Name: קשירת עורקים כליליים שמאליים: מודל מורין כירורגי של אוטם שריר הלב (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-09T14:45:00.000+00:00
Duration: 5 min 48 s
Description: למדו שיטת קשירת עורק כלילי שמאלי בעכברים לחקר פיזיולוגיית מחלת הלב ותגובת דלקת. מודל כירורגי זה מאפשר מחקר מדויק של אוטם שריר הלב בבעלי חיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי המכון הלאומי לבריאות (R01HL143967, R01HL142629, R01AG069399 ו- R01DK129339), פרס פרויקט טרנספורמטיבי AHA (19TPA34910142), פרס פרויקט חדשני AHA (19IPLOI34760566) ופרס פרויקט החדשנות של ALA (IA-629694) (ל- PD).

פרוטוקול המחקר הנוכחי נבדק ואושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של אוניברסיטת פיטסבורג. שמונה עכברי C57BL/6J בנות שנה (sham n = 4 ו-MI n = 4) בנות שנה במשקל 24-30 גרם שימשו לניסויים אלה. כ-100% ולפחות 80% מהעכברים שרדו ב-24 וב-28 הימים הראשונים, בהתאמה.
1. הכנה ואינטובציה אנדוטרכאלית של העכברים
<ol><li>מחממים מעקר חרוזים (ראו טבלת חומרים) ל-250°C ומניחים בו כלי ניתוח אוטוקלאביים למשך מספר דקות.</li>
	<li>מרדימים את העכבר בתא אינדוקציה עם 3% איזופלורן ו-1 ליטר/דקה חמצן למשך 5 דקות.</li>
	<li>ודא את עומק ההרדמה בעכבר על ידי בדיקת התגובה לצביטת בוהן יציבה.</li>
	<li>שקול את העכבר כדי להעריך את המינון של התרופה משככת כאבים לפני הניתוח, buprenorphine (0.1 מ"ג / ק"ג). להזריק את התרופה intraperitonially.</li>
	<li>קצצו את הפרווה בצד שמאל של בית החזה באמצעות סכין גילוח חשמלי.</li>
	<li>יש לחטא את אתר הניתוח בפובידון-יוד ובאתנול 70% לאחר מכן שלוש פעמים.</li>
	<li>מקם את העכבר במצב שכיבה על לוח נוטה. אבטח את ראשו וגפיו של העכבר באמצעות רצועה אלסטית המחוברת לשיניים החותכות העליונות ולסרט הדבקה, בהתאמה. החל חומר סיכה אופתלמי סטרילי על העיניים כדי למנוע יובש תחת הרדמה.</li>
	<li>פתחו את הלסת ומשכו בעדינות את הלשון מחלל הפה.</li>
	<li>זהה את פתח הגרון על ידי הארת הלוע באמצעות לרינגוסקופ (ראה טבלת חומרים).</li>
	<li>חותכים כ-0.5 ס"מ ממחט צנתר 24 גרם ומחדירים את המחט הקהה למגן הפלסטיק. כוונו את המחט הקהה עם מגן הפלסטיק לתוך קנה הנשימה. מוציאים את המחט, ומשאירים את מגן הפלסטיק לתוך קנה הנשימה.</li>
	<li>כוונו את מכונת ההנשמה (ראו טבלת חומרים) לקצב נשימה של 137 פעימות לדקה (מותאם לעכברים ששימשו במחקר זה) ולנפח גאות ושפל של 0.18 סמ"ק. חבר את צינורות ההנשמה למגן הצנתר וודא אינטובציה תקינה על ידי חיפוש תנועת חזה מסונכרנת עם מכונת ההנשמה.</li>
	<li>נתק את צינור ההנשמה ממגן הצנתר והנח את בעל החיים במצב שכיבה על לוח ניתוחים מבוקר טמפרטורה שחומם מראש. חבר מחדש את העכבר למכונת ההנשמה.</li>
</ol>2. קשירה קבועה של העורק הכלילי השמאלי
<ol><li>לחטא את אתר הניתוח עם פובידון-יוד ו 70% אלכוהול. החל וילון סטרילי עם חור בגודל רבע במרכז כדי לאבטח את אתר הניתוח. הרימו בעדינות את העור באמצעות זוג מלקחיים ובצעו חתך עורי רוחבי קטן (1.5-2 ס"מ) לאורך הקו שבין שרירי החזה השמאלי הגדול לשרירי המינור באמצעות זוג מספריים כירורגיים. הערה: מספריים שימשו לביצוע החתך מכיוון שהוא מספק את השליטה הנדרשת על עומק וכיוון החיתוך.</li>
	<li>הפרידו את שרירי החזה הבסיסיים בעזרת מלקחיים ומספריים מנתחים. השרירים הופרדו באמצעות retractors מחובר רצועות אלסטיות.</li>
	<li>בצע חתך בחלל הבין-קוסטלי השלישי עם זוג מספריים מיקרו בעקבות הזווית הטבעית של כלוב הצלעות. בשלב זה יש לנקוט משנה זהירות כדי למנוע פגיעה בלב ובריאות.</li>
