עיקור קרינת גמא במינון נמוך עבור שתלי קנה נשימה דה-צלולריים

פרוטוקול זה מספק תהליך עיקור מלא לכל איבר שאינו סטרילי מבלי להשפיע על מאפייניו. המטרה העיקרית של טכניקה זו כוללת את האפשרות של עיקור איבר מבלי להשפיע על תכונותיו. למרות שטכניקה זו התמקדה בקנה הנשימה, היא הוכיחה כי מינונים נמוכים יותר של קרינת גמא יכולים לעקר ביעילות חומרים ביולוגיים.

אדם עלול להתמודד עם הבעיה על ידי הגדרת המינון היעיל הנמוך ביותר עבור סוג שונה של איברים. לאחר מכן, מומלץ להתחיל עם מינון נמוך יותר ולהגדיל אותם עד להשגת העיקור. התחילו בחלוקת קנה הנשימה שנותח מארנבים לבנים ניו זילנדים מומתים, או Oryctolagus cuniculus, לחתיכות של שני סנטימטרים.

בעזרת מספריים, הסר את רקמת החיבור שמסביב ואת שכבת הרירית הפנימית. השקיעו את הדגימות ב-12 מיליליטר של תמיסת PBS המכילה SDS, 5%פניצילין סטרפטומיצין ו-5% אמפוטריצין. יש לערבב את קנה הנשימה באופן קבוע עם מערבל מגנטי במהירות 400 סל"ד למשך חמישה שבועות בטמפרטורת החדר.

מדי שבוע, תן שעתיים של הלם אוסמוטי על ידי טבילת קנה הנשימה במים מזוקקים לפני החלפת המדיום. לאחר חמישה שבועות, הקריוגנו את דגימות קנה הנשימה באמצעות תערובת של 12 מיליליטר של 80% FBS ו- 20% DMSO במיכל הקפאה במינוס 80 מעלות צלזיוס. לאחר 13 עד 15 ימים, להפשיר את קנה הנשימה באמבט מים ב 37 מעלות צלזיוס.

לאחר מכן, לשטוף אותם עם PBS. כדי להקרין את הדגימה, הניחו ארבע חתיכות קנה נשימה ב-20 מיליליטר של PBS בצלוחיות תרבית מתאקרילט T25, תוך מניעת היווצרות בועות. בצע את הקרינה באמצעות מאיץ ליניארי עם פוטונים של אנרגיה נומינלית של 10 מגה וולט שיטוח אלומות ללא מסנן.

החל קצב מינון של 2, 400 יחידות צג לדקה ולהגדיר פרמטרים אחרים כמתואר בכתב היד. לאחר שתסיים, תרבית את הדגימה ב -30 מיליליטר של DMEM בתוספת FBS 10% בלתי פעיל ללא אנטיביוטיקה או אנטי פטרייתיות. לדגור על התרבית באינקובטור רקמה סטנדרטי בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ופחמן דו חמצני של 5% במשך שבועיים ולבדוק אותה כל 24 שעות לפרמטרים של זיהום כמו pH בינוני, צבע ושינויי עכירות.

בצע בדיקות מתיחה במכונת בדיקה אוניברסלית שולחנית לאחיזה, או בקרת תזוזה של UTM, המצוידת בחיישני כוח ומיקום ובמחשב עם תוכנה שתוכננה במיוחד. הקלט נתונים כל 0.4 שניות וייצא אותם לגיליון אלקטרוני. בניית לסתות מתיחה המותאמות לקליבר הממוצע של קנה הנשימה של הארנב מפוליוויניל כלוריד גבישי טהור שאינו רעיל, או צינורות חלולים PVC.

חלקו את ההתנהלות למקטעים באורך שלושה סנטימטרים. כדי לבצע את התפר termino-terminal ללא הטיה, לקדוח 12 חורים מוכנים שני מילימטרים מקצה הלסתות, מופרדים על ידי 2.5 מ"מ. לאחר מכן, חבר את צינורות זכוכית PVC לקנה הנשימה של הארנב על ידי אנסטומוזה טרמינו-טרמינלית עם תפר מונופילמנט רציף של 6-0 ניילון דרך חורים של חמישה מילימטר המבוצעים לסירוגין הנמצאים במרחק של שני מילימטרים מקצה קנה הנשימה.

