו לחלוטין את שני החלקים של דבק אפוקסי AB על כל צלחת פלסטיק נקייה, ותנו לו לעמוד במשך 30 דקות עד שהוא הופך לדביק לפני החלתו על המשטח החיצוני של החלק העליון של צינור PTFE.יש לוודא כי דבק אפוקסי AB מכסה רק את ארבעת המילימטר של הצינור וכי אין דבק נוסף החוסם את הצינורות. חבר את שני צינורות ה- PTFE עם כל צינור ננו ממברנה על ידי הברגה עדינה של צינורות ה- PTFE לתוך צינור ננו הממברנה כדי להרכיב באופן מלא את כל 33 דוגמי המיקרודיאליזה הבתוליים. תנו לדוגמים המורכבים לעמוד למשך הלילה כדי להבטיח ריפוי וייצוב מלא של הדבק.כדי לשפר את ההידרופיליות ולנקות את דוגמי המיקרודיאליזה, השרו אותם באתנול למשך שעה, ולאחר מכן ניקוי קולי עם 2% חומצה חנקתית מדוללת ומים אולטרה-טהורים למשך 15 דקות כל אחד. בדוק את הפטנט ואת אטימות האוויר של דוגם מיקרודיאליזה על ידי בעבוע במים באמצעות מזרק חמישה מיליליטר. כדי להרכיב את פרופיל המיקרודיאליזה, השתמש בקובץ CAD כדי להדפיס את השלד המתוכנן מראש באמצעות חומר ניילון.לאחר מכן חלול מיכל PVC שטוף חומצה עם שני חריצים מקבילים של חמישה סנטימטרים מרווחים כדי להתאים את גודל השלד. השתמש במודול החריטה במדפסת התלת-ממד לחריץ. בנה מחבר יחיד לרבים על ידי ייצוב דבק אפוקסי בצורת מכסה צינור צנטריפוגה 50 מילימטר.לאחר מכן הכניסו 33 מכסי סיליקון באורך של סנטימטר אחד לדבק האפוקסי לפני הריפוי והניחו לו לעמוד למשך הלילה. לאחר מכן, הסר את מחבר האחד לרבים ממכסה הצינור וחתוך את דבק האפוקסי באמצעות סכין קרמית כך שכל קצוות מכסה הסיליקון יהיו ללא הפרעה. יש לשטוף ביסודיות את המחבר האחד לרבים עם חומצה חנקתית מדוללת ב-2% ומים אולטרה-טהורים במשך 15 דקות כל אחד, ולייבש בתנאי סביבה.לאחר הייבוש, חבר שסתום תלת-כיווני לתחתית הצינור כדי לשמש כמיכל חציצה. הרכיבו את מיכל האגירה על ידי התקנת מחבר יחיד לרבים לצינור מזרק 50 מיליליטר באמצעות דבק אפוקסי AB הרכיבו את דוגמי המיקרודיאליזה הבודדים על השלד באמצעות דבק מיזוג חם, וודאו שכל דוגם מקביל לקצה העליון או התחתון של השלד. התקינו את כל 33 דוגמי המיקרודיאליזה על השלד, וודאו ש-33 הדוגלים משני הצדדים עוברים דרך חריצי ה-PVC.אטמו את הרווחים במפרקי השלד ובחריצים בעזרת דבק אפוקסי AB. לאחר מכן, חבר את כל הדוגלים לצד אחד של השלד למיכל חציצה באמצעות שסתום מחבר יחיד לרבים המותקן מראש בצינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר. לאחר מכן חבר שקית עירוי רפואית ממולאת מראש במי אוהם 18.3 מילי אוהם למיכל החיץ דרך השסתום התלת-כיווני.סגור את כל הדגימות בצד הדגימה באמצעות מכסי סיליקון. בדוק שוב את הפטנט ואת אטימות האוויר של כל דוגם מיקרודיאליזה על ידי סיבוב המסתם התלת-כיווני, המאפשר למים לזרום משקית העירוי הרפואי אל הדוגם. לאחר מכן סגור וכבה את כל הדגימות ואת השסתום במיכל האגירה.לפני הדגירה על הקרקע המוצפת, הסר חמצן על ידי פירוק הגז של המים בשקית העירוי הרפואי. גז חנקן מבעבע בן לילה במסלול של קו גז חנקן טהור לשקית העירוי הרפואית. באמצעות שסתום תלת-כיווני, סגור את החיבור בין הפרופיילר לבין השקית המשוחררת.לאחר מכן הוסף 450 גרם של אדמה מיובשת באוויר מנופה למיכל PVC, וודא שחמישה דוגמי מיקרודיאליזה נשארים מעל פני הקרקע. כסו את פני הקרקע ברקמה לפני הצפת הקרקע במים טהורים במיוחד. ברגע שהאדמה מוצפת חמישה סנטימטרים מעל פני הקרקע, הסר את הרקמה.לאחר אתחול הדגירה של הקרקע, נקה מיד את המערכת עם התמיסה הטעונה מראש. לאחר מכן יש לשטוף את מערכת הדגימה על ידי הפעלת החיבור בין השקית האנאירובית לבין דוגם הדיאליזה. השתמש פי עשרה מהנפח הכולל של הדוגם בעת ניקוי כל דוגם במים.