Name: טכניקה כירורגית לכריתת גנגליון צוואר הרחם מעולה במודל מורין (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-02T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: למד כיצד לבצע כריתת גנגליון צווארי עליון בעכברים לחקר מערכת העצבים הסימפטטית והשפעתה על מחלות כמו סרטן. שיטה זו מאפשרת השמדה אדרנרגית חד-צדדית מלאה עם תופעות לוואי מינימליות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Q. W. נתמך על ידי NIH T32CA009685. R. J. W. נתמך על ידי NIH R01CA219534. מתקני הליבה של מרכז הסרטן ממוריאל סלואן קטרינג נתמכו על ידי NIH P30CA008748.

ההליכים המתוארים כאן אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים במרכז הסרטן ממוריאל סלואן קטרינג. עכברי NSG זכרים ונקבות בני שמונה שבועות שימשו כאן. בעלי החיים התקבלו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים). המכשירים מעוקרים, משטח העבודה הכירורגי עובר חיטוי, משטח העור של בעל החיים עובר חיטוי, והמנתח לובש כפפות סטריליות לאורך כל ההליך.
1. הכנת העכברים ומערך טרום ניתוחי
<ol><li>יום לפני הניתוח, יש להרדים את העכבר עם איזופלורן 2% בתא אינדוקציה (3.75 אינץ' רוחב x 9 אינץ' עומק x 3.75 גובה, ראה טבלת חומרים). הערה: מישור כירורגי של הרדמה מושג בדרך כלל תוך 3-5 דקות, בהתאם לחיה הבודדת. להעריך את הלימות ההרדמה על ידי צביטת בוהן, ולהגדיל את אחוז isoflurane לפי הצורך.<ol><li>יש לגלח את החלק הגחוני של הצוואר או להשתמש בחומר כימי להסרת שיער בהתאם להוראות היצרן (ראה טבלת חומרים).</li>
	</ol></li>
	<li>ביום הניתוח, להרדים את העכבר עם 2% isoflurane בתא אינדוקציה. להעריך את הלימות ההרדמה על ידי צביטת בוהן, ולהגדיל את אחוז isoflurane לפי הצורך.</li>
	<li>יש לתת 2 מ"ג/ק"ג של meloxicam תת עורית לשיכוך כאבים מערכתי מונע. יש למרוח משחת עיניים מקומית (ראו טבלת חומרים) למניעת פגיעות עיניים ויובש בהרדמה.</li>
	<li>הניחו את העכבר תחת מיקרוסקופ מנתח בצד הגבי שלו וספקו תמיכה תרמית. יש לשמור על הרדמה אינהלציונית עם איזופלורן 2%-2.5% באמצעות וופורייזר מדויק וחרוט אף. הדקו בעדינות את שתי הגפיים הקדמיות בעזרת סרט היפואלרגני (ראו טבלת חומרים).</li>
	<li>נקו את החלק הגחוני המגולח של הצוואר עם פובידון-יוד, ולאחר מכן נגבו עם 70% אלכוהול. חזור על תהליך זה פעמיים נוספות. ודא כי אתר הניתוח נקי מכל שיער רופף. הערה: ניתן להשתמש גם בזוג מלקחיים קצרים ומעוקלים. הקפידו להשתמש בזוג מלקחיים עדינים או אופתלמיים כדי לעבוד כראוי בחלל סגור זה. ניתן לכלול מערך טרום ניתוחי נוסף בהתאם להנחיות המוסדיות.</li>
</ol>2. דיסקציה
<ol><li>בצע חתך עור בקו האמצע של 1.5 ס"מ באספקט הגחוני של הצוואר באמצעות מספריים קטנים מכ-2 מ"מ מתחת לסנטר ועד 2 מ"מ מעל החריץ החזה.</li>
	<li>משכו את קצוות העור לרוחב בעזרת מלקחיים כדי לחשוף את הפאשיה הבסיסית ואת בלוטות הרוק התת-לסתות. הפרידו את העור מהפאשיה שמתחתיו על ידי החדרת מספריים מחודדים מתחת לעור בכל צד והתפשטות. משוך מטה את הבלוטות submandibular caudally עם מלקחיים כדי לחשוף את השרירים הבסיסיים.</li>
	<li>אתרו את צומת הבטן האחורית של שריר הקיבה ושריר האומוהיואיד (איור 1A, עיגול שחור). הווריד הצווארי הקדמי נראה רץ לאורך ולרוחב לשריר האומוהיואיד. הערה: שריר האומוהיואיד מכסה את קנה הנשימה לאורך, בעוד שהשריר הדיגסטרי נמצא באופן רוחבי באספקט הגולגולתי של קנה הנשימה (איור 1C).<ol><li>הכנס את קצה המלקחיים הזוויתיים 45° בצומת זה, לרוחב לווריד הצוואר הקדמי, כדי לחדור ולהפיץ פתח בפאשיה הצווארית העמוקה שמעליו.</li>
	</ol></li>
	<li>השאר חלון זה שנוצר בשלב 2.3.1 פתוח באמצעות מלקחיים זוויתיים של 45°. הרחב פתח זה על ידי ביצוע תמרוני התפשטות עם זוג מלקחיים מעוקלים ביד השנייה.</li>
</ol>3. זיהוי וכריתה של הגנגליון
<ol><li>אתר את גנגליון צוואר הרחם העליון (SCG) על הקיר הצידי של החלל שנחשף. הוא מופיע כרקמה עגולה ופנינית. הערה: אם SCG אינו מזוהה, הרקמות בחלל זה צריכות להיבדק באופן רוחבי וטוב יותר. SCG עשוי להיות מבולבל בקלות עם שומן, אשר קיים לעתים קרובות באזור זה. שומן יש גוון צהוב מעט, בעוד לעומת זאת, SCG נראה לבן פנינה.</li>
	<li>תוך שמירה על הפתח עם מלקחיים ביד השנייה, תפסו בעדינות את ה-SCG עם מלקחיים, ומשכו אותו החוצה מהפתח כדי להביא אותו לראייה טובה יותר.</li>
	<li>ברגע שה-SCG נמצא בתצוגה, תפסו את הבסיס הצידי של ה-SCG, שם הוא עדיין מחובר לרקמות הסובבות אותו. בעזרת היד השנייה, לאט ובעדינות למשוך את SCG לכיוון הגחון והקאודלי.<ol><li>משוך את SCG מספר פעמים כדי בהדרגה לפלוט את הגנגליון לאט לאט. שמור על שלמות הגנגליון במהלך תמרון זה כדי להבטיח שלא יישארו שאריות גנגליון מאחור. הערה: משוך את הגנגליון בעדינות, מכיוון שדימום עלול להתרחש במהלך שלב זה. אם מתרחש דימום קל, השתמש תאית מחומצנת מתחדשת או רצועה קטנה של גזה סטרילית כדי להחזיק לחץ על הפתח במשך 30 שניות עד 1 דקה. לאחר מכן, לאט להרים את הגזה ולהעריך מחדש. חזור על התהליך של החזקת לחץ על הפתח לפי הצורך עד שהדימום ייפסק.</li>
	</ol></li>
	<li>שחררו לאט לאט את המלקחיים האחרים המחזיקים את בסיס הגנגליון. בדוק דימום על ידי חיפוש איגום דם. הערה: נוטף קל בשלב זה הוא נורמלי. עקוב וודא שאין דימום מתמשך או משמעותי לפני סגירה וסיום ההליך. במקרה כזה, החזק את הלחץ מעל הפתח, כמתואר בשלב 3.3.1.</li>
	<li>החזירו את בלוטות הרוק למיקומן האנטומי הרגיל. יש לקרב ולסגור את העור באמצעות תפרים פשוטים מניילון קטועים של 5-0 (ראו טבלת חומרים).</li>
	<li>הניחו את העכבר בכלוב נקי בפני עצמו כדי לאפשר החלמה מלאה מההרדמה. הערה: ייתכן שיחלפו 5-15 דקות עד שהעכבר יתעורר באופן מלא מההרדמה. אל תשאיר את העכבר ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה עצם החזה. אין להניח את העכבר בכלוב עם עכברים אחרים עד שהוא מחלים לחלוטין. להעריך את העכבר עבור התאוששות לאחר הניתוח לפחות פעם אחת כל 24 שעות במשך 72 שעות.</li>
</ol>

