Name: הערכה של תפקוד דו-חדרי Ex Vivo Murine במודל לנגנדורף (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-23T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 54 s
Description: חקור הערכת תפקוד דו-חדרי בלב עכברי לאחר שימור קר באמצעות מערכת הדמיית לנגנדורף. שיטה זו מאפשרת השוואה בין חדרי הלב ומסייעת בפיתוח טיפולים לשיפור תפקוד לבות תורמים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

כל הניסויים בבעלי חיים בפרוטוקול זה אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת מישיגן, אן ארבור. כל העכברים שוכנו במחזור אור של 12:12 בחדרים נטולי פתוגנים. עיין בטבלת החומרים לקבלת פרטים הקשורים לכל החומרים, בעלי החיים והציוד המשמשים בפרוטוקול זה.
1. בניית צנתר בלון סיליקון
הערה: בלון הסיליקון מיוצר כמתואר קודם13.
<ol><li>הוסיפו 9.5 מ"ל מים מזוקקים, 14.2 מ"ל סירופ תירס בהיר ו-33.8 גרם סוכרוז לכוס של 100 מ"ל. מחממים ומערבבים את התמיסה עד שהסוכר מומס לחלוטין.</li>
	<li>מכינים את הבצק על ידי ערבוב 10 גרם קמח חיטה ו 5 גרם מים עד להשגת עקביות אחידה ולאפשר לו לנוח במשך 10 דקות.</li>
	<li>מעצבים חתיכת בצק קטנה לסגלגל - ה"ראש" - ומחברים אותה לקצה גדיל ספגטי יבש. לאחר מכן, טבלו את הראש בתמיסת הסוכר והסירו לאט מהתמיסה, מכיוון שהראש כעת מצופה לחלוטין. הערה: הבצק צריך להיות חלק ובעל מרקם אחיד. ניתן לשנות את גדלי הבצק ליצירת בלונים בגדלים שונים, החל מ-5 מ"מ (קוטר קצר) ועד 7 מ"מ (קוטר ארוך). נסו לכסות אותם בסרט דק של תמיסת סוכר.</li>
	<li>יש לתלות את גדיל הספגטי על גוש קצף פוליסטירן, או על מחזיקים אחרים, ליצירת כיסוי מבריק באופן אחיד מעל הראש ולייבש למשך הלילה.</li>
	<li>טובלים את התבנית בפיזור סיליקון (אלסטומר סיליקון מפוזר בקסילן). החזירו את גדיל הספגטי לגוש קצף הפוליסטירן בטמפרטורה של 37°C למשך שעתיים או עד לייבוש. חזור על שלב זה פעם אחת. הערה: חיוני למנוע מג'ל פיזור הסיליקון להתחמצן עקב חשיפה לאוויר, מכיוון שזה ייצור עובי בלון לא אחיד.</li>
	<li>הכניסו את התבנית למים כדי להפריד ולאסוף את הבלון. אחסנו את הבלון ב-0.02% נתרן אזיד.</li>
	<li>חותכים קצה שני קהה ממחט 22 גרם; הרכיבו קצה קהה אחד לבלון הסיליקון וקצה קהה נוסף לצינורות PE. השתמש 4-0 משי כדי לקשור את הבלון במקום על המחט. הערה: בדוק את שלמות הבלון על-ידי הזרקת מים לתוכו. לאחר מילוי הבלון, לחצו עליו ברכות כדי לבדוק אם הבלון שומר על מתח בפנים. השתמש בבלון חדש אם הוא דולף. ניתן לאחסן את הבלונים המותקנים לשימוש עתידי.</li>
</ol>2. הכנת מערכת זילוח הלב
<ol><li>צור 1 ליטר של חיץ זילוח קרבס-הנסלייט (KH) והעבר אותו למערכת מאגר המים לנגנדורף.</li>
	<li>חבר את צינור האוויר למאגר המים והפעל את זרימת האוויר כדי לאזן את מאגר KH עם 5% CO 2 ו- 95% O2 למשך 30 דקות לפחות.</li>
	<li>הגדר את אמבט המים על 41.5 מעלות צלזיוס והזרים את המים בשכבה החיצונית של מערכת לנגנדורף כדי לחמם את המערכת ואת חיץ KH. הערה: טמפרטורת אמבט המים דורשת אופטימיזציה עבור כל מערכת. עבור מערכת זו, טמפרטורת אמבט המים תשמור על KH ב 37-37.5 מעלות צלזיוס כאשר מחוררים לתוך הלב.</li>
</ol>3. בידוד, הרכבה ושימורים של לב העכבר
<ol><li>עבור נוגדי קרישה, adminster 200 יחידות של הפרין במי מלח על ידי הזרקה intraperitoneal (i.p.) לתוך הרביע הימני של C57/B6 בטן עכבר. שאפו את המזרק לפני ההזרקה כדי לאשר שהשיפוע של המחטים אינו נמצא בשלפוחית השתן או בלומן של מערכת העיכול. השתמש לפחות ארבעה עכברים בכל מצב ניסוי (אבל גם לשקול את גודל ההשפעה הטיפולית).<ol><li>לאחר 30 דקות, לתת 80 מ"ג / ק"ג קטמין ו 10 מ"ג / ק"ג של xylazine i.p. כדי להרדים את העכבר. בדוק אם העכבר המרדים מחוסר הכרה על ידי ביצוע צביטת בוהן ולוודא שלא נצפתה תגובה. ניתן להוסיף אצפרומזין 2 מ"ג/ק"ג לקוקטייל קט/קסיל אם זן העכברים המשומש אינו מגיע לרמה מספקת של הרדמה עם קט/קסיל בלבד.</li>
		<li>בצע חתך ממש מתחת לחזה. השתמש מספריים כדי לפתוח את החזה על ידי חיתוך הסרעפת והצלעות. קפלו את דופן בית החזה הקדמי כדי לחשוף את החזה במלואו. חותכים באבי העורקים היורד (סגור לקשת אבי העורקים). העבירו את הלב, הריאות ובלוטת התימוס של העכבר למאגר היסטידין-טריפטופן-קטוגלוטרט קר (HTK). בודדו את האיברים תחת חיץ HTK קר כקרח. לחשוף את אבי העורקים על ידי הסרת כל רקמות חיבור. הערה: הגדל את אורך אבי העורקים על-ידי הכללת אזור קשת אבי העורקים העולה וקשת אבי העורקים בכריתה כדי לאפשר מספיק מקום לחיבור למחט.</li>
	</ol></li>
	<li>מחברים את קצה אבי העורקים למחט 22 גרם, וקושרים בתפר משי 6-0. ודא שהצינורית נמצאת מעל שורש אבי העורקים כדי לא להפריע לשסתום אבי העורקים. מחוררים את אבי העורקים עם 10 מ"ל של חיץ HTK קר (4°C) במשך כ-10 דקות. הערה: זה לוקח פחות מ -15 דקות מהסרת הלב לקנולציה של אבי העורקים; עם זאת, חשוב לשמור על מהירות הזלוף ברמה המתאימה. זריקות מהירות ונמרצות מדי עלולות ליצור לחצים גבוהים ולגרום לנזק לכלי הדם/הלב.</li>
	<li>אחסנו את הלב בצינור של 50 מ"ל עם HTK קר כקרח למשך 8 שעות או בצעו מיד את הזילוח (אל תאחסנו את השליטה) והימנעו ממגע ישיר עם קרח. הערה: מגע ישיר של רקמת הלב עם קרח עלול להוביל לפגיעה בקור.</li>
	<li>חברו את הלב המורכב על המחט לצינורית במנגנון לנגנדורף וקשרו אותו בתפר משי. הערה: כדי לתקנן את ההליך, המתן בסך הכל 3 דקות לתהליך הקנולציה לפני הזילוח.</li>
	<li>התחל את הזילוח במצב זרימה קבועה במהירות של 3 מ"ל/דקה; לאחר מכן, שנה למצב לחץ קבוע ב 70-80 מ"מ כספית וכוונן את הלב ל~ 6 מ"ל / דקה. הערה: מישוש הלב ברכות יכול לעזור להאיץ את החייאת הלב. אם קצב זרימת הזילוח גבוה בהרבה מ-6 מ"ל/דקה במצב לחץ קבוע, ייתכן שיש דליפה בקנולציה או ששסתום אבי העורקים אינו פועל כראוי. התאם את החיבורים כדי לתקן את הדליפה. מצב הזרימה המתמדת מבטל את הוויסות העצמי של טונוס כלי הדם של הלב. מצב הלחץ המתמיד מאפשר ללב לווסת את זרימת הזילוח הכלילי שלו. לכן, מצב הלחץ המתמיד ימדוד במדויק את תפקוד הלב ואת איכות השימור של הלב.</li>
	<li>חברו בלון מנופח ומלא מים למתמר לחץ ולמזרק מלא מים באמצעות ברז תלת-כיווני. לאחר תקופת שיווי משקל של 15-20 דקות, חתכו את האטריום הימני (RA) והכניסו את הבלון לקרוואן דרך ה- RA. השתמשו בנייר דבק כדי להחזיק את הבלון בתוך הקרון. מזערו את השטח הפתוח של ה-RA כדי לעזור להגביל את הבלון בחדר (ראו איור 1 להתקנה). הערה: יש צורך בתקופה של שיווי משקל, שכן התכווצות הלב וההרפיה אינן יציבות בתחילתה, והמדד פחות מדויק ומייצג. אם צומת AV ניזוק במהלך פתיחת RA, הלב יציג הפרעות קצב תכופות.</li>
	<li>לאחר 20 דקות של איסוף נתונים פונקציונליים של RV, חתכו את האטריום השמאלי (LA) והכניסו בלון מלא מים מנופח ל- LV דרך לוס אנג'לס. השתמש בסרט הדבקה כדי להחזיק את הבלון בתוך ה- LV. הערה: הלב צריך לשמור על המודינמיקה יציבה במשך יותר מ 1.5 שעות.</li>
</ol>4. הקלטת נתונים פונקציונלית
<ol><li>כיול מתמר הלחץ<ol><li>ממלאים מזרק 10 מ"ל במי מלח חמים ומחברים את המזרק לכיפה דרך ברז משולש. פתחו את הברז ומלאו לאט את הכיפה במי מלח, ואז סגרו את כל הברזים והוציאו את המזרק. חבר את הכיפה המלאה למתמר; חבר את מד הלחץ לקצה השלישי של הברז התלת-כיווני.</li>
		<li>בתוכנת ההקלטה, בחר את גשר מגבר מהתפריט הנפתח של הערוץ המתחבר למתמר. שנה את שם הערוץ ללחץ מחורר. לחץ על אפס לאפס את המתמר.</li>
		<li>התחל את ההקלטה על ידי לחיצה על התחל כך שהמתמר קורא כעת 0 מ"מ כספית. לאחר מספר שניות של הקלטה, לדחוף לאט את המזרק ולהגדיל את הלחץ ל 100. לחץ על עצור כדי לעצור את ההקלטה.</li>
		<li>בתיבת הדו-שיח המרת יחידות, בחר אזור הקלטה עבור 0 מ"מ כספית ולחץ על החץ לנקודה 1 והקלד 0 מ"מ כספית. בחר אזור הקלטה עבור 100 מ"מ כספית, לחץ על החץ לנקודה 2 והקלד 100 מ"מ כספית. לחץ על אישור כדי לכייל את המתמר.</li>
	</ol></li>