	<li>מתחו בעדינות את הצלעות זו מזו באמצעות retractors כדי לחשוף את החדר השמאלי. הזיזו את שומן קרום הלב הצידה ואתרו את ה-LCA, הזורם מקצה האטריום השמאלי לכיוון קודקוד הלב.</li>
	<li>פס"ד 8-0 תפר ניילון מתחת ל- LCA בעזרת מחזיק מחט. קשר את ה- LCA עם קשר כפול ואחריו קשר שני (קשר מנתח שונה). הערה: הלבנה של החדר השמאלי התחתון מאשרת קשירת LCA מוצלחת. בנוסף לכך, מדידת טרופונין, ניטור א.ק.ג. (גובה ST), אקו / in vivo מגודר לב, או תמונות micro-CT מומלץ גם לאשר את נגעי MI דומים.</li>
	<li>הסר את retractors ולהכניס מחט קטטר 22 G לתוך חלל החזה. הסר את המחט, משאיר את קצה מגן הפלסטיק בחלל החזה. סגור את כלוב הצלעות באמצעות תפר ניילון 4-0.</li>
	<li>חבר מזרק למגן הפלסטיק 22 G והסר באיטיות עודפי אוויר הכלואים בחלל בית החזה על ידי לחיצה עדינה על החזה כדי ליצור לחץ אוויר שלילי. הסירו את מגן הפלסטיק.</li>
	<li>סוגרים את העור בתפר ניילון 4-0.</li>
	<li>כבה את אספקת האיזופלורן. בשלב זה, העכבר נמצא על מכונת ההנשמה המספקת חמצן.</li>
</ol>3. טיפול לאחר הניתוח
<ol><li>כבו את מכונת ההנשמה ברגע שמתחילה נשימה ספונטנית. הערה: ההליך אורך כ-30-35 דקות לכל בעל חיים מהכנת העכברים ועד לשלב זה.</li>
	<li>שמור את העכבר מתחת למנורת חום ועקוב אחריו עד שהוא ער. אין להשאיר את בעל החיים ללא השגחה עד שהוא התאושש מספיק בהכרה כדי לשמור על שכיבת עצם החזה.</li>
	<li>לאחר הניתוח, הניחו את בעל החיים בכלוב נפרד והחזירו אותו לכלוב המקורי עם בעלי חיים אחרים רק לאחר החלמתו המלאה.</li>
	<li>עקוב אחר העכבר מדי יום עבור כל סימן של כאב או אי נוחות.</li>
	<li>יש להמשיך בהזרקה תוך צפקית של בופרנורפין (0.1 מ"ג/ק"ג) כל 6-8 שעות למשך יומיים נוספים לאחר הניתוח.</li>
</ol>4. הערכה אקוקרדיוגרפית
הערה: אקוקרדיוגרפיה בוצעה כדי להעריך את הפרמטרים של אי ספיקת לב ביום 28 לאחר MI.
<ol><li>לאחר 28 ימים לאחר הניתוח, יש להרדים את העכברים עם 3% איזופלורן ו-1 ליטר חמצן, למרוח חומר סיכה סטרילי על העיניים ולהסיר את שיער החזה באמצעות קרם להסרת שיער. יש לחטא את אזור החזה בפובידון-יוד ובאתנול 70% שלוש פעמים.</li>
	<li>אבטחו את העכברים המורדמים על גבי פלטפורמת ההדמיה (ראו טבלת חומרים) במצב שכיבה ושמרו על רמת הרדמה קבועה לאורך כל ההליך באמצעות חרוט אף המחובר למערכת ההרדמה (1%-2% איזופלורן ו-1 ליטר/דקה חמצן).</li>
	<li>הדביקו את ארבע הכפות לאלקטרודות האק"ג בעזרת אלקטרודה ג'ל (ראו טבלת חומרים). עקוב אחר הטמפרטורה של בעל החיים על ידי החדרת בדיקה רקטלית (ראה טבלת חומרים).</li>
	<li>יש למרוח את ג'ל הסריקה (ראו טבלת חומרים) על בית החזה, להניח את המתמר אנכית, להוריד אותו לקו הפארסטרנלי (במקביל לבית החזה) ולסובב 35° נגד כיוון השעון כדי לקבל את מבט הציר הארוך של החזה בחדר השמאלי.</li>
	<li>הקש על לחצן הדמיה במצב B בתוכנת ההדמיה (ראה רשימת חומרים) כדי לקבל תצוגה מלאה של הלב על ציר ארוך. התאם את גודל השער ואת בהירותו ושמור את התמונות באמצעות Save Clip או Save Frame למדידות מאוחרות יותר16.</li>
	<li>עברו למצב M (מצב תנועה) ומקמו את ציר מצב M ברמת שריר הפפילרי. התאם את גודל השער והקש על לחצן התחל במצב M. שמור את התמונות באמצעות Save Clip או Save Frame16,17.</li>
	<li>מכיוון שתהליך רכישת התמונה במצב 4D הוא אוטומטי, ודא שאותות האק"ג והנשימה פעילים (איור 1) לפני קבלת הנתונים.</li>
	<li>התחל לרכוש את הנתונים במצב B. פתח את לוח הסריקה 4D והפעל את המנוע התלת-ממדי. הגדר את פרמטרי התמונה בחלונית הסריקה 4D והקש על לחצן סריקה כדי להתחיל בסריקה. לאחר סקירת התמונות בתצוגה הדו-ממדית, טען את התמונות למצב 4D באמצעות הלחצן טען ל-4D .</li>
</ol>