<ol><li>Magnon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomic+nerve+development+contributes+to+prostate+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autonomic nerve development contributes to prostate cancer progression.</a> Science. 341 (6142), 1236361(2013).</li>
<li>Zhao, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Denervation+suppresses+gastric+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Denervation suppresses gastric tumorigenesis.</a> Science Translational Medicine. 6 (250), 115(2014).</li>
<li>Zahalka, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenergic+nerves+activate+an+angio-metabolic+switch+in+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Adrenergic nerves activate an angio-metabolic switch in prostate cancer.</a> Science. 358 (6361), 321-326 (2017).</li>
<li>Amit, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+p53+drives+neuron+reprogramming+in+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Loss of p53 drives neuron reprogramming in head and neck cancer.</a> Nature. 578 (7795), 449-454 (2020).</li>
<li>Renz, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+signaling+via+muscarinic+receptors+directly+and+indirectly+suppresses+pancreatic+tumorigenesis+and+cancer+stemness%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Cholinergic signaling via muscarinic receptors directly and indirectly suppresses pancreatic tumorigenesis and cancer stemness.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1458-1473 (2018).</li>
<li>Lucido, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innervation+of+cervical+carcinoma+is+mediated+by+cancer-derived+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecologic+Oncology%22%5BJournal%5D)">Innervation of cervical carcinoma is mediated by cancer-derived exosomes.</a> Gynecologic Oncology. 154 (1), 228-235 (2019).</li>
<li>Peterson, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+cell+carcinoma+preferentially+arises+from+stem+cells+within+hair+follicle+and+mechanosensory+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Basal cell carcinoma preferentially arises from stem cells within hair follicle and mechanosensory niches.</a> Cell Stem Cell. 16 (4), 400-412 (2015).</li>
<li>Maronde, E., Stehle, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mammalian+pineal+gland%3A+Known+facts%2C+unknown+facets%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">The mammalian pineal gland: Known facts, unknown facets.</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 18 (4), 142-149 (2007).</li>
<li>Yamazaki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+of+circadian+organization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Rhythms%22%5BJournal%5D)">Ontogeny of circadian organization in the rat.</a> Journal of Biological Rhythms. 24 (1), 55-63 (2009).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((S100%2B+cells%3A+A+new+neuro-immune+cross-talkers+in+lymph+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">S100+ cells: A new neuro-immune cross-talkers in lymph organs.</a> Scientific Reports. 3 (1), 1114(2013).</li>
<li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+protects+the+retina+from+experimental+nonexudative+age-related+macular+degeneration+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pineal+Research%22%5BJournal%5D)">Melatonin protects the retina from experimental nonexudative age-related macular degeneration in mice.</a> Journal of Pineal Research. 68 (4), 12643(2020).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+superior+cervical+ganglionectomy+attenuates+the+progression+of+%CE%B2-aminopropionitrile-induced+aortic+dissection+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Bilateral superior cervical ganglionectomy attenuates the progression of β-aminopropionitrile-induced aortic dissection in rats.</a> Life Sciences. 193, 200-206 (2018).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+superior+cervical+sympathetic+ganglion+in+ischemia+reperfusion-induced+acute+kidney+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">The role of the superior cervical sympathetic ganglion in ischemia reperfusion-induced acute kidney injury in rats.</a> Frontiers in Medicine. 9, 792000(2022).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+cervical+ganglionectomy+alters+gut+microbiota+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Superior cervical ganglionectomy alters gut microbiota in rats.</a> American Journal of Translational Research. 14 (3), 2037-2050 (2022).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Adrenergic+signaling+induces+Notch-mediated+salivary+gland+progenitor+cell+control%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">β-Adrenergic signaling induces Notch-mediated salivary gland progenitor cell control.</a> Stem Cell Reports. 16 (11), 2813-2824 (2021).</li>
<li>Boyd, A., Aragon, I. V., Abou Saleh, L., Southers, D., Richter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cAMP-phosphodiesterase+4+%28PDE4%29+controls+%CE%B2-adrenoceptor-+and+CFTR-dependent+saliva+secretion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">The cAMP-phosphodiesterase 4 (PDE4) controls β-adrenoceptor- and CFTR-dependent saliva secretion in mice.</a> Biochemical Journal. 478 (10), 1891-1906 (2021).</li>
<li>Smith, B., Butler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+long-term+propranolol+on+the+salivary+glands+and+intestinal+serosa+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">The effects of long-term propranolol on the salivary glands and intestinal serosa of the mouse.</a> The Journal of Pathology. 124 (4), 185-187 (1978).</li>