	<li>שנה את שם התעלה המתאימה למתמר הלחץ עם הבלון כלחץ חדרי. התחל את ההקלטה כאשר הלב מחובר למערכת. לאחר החדרת הבלון לחדר, יש לכוונן את נפח המים בבלון באמצעות מזרק מיקרומטר דרך הברז התלת-כיווני כדי לשמור על הלחץ הדיאסטולי הסופי ב-5-10 מ"מ כספית. הערה: המדד הדיאסטולי הסופי עשוי לרדת במהלך המדידה, רצוי להתחיל קרוב ל-10 מ"מ כספית.</li>
	<li>שנה שם של ערוץ ריק כ- dP/dt. מהתפריט הנפתח, בחר נגזרת | ערוץ מקור כלחץ חדרי. התעלה תרשום את יחס שינוי הלחץ בחלל החדר במהלך תקופת ההתכווצות.</li>
	<li>בחר תקופת מדידה יציבה ולאחר מכן לחץ על הגדרה במודול לחץ הדם.<ol><li>בחר את לחץ החדר כערוץ הקלט ולחץ על בחירה לתקופת חישוב | בסדר.</li>
		<li>לחץ על תצוגת מסווג כדי להסיר את מחזור הלב החריג (לדוגמה, זמן מחזור חריג או לחץ).</li>
		<li>לחץ על תצוגת טבלה כדי ליצור את הטבלאות של הממוצע של dP/dt מרבי (התכווצות) ו- dP/dt מינימלי (הרפיה) עבור התקופה שנבחרה. הערה: אחסן את קובץ ההקלטה עבור כל דגימה ושמור את טבלת תפקוד הלב הממוצע לצורך ניתוח סטטיסטי.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Kim, I. C., Youn, J. C., Kobashigawa, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+past%2C+present+and+future+of+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+Circulation+Journal%22%5BJournal%5D)">The past, present and future of heart transplantation.</a> Korean Circulation Journal. 48 (7), 565-590 (2018).</li>
<li>Gaffey, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+%26%2334%3Bhigh-risk%26%2334%3B+donor+hearts%3A+Implications+for+infection%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of &#34;high-risk&#34; donor hearts: Implications for infection.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 152 (1), 213-220 (2016).</li>
<li>Hsich, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matching+the+market+for+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%3A+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">Matching the market for heart transplantation.</a> Circulation: Heart Failure. 9 (4), 002679(2016).</li>
<li>Piperata, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+the+new+era+of+extended+donor+criteria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiac+Surgery%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in the new era of extended donor criteria.</a> Journal of Cardiac Surgery. 36 (12), 4828-4829 (2021).</li>
<li>Huckaby, L. V., Hickey, G., Sultan, I., Kilic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+the+utilization+of+marginal+donors+for+orthotopic+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiac+Surgery%22%5BJournal%5D)">Trends in the utilization of marginal donors for orthotopic heart transplantation.</a> Journal of Cardiac Surgery. 36 (4), 1270-1276 (2021).</li>
<li>Singh, S. S. A., Dalzell, J. R., Berry, C., Al-Attar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+graft+dysfunction+after+heart+transplantation%3A+a+thorn+amongst+the+roses%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Failure+Reviews%22%5BJournal%5D)">Primary graft dysfunction after heart transplantation: a thorn amongst the roses.</a> Heart Failure Reviews. 24 (5), 805-820 (2019).</li>
<li>Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+heart+perfusion%3A+the+Langendorff+technique+of+isolated+heart+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Retrograde heart perfusion: the Langendorff technique of isolated heart perfusion.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).</li>
<li>Rossello, X., Hall, A. R., Bell, R. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+Langendorff+perfused+isolated+mouse+heart+model+of+global+ischemia-reperfusion+injury%3A+impact+of+ischemia+and+reperfusion+length+on+infarct+size+and+LDH+release%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Pharmacology+and+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Characterization of the Langendorff perfused isolated mouse heart model of global ischemia-reperfusion injury: impact of ischemia and reperfusion length on infarct size and LDH release.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics. 21 (3), 286-295 (2016).</li>
<li>Matsuura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+inotropic+effects+of+ATP+released+via+the+maxi-anion+channel+in+Langendorff-perfused+mouse+hearts+subjected+to+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+Development+Biology%22%5BJournal%5D)">Positive inotropic effects of ATP released via the maxi-anion channel in Langendorff-perfused mouse hearts subjected to ischemia-reperfusion.</a> Frontiers in Cell Development Biology. 9, 597997(2021).</li>
<li>Tse, G., Hothi, S. S., Grace, A. A., Huang, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventricular+arrhythmogenesis+following+slowed+conduction+in+heptanol-treated%2C+Langendorff-perfused+mouse+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Ventricular arrhythmogenesis following slowed conduction in heptanol-treated, Langendorff-perfused mouse hearts.</a> The Journal of Physiological Sciences. 62 (2), 79-92 (2012).</li>
<li>Kobashigawa, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Report+from+a+consensus+conference+on+primary+graft+dysfunction+after+cardiac+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Report from a consensus conference on primary graft dysfunction after cardiac transplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (4), 327-340 (2014).</li>
<li>Lei, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+inflammatory+responses+of+the+native+left+and+right+ventricle+associated+with+donor+heart+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">Differential inflammatory responses of the native left and right ventricle associated with donor heart preservation.</a> Physiological Reports. 9 (17), 15004(2021).</li>
<li>Miller, A., Wright, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+murine+ventricular+balloons+for+the+Langendorff+heart+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biotechnology+%26+Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Fabrication of murine ventricular balloons for the Langendorff heart preparation.</a> Journal of Biotechnology & Biomaterials. 1 (101), (2011).</li>
<li>Madsen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+immunology+of+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Advances in the immunology of heart transplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 36 (12), 1299-1305 (2017).</li>
<li>Voelkel, N. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Right+ventricular+function+and+failure%3A+report+of+a+National+Heart%2C+Lung%2C+and+Blood+Institute+working+group+on+cellular+and+molecular+mechanisms+of+right+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Right ventricular function and failure: report of a National Heart, Lung, and Blood Institute working group on cellular and molecular mechanisms of right heart failure.</a> Circulation. 114 (17), 1883-1891 (2006).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