<ol><li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics-2021+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics-2021 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 143 (8), 254(2021).</li>
<li>Mendis, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((World+Health+Organization+definition+of+myocardial+infarction%3A+2008-09+revision%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Epidemiology%22%5BJournal%5D)">World Health Organization definition of myocardial infarction: 2008-09 revision.</a> International Journal of Epidemiology. 40 (1), 139-146 (2011).</li>
<li>Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Physiology%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of myocardial infarction.</a> Comprehensive Physiology. 5 (4), 1841-1875 (2011).</li>
<li>Smit, M., Coetzee, A., Lochner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+myocardial+ischemia+and+perioperative+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiothoracic+and+Vascular+Anesthesia%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of myocardial ischemia and perioperative myocardial infarction.</a> Journal of Cardiothoracic and Vascular Anesthesia. 34 (9), 2501-2512 (2020).</li>
<li>Johny, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+mediated+inflammation+in+coronary+artery+disease+with+Type+2+Diabetes+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Inflammation+Research%22%5BJournal%5D)">Platelet mediated inflammation in coronary artery disease with Type 2 Diabetes patients.</a> Journal of Inflammation Research. 14, 5131(2021).</li>
<li>Martin, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+models+of+myocardial+infarction%3A+from+mechanism+to+translation%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Preclinical models of myocardial infarction: from mechanism to translation.</a> British Journal of Pharmacology. 179 (5), 770-791 (2022).</li>
<li>De Villiers, C., Riley, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+myocardial+infarction%3A+comparing+permanent+ligation+and+ischaemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Mouse models of myocardial infarction: comparing permanent ligation and ischaemia-reperfusion.</a> Disease Models & Mechanisms. 13 (11), (2020).</li>
<li>Vasamsetti, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+hematopoietic+progenitor-derived+adipose+tissue-resident+macrophages+contributes+to+insulin+resistance+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of hematopoietic progenitor-derived adipose tissue-resident macrophages contributes to insulin resistance after myocardial infarction.</a> Science Translational Medicine. 12 (553), (2020).</li>
<li>Fernandez, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+coronary+arteries+of+the+C57BL%2F6+mouse+strains%3A+implications+for+comparison+with+mutant+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">The coronary arteries of the C57BL/6 mouse strains: implications for comparison with mutant models.</a> Journal of Anatomy. 212 (1), 12-18 (2008).</li>
<li>van Amerongen, M. J., Harmsen, M. C., Petersen, A. H., Popa, E. R., van Luyn, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryoinjury%3A+a+model+of+myocardial+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Cryoinjury: a model of myocardial regeneration.</a> Cardiovascular Pathology. 17 (1), 23-31 (2008).</li>
<li>Lam, N. T., Sadek, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+heart+regeneration%3A+comprehensive+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Neonatal heart regeneration: comprehensive literature review.</a> Circulation. 138 (4), 412-423 (2018).</li>
<li>Heusch, G., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+acute+myocardial+infarction+and+strategies+of+protection+beyond+reperfusion%3A+a+continual+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of acute myocardial infarction and strategies of protection beyond reperfusion: a continual challenge.</a> European Heart Journal. 38 (11), 774-784 (2017).</li>
<li>Srikanth, G., Prakash, P., Tripathy, N., Dikshit, M., Nityanand, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+rat+model+of+myocardial+infarction+with+a+high+survival+rate%3A+A+suitable+model+for+evaluation+of+efficacy+of+stem+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stem+Cells+%26+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Establishment of a rat model of myocardial infarction with a high survival rate: A suitable model for evaluation of efficacy of stem cell therapy.</a> Journal of Stem Cells & Regenerative Medicine. 5 (1), 30-36 (2009).</li>
<li>Lugrin, J., Parapanov, R., Krueger, T., Liaudet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+myocardial+infarction+model+using+permanent+ligation+of+left+anterior+descending+coronary+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine myocardial infarction model using permanent ligation of left anterior descending coronary artery.</a> Journal of Visualized Experiments. (150), e59591(2019).</li>
<li>Muthuramu, I., Lox, M., Jacobs, F., De Geest, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permanent+ligation+of+the+left+anterior+descending+coronary+artery+in+mice%3A+a+model+of+post-myocardial+infarction+remodelling+and+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Permanent ligation of the left anterior descending coronary artery in mice: a model of post-myocardial infarction remodelling and heart failure.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52206(2014).</li>