<li>Sucharov, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Adrenergic+receptor+antagonism+in+mice%3A+A+model+for+pediatric+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">β-Adrenergic receptor antagonism in mice: A model for pediatric heart disease.</a> Journal of Applied Physiology. 115 (7), 979-987 (2013).</li>
<li>Ding, C., Walcott, B., Keyser, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+alpha1-+and+beta1-adrenergic+modulation+of+lacrimal+gland+function+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The alpha1- and beta1-adrenergic modulation of lacrimal gland function in the mouse.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 48 (4), 1504-1510 (2007).</li>
<li>Grisanti, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prior+%CE%B2-blocker+treatment+decreases+leukocyte+responsiveness+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Prior β-blocker treatment decreases leukocyte responsiveness to injury.</a> JCI Insight. 5 (9), 99485(2019).</li>
<li>Alito, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomic+nervous+system+regulation+of+murine+immune+responses+as+assessed+by+local+surgical+sympathetic+and+parasympathetic+denervation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica%2C+Pharmacologica+et+Therapeutica+Latinoamericana%22%5BJournal%5D)">Autonomic nervous system regulation of murine immune responses as assessed by local surgical sympathetic and parasympathetic denervation.</a> Acta Physiologica, Pharmacologica et Therapeutica Latinoamericana. 37 (3), 305-319 (1987).</li>
<li>Yun, H., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+role+for+sympathetic+nerves+in+herpes+stromal+keratitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">A central role for sympathetic nerves in herpes stromal keratitis in mice.</a> Ophthalmology & Visual Science. 57 (4), 1749-1756 (2016).</li>
<li>Haug, S. R., Heyeraas, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+sympathectomy+on+experimentally+induced+pulpal+inflammation+and+periapical+lesions+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of sympathectomy on experimentally induced pulpal inflammation and periapical lesions in rats.</a> Neuroscience. 120 (3), 827-836 (2003).</li>
<li>Savastano, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardized+surgical+technique+for+rat+superior+cervical+ganglionectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A standardized surgical technique for rat superior cervical ganglionectomy.</a> Journal of Neuroscience Methods. 192 (1), 22-33 (2010).</li>
<li>Garcia, J. B., Romeo, H. E., Basabe, J. C., Cardinali, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+superior+cervical+ganglionectomy+on+insulin+release+by+murine+pancreas+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Autonomic+Nervous+System%22%5BJournal%5D)">Effect of superior cervical ganglionectomy on insulin release by murine pancreas slices.</a> Journal of the Autonomic Nervous System. 22 (2), 159-165 (1988).</li>
<li>Ziegler, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+sympathetic+denervation+attenuates+myocardial+inflammation+and+improves+cardiac+function+after+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Local sympathetic denervation attenuates myocardial inflammation and improves cardiac function after myocardial infarction in mice.</a> Cardiovascular Research. 114 (2), 291-299 (2017).</li>
<li>Getsy, P. M., Coffee, G. A., Hsieh, Y. H., Lewis, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+superior+cervical+ganglia+modulate+ventilatory+responses+to+hypoxia+independently+of+preganglionic+drive+from+the+cervical+sympathetic+chain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">The superior cervical ganglia modulate ventilatory responses to hypoxia independently of preganglionic drive from the cervical sympathetic chain.</a> Journal of Applied Physiology. 131 (2), 836-857 (2021).</li>
<li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+cervical+gangliectomy+induces+non-exudative+age-related+macular+degeneration+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Superior cervical gangliectomy induces non-exudative age-related macular degeneration in mice.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (2), 031641(2018).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperactivation+of+sympathetic+nerves+drives+depletion+of+melanocyte+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hyperactivation of sympathetic nerves drives depletion of melanocyte stem cells.</a> Nature. 577 (7792), 676-681 (2020).</li>
<li>Pirzgalska, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sympathetic+neuron-associated+macrophages+contribute+to+obesity+by+importing+and+metabolizing+norepinephrine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Sympathetic neuron-associated macrophages contribute to obesity by importing and metabolizing norepinephrine.</a> Nature Medicine. 23 (11), 1309-1318 (2017).</li>
<li>Kajimura, D., Paone, R., Mann, J. J., Karsenty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxo1+regulates+Dbh+expression+and+the+activity+of+the+sympathetic+nervous+system+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Foxo1 regulates Dbh expression and the activity of the sympathetic nervous system in vivo.</a> Molecular Metabolism. 3 (7), 770-777 (2014).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