למתוח את כל חתיכות בקצב עקירה של 5.0 מ"מ לדקה. לאחר מכן, רשום את המשתנים, כגון מתח ומתח מרביים, האנרגיה המאוחסנת ליחידת נפח קנה הנשימה, ומודולוס יאנג. בצע בדיקות דחיסה רדיאליות ב- UTM שולחני של דחיסה המצויד בתא עומס של 15 ניוטון כדי לקבל נתוני כוח, מיקום וזמן.

רשום נתונים וייצא לגיליונות אלקטרוניים במרווחי זמן של 0.5 שניות. מניחים את קנה הנשימה כאשר האזור הקרומי מונח על הצלחת התחתונה לפני העלייה ההדרגתית של הצלחת לכיוון הצלחת העליונה במהירות קבועה של חמישה מילימטרים לדקה. חשב כל משתנה ליחידת אורך של הדגימה, קשיחות, ואת האנרגיה ליחידת שטח הפנים הדרוש כדי להסתיר את קנה הנשימה לחלוטין.

מניחים סטנט PVC אינטרלומינלי סטרילי בגודל 14, ומבטיחים שוליים של שלושה עד ארבעה מילימטרים בכל קצה. תקן את הסטנט בתפר יחיד של 6-0 ניילון מונופילמנט דרך החלל הבין-סחוסי של הסחוס הראשון. בתנאים אספטיים ועם חומר סטרילי, יש לבצע חתך בית חזה מרכזי אורכי בקוטר שלושה סנטימטרים ולקצור דשים דו-צדדיים המורכבים מפאשיה חזה ומרכיב שרירי.

לעטוף את קנה הנשימה עם הדש בארבעה ארנבים, קנה נשימה אחד על כל hemathorax. לאחר השלמת הניתוח, הפוך את ההרדמה על ידי הפסקת מתן איזופלורן. מתוך שמונת החלקים שנחשפו ל-0.5 קילו-אפור של קרינה, שתי יצירות הציגו שינוי בצבע המדיה בתוך שבוע.

עם זאת, אף אחד מהחלקים שהוקרנו בקילו אחד או שניים לא הראה שינוי בצבע המדיה. בהשוואה לקבוצת הביקורת, לא זוהו שינויים בדפוסי פיזור הקולגן או הסיבים האלסטיים בדגימות שנותחו שהוקרנו במנות קרינה שונות. הנתונים המתקבלים בבדיקת המתיחה על קנה הנשימה המוקרן מוצגים כאן.

עקומות מאמץ מאמץ עבור קנה נשימה decellularized ו מוקרן לא הראה שינויים לעומת קנה הנשימה לא מעוקר. בדיקות הדחיסה המבוצעות על קנה הנשימה או הבקרות המקוריות ובקנה הנשימה הסלולרי, השמור בהקפאה והמוקרן מוצגים. הגרפים המתאימים הראו כי הקרינה לא שינתה את אחוז החסימה בהשוואה לקנה הנשימה הטבעי.

קרינת גמא גרמה לירידה קלינית מינימלית אך מובהקת סטטיסטית במאפיינים רדיו-ביומכניים ובכוח המשתנה ליחידת אורך. הבדיקה ההיסטולוגית הראתה את רקמת החיבור המאורגנת בצורה של הפריכונדריה של קנה הנשימה המקומי. הסחוס היה שלם ולא הראה סימני נמק.

בעת השתלת אלמנט רדיולוגי ביצור חי, הסטריליות של השתל והתהליך הסטרילי הם בעלי חשיבות עליונה כדי למנוע זיהום ודחיית רקמות. יש מגוון רחב של איברים שיש להשתיל לאחר יצירת רקמות, והם צריכים להיות סטריליים. בעקבות תהליך זה ניתן להשיג עיקור מלא מבלי להשפיע על המאפיינים העיקריים של האיבר.