פרוטוקול זה מתאר את שיטת Langendorff פרפוזיה מדרדרית באמצעות קנולציה אבי העורקים. טכניקה זו יכולה לשמש כדי להעריך את תפקוד LV ו- RV של לבבות מורין לאחר אחסון קר. התוצאות מראות כי אחסון קר ממושך של לבבות התורם מוביל לתפקוד לבבי מופחת הן ב- LV והן ב- RV באמצעות פרוטוקול זה. 
המחקרים על דחייה חריפה וכרונית לאחר השתלת לב מתמקדים באופן נרחב באימונוביולוגיה14. ההשפעות של תאים מקומיים על PGD במהלך אחסון קר נבדקות פחות טוב. PGD מתרחש ב~10%-20% מהשתלות הלב ומהווה 66% ממקרי המוות המוקדם תוך 30 יום לאחר ההשתלה. בפרט, שכיחות PGD המשפיעה על LV לעומת RV שונה לאחר ההשתלה11. ללא התרומה של תגובות תאיות מקבלות, שיטת ex vivo זו מתמקדת בתרומות של תאי לב מקומיים ל-PGD לאחר שימור קר של לבבות תורמים. מחקרים נוספים עשויים לשלב תגובות מושתלים במודל השתלת לב מורין. 
בפרוטוקול זה, זילוח לנגנדורף של לבבות תורמים שהשתמרו בקור התמקד בתגובות הלבביות הילידיות לזילוח גבישי חם מבלי לחדור לחסינות תאית. כדי להשיג תוצאות הניתנות לשחזור, תוקנו מספר שלבים קריטיים. לבבות העכבר נעצרו באמצעות תמיסת HTK ואוחסנו ב-HTK קר כקרח, בדומה לפרקטיקה הקלינית. נפח הזילוח וזמן העירוי של תמיסת HTK לכל לב היו במעקב צמוד עם טיימר. הלב התורם נשמר בצינורות מקוררים על קרח המכיל HTK בחדר של 4 מעלות צלזיוס. זמן הקנולציה השתנה ל~ 3 דקות לפני הזילוח. כל השלבים הללו הבטיחו כי משך שימור הקור היה המשתנה העיקרי במחקר. 
תקופה של התכווצות לב לא סדירה במשך ~20 דקות נראתה בדרך כלל בתחילת הזילוח. תקופת שיווי משקל והחלמה זו התאפשרה על ידי התחממות הדרגתית וחמצון של רקמות הלב. תקופה יציבה יחסית הייתה צפויה לאחר 20 הדקות הראשונות. הבלון הוחדר לחלל החדר ב~18 דקות לאחר תקופת שיווי המשקל הראשונית. התחלנו להקליט המודינמיקה לאחר שהלב היה יציב במשך ~25 דקות, לאחר החדרת הבלון. זילוח עם חיץ KH שמר על ביצועי לב יציבים במשך ~ 1.5-2 שעות. לכן בחרנו להקליט המודינמיקה במשך 20 דקות בכל אחד מהחדרים השמאלי והימני.
ישנן מספר מגבלות של זילוח מדרדר לחקר PGD של לבבות לאחר אחסון קר. ראשית, בשל גודל הבלון וחוסר מקום בכל חלל חדר (בפרט, ה-RV), החדרה בו זמנית של שני בלונים הן ל-LV והן לקרוואן היא מאתגרת מאוד. לפיכך, אנו מודדים את הפונקציה של RV ו- LV ברצף. חשוב לציין כי המחיצה הבין-חדרית תורמת באופן משמעותי לתפקוד החדר השמאלי והימני כאחד. המחיצה תורמת ל~50% מתפקוד החדר הימני, ולכן קיימת תלות בין-חדרית15. כמו כן, חשוב לציין כי בעוד שההליכים לזילוח מחדש של הלב המורין במכשיר לנגנדורף אורכים ~ 3 דקות, השתלה כירורגית של הלב האנושי בשדה הכירורגי החם יחסית אורכת ~ 45 דקות. לשם השוואה, הלב המורין במערכת לנגנדורף זו צובר פחות זמן איסכמי. יש לקחת זאת בחשבון כאשר שוקלים תרגום קליני.
מאחר שהשתמשנו במאגר KH כדי לחורר את הלב ללא דם, ייתכן שגם לזה תהיה פחות יעילות באספקת חמצן. עם זאת, תפקוד הלב יציב יחסית לאורך 1.5-2 שעות הזילוח הראשוניות, ובכך מאפשר מדידות המודינמיות אמינות. למרבה הצער, אין כיום מודלים מעשיים של זילוח לב עבור לבבות מורינים קטנים אלה, ולא ניתן להעריך את ההשפעה של עומס חדרי במערכת זו. למרות זאת, מערכת הזילוח היא מאוד ניתנת לשחזור ופחות דורשת עבודה וגוזלת זמן רב מאשר מודלים להשתלה. הוא גם זול יותר ממחקרי השתלות, מה שעשוי להפוך אותו למתאים יותר לבדיקת אפשרויות טיפוליות שונות ומסלולים מולקולריים שונים. עם שינויים בפתרונות שימור על ידי הוספת תרופות מועמדות, ניתן להשתמש בפלטפורמה זו כדי להעריך את ההשפעות של חומרים פרמקולוגיים על הפחתת PGD הן ב- LV והן ב- RV.

