Name: שאיבת דם דינמית רציפה מלב חולדה באמצעות טכניקת מיקרודיאליזה לא פולשנית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: למד שאיבת דם דינמית רציפה מלב חולדה באמצעות מיקרודיאליזה לא פולשנית. שיטה זו מאפשרת ניטור בזמן אמת של רכיבי דם וניתוח ביומרקרים למחלות לב וכלי דם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82104533), הקרן למדע פוסט-דוקטורט בסין (2020M683273), מחלקת המדע והטכנולוגיה של מחוז סצ'ואן (2021YJ0175) ופרויקט המו"פ המרכזי של תוכנית המדע והטכנולוגיה של מחוז סצ'ואן (2022YFS0438). בינתיים, המחברים רוצים להודות למר יונצ'נג הונג, מהנדס ציוד בכיר ב-TRI-ANGELS D&H TRADING PTE. LTD. (סינגפור סיטי, סינגפור), למתן שירותים טכניים לטכניקות מיקרודיאליזה.

פרוטוקול בעלי החיים אושר על ידי הוועדה המנהלית של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית (מספר שיא: 2021-11). חולדות Sprague Dawley (SD) זכרים מוגדרים נטולי פתוגן (8-10 שבועות, 260-300 גרם) גודלו בכלובי אוורור עצמאיים, תוך שמירה על סביבת המעבדה בטמפרטורה של 22 מעלות צלזיוס ולחות יחסית של 65%, ושימשו במחקר הנוכחי. בעלי החיים התקבלו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים). כל החולדות הורגלו להאכלה אדפטיבית במשך שבוע אחד עם מים ותזונה בחינם במהלך התקופה.
1. הכנה ניסיונית
<ol><li>הרכיבו את הציוד המעורב במיקרודיאליזה של דגימת דם (ראו טבלת חומרים), כפי שמוצג באיור 1.</li>
	<li>הכינו תמיסת דקסטרוז ציטראט נוגדת קרישה (ACDs), המכילה 3.50 mmol / L של ציטראט, 7.50 mmol / L של נתרן ציטראט, ו 13.60 mmol / L של גלוקוז, כנוזל זילוח לאיסוף דם מיקרודיאליזה (ראה טבלה של חומרים).</li>
	<li>לפני השימוש, סנן את ACDs עם יחידת סינון קרום 0.22 מיקרומטר והסר בועות אולטרה-סאונד. שמור ACDs על 37 ° C כדי להפחית את הגירוי עבור חולדות SD.</li>
</ol>2. בדיקת פטנט של מערכת צנרת מיקרודיאליזה
<ol><li>חבר את פתח הבדיקה של יחידת הדיאליזה עם מחט המזרק, מתאם הצינור וצינור ה- fep (ראה טבלת חומרים). הערה: הקצה הכחול של בדיקת המיקרודיאליזה מיועד לזרימת הנוזלים, והקצה השקוף מיועד לזרימת הנוזלים.</li>
	<li>בדוק את הפטנט של מערכת צנרת המיקרודיאליזה על ידי החדרת ACDs18 למערכת הצנרת במהירות של 2 μL/min. הערה: אם ACDs זורמים מאתר איסוף הדגימות, ניתן להשתמש במערכת המיקרודיאליזה ללא הפרעה לאיסוף דם לבבי נוסף. אם לא, יש לבדוק את בדיקת הדם לאיתור נזילות שבורות או האם מפרק הצינור נאטם.</li>
</ol>3. השתלת בדיקת מיקרודיאליזה
<ol><li>הרדימו את החולדות עם איזופלורן 2% בתערובת אוויר-חמצן של 0.6 ליטר/דקה, הדקו את החולדות חסרות ההכרה לחלוטין על שולחן הניתוחים, ושמרו על טמפרטורת הגוף ב-37°C באמצעות שומר טמפרטורה של בעלי חיים (ראו טבלת חומרים).</li>
	<li>הסר את הפרווה מהצוואר עם מכונת גילוח חשמלית וחטא את אתר הניתוח עם שלושה סיבובים לסירוגין של בטדין ו 70% אלכוהול. הזריקו bupivacaine (1.5 מ"ג/ק"ג) לתוך החולדה. יש לחשוף את וריד הצוואר הימני על ידי דיסקציה קהה של רקמות רכות ופאשיה פריווסקולרית דרך חתך של 1.5 ס"מ לאורך קו האמצע של הצוואר. הערה: יש לעקר מראש את כל כלי הניתוח והכלים המשמשים בניסוי על ידי אוטוקלאבינג. השתמשו בכפפות סטריליות ובווילונות כירורגיים. כל פעולת הניסוי צריכה להתבצע בסביבה סטרילית. יש לעקוב אחר ההנחיות המקומיות לשימוש בבעלי חיים למשטר הרדמה ושיכוך כאבים.</li>
	<li>בצע החלקה ניתקת באמצעות תפר כירורגי 4-0 בווריד הצוואר הימני בקצה הדיסטלי של הלב כדי לחסום זמנית את זרימת הדם, ולבצע חתך של 1.5 ס"מ בווריד הצוואר הימני ליד הלב.</li>
	<li>יש להחדיר צנתר סטיילט בצורת מחט (אורך 25 מ"מ, קוטר 0.7 מ"מ, ראו טבלת חומרים) לווריד הצוואר הימני לכיוון הקצה הפרוקסימלי של לב החולדה, להחדיר את בדיקת הדם למיקרודיאליזה (אורך בדיקה כולל 24 מ"מ, אורך קרום 10 מ"מ) בצנתר, ולהשתיל את הבדיקה במלקחיים אופתלמיים לאורך החתך האלכסוני של הצנתר סטיילט19.</li>
	<li>הסר את סטילט הצנתר המודרך וטבול באופן מלא את הקרום החדיר למחצה של הבדיקה (אורך הממברנה 10 מ"מ, קוטר הממברנה 0.5 מ"מ) בווריד הצוואר הימני. לפרום את החלקה הננתקת בקצה הדיסטלי של הלב כדי להחזיר את זרימת הדם בווריד הצוואר הימני.</li>
	<li>קשרו את הבדיקה עם וריד הג'וגולרי הימני באמצעות תפרים כירורגיים 4-0 והשחילו תת עורית את צינור זנב הבדיקה דרך החלק האחורי של הצוואר. ראו איור 2 לשלבי השתלת בדיקה ספציפיים. הערה: החתך המולקולרי על ידי בדיקת מיקרודיאליזה בדם המשמש במחקר זה הוא >20 kD. דגימות הדם שנאספו מכילות חומרים בעלי משקל מולקולרי של פחות מ -20 kD.</li>
