Name: שיטת העשרה לבועיות חוץ-תאיות קטנות שמקורן ברקמת סרטן הכבד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-03T12:50:00.000+00:00
Duration: 10 min 33 s
Description: למד שיטת הפרדה אופטימלית לבידוד בועיות חוץ-תאיות קטנות מרקמת סרטן הכבד. השיטה משפרת את טוהר הבידוד ומספקת בסיס מתודולוגי למחקרים עתידיים בתחום הביולוגיה הסרטנית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לבית החולים המסונף הראשון של האוניברסיטה הרפואית גנאן על תמיכתו בעבודה זו. עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מספרי מענקים 82260422).

רקמת סרטן הכבד האנושית נאספה מחולים שאובחנו עם ממאירות בכבד בבית החולים המסונף הראשון של האוניברסיטה הרפואית גנאן. כל החולים חתמו על טופס הסכמה מדעת, ואיסוף דגימות רקמה אנושית אושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים המסונף הראשון של האוניברסיטה הרפואית גנאן. עיין בטבלת החומרים לקבלת פרטים הקשורים לכל החומרים, הציוד והתוכנות המשמשים בפרוטוקול זה.
1. הכנה
<ol><li>מניחים את שייקר הסרת הצבע העברה באינקובטור ולהגדיר את הטמפרטורה על 37 °C (77 °F). ראו איור 1 עבור כל שאר הציוד הדרוש.</li>
	<li>נקו את האזמל והמלקחיים על ידי ריסוס שלהם ב-75% אלכוהול.</li>
	<li>הכינו את תמיסת העיכול על ידי מדידת 6 מ"ג של collagenase D (4 מ"ג/מ"ל) ו-24 μL של DNase Ι (80 U/mL) והוספתם ל-1.5 מ"ל של RPMI-1640 Basic Medium. מערבבים בהיפוך עדין עד שהתוספים מומסים לחלוטין.</li>
	<li>מראש, יש להרטיב מסננות תאים של 70 מיקרומטר ו-0.22 מיקרומטר עם 1x מלח חוצץ פוספט (PBS).</li>
	<li>הניחו צלחת תרבית תאים סטרילית בקוטר 100 מ"מ על ארגז הקרח כדי להחזיק את רקמות הכבד לאחר ההפשרה.</li>
	<li>בתוך 15 דקות לאחר בידוד רקמת קרצינומה hepatocellular, לשטוף את הדם על פני השטח של בלוק הרקמה עם PBS, להעביר את הרקמה לתוך צינור קפוא סטרילי, ולאחסן אותו ב -80 ° C עד הניסוי לא יותר מ 2 שבועות.</li>
</ol>2. דיסוציאציה של רקמות
<ol><li>הוציאו את דגימת הרקמה מהמקפיא בטמפרטורה של 80°C והכניסו כ-400 מ"ג של הרקמה - חתוכה לרסיסים של 2 מ"מ x 2 מ"מ x 2 מ"מ - לתוך צלחת תרבית התאים בקוטר 10 ס"מ שעל ארגז הקרח.</li>
	<li>להעביר את הרקמה לתוך צלחת 6 באר עם 1.5 מ"ל של פתרון העיכול; לאחר מכן, הניחו את הצלחת על שייקר הסרת הצבע של טרנספר (20 סל"ד לדקה) כדי לדגור במשך 20 דקות בטמפרטורה של 37°C לדיסוציאציה מוחלטת של רקמת סרטן הכבד ושחרור של sEVs.</li>
	<li>מוציאים את צלחת 6 הקידוחים מהאינקובטור ומניחים אותה על ארגז הקרח. הוסף 80 μL של מעכב phosphatase ו 200 μL של פתרון מעכב פרוטאז מלא כדי לעצור את העיכול.</li>
	<li>העבירו את תמיסת העיכול למסננת התאים בגודל 70 מיקרומטר וסננו אותה לאט כדי להסיר פסולת רקמות גדולה. אספו את התסנין והניחו אותו בצינור צנטריפוגה של 2 מ"ל.</li>
</ol>3. אולטרה-צנטריפוגה דיפרנציאלית
הערה: בצע את כל שלבי הצנטריפוגה ב- 4 °C.
<ol><li>צנטריפוגה את התסנין ב 500 × גרם במשך 10 דקות ולאסוף את supernatant בצינור צנטריפוגה חדש 2 מ"ל. לאחר מכן ניתן להסיר את רוב פסולת הרקמה הקטנה.</li>
	<li>צנטריפוגה את הסופרנאטנט במהירות של 3,000 × גרם למשך 20 דקות כדי להסיר פסולת תאים. מעבירים בזהירות את הסופרנאטנט לצינור צנטריפוגה חדש עד שקצה הפיפטה עומד לגעת בחומר הלבן שעל פני השטח.</li>
	<li>צנטריפוגה את הנוזל הנותר ב 3,000 × גרם במשך 3 דקות; לאחר מכן, שאפו את supernatant כדי להקל על איסוף שלפוחיות. כדי להבטיח את טוהר הרכבים החשמליים, יש לוודא כי החומר הלבן אינו שואף.</li>
	<li>צנטריפוגה את הסופרנאטנט שנאסף ב 12,000 × גרם למשך 20 דקות ולהעביר 900 μL של supernatant לצינור אולטרה צנטריפוגה 4.7 מ"ל. צנטריפוגה את הנוזל הנותר ב 12,000 × גרם במשך 3 דקות ולאחר מכן לאסוף ולערבב את שני supernatants לתוך אותו צינור ultracentrifuge. מלא את הצינור לחלוטין עם PBS.</li>
	<li>צנטריפוגה את הסופרנאטנטים ב-100,000 × גרם למשך 60 דקות. השליכו את הסופרנאטנט והשעו מחדש את הגלולה על ידי מילוי צינור האולטרה-צנטריפוגה ב-PBS וצנטריפוגה נוספת ב-100,000 × גרם למשך 60 דקות. להשעות את הגלולה עם 50 μL של PBS.</li>
	<li>שאפו את מתלה ה-sEV באמצעות מזרק סטרילי בנפח 1 מ"ל וסננו אותו דרך מסנן קרום של 0.22 מיקרומטר. אספו את התסנין בצינור צנטריפוגה של 600 μL ואחסנו אותו בטמפרטורה של -80°C לניתוח נוסף.</li>
</ol>4. הערכת איכות ההעשרה
<ol><li>התבוננו במורפולוגיה של כלי הרכב החשמליים תחת מיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת.<ol><li>לאחר מכן, יש לזרוק 10 μL של דגימת sEV על רשת נחושת, לדגור בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות, ולנקות אותו עם מים מזוקקים סטריליים, באמצעות נייר סופג כדי להסיר נוזלים עודפים.</li>
		<li>יש לטפטף 10 μL של 2% אורניל אצטט על רשת הנחושת לקבלת צביעה שלילית למשך דקה אחת. השתמש בנייר מסנן כדי לספוג את הנוזל על פני רשת הנחושת ולייבש אותו במשך 2 דקות תחת מנורת ליבון.</li>
		<li>התבונן ברשת הנחושת תחת מיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת ותמונה ב 80 kV.</li>
	</ol></li>
	<li>השתמש בציטומטר זרימת ננו-חלקיקים כדי לקבוע את התפלגות הגודל והטוהר של כלי הרכב החשמליים.<ol><li>לפני הפעלת המכונה, הכינו צינורות המכילים 200 μL של בקרת איכות, 200 μL של ננוספירות סיליקה, 2 x 200 μL של מים טהורים במיוחד, 2 x 200 μL של תמיסת ניקוי, ו 200 μL של PBS. הערה: לפני בדיקת דגימות sEV, יש צורך לבצע בקרת איכות במכשיר ולבדוק את תקן גודל החלקיקים (יש לחשב את התפלגות הגודל באמצעות עקומות סטנדרטיות הנוצרות עם מספר ננומיקרוספרות בקטרים שונים [68-155 ננומטר] באותו תנאי זיהוי). חרוזי QC וננו-ספירות סיליקה דוללו פי 100 במים אולטרה-טהורים בנפח כולל של 200 מיקרוליטר.</li>
		<li>בדקו את נפח תמיסת הניקוי (>10 מ"ל) ושימו לב להפרש בין רמות נוזל הנדן לנוזל הפסולת (20-30 ס"מ).</li>