פרוטוקול זה מתאר מודל עכבר לאבלציה חד צדדית כירורגית של קלט SCG. טכניקה זו מאפשרת ללמוד את ההשפעות של עצבוב אדרנרגי בסביבות שונות. בנוסף, ניתן לגדל את הגנגליון הסימפתטי המנותח גם בתרבית מטריג'ל תלת ממדית לניסויים חוץ גופיים 30.
מחקרים הכוללים SCGx בוצעו בעיקר בחולדות, מכיוון שהאנטומיה הגדולה שלהן מאפשרת הדמיה אנטומית ודיסקציה קלות יותר. בעוד SCGx בעכברים תואר בעבר על ידי Ziegler et al.26 ודווח בקצרה במחקרים אחרים21,22,27,28, הטכניקה התבס...

מחקרים רבים דיווחו כי העצבים במיקרו-סביבה של הגידול ממלאים תפקיד פעיל בתמיכה בהתקדמות הגידול. אבלציה של עצבים סימפתטיים אדרנרגיים הוכחה כפוגעת בהתפתחות הגידול ובהתפשטותו בסרטן הערמונית והקיבה in vivo 1,2,3, בעוד שהחסימה הפרמקולוגית של קולטנים אדרנרגיים מעכבת את צמיחת הגידול בסרטן הראש והצוואר4. מעורבות עצבית סימפתטית תוארה גם בהתקדמות קרצינומה של תאי הלבלב, צוואר הרחם ותאי הבסיס 5,6,7.
בתוך מערכת העצבים הסימפתטית, גנגליון צוואר הרחם העליון (SCG) הוא הגנגליון היחיד של החדק הסימפתטי שמעצבב את הראש. ה- SCG מווסת תפקודים פיזיולוגיים שונים, כגון הפרשת רוק ושעון ביולוגי, ומעצבב ישירות את בלוטות הלימפה הצוואריות 8,9,10. ה- SCG היה מעורב גם בתהליכים פתולוגיים כגון ניוון מקולרי11 והתקדמות דיסקציה של אבי העורקים12. בנוסף, כריתה של SCG דווחה כמחמירה פגיעה חריפה בכליות הנגרמת על ידי איסכמיה13 וגם משנה את מיקרוביוטת המעי בחולדות14.
אבלציה מלאה של SCG במודל עכבר תייצג טכניקה ניסיונית רבת ערך כדי לאפשר סרטן ומחקר מערכת העצבים האוטונומית. בעוד שמחקרים רבים השתמשו בחסימת קולטן אדרנרגי פרמקולוגי כאבלציה אדרנרגית 15,16,17,18,19,20, כריתה כירורגית מאפשרת אבלציה אדרנרגית מלאה וחד צדדית תוך הימנעות מהצורך בהתערבות פרמקולוגית חוזרת ותופעות הלוואי הנלוות 21,22,23.
כריתה כירורגית של SCG תוארה בחולדות24, ורוב הדיווחים שחקרו את ההשפעה של כריתת גנגליון צווארי עליון (SCGx) השתמשו במודל החולדות. בהשוואה למודל החולדות, SCGx מאתגר יותר מבחינה טכנית בעכברים בשל גודלו הקטן של ה-SCG. עם זאת, עכברים קלים יחסית לטיפול, חסכוניים יותר ונוחים יותר למניפולציה גנטית. גרסיה ועמיתיו היו בין הראשונים לדווח על SCGx בעכברים, ונמצא שהוא משפיע על שחרור אינסולין25. לאחרונה, Ziegler et al. תיארו SCGx בעכברים בהתבסס על הטכניקה שפורסמה שתוארה עבור חולדות24,26. מאמר זה ומאמרים אחרים מתארים שיטה שבה עורק התרדמה המשותף (CCA) מזוהה ומנותח לראשונה, ולאחר מכן ה-SCG מוסר מהפיצול של CCA21,22,27,28. במאמר זה, טכניקה פחות פולשנית ובטוחה יותר מתוארת בעכברים המונעת את הדיסקציה של CCA, ובכך ממזערת את הסיבוך החמור ביותר של הליך זה – דימום מפגיעה ב- CCA.