לאחר השלמת הטיהור של דוגם אחד, יש לסגור אותו באמצעות מכסה סיליקון נקי לפני ניקוי כל דוגם כדי להקים מערכת דגירה ודיגום אחת של קרקע מוצפת. לאחר מכן, התאימו את השקית האנאירובית לגובה פני המים, וודאו שכל הצינורות מלאים במים. אם לא, הסירו את הפקק והורידו את ראש הצינור, כדי לאפשר למים לזרום מהשקית האנאירובית.סגרו את הפקקים והשסתומים ודגרו במשך שבעה ימים כשהחיבור בין השקית האנאירובית לדוגם הדיאליזה כבוי. לפני הדגימה, התאימו את מפלסי המים במיכל הקרקע, בראשי הדגימה ובשקית האנאירובית לגובה דומה כדי למנוע פוטנציאל מים שונה במידה ניכרת. לאחר מכן הפעל את החיבור בין השקית האנאירובית למיכל החיץ.הסר את מכסה הדוגם הראשון מלמעלה למטה. באמצעות פיפטה, להעביר 133 מיקרוליטר של דגימה מן הדוגם בקבוקון 0.6 מיליליטר, טעון מראש עם 133 מיקרוליטר של 2% חומצה חנקתית לשימור. במהלך הדגימה יש לצפות בזרימה איטית אך אחידה של טיפות מים לכיוון דוגם המיקרודיאליזה בתא התצפית האנאירובי.סגור את ראש הצינור עם מכסה סיליקון לפני המעבר לצינור הדגימה הבא. חזור על פעולה זו עבור כל 33 הדגימות לפני כיבוי החיבור בין השקית האנאירובית למיכל החיץ. לחדש את המים המוצפים ביום השישי לאחר הדגימה.חשב את שחזור נפח הדגימה על ידי שקילת בקבוקון הדגימה לפני ואחרי העברת דגימת המים הגרועה. לאחר מכן למדוד את הריכוזים המומסים הכוללים של יסודות במים עניים באמצעות ספקטרומטריית מסה פלזמה מצומדת אינדוקטיבית או ICPMS. אחוז ההחלמה של נפח הדגימה עמד בממוצע על 101.4% ונע בין 100.2% ל-103.6%. התאוששות מעט גבוהה יותר של נפח הדגימה הצביעה על הפרש מפלס המים בין השקית האנאירובית לחלק העליון של צינור הדגימה.באמצעות הדגימות על פני ממשק מי הקרקע שנאספו ביום השישי והשביעי, נקבעו הריכוזים המומסים הכוללים של ברזל, מנגן, ארסן, קדמיום, נחושת, עופרת, ניקל ואבץ במים הדלים. ביום השישי, הריכוזים המומסים של מנגן, ברזל וארסן עלו יחד עם עומק הקרקע, ואילו אלה של נחושת ועופרת ירדו עם עליית עומק הקרקע. עם זאת, עבור קדמיום, ניקל ואבץ, פרופילי עומק הריכוז הצביעו על דפוס שונה, שכן הריכוזים המומסים עלו ממינוס 20 מילימטרים למקומות עמוקים יותר.פרופילי עומק הריכוז של ברזל וארסן בעומק של מינוס 12 מילימטר ביום השישי היו גבוהים משמעותית מהרמות ביום השביעי. עם זאת, ריכוזי הברזל והארסן היו גבוהים משמעותית מעומקים של מינוס 18 עד מינוס 50 מילימטר. עבור רוב היסודות שנקבעו למעט מנגן, הריכוזים המומסים במים העיליים ובקרקע האחידה על פני השטח בעומק מינוס 15 מילימטר היו נמוכים משמעותית לאחר חידוש המים האירוביים.שיא ריכוז העופרת ביום השביעי בעומק של כמינוס 10 מילימטר הראה דפוס מנוגד ליום השישי. טכניקה זו שימושית במיוחד חוקרים שחקרו תהליכי מיקרו ממשק ביו-גיאוכימיים. זה יכול לצמצם גורמים מבלבלים רפואיים.הליך זה מיושם על קרקע שטוחה, כלומר דליפה או חדירה של חמצן תשנה באופן משמעותי את התהליכים הכימיים בלתי צפויים, להבטיח כי כל החיבורים אטומים ופליטת מים מספיקה. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כגון כרומטוגרפיה נוזלית קרפלית וכרומטוגרפיית מסה ואנליזה מיקרוביאלית ברזולוציה מיוחדת כדי לגשר על התהליכים הכימיים והביולוגיים. טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים לחקור שאלות חדשות על האופן שבו הפרעות וירוסים משפיעות על התנהגויות של רכיב חיישן ערוך בסביבה משתנה.