		<li>כבה את אספקת החשמל העיקרית של המכשיר; לאחר 20 שניות, הפעל את המחשב והמתן לצפצופים המציינים שהמכשיר מחובר כראוי להפעלת התוכנה.</li>
		<li>לחץ על Start Up כדי להפעיל את המצלמה, הלייזר ומשאבת האוויר.</li>
		<li>לחץ על Sheath Flow-Start Up, והנח מים טהורים במיוחד על פלטפורמת הטעינה. לאחר 4 דקות (הספירה לאחור של המכשיר), לחץ על Sample-Boosting | פריקת דגימה.</li>
		<li>לאחר 30 שניות, הניחו את הצינור הריק על פלטפורמת הטעינה ולחצו על Sample-Boosting | פריקת דגימה. לאחר מכן, הניחו את הצינור המחזיק את המים האולטרה-טהורים על פלטפורמת הטעינה, ובו-זמנית, לחצו על Sample-Boosting | נדן זרימה-טיהור.</li>
		<li>לחץ על הפעלה ידנית והנח את צינור ריכוז החלקיקים על פלטפורמת הטעינה. לאחר מכן, לחץ על Sample-Boosting למשך דקה אחת ובחר בו זמנית בקרת איכות 250 ננומטר Std FL SiNPs ב- "SAMP. אינף."</li>
		<li>לחץ על דגימת דגימה והפעל את הגלאי על ידי לחיצה על SPCM. הערה: בשלב זה, ניתן לראות את צורת הגל של האות בזמן אמת.</li>
		<li>לחץ על Auto Sampling והזן 1.0 לתוך Sampling SET כדי לתקן את הלחץ ב- 1 KPa. לחץ על סרגל הכלים ובחר אות גדול.</li>
		<li>התאם את המיקום האופקי של הלייזר והגדר את הלייזר ל -2 מיקרומטר; לאחר מכן, לחץ על L או R כדי לוודא שהאות חזק ואחיד.</li>
		<li>לחץ על Time to Record כדי לאסוף את הנתונים, אשר יקפוץ אוטומטית למאגר בסיום. לאחר מכן, שמור את הנתונים בקובץ Naf ולחץ על פריקת דגימה.</li>
		<li>הניחו את צינור פתרון הניקוי על פלטפורמת הטעינה, לחצו על Sample-Boosting, ולאחר דקה לחצו על Sample-Unloading. השתמש במים טהורים במיוחד כדי להסיר את תמיסת הניקוי השיורית מקצה הנימים.</li>
		<li>הניחו את הצינור הסטנדרטי בגודל חלקיק על פלטפורמת הטעינה ולחצו על Sample-Boosting למשך דקה אחת.</li>
		<li>בחר 68-155 ננומטר Std FL SiNPs בקרת איכות ב "SAMP. Inf" ולחץ על Sample-Sampling. לאחר מכן, לחץ על סרגל הכלים ובחר אות קטן.</li>
		<li>לחץ על Time to Record כדי לאסוף את הנתונים, אשר יקפוץ אוטומטית למאגר בסיום. לאחר מכן, שמור את הנתונים בקובץ Naf ולחץ על פריקת דגימה.</li>
		<li>הניחו את צינור פתרון הניקוי על פלטפורמת הטעינה, לחצו על Sample-Boosting ולחצו על Sample-Unload לאחר דקה. השתמש במים טהורים במיוחד כדי להסיר את תמיסת הניקוי השיורית מקצה הנימים.</li>
		<li>מקם את צינור PBS על פלטפורמת הטעינה; לחץ על Sample-Boosting למשך דקה אחת.</li>
		<li>בחר 68-155 ננומטר Std FL SiNPs בקרת איכות ב "SAMP. Inf" ולחץ על Sample-Sampling. לאחר מכן, לחץ על סרגל הכלים ובחר אות קטן.</li>
		<li>לחץ על Time to Record כדי לאסוף נתונים, אשר יקפוץ אוטומטית למאגר בסיום. שמור את הנתונים בקובץ Naf ולחץ על Sample-Unload.</li>
		<li>הניחו את צינור פתרון הניקוי על פלטפורמת הטעינה, לחצו על Sample-Boosting ו-Sample-Unload לאחר דקה. השתמשו במים אולטרה-טהורים כדי להסיר שאריות תמיסת ניקוי מקצה הנימים.</li>
		<li>בדוק את המידע לדוגמה כמתואר קודם לכן בשלבים 4.2.17-4.2.20; שנה את PBS (שלב 4.2.17) למדגם sEV ונתח את הנתונים.</li>
	</ol></li>
	<li>זיהוי נוסף של כלי הרכב החשמליים על ידי כתם מערבי.<ol><li>קבע את ריכוזי החלבונים של כלי הרכב החשמליים והרקמות באמצעות ערכת כימות חלבון BCA בהתאם להוראות היצרן.</li>
		<li>חשב את נפח ההעמסה של sEV (למשל, עבור 5 מיקרוגרם חלבון לכל באר) בהתבסס על תוצאות כמותיות אלה. מוסיפים חיץ העמסה ביחס של 1:4 ומערבלים את התערובת.</li>
		<li>לאחר דנטורציה באמבט מתכת של 100 מעלות צלזיוס (תרמוסטט יבש) למשך 10 דקות, יש להפריד את החלבון על ג'ל פוליאקרילאמיד 12% במתח של 60 וולט למשך 80 דקות.</li>
		<li>מעבירים את הג'ל לקרום פוליווינילידן דיפלואוריד 0.22 מיקרומטר ב-220 mA למשך שעתיים באמצעות מאגר העברה (25 mM Tris, 192 mM גליצין, 20% מתנול).</li>
		<li>יש לחסום את הממברנה עם חלב יבש 5% ללא שומן בטווין מלח חוצץ טריס (TBST) למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר ולדגור עם נוגדן ראשוני (נוגדן CD9 חד שבטי אנטי אנושי ארנב, נוגדן CD63 חד שבטי ארנב, נוגדן TSG101 חד שבטי ארנב, נוגדן GM130 חד שבטי עכבר) למשך הלילה ב -4 מעלות צלזיוס. יש לדלל את הנוגדנים הראשוניים בחלב 5% ללא שומן בקנ"מ 1:1,000.</li>
		<li>לאחר שלוש שטיפות עם TBST, יש לדגור על הממברנה עם נוגדן משני מצומד (HRP) בטמפרטורת החדר למשך שעה אחת.</li>
		<li>זהה את הנוגדן המקושר ל- HRP באמצעות מצע ניקוי ECL, ולאחר מכן אסוף ונתח את התמונות.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Isaac, R., Reis, F. C. G., Ying, W., Olefsky, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes+as+mediators+of+intercellular+crosstalk+in+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Exosomes as mediators of intercellular crosstalk in metabolism.</a> Cell Metabolism. 33 (9), 1744-1762 (2021).</li>
<li>Hou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+exosome+isolation+methods+and+their+applications+in+proteomic+analysis+of+biological+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Advances in exosome isolation methods and their applications in proteomic analysis of biological samples.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 411 (21), 5351-5361 (2019).</li>
<li>Zhang, L., Yu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes+in+cancer+development%2C+metastasis%2C+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+-+Reviews+on+Cancer%22%5BJournal%5D)">Exosomes in cancer development, metastasis, and immunity.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Reviews on Cancer. 1871 (2), 455-468 (2019).</li>