<li>Pistner, A., Belmonte, S., Coulthard, T., Blaxall, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+echocardiography+and+ultrasound+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine echocardiography and ultrasound imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. (42), e2100(2010).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+cardiac+morphological+and+functional+changes+in+mouse+model+of+transverse+aortic+constriction+by+echocardiographic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessment of cardiac morphological and functional changes in mouse model of transverse aortic constriction by echocardiographic imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. (112), e54101(2016).</li>
<li>Vasamsetti, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sympathetic+neuronal+activation+triggers+myeloid+progenitor+proliferation+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Sympathetic neuronal activation triggers myeloid progenitor proliferation and differentiation.</a> Immunity. 49 (1), 93-106 (2018).</li>
<li>Reichert, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+left+anterior+descending+%28LAD%29+coronary+artery+ligation%3A+an+improved+and+simplified+model+for+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine left anterior descending (LAD) coronary artery ligation: an improved and simplified model for myocardial infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55353(2017).</li>
<li>Alwardt, C. M., Redford, D., Larson, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+anesthesia+in+cardiac+surgery%3A+a+review+of+drugs+and+practices%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Extra-Corporeal+Technology%22%5BJournal%5D)">General anesthesia in cardiac surgery: a review of drugs and practices.</a> The Journal of Extra-Corporeal Technology. 37 (2), 227-235 (2005).</li>
<li>Kolk, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LAD-ligation%3A+a+murine+model+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">LAD-ligation: a murine model of myocardial infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (32), e1438(2009).</li>
<li>Wu, Y., Yin, X., Wijaya, C., Huang, M. -H., McConnell, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myocardial+infarction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Acute myocardial infarction in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (48), e2464(2011).</li>
<li>Kalogeris, T., Baines, C., Krenz, M., Korthuis, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+six-cell+biology+of+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22International+Review+of+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Chapter six-cell biology of ischemia/reperfusion injury.</a> International Review of Cell and Molecular Biology. , Academic Press. 229-317 (2012).</li>
<li>Scofield, S. L., Singh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confirmation+of+myocardial+ischemia+and+reperfusion+injury+in+mice+using+surface+pad+electrocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Confirmation of myocardial ischemia and reperfusion injury in mice using surface pad electrocardiography.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54814(2016).</li>
<li>Yan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+dynamics+of+cardiac+immune+cell+accumulation+following+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Temporal dynamics of cardiac immune cell accumulation following acute myocardial infarction.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 62, 24-35 (2013).</li>
<li>Xu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+fentanyl+preconditioning+on+cardiomyocyte+apoptosis+induced+by+ischemia-reperfusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Medical+and+Biological+Research%22%5BJournal%5D)">Protective effects of fentanyl preconditioning on cardiomyocyte apoptosis induced by ischemia-reperfusion in rats.</a> Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 50 (2), 5286(2017).</li>
<li>Leuschner, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+monocyte+kinetics+in+acute+myocardial+infarction+are+sustained+by+extramedullary+monocytopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Rapid monocyte kinetics in acute myocardial infarction are sustained by extramedullary monocytopoiesis.</a> Journal of Experimental Medicine. 209 (1), 123-137 (2012).</li>
<li>Leuschner, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+of+CCR2+in+myocarditis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Silencing of CCR2 in myocarditis.</a> European Heart Journal. 36 (23), 1478-1488 (2015).</li>
<li>Dutta, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((E-selectin+inhibition+mitigates+splenic+HSC+activation+and+myelopoiesis+in+hypercholesterolemic+mice+with+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">E-selectin inhibition mitigates splenic HSC activation and myelopoiesis in hypercholesterolemic mice with myocardial infarction.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 36 (9), 1802-1808 (2016).</li>
<li>Jiang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+simple+method+for+induction+of+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A modified simple method for induction of myocardial infarction in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (178), e63042(2021).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