dissolved-solute-sampling-across-an-oxic-anoxic-soil-water-interface

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

lysimetry שדה ודגימת porewater מאפשרים לחוקרים להעריך את גורלם של חומרים כימיים מוחלים על קרקעות וצמחייה שהוקמה. המטרה של פרוטוקול זה היא להדגים כיצד להתקין מכשור הנדרש ולאסוף דגימות לאנליזה כימית בlysimetry שדה המשולב וניסויים דגימת porewater.

משולב שדה Lysimetry וPorewater דגימה להערכת כימית ניידות בקרקעות וצמחייה הוקמה

מוצג פרוטוקול לחיתוך ליבות משקעים ושאיבת מי נקבוביות בתנאים אנוקסיים על מנת לאפשר ניתוח של מינים רגישים לחמצון חיזור הן במוצקים והן בנוזלים.

משקעי Core חתך וסחיטה הנקבובית ווטרס תחת תנאים אנוקסיים

כאן, אנו מציגים דגירות ליבה קטנות למדידת גז משקעים-מים וחילופי מומסים. אלה יספקו מדידות אמינות של חילופי משקעים-מים המעריכים את תפקיד המשקעים בהשפעה על תהליכים ביולוגיים וביו-גיאוכימיים במערכות אקולוגיות ימיות.

Benthic Exchange של O<sub&gt; 2</sub&gt;, N<sub&gt; 2</sub&gt; וחומרים מזינים מומסים באמצעות קטנים Core incubations

אנו מציגים את VacuSIP, שיטה פשוטה, לא פולשנית ואמינה לדגימה נקודתית נקייה ומדויקת של מים. המערכת פותחה והוערכה לאיסוף בו-זמני של המים הנשאפים והנשפים על ידי מזיני תרחיף בנתיים באתרם, כדי למדוד בצורה נקייה הסרה והפרשה של חלקיקים ותרכובות מומסות.