<li>Yang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((and+perspective+on+exosome+isolation+-+Efforts+for+efficient+exosome-based+theranostics%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">and perspective on exosome isolation - Efforts for efficient exosome-based theranostics.</a> Theranostics. 10 (8), 3684-3707 (2020).</li>
<li>Crescitelli, R., Lässer, C., Lötvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+extracellular+vesicle+subpopulations+from+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of extracellular vesicle subpopulations from tissues.</a> Nature Protocols. 16 (3), 1548-1580 (2021).</li>
<li>Crescitelli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subpopulations+of+extracellular+vesicles+from+human+metastatic+melanoma+tissue+identified+by+quantitative+proteomics+after+optimized+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Extracellular+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Subpopulations of extracellular vesicles from human metastatic melanoma tissue identified by quantitative proteomics after optimized isolation.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 9 (1), 1722433(2020).</li>
<li>Jang, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+protein+enriched+extracellular+vesicles+discovered+in+human+melanoma+tissues+can+be+detected+in+patient+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Extracellular+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial protein enriched extracellular vesicles discovered in human melanoma tissues can be detected in patient plasma.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 8 (1), 1635420(2019).</li>
<li>Muralidharan-Chari, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ARF6-regulated+shedding+of+tumor+cell-derived+plasma+membrane+microvesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">ARF6-regulated shedding of tumor cell-derived plasma membrane microvesicles.</a> Current Biology. 19 (22), 1875-1885 (2009).</li>
<li>Matejovič, A., Wakao, S., Kitada, M., Kushida, Y., Dezawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+separation+methods+for+tissue-derived+extracellular+vesicles+in+the+liver%2C+heart%2C+and+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Open+Bio%22%5BJournal%5D)">Comparison of separation methods for tissue-derived extracellular vesicles in the liver, heart, and skeletal muscle.</a> FEBS Open Bio. 11 (2), 482-493 (2021).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+adipose+tissue-derived+exosomes+mitigate+the+metabolic+syndrome+in+high+fat+diet+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Brown adipose tissue-derived exosomes mitigate the metabolic syndrome in high fat diet mice.</a> Theranostics. 10 (18), 8197-8210 (2020).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+variability+of+small+extracellular+vesicles+derived+from+human+liver+cancer+tissues+and+cultured+from+the+tissue+explants+based+on+a+simple+enrichment+method%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews+and+Reports%22%5BJournal%5D)">Comparison of the variability of small extracellular vesicles derived from human liver cancer tissues and cultured from the tissue explants based on a simple enrichment method.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 18 (3), 1067-1077 (2022).</li>
<li>Fang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-derived+exosomal+miR-1247-3p+induces+cancer-associated+fibroblast+activation+to+foster+lung+metastasis+of+liver+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Tumor-derived exosomal miR-1247-3p induces cancer-associated fibroblast activation to foster lung metastasis of liver cancer.</a> Nature Communications. 9 (1), 1247-1243 (2018).</li>
<li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+sequencing+of+plasma+exosomes+revealed+novel+functional+long+noncoding+RNAs+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Science%22%5BJournal%5D)">RNA sequencing of plasma exosomes revealed novel functional long noncoding RNAs in hepatocellular carcinoma.</a> Cancer Science. 111 (9), 3338-3349 (2020).</li>
<li>Chen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HCC-derived+exosomes+elicit+HCC+progression+and+recurrence+by+epithelial-mesenchymal+transition+through+MAPK%2FERK+signalling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">HCC-derived exosomes elicit HCC progression and recurrence by epithelial-mesenchymal transition through MAPK/ERK signalling pathway.</a> Cell Death & Disease. 9 (5), 513(2018).</li>
<li>Jingushi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+isolated+from+human+renal+cell+carcinoma+tissues+disrupt+vascular+endothelial+cell+morphology+via+azurocidin%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles isolated from human renal cell carcinoma tissues disrupt vascular endothelial cell morphology via azurocidin.</a> International Journal of Cancer. 142 (3), 607-617 (2018).</li>
<li>Camino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deciphering+adipose+tissue+extracellular+vesicles+protein+cargo+and+its+role+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Deciphering adipose tissue extracellular vesicles protein cargo and its role in obesity.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (24), 9366(2020).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