</ol>4. דגימת מיקרודיאליזה
<ol><li>שבוע לאחר השתלת בדיקת המיקרודיאליזה, חולדות המתאוששות מטראומה כירורגית עוברות דגימת מיקרודיאליזה. הכניסו את החולדה העירה למכל הנע בחופשיות (ראו טבלת חומרים) וחברו את הגשושית למערכת המיקרודיאליזה. אזנו את קרום הדיאליזה של הבדיקה על ידי השקיית ACDs בקצב של 2 מיקרוליטר/דקה למשך שעה אחת.</li>
	<li>יש לאסוף דגימות דם של מיקרודיאליזה בקצב זרימה של 2 μL/min ולשמור אותן באופן זמני במיכל חלקי של 4°C. הערה: דגימות הדם המתקבלות יכולות להיבדק ישירות על ידי צנטריפוגה ב 20,000 x גרם במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. או שניתן לאחסן אותו ב -80 מעלות צלזיוס לבדיקות הבאות. בעת איסוף דגימות, חשוב תמיד לבחון האם הבדיקה צונחת ו / או דולפת החוצה.</li>
</ol>5. פעולה לאחר הדגימה
<ol><li>הרדימו את חולדות SD עם 2% איזופלורן בתערובת אוויר-חמצן ב-0.6 ליטר/דקה.</li>
	<li>לנתח כדי לאשר מחדש כי הבדיקה היא בווריד הצוואר הימני. הסר את בדיקת מיקרודיאליזה מן הווריד הצווארי הימני ולשים אותו לתוך מים טהורים במיוחד.</li>
	<li>לבסוף, להרדים את החולדות על ידי שאיפה של 5% isoflurane.</li>
	<li>חבר את הגשושית לצנרת ושטוף במשך הלילה בקצב של 2 מיקרוליטר/דקה במים טהורים במיוחד כדי לשטוף לחלוטין את שאריות המלח בצינור ובבדיקה.</li>
	<li>הסר את הבדיקה והשרה אותה במים טהורים במיוחד. יש לאחסן בטמפרטורה של 4°C כדי למנוע התכווצות של קרום הדיאליזה של הבדיקה. הערה: אם נפח נוזל הדיאליזה אינו תואם את נפח נוזל הזילוח, הבדיקה עלולה להיחסם על ידי דם קרוש. ניתן למקם את הבדיקה בתמיסת חלבון הלבלב עד שהחומר הנראה מתקלקל מקצה קרום הבדיקה.</li>
</ol>

<ol><li>van Rensburg, W. J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-mortem+evidence+of+a+diverse+distribution+pattern+of+atherosclerosis+in+the+South+African+population%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Post-mortem evidence of a diverse distribution pattern of atherosclerosis in the South African population.</a> Scientific Reports. 12 (1), 11366(2022).</li>
<li>Katz, A. J., Chen, R. C., Usinger, D. S., Danus, S. M., Zullig, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+prevention+and+management+of+pre-existent+cardiovascular+disease+in+a+cohort+of+prostate+cancer+survivors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer+Survivorship%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease prevention and management of pre-existent cardiovascular disease in a cohort of prostate cancer survivors.</a> Journal of Cancer Survivorship. , (2022).</li>
<li>Rødevand, L., Tesli, M., Andreassen, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+risk+in+people+with+severe+mental+disorders%3A+an+update+and+call+for+action%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease risk in people with severe mental disorders: an update and call for action.</a> Current Opinion in Psychiatry. 35 (4), 277-284 (2022).</li>
<li>Izumi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+circulating+cathepsin+K+on+the+coronary+calcification+and+the+clinical+outcome+in+chronic+kidney+disease+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+and+Vessels%22%5BJournal%5D)">Impact of circulating cathepsin K on the coronary calcification and the clinical outcome in chronic kidney disease patients.</a> Heart and Vessels. 31 (1), 6-14 (2016).</li>
<li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whey+protein+hydrolysate+alleviated+atherosclerosis+and+hepatic+steatosis+by+regulating+lipid+metabolism+in+apoE-%2F-+mice+fed+a+Western+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Research+International%22%5BJournal%5D)">Whey protein hydrolysate alleviated atherosclerosis and hepatic steatosis by regulating lipid metabolism in apoE-/- mice fed a Western diet.</a> Food Research International. 157, 111419(2022).</li>
<li>Angelone, T., Rocca, C., Pasqua, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nesfatin-1+in+cardiovascular+orchestration%3A+From+bench+to+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Nesfatin-1 in cardiovascular orchestration: From bench to bedside.</a> Pharmacological Research. 156, 104766(2020).</li>