השתלת לב משפרת את ההישרדות ואת איכות החיים בחולים עם אי ספיקת לב סופנית1. למרבה הצער, המחסור בתורמי לב מגביל את מספר החולים שיכולים להפיק תועלת מטיפול זה ומגביל את יכולתם של הרופאים להתאים באופן אופטימלי בין תורמיםלמושתלים 2,3,4. יתר על כן, מערכת ההקצאה החדשה תרמה להארכת זמני האיסכמיה והגדילה משמעותית את השימוש בתורמים שוליים מאז 20185. כתוצאה מכך, הגיל הממוצע של תורמי הלב והזמן האיסכמי עולה עם הזמן, מה שמוביל לשיעור גבוה יותר של תפקוד לקוי של השתל הראשוני (PGD) למרות שיפורים משמעותיים באסטרטגיות לשימור לב 6.
PGD יכול להשפיע על החדר השמאלי, הימני או שניהם, ונשאר סיבוך מסכן חיים המייצג את הגורם המוביל למוות מוקדם לאחר השתלת לב. חקירת מנגנוני PDG ופיתוח אסטרטגיות לשימור לב טוב יותר הם שיקולים חשובים, בהתחשב בהשפעה הפוטנציאלית מצילת החיים על מושתלי לב. לכן, מודלים ניסיוניים המאפשרים הערכה חזקה ואמינה של תפקוד הלב התורם לאחר זמן אחסון ממושך חיוניים כדי להגביר את הבנתנו של PGD ולהקל על פיתוח טיפולים חדשניים. היכולת להעריך במדויק את תפקוד הלב בלב העכבר מאפשרת גישה לרפרטואר עצום של מודלים מורינים טרנסגניים שיכולים לזהות במדויק מנגנוני PGD.
במחקרים פיזיולוגיים ופרמקולוגיים, מודל הזילוח המדרדר של לנגנדורף נמצא בשימוש נרחב להערכת תפקוד הלב7. באופן ספציפי, ביצועי הלב מזוהים על ידי בלון סיליקון המחובר למתמר לחץ בתוך חלל החדר השמאלי (LV). מאפיין מרכזי של PGD הוא כיווץ והרפיה לא מספקים של שריר החדר. מחקרים קודמים של לנגנדורף התמקדו בשימוש בבלון LV כדי להפיק תוצאות אמינות וניתנות לשחזור בהערכה תפקודיתשל LV 8,9,10. עם זאת, השימוש בבלון תוך קוויטרי להערכת תפקוד החדר הימני (RV) באמצעות מערכת הבלון פחות מוכר.
בהינתן שיעור PGD משמעותי המערב את ה-RV לאחר השתלה11, שיטות ניסיוניות לחקר תפקוד LV ו-RV יסייעו לקבוע את המנגנונים המולקולריים והפיזיולוגיים התורמים ל-RV PGD. פרוטוקול זה מראה כי בלוני סיליקון תוך קוויטריים יכולים לספק הערכות אמינות של תפקוד LV ו- RV באותו לב מורין12. כדי להעריך את השימוש הפוטנציאלי במערכת לנגנדורף במחקר PGD, בחנו את תפקודי הלב עם תקופות אחסון שונות ומצאנו ירידה בתפקוד הלב בהתכווצות והרפיה עם אחסון קר ממושך של לבבות מורינים. מעניין, LV יש ירידה תפקודית גבוהה יותר מאשר RV. לסיכום, הפרוטוקול המתואר כאן יכול לשמש להערכת ההשפעה של תרופה מועמדת ומסלולים מולקולריים על תפקוד LV ו- RV כאחד. היכולת להשתמש בשיטה זו על לבבות מורין תקל על ביצוע מחקרים מכניסטיים מפורטים.