מודל מורין של MI צובר פופולריות במעבדות מחקר לב וכלי דם, ומחקר זה מתאר מודל MI הניתן לשחזור ורלוונטי קלינית. פרוטוקול זה משפר את תהליך קשירת LCA במספר דרכים. ראשית, נמנע השימוש בחומרי הרדמה לפני הניתוח בהזרקה כגון קסילזין/קטמין או נתרן פנטוברביטל14,15. נעשה שימוש רק בהרדמה איזופלורנית, המסייעת לשפר את שיעורי ההישרדות של בעלי חיים (>80% הישרדות 28 יום לאחר הניתוח), למזער סיבוכים הנגרמים על ידי תרופות, ויש לה השפעות לבביות מינימליות בהשוואה לחומרים אחרים<sup class=...

מחלות לב וכלי דם הן דאגה מרכזית לבריאות הציבור שגובה את חייהם של 17.9 מיליון בני אדם מדי שנה, ומהווה 31% מהתמותה העולמית1. הסוג השכיח ביותר של אנומליה קרדיווסקולרית הוא מחלת לב כלילית, ואוטם שריר הלב (MI) הוא אחד הביטויים העיקריים של מחלת לב כלילית2. MI נגרמת בדרך כלל על ידי חסימה טרומבוטית של עורק כלילי עקב קרע של רובד פגיע3. האיסכמיה המתקבלת גורמת לשינויים יוניים ומטבוליים עמוקים בשריר הלב המושפע, כמו גם לירידה מהירה בתפקוד הסיסטולי. MI גורם למוות של קרדיומיוציטים, אשר יכול להוביל עוד יותר לתפקוד לקוי של החדרים ואי ספיקת לב4.
המחקר על MI בחולים מוגבל בשל מחסור ברקמות המתקבלות מחולים עם MI5. ככאלה, מודלים של MI שימושיים הן בחקר מנגנוני המחלה והן בפיתוח מטרות טיפוליות פוטנציאליות. המודלים הקיימים כיום של MI כוללים מודלים בלתי הפיכים של איסכמיה (LCA ושיטות אבלציה) ומודלים של רפרפוזיה (איסכמיה/רפרפוזיה, I/R)6. קשירה קבועה של העורק הכלילי השמאלי (LCA) בעכברים היא השיטה הנפוצה ביותר, והיא מחקה את הפתופיזיולוגיה והאימונולוגיה של MI בחולים 7,8,9. MI קבוע יכול להיגרם גם על ידי שיטות אבלציה, אשר כרוך נזק חשמלי או cryoinjury. שיטות אבלציה מסוגלות ליצור אוטם בגודל אחיד במיקום המדויק10. מצד שני, היווצרות צלקת, מורפולוגיית אוטם ומנגנוני איתות מולקולריים עשויים להשתנות בין שיטות האבלציה10,11. שיטת Murine I/R היא מודל MI חשוב נוסף מכיוון שהיא מייצגת את התרחיש הקליני של טיפול ברפרפוזיה12. מודל I/R קשור לאתגרים כגון גודל אוטם משתנה, קושי להבחין בין תגובות של פגיעה ראשונית ורפרפוזיה6.
למרות השימוש הנפוץ, שיטות קשירת LCA קשורות לשיעורי הישרדות נמוכים וכאב לאחר הניתוח13. פרוטוקול זה מדגים את מודל MI הכירורגי של קשירת LCA הכולל הכנה ואינטובציה של עכברים, קשירת LCA, טיפול לאחר ניתוח ותיקוף של MI. במקום להשתמש בטרכאוטומיה פולשנית14, שיטה זו משתמשת באינטובציה אנדוטרכאלית. החיה עוברת אינטובציה על ידי הארת הלוע באמצעות לרינגוסקופ, מה שהופך את ההליך לקל, בטוח יותר ופחות טראומטי15. העכבר מוחזק על תמיכת הנשמה ותחת הרדמה איזופלורנית לאורך כל ההליך. יתר על כן, אקוקרדיוגרפיה וצביעת טריכרום של מאסון מבוצעות כדי להעריך את תפקוד הלב ואת פיברוזיס הלב לאחר MI, בהתאמה. בסך הכל, שיטה זו מספקת מודל מורין כירורגי אמין וניתן לשחזור של MI שניתן להשתמש בו כדי ללמוד פתופיזיולוגיה ודלקת לאחר MI.