<li>Bernardi, P. M., Barreto, F., Dalla Costa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+a+LC-MS%2FMS+method+for+evaluating+lung+penetration+of+tobramycin+in+rats+by+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Application of a LC-MS/MS method for evaluating lung penetration of tobramycin in rats by microdialysis.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 134, 340-345 (2017).</li>
<li>Anderzhanova, E., Wotjak, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+microdialysis+and+its+applications+in+experimental+neurochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Brain microdialysis and its applications in experimental neurochemistry.</a> Cell and Tissue Research. 354 (1), 27-39 (2013).</li>
<li>Joukhadar, C., Müller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis%3A+current+applications+in+clinical+pharmacokinetic+studies+and+its+potential+role+in+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacokinetics%22%5BJournal%5D)">Microdialysis: current applications in clinical pharmacokinetic studies and its potential role in the future.</a> Clinical Pharmacokinetics. 44 (9), 895-913 (2005).</li>
<li>Stangler, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+and+microperfusion+electrodes+in+neurologic+disease+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+and+Barriers+of+the+CNS%22%5BJournal%5D)">Microdialysis and microperfusion electrodes in neurologic disease monitoring.</a> Fluids and Barriers of the CNS. 18 (1), 52(2021).</li>
<li>Young, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Nursing+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Cerebral microdialysis.</a> Critical Care Nursing Clinics of North America. 28 (1), 109-124 (2016).</li>
<li>O'Connell, M. T., Krejci, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+techniques+and+microdialysis-based+patient-near+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Microdialysis techniques and microdialysis-based patient-near diagnostics.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 414 (10), 3165-3175 (2022).</li>
<li>Hammarlund-Udenaes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+as+an+important+technique+in+systems+pharmacology-a+historical+and+methodological+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+AAPS+Journal%22%5BJournal%5D)">Microdialysis as an important technique in systems pharmacology-a historical and methodological review.</a> The AAPS Journal. 19 (5), 1294-1303 (2017).</li>
<li>Stahl, M., Bouw, R., Jackson, A., Pay, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharmaceutical+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Human microdialysis.</a> Current Pharmaceutical Biotechnology. 3 (2), 165-178 (2002).</li>
<li>Pierce, C. F., Kwasnicki, A., Lakka, S. S., Engelhard, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microdialysis+as+a+tool+for+assessing+the+delivery+of+chemotherapy+in+brain+tumor+patients%5BTitle%5D)+AND+%22World+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Cerebral microdialysis as a tool for assessing the delivery of chemotherapy in brain tumor patients.</a> World Neurosurgery. 145, 187-196 (2021).</li>
<li>Sørensen, M., Jacobsen, S., Petersen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+in+equine+research%3A+a+review+of+clinical+and+experimental+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Microdialysis in equine research: a review of clinical and experimental findings.</a> Veterinary Journal. 197 (3), 553-559 (2013).</li>
<li>Dmitrieva, N., Rodríguez-Malaver, A. J., Pérez, J., Hernández, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+release+of+neurotransmitters+from+superficial+and+deep+layers+of+the+dorsal+horn+in+response+to+acute+noxious+stimulation+and+inflammation+of+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pain%22%5BJournal%5D)">Differential release of neurotransmitters from superficial and deep layers of the dorsal horn in response to acute noxious stimulation and inflammation of the rat paw.</a> European Journal of Pain. 8 (3), 245-252 (2004).</li>