<table><tbody><tr><td>4-0 תפר משי</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUTS108</td><td></td></tr><tr><td>6-0 תפר משי</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUTS104</td><td></td></tr><tr><td>קמח לכל מטרה</td><td>Kroger</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD שימוש כללי ודיוקGlide מחטים היפודרמיות 22 G</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5A</td><td></td></tr><tr><td>מזרק BD עם טיפים Luer-Lok (ללא מחט)</td><td>פישר מדעי</td><td>14-823-16E</td><td></td></tr><tr><td>סירופ תירס</td><td>Kroger</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK Solution</td><td>Essential Pharmaceuticals LLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מספריים לניתוח&nbsp;</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>14393/14394</td><td></td></tr><tr><td>פלקון 50 מ"ל צינורות חרוטיים</td><td>פישר מדעי</td><td>14-959-49A</td><td></td></tr><tr><td>מלח נתרן הפרין מרירית מעי חזיר&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma</td><td>H4784</td><td></td></tr><tr><td>Krebs Henseleit buffer</td><td>Sigma</td><td>K3753</td><td></td></tr><tr><td>פיזור סיליקון Nusil</td> מערכת זלוף <td>Avantor</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Radnoti</td><td>130101BEZ</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab</td><td>ADinstruments</td><td>PL3508</td><td></td></tr><tr><td>נתרן אזיד</td><td>Sigma</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>סיגמא</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>סיגמא</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>סיגמא</td><td>X1126</td><td></td></tr></tbody></table>

הערכה של תפקוד דו-חדרי ex vivo murine במודל לנגנדורף

Assessment of Ex Vivo Murine Biventricular Function in a Langendorff Model

תפקוד לקוי של השתל הראשוני (PGD) נותר הגורם המוביל למוות מוקדם לאחר השתלת לב. זמן איסכמי ממושך במהלך שימור קור הוא גורם סיכון חשוב עבור PGD, והערכה אמינה של תפקוד הלב חיונית כדי ללמוד את התגובות התפקודיות של הלב התורם לאחר שימור קור. הסרטון הנלווה מתאר טכניקה להערכת תפקוד החדר הימני והשמאלי באמצעות זילוח ex vivo המבוסס על מודל לנגנדורף לאחר שימור קור לפרקי זמן שונים. בקצרה, הלב מבודד ומאוחסן בתמיסת היסטידין-טריפטופן-קטוגלוטרט קרה (HTK). לאחר מכן, הלב מחורר עם חיץ Kreb במודל Langendorff במשך 60 דקות. בלון סיליקון מוחדר לחדר השמאלי והימני, ונרשמים פרמטרים תפקודיים לבביים (dP/dt, יחסי לחץ-נפח). פרוטוקול זה מאפשר הערכה אמינה של תפקוד הלב לאחר פרוטוקולים שונים לשימור הלב. חשוב לציין, טכניקה זו מאפשרת לחקור תגובות שימור לב במיוחד בתאי לב מקומיים. השימוש בלבבות מורין קטנים מאוד מאפשר גישה למגוון עצום של עכברים טרנסגניים כדי לחקור את המנגנונים של PGD.