<table><tbody><tr><td>מחט קטטר 22 G</td><td>Exel INT</td><td>26741</td><td>בית החזה</td></tr><tr><td>24 G מחט קטטר</td><td>Exel INT</td><td>26746</td><td>אינטובציה אנדוטרכיאלית</td></tr><tr><td>4-0 תפר ניילון</td><td>Covetrus</td><td>29263</td><td>תפירת שרירים ועור</td></tr><tr><td>8-0 תפר ניילון</td><td>S& T</td><td>3192</td><td>קשירת</td></tr><tr><td>מכשירי אידוי הרדמה</td> LAD <td>ציוד וטרינרי</td><td>VE-6047</td><td>תמיכה בהרדמה</td></tr><tr><td>מוניטור פיזיולוגיה של בעלי חיים</td><td>Fujifilm</td><td>VEVO 3100</td><td>ניטור דופק, קצב נשימה וטמפרטורת גוף</td></tr><tr><td>תמיסת בטדין</td><td>PBS בריאות בעלי חיים</td><td>11205</td><td>אנטיספטי</td></tr><tr><td>בופרנורפין</td><td>Covetrus</td><td>55175</td><td>משכך כאבים</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ חיטוי</td><td>OMANO</td><td>OM2300S-V7</td><td></td></tr><tr><td>סכין גילוח חשמלי</td> משקפת <td>Wahl</td><td>79300-1001M</td><td></td></tr><tr><td>ג'ל אלקטרודות</td> גילוח <td>Parker Laboratories</td><td>W60698L</td><td>ג'ל מוליך חשמלי</td></tr><tr><td>אתנול</td><td>Decon Laboratories</td><td>22-032-601</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td> לחיטוי <td>FST</td><td>11065-07</td><td>נירוסטה</td></tr><tr><td>גזה</td><td>Curity</td><td>CAR-6339-PK</td><td></td></tr><tr><td>מנורת חום</td> סטרילית <td>Satco</td><td>S4998</td><td>טיפול לאחר ניתוח</td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>קנט מדעי</td><td>Surgi-M</td><td>בקרת טמפרטורה</td></tr><tr><td>מעקר חרוזים</td><td>חמים נביטה 500</td><td>11503</td><td>עיקור של מכשיר כירורגי</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Covetrus</td><td>29405</td><td>הרדמה</td></tr><tr><td>מאסון&rsquo; s ערכת צביעת טריכרום</td><td>Thermoscientific</td><td>87019</td> מדידת מחזיק מחט <td>מיקרו פיברוזיס לב</td></tr><tr><td></td><td>FST</td><td>12500-12</td> מספריים מיקרו <td>נירוסטה</td></tr><tr><td></td><td>FST</td><td>15000-02</td><td></td></tr><tr><td>משחת עיניים</td> מנירוסטה <td>Dechra</td><td>Puralube Vet</td><td>חומר סיכה עיני סטרילי</td></tr><tr><td>סריקת ג'ל</td><td>מעבדות פארקר</td><td>Aquasonic 100</td><td>מספריים ג'ל העברת אולטרסאונד מימי</td></tr><tr><td></td><td>FST</td><td>14060-11</td><td>נירוסטה</td></tr><tr><td>לרינגוסקופ לבעלי חיים קטנים</td><td>דגם Penn-Century דגם LS-2-M</td><td>הארת הפה והלוע</td><td></td></tr><tr><td>מאוורר בעלי חיים קטנים</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>557058</td><td>תמיכת מאוורר</td></tr><tr><td>אור כירורגי</td><td>Cole parmer</td><td>41723</td><td>רוחב תאורה (בתוך): 7</td></tr><tr><td>פלטפורמת הדמיה פרה-קלינית Vevo 3100</td><td>Fujifilm</td><td>VEVO 3100</td><td>אקו לב</td></tr><tr><td>תוכנת VevoLAB</td><td>Fujifilm</td><td>VevoLAB 3.2.6</td><td>ניתוח נתוני אקו לב</td></tr></tbody></table>