<table><tbody><tr><td>נוגדן נגד טירוזין הידרוקסילאז</td><td>EMD Millipore</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr><td>דמעות מלאכותיות חומר סיכה משחת עיניים</td><td>Akorn</td><td>59399-162-35</td><td></td></tr><tr><td>Curity 2 x 2 אינץ' ספוג גזה 8 שכבות,</td><td>סטרילי Covidien</td><td>1806</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט Derf</td><td>תומאס סיינטיפיק</td><td>1177K00</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td></td><td></td><td></td> ניתוח</tr><tr><td>Dumont #5/45 מלקחיים</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7b מלקחיים</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11270-20</td><td></td></tr><tr><td>ETHILON תפר ניילון</td><td>Ethicon</td><td>698H</td><td></td></tr><tr><td>מספריים עדינים - ToughCut</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>סרט כירורגי היפואלרגני</td><td>3M אינדוקציה 70200419342</td><td></td><td></td>בלנדר</tr><tr><td> תא, 2 ליטר</td><td>VetEquip</td><td>941444</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>בקסטר</td><td>1001936060</td><td></td></tr><tr><td>כנסיית נאיר</td><td>& דווייט ושות', בע"מ</td><td>40002957</td><td>חומר להסרת שיער כימי</td></tr><tr><td>NORADRENALINE RESEARCH ELISA</td><td>Labor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics)</td><td>BA E-5200</td><td></td></tr><tr><td>NSG</td><td>Mouse Jackson Laboratory</td><td>JAX:005557</td><td></td></tr><tr><td>Povidone-Iodine Swabstick</td><td>PDI</td><td>S41350</td><td></td></tr><tr><td>Webcol Alcohol Preps</td><td>Covidien</td><td>5110</td><td></td></tr></tbody></table>