פרוטוקול זה מתאר שיטה חוזרת לחילוץ sEV מרקמת סרטן הכבד. sEV באיכות גבוהה מתקבלים על ידי בידוד רקמות חד, טיפול באנזימי עיכול, אולטרה-צנטריפוגה דיפרנציאלית, וסינון וטיהור קרום מסנן 0.22 מיקרומטר. עבור ניתוח במורד הזרם, חשוב מאוד להבטיח את הטוהר הגבוה של sEVs. בתהליך של צנטריפוגה דיפרנציאלית, שכבה של חומרים לבנים (הרכב לא ידוע) יופיע על פני השטח של supernatant. מכיוון ששכבה זו תזהם את כלי הרכב החשמליים, הסרנו אותה ככל האפשר באמצעות צנטריפוגות חוזרות (3,000 × גרם ו-12,000 × גרם) וסינון דרך קרום של 0.22 מיקר...

שלפוחיות חוץ-תאיות קטנות (sEVs) הן בקוטר של כ-30 ננומטר עד 150 ננומטר והן מופרשות על ידי תאים שונים1. הם יכולים לתקשר עם תאי רקמה ולווסת את המיקרו-סביבה המקומית או הרחוקה על ידי העברת מולקולות ביולוגיות חשובות כגון שומנים, חלבונים, דנ"א ורנ"א לאיברים, רקמות, תאים וחלקים תוך-תאיים שונים. לכן, הם יכולים גם לשנות את ההתנהגות של תאים נמענים 2,3. בידוד וטיהור של כלי רכב חשמליים ספציפיים הוא תנאי מוקדם חיוני לחקר ההתנהגות הביולוגית שלהם במהלך התפתחות המחלה ובמהלכה. אולטרה-צנטריפוגה דיפרנציאלית - הנחשבת לתקן הזהב - משמשת בדרך כלל להפרדת כלי רכב חשמליים מהרקמות שבהן הם שוכנים בדרך כלל4. פסולת רקמות, פסולת תאים, שלפוחיות גדולות וגופים אפופטוטיים ניתנים להסרה באמצעות טכניקה זו, ומשאירים רק את ה- sEVs.
הודגם כי Collagenase D ו-DNase I אינם משפיעים על המאפיינים המולקולריים של תאים או שלפוחיות, כאשר התכונות של שני האנזימים תורמות לשחרור שלפוחיות במטריצה החוץ תאית 5. אנזימים אלה שימשו למיצוי sEV מרקמת מלנומה גרורתית אנושית, רקמת סרטן המעי הגס ורקמת רירית המעי הגס 5,6,7. עם זאת, הריכוז וזמן העיכול של collagenase D ו- DNase I בשיטות אלה שונים, מה שמוביל למסקנות לא עקביות. כדי למנוע משקעים משותפים של תת-סוגים אחרים של sEVs, חוקרים הסירו בועיות חוץ-תאיות גדולות יותר (0.1 מיקרומטר או 0.2 מיקרומטר קוטר) על ידי סינון ו / או צנטריפוגה דיפרנציאלית8. בהתאם לרקמת המקור, שיטות שונות של בידוד וטיהור עשויות להידרש 9,10.
שימוש בשיטת האולטרה-צנטריפוגה הדיפרנציאלית המסורתית כדי לחלץ sEV מרקמת הכבד יוצר שכבה של חומר לבן על פני השטח של הסופרנטנט, ללא כל דרך לקבוע את תכונותיו. במחקר קודם11, שכבה זו של חומר לבן נמצאה כמשפיעה על טוהר ה-sEVs. למרות שמספר החלקיקים וריכוז החלבונים של הדגימות שבודדו בשיטה המסורתית היו גבוהים מאלה של השיטה הנוכחית, מקדם השונות היה גדול, אולי משום שמזהמים רבים יכולים להוביל לחזרתיות לקויה של התוצאות. כלומר, באמצעות חומר ניקוי (כלומר, זיהוי מסיסות של חלקיקים ב-1% טריטון X-100), מצאנו כי טוהר ה-sEV המתקבל בשיטה זו היה גדול יותר. לפיכך, אנו משתמשים בשיטה זו כדי לבודד ולטהר sEV שמקורם ברקמת סרטן המעי הגס לצורך מחקר פרוטאומי.
כיום, המחקר על sEVs בסרטן הכבד מתמקד בעיקר בסרום, פלזמה, ואת supernatant של תרבית התא12,13,14. עם זאת, sEVs שמקורם ברקמת סרטן הכבד יכולים לשקף בצורה מדויקת יותר את הפתולוגיה הפיזיולוגית ואת המיקרו-סביבה הסובבת את סרטן הכבד ולמנוע ביעילות את הפירוק והזיהום של כלי רכב חשמליים אחרים15,16. עם השימוש אולטרה-צנטריפוגה דיפרנציאלית, שיטה זו יכולה להעשיר את התשואה ולקבל sEV באיכות גבוהה, מתן בסיס חשוב למחקר נוסף של סרטן הכבד. שיטה זו מאפשרת לרקמת סרטן הכבד להיות מופרדת על ידי הפרדה חדה ולהיות מנותקת על ידי collagenase D ו- DNase I. לאחר מכן, פסולת התא, שלפוחיות גדולות, גופים אפופטוטיים מוסרים עוד יותר על ידי סינון אולטרה צנטריפוגה דיפרנציאלית. לבסוף, הרכבים החשמליים מבודדים ומטוהרים למחקרים מאוחרים יותר.