<li>Li, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+sampling+and+HPLC-MS%2FMS+quantification+of+sinomenine%2C+ligustrazine%2C+gabapentin%2C+paracetamol%2C+pregabalin+and+amitriptyline+in+rat+blood+and+brain+extracellular+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmaceutica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Microdialysis sampling and HPLC-MS/MS quantification of sinomenine, ligustrazine, gabapentin, paracetamol, pregabalin and amitriptyline in rat blood and brain extracellular fluid.</a> Acta Pharmaceutica Sinica. 55 (9), 2198-2206 (2020).</li>
<li>Chauzy, A., Lamarche, I., Adier, C., Couet, W., Marchand, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+study+of+Aztreonam-Avibactam+distribution+in+peritoneal+fluid+and+muscle+of+rats+with+or+without+experimental+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Microdialysis study of Aztreonam-Avibactam distribution in peritoneal fluid and muscle of rats with or without experimental peritonitis.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 62 (10), 01228(2018).</li>
<li>Fang, X. X., Ardehali, H., Min, J. X., Wang, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+metabolic+landscape+of+iron+and+ferroptosis+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The molecular and metabolic landscape of iron and ferroptosis in cardiovascular disease.</a> Nature Reviews. Cardiology. , 1-17 (2022).</li>
<li>Samson, R., Ennezat, P. V., Le Jemtel, T. H., Oparil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+risk+reduction+and+body+mass+index%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Hypertension+Reports%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease risk reduction and body mass index.</a> Current Hypertension Reports. , (2022).</li>
<li>Kim, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((School+racial+segregation+and+long-term+cardiovascular+health+among+Black+adults+in+the+US%3A+A+quasi-experimental+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">School racial segregation and long-term cardiovascular health among Black adults in the US: A quasi-experimental study.</a> PLoS Medicine. 19 (6), 1004031(2022).</li>
<li>Qin, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+m6A+RNA+methylation+in+cardiovascular+disease+%28Review%29%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Role of m6A RNA methylation in cardiovascular disease (Review).</a> International Journal of Molecular Medicine. 46 (6), 1958-1972 (2020).</li>
<li>Xu, C. M., Liu, C. J., Xiong, J. H., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+aspects+of+the+%28pro%29renin+receptor%3A+Function+and+significance%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular aspects of the (pro)renin receptor: Function and significance.</a> FASEB Journal. 36 (4), 22237(2022).</li>
<li>Guvenc-Bayram, G., Yalcin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intermediary+role+of+the+central+cyclooxygenase+%2F+lipoxygenase+enzymes+in+intracerebroventricular+injected+nesfatin-1-evoked+cardiovascular+effects+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">The intermediary role of the central cyclooxygenase / lipoxygenase enzymes in intracerebroventricular injected nesfatin-1-evoked cardiovascular effects in rats.</a> Neuroscience Letters. 756, 135961(2021).</li>
<li>Ahrens Kress, A. P., Zhang, Y. D., Kaiser-Vry, A. R., Sauer, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+blood+collection+techniques+in+mice+and+their+effects+on+welfare%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">A comparison of blood collection techniques in mice and their effects on welfare.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 61 (3), 287-295 (2022).</li>