קשירת עורקים כליליים שמאליים: מודל מורין כירורגי של אוטם שריר הלב

Left Coronary Artery Ligation: A Surgical Murine Model of Myocardial Infarction

מחלת לב איסכמית ואוטם שריר הלב (MI) לאחר מכן היא אחד הגורמים המובילים לתמותה בארצות הברית וברחבי העולם. על מנת לחקור את השינויים הפתופיזיולוגיים לאחר אוטם שריר הלב ולתכנן טיפולים עתידיים, נדרשים מודלים מחקריים של MI. קשירה קבועה של העורק הכלילי השמאלי (LCA) בעכברים היא מודל פופולרי לחקר תפקוד הלב ועיצוב מחדש של החדרים לאחר MI. כאן אנו מתארים מודל MI כירורגי פחות פולשני, אמין וניתן לשחזור על ידי קשירה קבועה של LCA. המודל הניתוחי שלנו כולל הרדמה כללית הפיכה בקלות, אינטובציה אנדוטרכאלית שאינה דורשת טרכאוטומיה ותורקוטומיה. יש לבצע אלקטרוקרדיוגרפיה ומדידת טרופונין כדי להבטיח MI. אקוקרדיוגרפיה ביום 28 לאחר MI תבחין בתפקוד הלב ובפרמטרים של אי ספיקת לב. ניתן להעריך את מידת הפיברוזיס הלבבי על ידי צביעת טריכרום ו- MRI לב של מאסון. מודל MI זה שימושי לחקר השינויים הפתופיזיולוגיים והאימונולוגיים לאחר MI.

איור 1 מדגים את אותות האק"ג והנשימה הפעילים המייצגים במהלך הערכה אקוקרדיוגרפית של עכברי דמה (איור 1A) ו-MI (איור 1B). אימות של אותות אק"ג פעילים ונשימה חשובים לפני רכישת הנתונים אקוקרדיוגרפיים. איור 2 מראה מדידה אקוקרדיוגרפית של פרמטרים תפקודיים לבביים לאחר 28 ימים לאחר קשירת LCA. איור 2 מראה תמונות במצב M של לבבות הציר הקצר הפארא-סטרנלי של לבבות דמה (איור...

מוצג כאן הליך כירורגי לקשירה קבועה של העורק הכלילי השמאלי בעכברים. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה ואת התגובה הדלקתית הקשורים לאחר אוטם שריר הלב.

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In ...

המודל הכירורגי קשירה קבועה של עורק שמאל בעכברים יכול לשמש כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה ואת התגובה הדלקתית הנלווית לאחר אוטם שריר הלב. שיטה זו מספקת מודל עכבר אמין וניתן לייצור של MI, שהוא קל, בטוח ופחות פולשני. כדי להתחיל, מחממים מעקר חרוזים ל 250 מעלות צלזיוס ומניחים בו כלי ניתוח autoclaved במשך כמה דקות.ודא את עומק ההרדמה בעכבר על ידי בדיקת התגובה לצביטת בוהן יציבה. לשקול את העכבר כדי להעריך את המינון של התרופה משכך כאבים לפני הניתוח buprenorphine ולהזריק את התרופה intraperitoneally. קצצו את הפרווה בצד שמאל של בית החזה באמצעות סכין גילוח חשמלי.לאחר חיטוי אתר הניתוח, הניחו את העכבר במצב שכיבה על לוח נוטה. אבטחו את ראשו וגפיו של העכבר באמצעות רצועה אלסטית המחוברת לשיניים החותכות העליונות ולסרט הדבקה בהתאמה. יש למרוח חומר סיכה סטרילי על העיניים כדי למנוע יובש בזמן הרדמה.פתחו את הלסת ומשכו בעדינות את הלשון מחלל הפה. זהה את פתח הגרון על ידי הארת הלוע האוראלי באמצעות לרינגוסקופ. חותכים כ-0.5 ס"מ ממחט צנתר 24 מד ומחדירים את המחט הקהה למגן הפלסטיק.כוונו את המחט הקהה עם מגן הפלסטיק לתוך קנה הנשימה. מוציאים את המחט, ומשאירים את מגן הפלסטיק בקנה הנשימה. הגדר את מכונת ההנשמה לקצב נשימה של 137 פעימות לדקה, מותאם במיוחד לעכברים ששימשו במחקר זה ונפח גאות של 0.18 יכולת סגירה.חבר את צינורות ההנשמה

left-coronary-artery-ligation-surgical-murine-model-myocardial

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

וידאו זה מדגים כיצד להשתמש במודל מהיר ואמין ללמוד תהליכים pathobiological ו pathophysiological של שריר הלב.