<table><tbody><tr><td>0.22 ומיקרו; m ממברנה יחידת סינון</td><td>Millex</td><td>SLGPR33RB</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרק סטרילי</td><td>Hubei Xianming Medical Instrument Company</td><td>YL01329</td><td></td></tr><tr><td>2% אורניל אצטט</td><td>אלקטרונים מיקרוסקופיה Sciences</td><td>22400-2</td><td></td></tr><tr><td>4.7 מ"ל צינור צנטריפוגה</td><td>בקמן קולטר</td><td>361621</td><td></td></tr><tr><td>6 בארות צלחת חיתוך תאים</td><td>LABSELECT</td><td>11110</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל </td><td>טיאנג'ין Kangyiheng חברת מכירות מכשירים ניסיוניים</td><td>CF2100800</td><td></td></tr><tr><td>70 ומיקרו; m מסננת תאים</td><td>Biosharp</td><td>BS-70-XBS</td><td></td></tr><tr><td>100 מ"מ צלחת תרבית תאים</td><td>CELL TER</td><td>CS016-0128</td><td></td></tr><tr><td>600 ומיקרו; צינור צנטריפוגה L</td><td>Axygen</td><td>MCT060C</td><td></td></tr><tr><td>ערכת כימות חלבון BCA Thermo</td><td>Fisher</td><td>RJ240544</td><td></td></tr><tr><td>Beckman Coulter Optima-Max-TL</td><td>Beckman&nbsp;</td><td>A95761</td><td></td></tr><tr><td>BioRad Mini trans-blot</td><td>Bio-Rad</td><td>1703930</td><td></td></tr><tr><td>BioRad Mini-Protean</td><td>Bio-Rad</td><td>1645050</td><td></td></tr><tr><td>CD63 נוגדן</td><td>Abcam</td><td>ab134045</td><td></td></tr><tr><td>CD9 נוגדן</td><td>Abcam</td><td>ab263019</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה 5430R</td><td>Eppendorf</td><td>5428HQ527333</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת ניקוי</td><td>NanoFCM</td><td>C1801</td><td></td></tr><tr><td>קולגנז D</td><td>Roche</td><td>11088866001</td><td></td></tr><tr><td>רשת נחושת</td><td>Henan Zhongjingkeyi חברת טכנולוגיה</td><td>DJZCM-15-N1</td><td></td></tr><tr><td>תרמוסטט יבש</td><td>האנגג'ואו allsheng מכשירים חברה</td><td>AS-01030-00</td><td></td></tr><tr><td>FITC אנטי אנושי CD9 נוגדן</td><td>Elabscience</td><td>E-AB-F1086C</td><td></td></tr><tr><td>גליצין</td><td>Solarbio</td><td>G8200</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן אנטי עכברי משני בשילוב חזרת עיזים (HRP)&nbsp;</td><td>Proteintech</td><td>SA00001-1</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן משני נגד ארנב (HRP) עם חזרת עיזים&nbsp;</td><td>Proteintech</td><td>SA00001-2</td><td></td></tr><tr><td>מתנול</td><td>שנחאי Zhenxing כימיקלים חברה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ציטומטר זרימת ננו-חלקיקים</td><td>NanoFCM INC</td><td>FNAN30E20112368</td><td></td></tr><tr><td>מעכבי פוספטאז (PhosSTOP)</td> <td>Roche</td><td>4906845001</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח (PBS)</td> <td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>ממברנת פוליווינילידן דיפלואוריד</td><td>Solarbio</td><td>ISEQ00010</td><td></td></tr><tr><td>QC חרוזים</td><td>NanoFCM</td><td>QS2502</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 בסיסי בינוני</td><td>תעשיות ביולוגיות&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C11875500BT אזמל</td><td>גואנגג'ואו Kehua חברת מסחר</td><td>NN-0623-1</td><td></td></tr><tr><td>ננו-ספירות סיליקה</td><td>NanoFCM</td><td>S16M-Exo</td><td></td></tr><tr><td>העברת שייקר הסרת צבע TS-8</td><td>Kylin-Bell</td><td>E0018</td><td></td></tr><tr><td>שידור מיקרוסקופ אלקטרונים</td><td>תרמו מדעי</td><td>Talos L120C</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Solarbio</td><td>T8060</td><td></td></tr><tr><td>TSG101 נוגדן</td><td>Proteintech</td><td>28283-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>גואנגג'ואו Lige Technology Company</td><td>LG01-105-4X</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטת העשרה לבועיות חוץ-תאיות קטנות שמקורן ברקמת סרטן הכבד