טכניקה כירורגית לכריתת גנגליון צוואר הרחם מעולה במודל מורין

Surgical Technique for Superior Cervical Ganglionectomy in a Murine Model

עדויות הולכות וגדלות מצביעות על כך שמערכת העצבים הסימפתטית ממלאת תפקיד חשוב בהתקדמות הסרטן. עצבוב אדרנרגי מווסת את הפרשת בלוטת הרוק, שעון ביולוגי, ניוון מקולרי, תפקוד מערכת החיסון ופיזיולוגיה של הלב. Murine surgical sympathectomy היא שיטה לחקר ההשפעות של עצבוב אדרנרגי על ידי מתן אפשרות אבלציה אדרנרגית מלאה, חד צדדית תוך הימנעות מהצורך בהתערבות פרמקולוגית חוזרת ונשנית ותופעות הלוואי הנלוות. עם זאת, כריתת סימפטקטומיה כירורגית בעכברים מאתגרת מבחינה טכנית בגלל הגודל הקטן של גנגליון צוואר הרחם העליון. מחקר זה מתאר טכניקה כירורגית לזיהוי אמין וכריתה של גנגליון צוואר הרחם העליון כדי לעבד את מערכת העצבים הסימפתטית. הזיהוי וההסרה המוצלחים של הגנגליון מאומתים על ידי הדמיה של הגרעינים הסימפתטיים הפלואורסצנטיים באמצעות עכבר מהונדס, זיהוי תסמונת הורנר לאחר כריתה, צביעה לסמנים אדרנרגיים בגרעינים המנותחים, וצפייה באימונופלואורסנציה אדרנרגית מופחתת באיברי המטרה לאחר כריתת סימפתקטיה. מודל זה מאפשר מחקרים עתידיים על התקדמות הסרטן, כמו גם תהליכים פיזיולוגיים אחרים המווסתים על ידי מערכת העצבים הסימפתטית.

פרוטוקול זה מתאר את ההסרה הכירורגית של SCG במודל עכבר. איור 2 מדגים את ציוני הדרך האנטומיים, כולל CCA, וריד הצוואר הקדמי וה-SCG. בדיסקציה (איור 2A) ניתן לראות את הווריד הצווארי הקדמי הימני זורם לצד הגבול הצידי של קנה הנשימה. מכיוון שהוא ממוקם עמוק יותר מהווריד הצווארי הקדמי, ה-CCA השמאלי והפילוג שלו לעורק התרדמה הפנימי (ICA) ועורק התרדמה החיצוני (ECA) נראים רק קלושים לרוחב הווריד. כאשר בוחנים זאת ב-NSG. עכבר מהונדס B6-P0TdTomato (עכבר P0-Cre TdTomato שבו תאי Sch...

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל עכברי של אבלציה של עצבוב אדרנרגי על ידי זיהוי וכריתה של גנגליון צוואר הרחם העליון.

Growing evidence suggests that the sympathetic nervous system plays an important role in cancer progression. Adrenergic innervation regulates salivary ...