LAD-קשירת: מודל Murine של אוטם שריר הלב

מניפולציות גנטיות רבות ו / או זריקות intramyocardial של גנים, חלבונים, תאים, ו / או biomaterials באים על גבי מימד הזמן במחקרים של פגיעה איסכמיה / reperfusion חריפה שיפוץ כרונית בעכברים. וידאו זה ממחיש את הליכי microsurgical עבור איסכמיה / reperfusion, קשירת עורק כלילי קבע, ומחקרים הזרקת intramyocardial.

קשירת עורקים כלילית לבין הזרקת Intramyocardial ב מודל Murine של אוטם

ההליך הניתוחי המשמש ללגרום לאוטם שריר לב בעכברי ניסוי מתחיל בבית חזה שמאלי בין השלישי ואת צלעות 4 כדי להמחיש את המשטח הקדמי של הלב והריאה שמאלית. העורק הכלל שמאלי גבעול, החזה סגור והעכבר מותר להתאושש באופן ספונטני.

טכניקה שונה לקשירת עורקים הכליליים בעכברים

בסרטון זה, אנו מתארים הליך כירורגי ליצירת מודל עכבר של אוטם שריר הלב על ידי קשירת העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי.

יצירת מודל מורין של אוטם שריר הלב: הליך כירורגי לקשירה קבועה של עורק כלילי יורד קדמי שמאלי במודל עכבר

אנחנו מציגים את שיטה כירורגית כדי לגרום לאיסכמיה / reperfusion הניסיוני (I / R) פציעה כדי לדמות אוטם שריר הלב (MI) בעכברי מודל, המאפשר ליותר בהירות במיצוב של קשירה בעורק השמאלי הקדמי יורד (LAD) כדי להגדיל את שחזור ניסויים MI בעכברים.

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

אי ספיקת לב היא הגורם המוביל לאשפוז וגורם עיקרי לתמותה. מודל של קשירה קבועה של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי בעכברים מיושם כדי לחקור עיצוב מחדש של החדרים ותפקוד לקוי של הלב לאחר אוטם שריר הלב. מוצגת הטכניקה של מדידות המודינמיות פולשניות בעכברים.

קשירת קבע של העורק השמאלי קדמי יורד כלילית בעכברים: דגם של Remodelling אוטם שריר לב ופוסט-אי ספיקת לב

אנו מספקים שיטה אמינה לקשירת העורק היורד הקדמי השמאלי (LAD) במודל עכבר. שיטה זו פחות פולשנית יחסית משיטות אחרות, הכוללת אינטובציה אנדוטרכיאלית, גישת כריתת בית החזה בצד שמאל וניתוח בית החזה. שיטה זו יכולה לשמש כמודל לאוטם שריר הלב החריף והכרוני (MI).

Murine שמאל Anterior יורד (LAD) קשירת עורקים הכליליים: דגם משופר או פשוט עבור אוטם שריר לב

כאן אנו מתארים הליך כירורגי המראה כיצד להשיג הארכה קבועה של עורק שמאלי הקדמי כלילית בעכברים. מודל זה הוא בעל רלוונטיות גבוהה לחקור את הפתופסולוגיה של אוטם שריר הלב ואת התהליכים הביולוגיים המקביל.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

פרוטוקול זה מתווה את השלבים לגרימת אוטם שריר הלב בעכברים תוך שמירה על קרום הלב ותכולתו.

מודל מכרסם איסכמי שלם של קרום הלב

כאן אנו מתארים שיטה פשוטה וניתנת לשחזור שיכולה לגרום לאוטם שריר הלב או לפגיעה באיסכמיה של שריר הלב בעכברים על ידי קשירה מדויקת של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי באמצעות מיקרומניפולציה.

השראת אוטם שריר הלב ופגיעה באיסכמיה של שריר הלב בעכברים

למדו שיטת קשירת עורק כלילי שמאלי בעכברים לחקר פיזיולוגיית מחלת הלב ותגובת דלקת. מודל כירורגי זה מאפשר מחקר מדויק של אוטם שריר הלב בבעלי חיים.

קשירת עורקים כליליים שמאליים: מודל מורין כירורגי של אוטם שריר הלב

גלה סרטונים נוספים