<li>Joshi, A., Patel, H., Joshi, A., Stagni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetic+applications+of+cutaneous+microdialysis%3A+Continuous%2Bintermittent+vs+continuous-only+sampling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacological+and+Toxicological+Methods%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetic applications of cutaneous microdialysis: Continuous+intermittent vs continuous-only sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 83, 16-20 (2017).</li>
<li>Reyes-Garcés, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+brain+sampling+using+a+microextraction+probe+reveals+metabolic+changes+in+rodents+after+deep+brain+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">In vivo brain sampling using a microextraction probe reveals metabolic changes in rodents after deep brain stimulation.</a> Analytical Chemistry. 91 (15), 9875-9884 (2019).</li>
<li>Kho, C. M., Enche Ab Rahim, S. K., Ahmad, Z. A., Abdullah, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+microdialysis+calibration+methods%3A+the+theory+and+current+related+efforts%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">A review on microdialysis calibration methods: the theory and current related efforts.</a> Molecular Neurobiology. 54 (5), 3506-3527 (2017).</li>
<li>Zhuang, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theory+and+application+of+microdialysis+in+pharmacokinetic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Theory and application of microdialysis in pharmacokinetic studies.</a> Current Drug Metabolism. 16 (10), 919-931 (2015).</li>
<li>Zhang, Y. F., Huang, X. X., Zhu, L. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabonomics+research+strategy+based+on+microdialysis+technique%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Metabonomics research strategy based on microdialysis technique.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (1), 214-220 (2020).</li>
<li>Carpenter, K. L., Young, A. M., Hutchinson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+monitoring+in+traumatic+brain+injury%3A+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Advanced monitoring in traumatic brain injury: microdialysis.</a> Current Opinion in Critical Care. 23 (2), 103-109 (2017).</li>
<li>Brunner, M., Langer, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+versus+other+techniques+for+the+clinical+assessment+of+in+vivo+tissue+drug+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22The+AAPS+Journal%22%5BJournal%5D)">Microdialysis versus other techniques for the clinical assessment of in vivo tissue drug distribution.</a> The AAPS Journal. 8 (2), 263-271 (2006).</li>
<li>Tettey-Amlalo, R. N., Kanfer, I., Skinner, M. F., Benfeldt, E., Verbeeck, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+dermal+microdialysis+for+the+evaluation+of+bioequivalence+of+a+ketoprofen+topical+gel%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Application of dermal microdialysis for the evaluation of bioequivalence of a ketoprofen topical gel.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 36 (2-3), 219-225 (2009).</li>
<li>Dhanani, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+rates+of+combination+antibiotic+therapy+using+in+vitro+microdialysis+simulating+in+vivo+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Recovery rates of combination antibiotic therapy using in vitro microdialysis simulating in vivo conditions.</a> Journal of Pharmaceutical Analysis. 8 (6), 407-412 (2018).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

CVD היא מחלה כרונית נפוצה במרפאות עם שכיחות עולה בהדרגה בסין, וגיל ההתחלה נוטה להיות צעיר יותר, מה שגורם לדאגה ובהלה של רוב החולים20,21. להיות הגורם המוביל למוות בעולם, CVDs יכול לגרום אוטם מוחי ומחלות תמותה גבוהה אחרות, איום רציני על החיים הבריאים של חולים22. מחלות לב וכלי דם, כולל מחלת לב איסכמית, קרדיומיופתיה, טרשת עורקים, לחץ דם גבוה, שבץ ואי ספיקת לב, מתרחשות כאשר העורקים המספקים דם ללב צרים או מתקשים23,24...