לבבות עכבר C57Bl/6 בוגרים, בני 3 חודשים, נקטפו והותקנו על מערכת לנגנדורף. הלב התורם אוחסן ב- HTK במשך 0 ו -8 שעות, ולאחר מכן מחורר עם חיץ KH מחומצן. בלון סיליקון המתחבר למתמר לחץ שימש למדידת ההתכווצות וההרפיה של תפקוד LV ו-RV.
הלחצים האאורטליים נשמרו בטווח של 70-80 מ"מ כספית. הדופק היה דומה בלבבות עכברים עם 0 ו-8 שעות אחסון. תפקוד ה-LV וה-RV נבדקו על ידי מדידת לחץ סיסטולי ודיאסטולי. dP/dt, נגזרת לחישוב היחס בין שינוי הלחץ, חושבה כדי לקבוע את דינמיקת הלחץ. המספר המוחלט של dP/dt מקסימלי ומינימום dP/dt יכול לייצג את רמת התכווצות השרירים וההרפיה. ב-0 שעות אחסון, ה-LV היה בעל לחץ סיסטולי גבוה יותר בהשוואה ל-RV (איור 2C ואיור 3A). ה-LV הראה יותר כיווץ שרירים והרפייה מאשר ה-RV לאחר זילוח של 0 שעות אחסון (איור 2C ואיור 3B,C). אולם לאחר 8 שעות של אחסון קר, גם ה-LV וגם ה-RV הראו ירידה תפקודית משמעותית בהשוואה לקו בסיס של 0 שעות (איור 2A-D ואיור 3B,C). הירידות בהתכווצות הלב היו חמורות יותר ב- LV. לאחר 8 שעות אחסון, ההתכווצות וההרפיה של ה-LV היו 25.1% ו-30.7% מקו הבסיס של 0 שעות, בעוד של-RV היו 32.5% ו-29.1% תפקוד בהשוואה לקו הבסיס של 0 שעות (איור 3B,C). תוצאות אלה הראו כי PGD של LV לאחר אחסון ממושך היה ירידה משמעותית יותר בהתכווצות הלב מאשר RV.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64384/64384fig01.jpg"> איור 1: הרכבה וקנולציה של לב העכבר . (A) הגדרה כוללת של מערך הזלוף. 1. מאגר זילוח. 2. תא חמצון. 3. תא מלכודת אוויר. 4. חדר הלב. 5. מתג ערך לזרימה ולחץ קבועים. 6 ו-7. זרימת חמצן. (B) לבבות משומרים עם הקרוואן מלפנים. (ג) מיקום הקרוואן לחיתוך לצורך פתיחת חללו. (D) הקש על צינורית הבלון עם הצינורית. קיצור: RV = החדר הימני. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64384/64384fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64384/64384fig02.jpg"> איור 2: השוואת התפקוד של LV לעומת RV . (A) מעקב אחר רשומות של dP/dt מרבי ומינימלי בקרוואן ו-LV בלב התורם עם 0 שעות אחסון. (B) תיעוד של dP/dt מרבי ומינימלי בקרוואן ו-LV בלב התורם עם 8 שעות אחסון. (ג,ד) פרטים על dP/dt, לחץ LV, קצב לב ולחץ זילוח ב- LV ו- RV ב- 0 שעות ו- 8 שעות. קיצורים: RV = החדר הימני; LV = החדר השמאלי; dP/dt = יחסי לחץ-זמן. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64384/64384fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64384/64384fig03.jpg"> איור 3: השוואת תפקוד ה-LV לעומת ה-RV לאחר אחסון וזילוח. (A) לחץ סיסטולי ודיאסטולי של ה-LV וה-RV לאחר 0 שעות ו-8 שעות אחסון. (B) מקסימום dP/dt ו-(C) מינימום dP/dt של ה-LV וה-RV לאחר זילוח עם 0 שעות ו-8 שעות אחסון. נתון זה לקוח מתוך Lei et al.12. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64384/64384fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

מוצג כאן פרוטוקול לכימות אמין של תפקוד החדר הימני והשמאלי של לבבות תורמים לאחר שימור קר באמצעות מערכת זילוח ex vivo .

הערכה של תפקוד דו-חדרי Ex Vivo Murine במודל לנגנדורף

Primary graft dysfunction (PGD) remains the leading cause of early death following heart transplantation. Prolonged ischemic time during cold preservation ...