מערכת העצבים הסימפתטית ממלאת תפקיד חשוב בהתקדמות סרטן ומחלות אחרות. כריתת סימפטקטומיה כירורגית היא שיטה חשובה לחקר תהליכים אלה על ידי גרימת אבלציה אדרנרגית חד צדדית מלאה. טכניקה זו מונעת את תופעות הלוואי הקשורות עיכוב תרופתי של מערכת העצבים הסימפתטית.בנוסף, הוא פחות פולשני מהשיטות שתוארו קודם לכן מכיוון שהוא מונע דיסקציה של עורק התרדמה. בעת ביצוע טכניקה זו, ייתכן שיהיה קשה להיכנס לחלל הנכון שבו מתגורר הגנגליון ולהבדיל אותו מן השומן. לכן זיהוי ציון הדרך והפרקטיקה הוא חיוני.האנטומיה נראית מעט שונה כאשר היא בתנועה ולא מנותחת, ולכן הדגמה חזותית מספקת מדריך טוב יותר כיצד לזהות את ציון הדרך האנטומי שהוא המפתח לטכניקה זו. התחל על ידי מריחת משחה אופתלמית מקומית על העכבר המרדים כדי למנוע פציעות עיניים ויובש. הניחו את העכבר תחת מיקרוסקופ מנתח בצדו הגבי ושמרו על הרדמה אינהלציה באמצעות וופורייזר מדויק וחרוט אף.אבטח את שתי הגפיים הקדמיות עם סרט היפואלרגני. נקו את החלק הגחוני המגולח של הצוואר עם יוד פובידון ולאחר מכן נגבו עם 70% אלכוהול. לאחר חזרה על תהליך הניקוי פעמיים נוספות, הניחו וילון סטרילי מעל אתר הניתוח.לאחר מכן השתמשו במספריים קטנים ובצעו חתך עור בקו האמצע בקוטר 1.5 ס"מ באספקט הגחוני של הצוואר מכשני מילימטרים מתחת לסנטר ועד שני מילימטרים מעל החריץ החזה. הפרידו את העור מהפאשיה שמתחתיו על ידי החדרת מספריים מחודדים מתחת לעור בכל צד והתפשטות. לאחר מכן משכו את קצוות העור לרוחב עם מלקחיים כדי לחשוף את הפאשיה הבסיסית ואת בלוטות הרוק התת-לסתות.משוך את הבלוטות submandibular caudally עם מלקחיים כדי לחשוף את השרירים הבסיסיים. לאחר מכן, אתר את צומת הבטן האחורית של שריר digastric ושריר omohyoid . יש להכניס קצה של מלקחיים זוויתיים בזווית של 45 מעלות בצומת זה לרוחב לווריד הצוואר הקדמי כדי לחדור ולפזר פתח בפאשיה הצווארית העמוקה שמעליה.השאירו חלון זה פתוח עם המלקחיים הזוויתיים של 45 מעלות והרחיבו פתח זה רחב יותר על ידי ביצוע תמרוני התפשטות עם זוג מלקחיים מעוקלים ביד השנייה. אתר את גנגליון צוואר הרחם העליון או SCG על הקיר הצידי של החלל שנחשף. תוך שמירה על הפתח עם מלקחיים ביד השנייה, אחזו בעדינות את ה-SCG במלקחיים ומשכו אותו החוצה מהפתח כדי להביא אותו לראייה טובה יותר.ברגע שה-SCG נמצא בתצוגה, תפסו את הבסיס הצידי של ה-SCG היכן שהוא עדיין מחובר לרקמות הסובבות אותו. באמצעות היד השנייה, לאט ובעדינות למשוך את SCG בכיוון הגחון והקאודלי מספר פעמים כדי בהדרגה לפזר את הגנגליון לאט לאט. שמור על שלמות הגנגליון במהלך תמרון זה כדי להבטיח שלא יישארו שאריות גנגליון מאחור.שחררו לאט את בסיס הגנגליון ובדקו דימום על ידי חיפוש איגום דם. לאחר שתסיים, העבר את בלוטות הרוק חזרה למיקומן האנטומי הרגיל. מקורב וסוגר את העור באמצעות תפרים פשוטים קטועים של 5-0 ניילון.במהלך הדיסקציה, הווריד הצווארי הקדמי הימני עבר לצד הגבול הצידי של קנה הנשימה. כאשר עכבר טרנסגני P0 tdTomato עם נוירונים פלואורסצנטיים אדומים נבדק תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, נצפה עצב הואגוס פלואורסצנטי זורם לרוחב לעורק התרדמה המשותף וה- SCG הפלואורסצנטי נצפה בביפורקציה של עורק התרדמה המשותף לרוחב לווריד הצוואר הקדמי. ה-SCG המנותח בעכבר מהונדס אושר על ידי הפלואורסצנטיות האדומה שלו בהשוואה לבקרת SCG שאינה פלואורסצנטית.הצביעה האימונופלואורסצנטית אישרה טירוזין הידרוקסילאז, סמן לעצבים אדרנרגיים. לאחר כריתת גנגליון צוואר הרחם העליון, פטוזיס, כלומר צניחת העפעף, נצפתה, וזה סימן לתסמונת הורנר. צביעה אימונופלואורסצנטית לטירוזין הידרוקסילאז בבלוטת הרוק התת-לסתית הימנית לאחר כריתת גנגליון צוואר עליון ימני אישרה את האבלציה המוצלחת של האיתות האדרנרגי עם צביעת עצב טירוזין הידרוקסילאז נעדרת.לעומת זאת, בלוטת הבקרה התת-לסתית השמאלית שמרה על הקלט האדרנרגי שלה ושלמה צביעת עצב טירוזין הידרוקסילאז שאושרה גם על ידי כימות. כימות ELISA של נוראפינפרין בבלוטת הרוק אישר ירידה משמעותית בביטוי נוראפינפרין בבלוטה התת לסתית בצד של כריתת גנגליון צוואר עליון בניגוד לצד ניתוח דמה בקרה. היו סבלניים ועדינים בעת הסרת ה-SCG.לאט לאט בצורה חתיכה. אחרת, עורק התרדמה המחובר ל- SCG עלול להיפגע בקלות וכתוצאה מכך לדימום.

surgical-technique-for-superior-cervical-ganglionectomy-murine

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

זהו פרוטוקול המתאר כיצד לבודד תרבות נוירונים אוהד העיקרי של הגנגליונים צוואר הרחם מעולה (SCG) של גורי חולדה היילוד.