An Enrichment Method for Small Extracellular Vesicles Derived from Liver Cancer Tissue

שלפוחיות חוץ-תאיות קטנות (sEVs) שמקורן ברקמה יכולות לשקף את המצב התפקודי של תאי המקור ואת מאפייני החלל הבין-תאי של הרקמה. העשרה יעילה של כלי רכב חשמליים אלה היא תנאי מוקדם חשוב לחקר תפקודם הביולוגי ומפתח לפיתוח טכניקות זיהוי קליניות וטכנולוגיית נשאות טיפולית. קשה לבודד sEV מרקמה מכיוון שהם בדרך כלל מזוהמים מאוד. מחקר זה מספק שיטה להעשרה מהירה של sEV באיכות גבוהה מרקמת סרטן הכבד. השיטה כוללת תהליך בן ארבעה שלבים: דגירה של אנזימי עיכול (collagenase D ו-DNase Ι) עם רקמות, סינון דרך מסננת תאים של 70 מיקרומטר, אולטרה-צנטריפוגה דיפרנציאלית וסינון דרך מסנן קרום של 0.22 מיקרומטר. בשל אופטימיזציה של שלב אולטרה-צנטריפוגה דיפרנציאלית והוספת שלב סינון, טוהר ה- sEV המתקבל בשיטה זו גבוה מזה שהושג על ידי אולטרה-צנטריפוגה דיפרנציאלית קלאסית. הוא מספק מתודולוגיה חשובה ונתונים תומכים לחקר sEV נגזר רקמות.

sEVs מרקמות סרטן כבד אנושיות מילאו תפקיד מכריע באבחון, בטיפול ובפרוגנוזה של חולים עם סרטן הכבד. שיטה זו השתמשה במכשירי מעבדה נפוצים כדי לבודד ולטהר sEV שמקורם ברקמות סרטן הכבד; זה עשוי לספק תמיכה מתודולוגית לחקר sEVs. איור 2 מדגים את התהליך הכללי של העשרת sEV מרקמות סרטן הכבד. sEVs בחללים הבין-תאיים של רקמות משוחררים במלואם באמצעות חיתוך רקמות והידרוליזה אנזימטית. יתר על כן, פתרון העיכול מסונן דרך מסננים 70 מיקרומטר כדי להסיר שברי רקמות גדולים. יתר על כן, שלבי צנטריפוגה דיפרנציאליים בוצעו (ב...

כאן אנו מתארים את העשרת שלפוחיות חוץ-תאיות קטנות שמקורן ברקמת סרטן הכבד באמצעות שיטת אולטרה-צנטריפוגה דיפרנציאלית אופטימלית.

Small extracellular vesicles (sEVs) derived from tissue can reflect the functional status of the source cells and the characteristics of the tissue's ...