בעזרת הפרוטוקול המתואר, אנו יכולים להשוות בין הלב התורם, החדר השמאלי ותפקוד החדר לאחר השימור, ואנו יכולים לבחון את ההבדל בביולוגיה של שימור בשני החדרים במהלך תהליך שימור זה. טכניקה זו משתמשת במערכת זילוח ex vivo כדי לבחון את תפקודי הלב לאחר השימור. הוא מספק כלים חזקים ואמינים לסינון טיפולים חדשים לשיפור תפקודי הלב של התורם לאחר השימור.מתחילים בהכנת בצק כמתואר בטקסט ומעצבים חתיכה קטנה מהבצק לצורה אליפסה כדי לקבל את הראש. חברו אותו לקצה גדיל ספגטי יבש. טובלים את הראש בתמיסת הסוכר שכבר מוכנה ומסירים אותה לאט ברגע שהיא מצופה היטב בסרט דק של התמיסה.לאחר מכן, השהו את גדיל הספגטי על גוש קצף פוליסטירן או על מחזיקים אחרים כדי לאפשר היווצרות כיסוי אחיד ומבריק מעל הראש וייבשו אותו למשך הלילה. למחרת, טובלים את התבנית באלסטומר סיליקון המפוזר בקסילן ומחזירים את גדיל הספגטי לגוש קצף הפוליסטירן בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים או עד לייבוש. חזור על שלב זה פעם נוספת.לאחר מכן, הכניסו את התבנית למים כדי להפריד ולאסוף את הבלון. אחסנו את הבלון ב-0.02% נתרן אזיד. כעת, חתכו קצה קהה של שני קהות ממחט של 22 מד והרכיבו קצה קהה אחד לבלון הסיליקון ואילו הקצה השני קהה לצינור PE.השתמש בתפר משי 4-0 כדי לקשור את הבלון במקומו על המחט. קח את העכבר C57Black/6 והזריק תוך צפקית 200 יחידות של הפרין לתוך הבטן של החיה עבור נוגדי קרישה. לאחר אישור הרדמה תקינה עם צביטת בוהן, לבצע חתך ממש מתחת עצם החזה.ובאמצעות מספריים, לפתוח את החזה על ידי חיתוך הסרעפת בצלעות. לאחר מכן, קפלו את דופן החזה הקדמית כדי לחשוף את החזה במלואו לפני ביצוע חתך באבי העורקים היורד קרוב לקשת אבי העורקים. כעת, העבירו את הלב, הריאות ובלוטת התימוס של העכבר להיסטידין-טריפטופן-קטוגלוטרט קר כקרח, או מאגר HTK, כדי לבודד את האיברים.חשוף את אבי העורקים על ידי הסרת כל רקמת חיבור. חברו את קצה אבי העורקים למחט בעלת 22 מד וקשרו אותה בתפר משי 6-0. ודא שהצינורית נמצאת מעל שורש אבי העורקים, כדי לא להפריע לשסתום אבי העורקים.מחוררים את אבי העורקים למשך כ-10 דקות עם 10 מיליליטר של חיץ HTK, מקורר מראש לארבע מעלות צלזיוס. בהתאם לסוג הניסוי, או לאחסן את הלב בצינור 50 מיליליטר עם HTK קר כקרח במשך שמונה שעות או מיד לבצע את השפע. כדי לבצע שפע, חבר את הלב המורכב על המחט לצינורית במנגנון לנגנדורף וקשר אותו בתפר משי.התחל את השפע במצב זרימה קבועה בשלושה מיליליטר לדקה, ולאחר מכן לאחר שינוי למצב לחץ קבוע ב 70 עד 80 מילימטר כספית, להתאים את קצב הזלוף לכשישה מיליליטר לדקה. לאחר מכן, חברו בלון סיליקון מנופח מלא מים למתמר לחץ ולמזרק מלא מים באמצעות ברז תלת-כיווני. לאחר 15 עד 20 דקות של תקופת שיווי משקל לאחר הזילוח הקודם, חתכו את האטריום הימני, או RA, והכניסו את הבלון לחדר הימני, או RV, דרך RA. השתמש בסרט כדי להחזיק את הבלון בתוך הקרוואן ולמזער את השטח הפתוח של RA כדי לעזור להגביל את הבלון בחדר.לאחר 20 דקות של איסוף נתונים פונקציונליים עבור הקרוואנים, חתכו את האטריום השמאלי, או LA, והכניסו בלון מלא מים מנופח לחדר השמאלי, או LV, דרך לוס אנג'לס. השתמשו בנייר דבק כדי להחזיק את הבלון בתוך LV.To לכייל את מתמר הלחץ, מלאו תחילה מזרק 10 מיליליטר במי מלח חמים וחברו את המזרק לכיפה דרך ברז משולש. פתחו את הברז ומלאו לאט את הכיפה במי מלח לפני סגירת כל הברזים והוצאת המזרק. לאחר מכן, חבר את הכיפה המלאה למתמר על ידי חיבור מד הלחץ לקצה השלישי של הברז התלת-כיווני.בתוכנת ההקלטה, מהתפריט הנפתח של הערוץ המתחבר למתמר, בחר באפשרות של גשר אמפר. לחץ על 0 לפני תחילת ההקלטה כדי להגדיר את קריאת המתמר לאפס מילימטרים של כספית. לאחר מספר שניות של הקלטה, לדחוף לאט את המזרק ולהגדיל את הלחץ ל 100.לחץ על תפסיק כדי לסיים את ההקלטה. בתיבת הדו-שיח המרת יחידות, בחר את אזור ההקלטה עבור אפס מילימטרים של כספית ולחץ על החץ ל- 1 לפני הקלדת אפס מילימטרים של כספית. באופן דומה, בחר את אזור ההקלטה עבור 100 מ"מ כספית.לחץ על החץ ל- 2 והקלד 100 מילימטרים של כספית. כעת, לחץ על אישור כדי לכייל את המתמר. לאחר סיום הכיול, שנו את שם התעלה המתאימה למתמר הלחץ עם הבלון כלחץ חדרי, או לחץ LV, והתחילו להקליט כאשר הלב מחובר למערכת.לאחר החדרת הבלון לחדר, התאימו את נפח המים בבלון באמצעות מזרק מיקרומטר דרך הברז התלת-כיווני כדי לשמור על הלחץ הדיאסטולי הסופי בחמישה עד 10 מילימטרים של כספית. לאחר מכן, שנה את שם הערוץ הריק כ- dP/dt ושמור על ערוץ המקור הנגזרת כלחץ חדרי. תעלה זו רושמת את יחס שינוי הלחץ בחלל החדר במהלך התכווצות.בחר את תקופת המדידה היציבה לפני שתגדיר את מודול לחץ הדם. לאחר מכן, בחר את לחץ LV כערוץ הקלט ולחץ על בחירה לפני לחיצה על אישור. כעת, לחץ על תצוגת מסווג כדי להסיר מחזור לב חריג ועל תצוגת טבלה כדי ליצור את הטבלאות עבור הממוצע של dP/dt מרבי ו- dP/dt מינימלי עבור התקופה שנבחרה. כאשר לב העכבר אוחסן במאגר HTK במשך אפס שעות לפני הזילוח, לחץ סיסטולי גבוה יותר נרשם עבור LV בהשוואה ל- RV. בנוסף, בהשוואה ל-RV, ה-LV הציג גם התכווצות שרירים משמעותית יותר, כמו גם הרפיה.עם זאת, כאשר בוצע זילוח על הלב לאחר שחשף אותו לשמונה שעות של אחסון קר, הן ה- LV והן ה- RV הראו ירידה תפקודית משמעותית בהשוואה לשלב שעת האפס. הירידות נצפו חמורות יותר ב-LV בהשוואה ל-RV. ההתכווצות וההרפיה של ה-LV לאחר אחסון של שמונה שעות היו 25.1% ו-30.7% מהפונקציה המתאימה לאחסון שעות אפס, בעוד שה-RV הציג 32.5% ו-29.1% של תפקוד, בהשוואה לקו הבסיס של שעת אפס. ציון תפקוד לקוי ראשוני של LV לאחר אחסון ממושך היה משמעותי יותר מזה של RV. איכות השימור תלויה במידה רבה בזילוח של HTK.חשוב לוודא שהזילוח עקבי כדי להשוות במדויק בין טיפולים שונים. עם מדידה מדויקת של תפקוד הלב התורם של שימור, שיטה זו יכולה בקלות להסתגל לתרופות סינון שיכולות לשפר את תפקוד הלב התורם ולאחר מכן לאמת עוד יותר באמצעות מודל השתלה הטרוטופית.