עם האצת קצב החיים ועליית הלחץ הפסיכולוגי, מחלות לב וכלי דם (CVD) נוטות להתרחש אצל צעירים, בגיל העמידה וקשישים 1,2. התחלואה והתמותה של מחלות לב וכלי דם גבוהות, עם מאפיינים של התפרצות חריפה, התקדמות מהירה ומהלך ארוך של המחלה, המשפיעים קשות על בטיחות החולים3. המופע של CVD עשוי להיות קשור קשר הדוק לשינויים בחלק מרכיבי הדם, כגון כולסטרול, שומנים בסרום, גלוקוז בדם, אנזימי שריר הלב וחלבון קינאז K 4,5,6. ניתן לנהל את המצב הרלוונטי של המטופל במהירות הרבה ביותר על ידי ניתוח פריטי בדיקת דם שגרתיים. לפיכך, איכות דגימות הדם קובעת את דיוק תוצאות הבדיקה. עם זאת, לשיטות קונבנציונליות לאיסוף דם יש כמה חסרונות בלתי נמנעים, המשפיעים באופן חמור על תוצאות הניסוי, כגון שטח טראומה גדול, נפח איסוף דם קטן, דרישות גבוהות למפעילים, חוסר יכולת לשקף שינויים בתרופות בזמן אמת, טיפול מקדים מסורבל בדגימות דם, צריכה גדולה של חיות ניסוי ואי עמידה בדרישות אתיות של בעלי חיים 7,8,9 . עם התקדמות מתמשכת בטכנולוגיה רפואית, איכות איסוף הדם הציבה גם דרישות גבוהות יותר. לכן, דחוף לפתח טכנולוגיית דגימת דם חדשה כדי להתגבר על החסרונות לעיל.
מיקרודיאליזה היא טכניקת דגימה in vivo המבוססת על עקרונות הדיאליזה10. בתנאים שאינם שווי משקל, התרכובות הנמדדות מפוזרות ומחוררות מהרקמה לאורך שיפוע הריכוז אל תוך בדיקת המיקרודיאליזה המוטמעת ברקמה לתוך הדיאליזה, אשר מוסרת ברציפות יחד עם הדיאליזה, ומשיגה את מטרת הדגימה מהרקמה החיה11,12. בהשוואה לשיטות הדגימה המסורתיות, לטכניקת המיקרודיאליזה יתרונות נפלאים בהיבטים הבאים13,14,15: מעקב רציף בזמן אמת אחר שינויים של תרכובות שונות בדם; הדגימה אינה דורשת עיבוד מקדים מייגע ויכולה לייצג באמת את ריכוז תרכובת המטרה באתר הדגימה; בדיקות ניתן להשתיל בחלקים שונים של הגוף כדי לחקור את הספיגה, ההפצה, חילוף החומרים, ההפרשה והרעילות של תרכובות המטרה; הדגימה שנרכשה אינה מכילה מקרומולקולות ביולוגיות (>20 kD). לכן, דגימות הדם האיכותיות יותר מבטיחות פרשנות טובה יותר של CVD והמנגנון המטופל על ידי הרפואה האתנית.
מערכות דיגום מיקרודיאליזה מורכבות בדרך כלל ממשאבות מיקרו-הזרקה, צינורות חיבור, מיכלי תנועה ללא בעלי חיים, בדיקות מיקרודיאליזה ואוספי דגימות16. כחלק הקריטי ביותר במכשיר של מערכת המיקרודיאליזה, בדיקות מיקרודיאליזה נפוצות כוללות בדיקות קונצנטריות, בדיקות גמישות, בדיקות ליניאריות ובדיקות שאנט17. בין אלה, בדיקות גמישות הן בדיקות רכות ולא מתכתיות, המשמשות בעיקר לאיסוף דגימות מכלי דם ורקמות היקפיות כגון לב, שרירים, עור ושומן של בעלי חיים ערים ונעים בחופשיות או מורדמים13. כאשר במגע עם כלי דם או רקמות, הבדיקה יכולה להיות כפופה גמישה, ובכך למנוע נזק בלתי הפיך לבדיקה או לאתר הדגימה. עם ההתפתחות המתמשכת של טכנולוגיית הגשוש, מעמיק גם היישום של טכנולוגיית מיקרודיאליזה בתחומים שונים. במאמר זה, דם לב החולדה נרכש באופן דינמי ורציף על ידי טכנולוגיית המיקרודיאליזה הלא פולשנית באמצעות בדיקה גמישה המיועדת לאיסוף דם.