שיטה זו מאפשרת בידוד של שלפוחיות חוץ-תאיות קטנות שמקורן בסרטן הכבד בעלות טוהר גבוה מזה המושג על ידי אולטרה-צנטריפוגה דיפרנציאלית קלאסית. טכנולוגיה זו היא פשוטה, נוחה וקלה לתפעול, אשר יכולה לספק תמיכה מתודולוגית לחקר שלפוחיות חוץ-תאיות קטנות. כדי להתחיל, להסיר את דגימת הרקמה מהמקפיא 80 מעלות צלזיוס.מניחים כ-400 מיליגרם של הרקמה לתוך צלחת תרבית תאים בקוטר 10 ס"מ על קופסת הקרח, וטוחנים דק את הרקמה בעזרת אזמל. מעבירים את הרקמה לצלחת בעלת שש בארות עם 1.5 מיליליטר של תמיסת העיכול. לאחר מכן, הניחו את הצלחת על שייקר שינוי הצבע של העברה, ודגרו על 37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות לדיסוציאציה מוחלטת של רקמת סרטן הכבד ושחרור השלפוחיות החוץ תאיות הקטנות, או sEVs.לאחר הדגירה, מניחים את צלחת שש בארות על ארגז הקרח. הוסף 80 מיקרוליטר של מעכב phosphatase ו 200 מיקרוליטר של פתרון מעכב פרוטאז מלא כדי לעצור את העיכול. לאחר מכן, העבירו את תמיסת העיכול למסננת תאים בגודל 70 מיקרומטר המונחת על צינור צנטריפוגה של שני מיליליטר, וסננו אותה לאט כדי להסיר פסולת רקמות גדולה.צנטריפוגה את התסנין ב 500 גרם במשך 10 דקות כדי להסיר את פסולת הרקמה הקטנה, ולאסוף את supernatant בצינור צנטריפוגה שני מיליליטר חדש. צנטריפוגה את supernatant ב 3, 000 גרם במשך 20 דקות כדי להסיר את פסולת התא. מעבירים בזהירות את הסופרנאטנט לצינור צנטריפוגה חדש עד שקצה הפיפטה עומד לגעת בפסולת הלבנה שבתחתית.לאחר חזרה על הצנטריפוגה של הנוזל שנותר, אגרו את הסופרנאטנט לתוך הצינור מבלי להפריע לפסולת. צנטריפוגה את supernatant שנאסף ב 12, 000 גרם במשך 20 דקות, ולהעביר 900 מיקרוליטר של supernatant לצינור אולטרה צנטריפוגה 4.7 מילימטר. חזור על הצנטריפוגה של הנוזל שנותר, ולאחר מכן לאסוף ולערבב את שני supernatants לתוך אותו צינור אולטרה צנטריפוגה.מלא את הצינור לחלוטין עם PBS. צנטריפוגה supernatant ב 100, 000 גרם במשך 60 דקות. לאחר השלכת הסופרנטנט, השהה מחדש את הגלולה על ידי מילוי צינור האולטרה-צנטריפוגה ב- PBS.לאחר חזרה על הצנטריפוגה ב 100, 000 גרם במשך 60 דקות, להשעות מחדש את הגלולה עם 50 מיקרוליטר של PBS. שאפו את מתלה ה-sEV באמצעות מזרק סטרילי של מיליליטר, וסננו אותו דרך מסנן קרום של 0.22 מיקרומטר לתוך צינור צנטריפוגה של 600 מיקרוליטר. אחסנו את התסנין בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס לניתוח נוסף.השתמש בציטומטר זרימת ננו-חלקיקים כדי לקבוע את התפלגות הגודל והטוהר של כלי הרכב החשמליים. בדוק את עוצמת הקול של תמיסת הניקוי. לאחר מכן, שימו לב להבדל בין רמות הנדן לבין נוזל הפסולת.לאחר 20 שניות של הפעלת ספק הכוח הראשי של המכשיר, הפעל את המחשב. המתן לצפצופים המציינים שהמכשיר מחובר כראוי כדי להפעיל את התוכנה. לחץ על Start Up כדי להפעיל את המצלמה, הלייזר ומשאבת האוויר.לאחר מכן, לחץ על זרימת מעטפת, ובחר Start Up.Place מים טהורים במיוחד על פלטפורמת הטעינה. לאחר ארבע דקות, לחץ על דגימה והגברה, ולאחר מכן בחר בטל טעינה בדגימה. לאחר 30 שניות, הנח את הצינור הריק על פלטפורמת הטעינה.לחץ על דוגמה, בחר הגברה, ולאחר מכן בחר בטל טעינה בדגימה. לאחר מכן, הניחו את הצינור המכיל את המים האולטרה-טהורים על פלטפורמת הטעינה. במקביל, לחץ על Sample and Boosting, ואחריו Sheath Flow ו-Purge.לחץ על הפעלה ידנית, והנח את צינור ריכוז החלקיקים על פלטפורמת הטעינה. לאחר מכן, לחץ על דגימה, בחר הגברה למשך דקה אחת, ובחר בו זמנית בקרת איכות ננו-ספירות סיליקה פלואורסצנטיות סטנדרטיות של 250 ננומטר במידע מדגם. בחר דגימה מדגימה, והפעל את הגלאי על ידי לחיצה על SPCM.לאחר מכן, לחץ על דגימה אוטומטית, והזן 1.0 לתוך ערכת דגימה כדי לתקן את הלחץ בקילופסקל אחד. לחץ על סרגל הכלים ובחר אות גדול. התאם את המיקום האופקי של הלייזר והגדר את הלייזר לשני מיקרומטרים.לאחר מכן, לחץ ברציפות על L ו- R כדי להבטיח שהאות חזק ואחיד. לחץ על Time to Record כדי לאסוף את הנתונים, אשר קופצים אוטומטית למאגר בסיום. לאחר מכן, שמור את הנתונים בקובץ Nfa ולחץ על מדגם כדי לבחור בטל פריקה.הניחו את צינור תמיסת הניקוי על פלטפורמת הטעינה. לחץ על דוגמה, בחר קידום, ולאחר דקה לחץ על דגימה ופריקה. השתמש במים טהורים במיוחד כדי להסיר את תמיסת הניקוי השיורית מקצה הנימים.הניחו את הצינור הסטנדרטי בגודל החלקיקים על פלטפורמת הטעינה, ולחצו על Sample Boosting למשך דקה אחת. בחר בקרת איכות 68 עד 155 S16M-Exo במידע לדוגמה, ולחץ על דגימה ולאחר מכן על דגימה. לאחר מכן, לחץ על סרגל הכלים ובחר אות קטן.לחץ על Time to Record כדי לאסוף את הנתונים, אשר קופצים אוטומטית למאגר בסיום. לאחר מכן, שמור את הנתונים בקובץ Nfa ולחץ על דוגמה כדי לבחור בטל טעינה. לאחר הסרת השאריות עם תמיסת הניקוי, הניחו את צינור PBS על פלטפורמת הטעינה, ובצעו את השלבים שהודגמו עבור הצינור הסטנדרטי בגודל חלקיקים.לאחר מכן, נקו את קצה הנימים כפי שהודגם קודם לכן, וטענו את דגימת ה-sEV כדי לנתח את הנתונים שתוארו קודם לכן עבור הצינור הסטנדרטי בגודל חלקיקים. כלי הרכב החשמליים המטוהרים נבדקו תחת מיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת, שחשף את נוכחותם של כלי רכב חשמליים עם מורפולוגיה בצורת גביע. בוצעה ציטומטריית זרימה עבור כלי רכב חשמליים.וגודל החלקיקים נע בין 40 ל -200 ננומטר, וגודל החלקיקים הממוצע היה 89 ננומטר. טוהר ה-sEV המועשר נמצא ב-68.32%הסמנים החלבוניים של sEVs כגון CD63, CD9 ו-TSG101 זוהו על ידי כתם מערבי. GM130 שימש כסמן הבקרה השלילי של sEVs, אשר נמצא בתאי רקמה אך לא ב- sEVs.חיוני לבצע את השלבים של עיכול אנזימטי, אולטרה-צנטריפוגה דיפרנציאלית וסינון ממברנות בזהירות מרבית כדי להבטיח את טוהר השלפוחיות החוץ תאיות הקטנות.