פרוטוקול נוירונים culturing הסימפתטית מן הגרעינים עכברוש צוואר הרחם מעולה (SCG)

כדי לעקוב אחר ההתקדמות של תגובה חיסונית לאורך זמן בתוך העכבר זאת, בלוטות הלימפה ניתן להסיר ברצף על ידי ניתוח. כאן, אנו מתארים כיצד טכניקה זו ניתן לבצע.

צומת Murine שטחית לימפה ניתוח

בסרטון זה אנו מתארים את ההליך להעברת תאים סרטניים שמקורם בבני אדם לתוך עצם העצם במוחו של עכבר. מודל העכבר האורתוטופי יכול לשמש לחקר התפשטות גרורתית של סרטן לקרומי המוח הגולגולתיים.

הזרקת Cisterna Magna כירורגית: שיטה למתן תאי גידול ישירות למערכת העצבים המרכזית של מודל Murine

אנו מציגים פרוטוקול כירורגי המפרט כיצד לבצע אקסוטומיה של חתך או ריסוק על עצב הפנים בעכבר. ניתן להשתמש באקסוטומיה של עצב הפנים כדי לחקור את התגובה הפיזיולוגית לפגיעה עצבית ולבדוק טכניקות טיפוליות.

Axotomy פנים עצב של עכברים: דגם לחקר תגובת Motoneuron לפגיעה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של הטרוסקסואלים השתלת אבי העורקים בעכברים באמצעות שימוש בטכניקת השרוול שאינו תפר במודל מורטין הצווארי. מודל זה יכול לשמש כדי ללמוד את הפתולוגיה הבסיסית של השתלת האלופתיה כרונית (קו) והוא יכול לעזור להעריך סוכנים רפואיים חדשים כדי למנוע את הקמתה.

מורי צוואר הרחם מורנה השתלת מודל באמצעות שינוי שאינו תפר שיטה השרוול

כאן, אנו מתארים מודל קסנוגרפט מורין הדומה מבחינה תפקודית למאגר Ommaya בחולים. פיתחנו את מורין אומאיה כדי לחקור טיפולים חדשניים למחלת לפטומינגיאל הקטלנית באופן אוניברסלי.

מודל קסנוגרפט של מורין אומאיה לחקר טיפול ישיר ממוקד במחלת לפטומינגיאל

ניתוח סטריאוטקסי למיקוד אתרי מוח בעכברים כולל בדרך כלל גישה דרך עצמות הגולגולת ומונחה על ידי ציוני דרך בגולגולת. כאן אנו מתווים גישה סטריאוטקסית חלופית כדי להתמקד בגזע המוח הקאודלי ובחוט השדרה הצווארי העליון באמצעות ה-cisterna magna המסתמך על הדמיה ישירה של ציוני דרך של גזע המוח.

גישה כירורגית סטריאוטקסית למיקרו-איניג'קט גזע המוח הקאודלי וחוט השדרה הצווארי העליון באמצעות ציסטרנה מגנה בעכברים

פרוטוקול זה מתאר את ההכנה המפורטת של דגימות בעלות קלט נמוך לריצוף גרעין יחיד, כולל כריתה של צוואר הרחם העליון של העכבר וגרעיני סטלאט, דיסוציאציה של תאים, שימור בהקפאה, בידוד גרעין וברקוד האשטאגים.

בידוד גרעין בעל קלט נמוך וריבוב עם נוגדנים ברקודים של גרעינים סימפתטיים של עכברים לריצוף RNA של גרעין יחיד

תיקון עורק התרדמה במודל עכברי לאחר הזרקה מחזיר את זרימת הדם לעורק מבלי להשפיע לרעה על פיזור החומר המוזרק. תיקון אתר ההזרקה מאפשר זריקות עוקבות דרך אותו עורק ומונע איסכמיה מוחית בזני עכברים חסרי מעגל שלם של וויליס.

הקלה על הזרקות חוזרות תוך קרוטיד במודלים של עכברים על ידי טכניקת תיקון אתר הזרקה חדשנית

כתב יד זה מציג פרוטוקול להסרה כירורגית של תאי עצב סימפתטיים מותניים פוסט-גנגליונים מעכבר. הליך זה יאפשר מספר רב של מחקרים שמטרתם לחקור את התפקיד של עצבוב סימפתטי במטרות רקמות דיסטליות.

כריתת סימפתטומיה מותנית כירורגית בעכברים

למד כיצד לבצע כריתת גנגליון צווארי עליון בעכברים לחקר מערכת העצבים הסימפטטית והשפעתה על מחלות כמו סרטן. שיטה זו מאפשרת השמדה אדרנרגית חד-צדדית מלאה עם תופעות לוואי מינימליות.

טכניקה כירורגית לכריתת גנגליון צוואר הרחם מעולה במודל מורין

גלה סרטונים נוספים