assessment-ex-vivo-murine-biventricular-function-langendorff

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

המטרה היא לפקח על המדינה חמזור המיטוכונדריה של לבבות בודדים בהקשר של preload פיזיולוגי ולחצים afterload. הלב biventricular לעבוד במודל ארנבת מוצג. רזולוציה גבוהה spatiotemporal הקרינה הדמיה של NADH משמש כדי לפקח על מצב חמזור המיטוכונדריה של הרקמה epicardial.

NADH Fluorescence הדמיה של Biventricular מבודדת עבודה לבבות ארנב

בסרטון זה אנו מבצעים זילוח מדרדר לנגנדורף של לב עכבר מבודד. במהלך ההליך, הפעילות הלבבית של הלב נשמרת על ידי ניקוב אותו לאחור עם פתרון זילוח דרך העורקים הכליליים באמצעות צינורית המוחדרת לתוך אבי העורקים העולה. המודל משמש לחקר הפתופיזיולוגיה הלבבית של הלב.

זילוח לב מדרדר לנגנדורף: טכניקת Ex Vivo לניקוב לב עכבר מבודד

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של האפנון של מערכת העצבים האוטונומית intracardiac, את ההערכה של השפעתה על בסיסי אלקטרופיזיולוגיה, arrhythmogenesis מחנה dynamics באמצעות התקנה Langendorff ex-vivo .

ההשפעה של נוירונים Intracardiac על הלב אלקטרופיזיולוגיה, Arrhythmogenesis במערכת Langendorff Vivo לשעבר

מטרת מחקר זה הייתה ליצור שיטה לחקירת דינמיקה קרדיולוגית באמצעות מודל בעלי חיים טרנסלבותית. הגישה הניסיונית המתוארת משלבת אופקרדיוגרפיה כפולה בשילוב עם מחקר אלקטרולוגי להערכת פעילות החשמל במודל לב פורצין מבודד, שלם.

אופקרדיוגרפיה ולימודי אלקטרופיזיולוגיה של לשעבר Vivo נגדורף

מוצג כאן פרוטוקול להערכת תפקוד הלב הדו-חדרי בעכברים על ידי יצירת לולאות נפח לחץ (PV) מהחדר הימני והשמאלי באותו בעל חיים באמצעות צנתור חזה סגור. ההתמקדות היא בהיבט הטכני של ניתוח ורכישת נתונים.

הערכה דו-חדרית של תפקוד הלב ולולאות נפח לחץ על ידי צנתור חזה סגור בעכברים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר תותח אבי העורקים וזליפה מדרדרת של לב מורין ילודים לשעבר .  אסטרטגיה של שני אנשים, באמצעות מיקרוסקופ ניתוח ומחט מד קטנה קהה, מאפשרת תותח אמין. כימות מתח התכווצות אורכי מושג באמצעות מתמר כוח המחובר לפסגת החדר השמאלי.

טכניקה שונה לשימוש בלבבות מורין יילודים בהכנת לנגנדורף

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטות לביטוי טרנסגני בלבבות חולדות ועכברים על ידי הזרקה ישירה של הנגיף בהנחיית אקוקרדיוגרפיה. שיטות להערכת הרגישות של לבבות להפרעות קצב חדריות על ידי גירוי חשמלי מתוכנת של לבבות מבודדים, Langendorff-perfused מוסברים גם כאן.

ביטוי טרנסגני נגיפי בלבבות מכרסמים והערכת הסיכון להפרעות קצב לב

הפרוטוקול הנוכחי מתאר השגת הקשר לחץ-נפח באמצעות קצב טרנס-וושט, המשמש כלי רב ערך בהערכת תפקוד דיאסטולי במודלים עכבריים של אי ספיקת לב.

הליך מבוקר קצב להערכת תפקודים דיאסטוליים תלויי קצב לב במודלים של אי ספיקת לב מורין

פרוטוקול זה מתאר ייצור חומרים מתקדם ושיטות לב חולדות ex vivo לממשק ביולוגי דו-כיווני אופטי וחשמלי, המאפשר גירוי לבבי מדויק, הקלטה ומידול אוטם למחקר ביו-אלקטרוניקה.

ממשקים חשמליים ואופטו-אלקטרוניים דו-כיווניים בלבבות חולדות ex vivo בריאים ואיסכמיים

טרשת עורקים היא תהליך דלקתי כרוני. כתב יד זה מדגים קל לשימוש מודל vivo לשעבר לחקור התרדמה טריות או הפלאק בעורקים הכליליים. מודל vivo לשעבר מאפשר החקירה של חומרים פוטנציאליים על הסביבה הדלקתית בטרשת עורקי אדם ותוצאות יכולים להיות מנותח על ידי שיטות שונות.

אדם<em&gt; Ex Vivo</em&gt; טרשת רובד מודל ללמוד ביולוגיה נגע

חקור הערכת תפקוד דו-חדרי בלב עכברי לאחר שימור קר באמצעות מערכת הדמיית לנגנדורף. שיטה זו מאפשרת השוואה בין חדרי הלב ומסייעת בפיתוח טיפולים לשיפור תפקוד לבות תורמים.

הערכה של תפקוד דו-חדרי Ex Vivo Murine במודל לנגנדורף

גלה סרטונים נוספים