an-enrichment-method-for-small-extracellular-vesicles-derived-from

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

האקסוזומים המבודדים בפלזמה יכולים לשמש כדרך לא פולשנית וחוזרת על עצמה לגילוי ומעקב אחר הסמנים הביולוגיים לגילוי מוקדם והתקדמות המחלה. סרטון זה מתאר את הפרוטוקול להפרדת אקסוזומים מדגימות פלזמה של חולי סרטן ריאה מסוג תאים לא קטנים, אשר יכול לשמש למיצוי DNA וחלבונים.

בידוד אקסוזום: טכניקה להפרדת אקסוזומים מהפלזמה של חולי סרטן ריאות מסוג תאים לא קטנים

זהו פרוטוקול לבידוד ושלפוחיות רקמות (EVs) מהכבד. הפרוטוקול מתאר תהליך דו-שלבים המעורב בקולגן ומלווה באמצעות מעקב דיפרנציאלי לבידוד רקמת הכבד EVs.

בידוד של מסחטות ושלפוחיות רקמה מהכבד

Exosome הוא דור חדש של ספקיות שירות משלוח סמים. הקמנו פרוטוקול בידוד exosome עם תשואה גבוהה וטוהר למסירה siRNA. אנו גם אנקפסולציה siRNA שאינם ספציפיים שכותרתה fluorescently לתוך exosomes, חקר את ספיגת הסלולר של siRNA טעונים exosomes בתאים סרטניים.

הכנה של Exosomes siRNA מסירה תאים סרטניים

כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט כדי לבודד שלפוחית חוץ-תאית קטנה (EVs) של כל הרקמות, כולל דגימות המוח ואת הגידול. שיטה זו מציעה שיטה לשחזור כדי לחלץ EVs מרקמות מוצק עבור נוסף במורד הזרם ניתוחים.

מיצוי של שלפוחית חוץ-תאית מרקמות כל

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה לחילוץ שלפוחיות חוץ-תאיות מהדם ההיקפי ומרקמות מוצקות עם פרופיל עוקב של אנטיגנים על פני השטח ומטעני חלבונים.

בידוד וניתוח של שלפוחיות חוץ-תאיות ניתנות למעקב ומתפקדות מהפלזמה והרקמות המוצקות

פרוטוקול זה מדגים כיצד לבודד שלפוחיות חוץ-תאיות קטנות של תאי גזע מזנכימליים שמקורם בחבל הטבור האנושי (hUC-MSC-sEVs) באמצעות הגדרה פשוטה בקנה מידה של מעבדה. התפלגות הגודל, ריכוז החלבונים, סמני sEVs והמורפולוגיה של hUC-MSC-sEV מבודדים מאופיינים בניתוח מעקב אחר ננו-חלקיקים, בדיקת חלבון BCA, כתם מערבי ומיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת, בהתאמה.

שיטת סינון פשוטה לבידוד בועיות חוץ-תאיות קטנות מתאי גזע מזנכימליים אנושיים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את הצנטריפוגה הדיפרנציאלית לבידוד ואפיון כלי רכב חשמליים מייצגים (אקסוזומים ומיקרובוסיקלים) מתאי MSC אנושיים מתורבתים. יישומים נוספים של כלי רכב חשמליים אלה מוסברים גם במאמר זה.

בידוד, אפיון ויישום טיפולי של שלפוחיות חוץ-תאיות מתאי גזע מזנכימליים אנושיים בתרבית

הפרוטוקול המוצע כולל הנחיות כיצד להימנע מזיהום באנדוטוקסין במהלך בידוד שלפוחיות חוץ-תאיות מסופרנאטנטים של תרביות תאים, וכיצד להעריך אותן כראוי.

בידוד של תכולת אנדוטוקסין נמוכה שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן בשורות תאים סרטניים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבידוד אקסוזומים שמקורם בטחול עכברים באמצעות שילוב של עיכול עם קולגן מסוג I ואולטרה-צנטריפוגה.

בידוד ואפיון אקסוזומים שמקורם ברקמת הטחול של העכבר

פרוטוקול זה מתאר את בידוד שלפוחיות חוץ-תאיות קטנות משרירי השלד של העכברים וממח עצם באמצעות עיכול אנזימטי וכרומטוגרפיה של הרחקת גודל, ומאפשר שחזור שניתן לשחזור של שברים מועשרים בוסיקולות מרקמות מורכבות מבנית ובעלות תפוקה נמוכה לניתוח מולקולרי במורד הזרם.

בידוד וזיקולות חוץ-תאיות קטנות משריר השלד של עכברו וממח עצם באמצעות כרומטוגרפיה של הוצאת גודל

למד שיטת הפרדה אופטימלית לבידוד בועיות חוץ-תאיות קטנות מרקמת סרטן הכבד. השיטה משפרת את טוהר הבידוד ומספקת בסיס מתודולוגי למחקרים עתידיים בתחום הביולוגיה הסרטנית.

שיטת העשרה לבועיות חוץ-תאיות קטנות שמקורן ברקמת סרטן הכבד

גלה סרטונים נוספים