VacuSIP, שיטת INEX משופרת<em&gt; באתרו</em&gt; מדידה של חלקיקים מומס תרכובות מעובד על ידי האכלת השעית Active

מחקר זה מציג שיטה החפירה לחקירת הידרולוגיים מתחת לפני הקרקע, גיאוכימיים, וההטרוגניות מיקרוביולוגיות של lysimeter אדמה. Lysimeter מדמה hillslope המלאכותי שהיה בתחילה בתנאי הומוגניות היה נתון כ -5,000 מ"מ של מים במשך שמונה מחזורים של השקיה ב תקופה של 18 חודשים.

חפירה באדמה Lysimeter עבור ההידרולוגי מצמידים, גיאוכימיות, וחקירות מיקרוביולוגיות

חומר אורגני מומס מהווה מקור חשוב של אנרגיה וחומרים מזינים להזרים מערכות אקולוגיות. כאן אנו מדגימים שיטה מבוססת בשטח כדי לתפעל את ברכת הסביבה של חומר אורגני מומס באתרו באמצעות פולסים מזינים לשכפול בקלות.

הבנה מומס אורגני Biogeochemistry דרך<em&gt; באתרו</em&gt; מניפולציות מזינות במערכות אקולוגיות זרמו

פרוטוקול מוצג עבור חילוץ מטבוליטים, חלבונים ושומנים דגימת אדמה אחד בו זמנית, המאפשר דגימת מופחתת הכנה פעמים ולאפשר מולטי-omic ניתוחים ספקטרומטר מסה של דגימות עם כמויות מוגבלות.

פרוטוקול MPLEx עבור ניתוחים מולטי-omic של דגימות אדמה

פרוטוקול זה מציג זרימת עבודה עבור הדמיה דו-ממדית תת-מ"מ של מינים מרובים של חומרים מזינים אנאורגניים מזהמים ומינים מזהמים באמצעות מעברי צבע דיפוזיביים בסרטים דקים (DGT) בשילוב עם הדמיית ספקטרומטריית מסה. דגימה מסיסת וניתוח כימי ברזולוציה גבוהה מתוארים בפירוט למיפוי כמותי של מסיסים בריזוספרה של צמחים יבשתיים.

הדמיה דו מימדית וכימות של Labile, חומרים מזינים ומזהמים צמחיים אנאורגניים באדמה

מחקר זה מדגים גישה למדידת ריכוזי גז מתאן בדגימות מימיות באמצעות אנלייזרים אופטיים ניידים המחוברים לתא הזרקה בלולאה סגורה. התוצאות דומות לכרומטוגרפיית גז קונבנציונלית, ומציגות חלופה מעשית ובעלות נמוכה המתאימה במיוחד למחקרי שדה מרוחקים.

מדידת מתאן מומס במערכות אקולוגיות מימיות באמצעות מנתח גז ספקטרוסקופיה אופטית

מאמר זה מציג ניסוי אידוי פשוט באמצעות מכשיר תכונה הידראולי עבור דגימת קרקע. באמצעים יעילים, ניתן לבצע מדידות במשך סדרה של ימים כדי להפיק נתונים באיכות גבוהה.

מדידות פוטנציאל ומוליכות מי קרקע על בסיס ניסוי אידוי פשוט באמצעות מנתח תכונות הידראולי

למדו כיצד לבנות פרופיל מיקרודיאליזה לדגימת מומסים במי הניקוז של קרקעות בלתי מופרעות. שיטה זו מאפשרת ניטור בזמן אמת של שינויים בריכוזי מומסים בממשק קרקע-מים תחת תנאים אנאירוביים.

דגימת מומס מומס על פני ממשק קרקע-מים אוקסיק-אנוקסי באמצעות פרופילי מיקרודיאליזה

גלה סרטונים נוספים