<table><tbody><tr><td>מערכת הרדמה לבעלי חיים</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IE</td><td></td></tr><tr><td>שומר טמפרטורת בעלי חיים</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>69020</td><td></td></tr><tr><td>בדיקת מיקרודיאליזה בדם</td><td>  צנתר CMA מיקרודיאליזה AB</td><td>T55347</td><td></td></tr>&amp;<tr><td></td><td>nbsp; CMA מיקרודיאליזה AB</td><td>T55347</td><td></td></tr><tr><td>ציטראט</td><td>Merck Chemical Technology (שנחאי) ושות', בע"מ</td><td>251275</td><td></td></tr><tr><td>מכונת גילוח חשמלית</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>CP-5200</td><td></td></tr><tr><td>צינורות Fep</td><td>  CMA Microdialysis AB</td><td>3409501</td><td></td></tr><tr><td>מיכל תנועה חופשית לבעלי חיים</td><td>  CMA מיקרודיאליזה AB</td><td>CMA120</td><td></td></tr><tr><td>גלוקוז</td><td>Merck טכנולוגיה כימית (שנחאי) ושות', בע"מ</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים המוסטטיים</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>F21020-16</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו מספריים</td><td>Beyotime ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ</td><td>FS221</td><td></td></tr><tr><td>מיקרודיאליזה שפופרת איסוף</td><td>  CMA מיקרודיאליזה AB</td><td>7431100</td><td></td></tr><tr><td>אספן מיקרודיאליזה</td><td>  CMA Microdialysis AB</td><td>CMA4004</td><td></td></tr><tr><td>מעמד מיקרודיאליזה במבחנה</td><td>  CMA מיקרודיאליזה AB</td><td>CMA130</td><td></td></tr><tr><td>משאבת מיקרודיאליזה מיקרו-הזרקה</td><td>  CMA מיקרודיאליזה AB</td><td>788130</td><td></td></tr><tr><td>מזרק מיקרודיאליזה (1.0 מ"ל)</td><td>  CMA Microdialysis AB</td><td>8309020</td><td></td></tr><tr><td>מתאם צינורות מיקרודיאליזה</td><td>  CMA מיקרודיאליזה AB</td><td>3409500</td><td></td></tr><tr><td>קרום מסנן מיקרופורוס</td><td>Merck Millipore Ltd.</td><td></td><td></td>R0DB36622</tr><tr><td>תפרים כירורגיים שאינם נספגים</td><td>שנחאי Tianqing חומרים ביולוגיים ושות', בע"מ</td><td>S19004</td><td></td></tr><tr><td>שולחן ניתוחים</td><td>Yuyan Scientific Instrument Co., Ltd</td><td>30153</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עיניים</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>F12016-15</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ציטראט</td><td>Merck Chemical Technology (שנחאי) ושות', בע"מ</td><td>1613859</td><td></td></tr><tr><td>ספראג דולי  (SD) חולדות</td><td>צ'נגדו דוסי חיות ניסוי ושות', בע"מ</td><td>SYXK(<img alt="משוואה 1" src="/files/ftp_upload/64531/64531eq01.jpg" style="margin: auto; ">)2019-049</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>S14014-15</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td>שנחאי Bingyu Fluid Technology Co., Ltd</td><td>BY-103</td><td></td></tr><tr><td>מחט מזרק</td><td>  CMA מיקרודיאליזה AB</td><td>T55347</td><td></td></tr><tr><td>מנקה אולטרסאונד</td><td>גואנגדונג Goote אולטרסאונד ושות', בע"מ</td><td>KMH1-240W8101</td><td></td></tr></tbody></table>

שאיבת דם דינמית רציפה מלב חולדה באמצעות טכניקת מיקרודיאליזה לא פולשנית

Dynamic Continuous Blood Extraction from Rat Heart via Noninvasive Microdialysis Technique

לניתוח דינמי של מרכיבי הדם חשיבות רבה בהבנת מחלות לב וכלי דם והמחלות הקשורות אליהן, כגון אוטם שריר הלב, הפרעות קצב, טרשת עורקים, בצקת ריאות קרדיוגנית, תסחיף ריאתי ותסחיף מוחי. יחד עם זאת, דחוף לפרוץ את טכניקת דגימת הדם המתמשכת בלב בחולדות חיות כדי להעריך את היעילות של טיפול ייחודי ברפואה אתנית. במחקר זה הושתלה בדיקת מיקרודיאליזה בדם בווריד הצוואר הימני של חולדות בהליך כירורגי מדויק ולא פולשני. דגימות דם לבביות נאספו בקצב של 2.87 nL/min עד 2.98 mL/min על ידי חיבור למערכת מקוונת לאיסוף דגימות מיקרודיאליזה. חשוב מכך, דגימות הדם שנרכשו יכולות להיות מאוחסנות באופן זמני במיכלי מיקרודיאליזה ב -4 מעלות צלזיוס. תוכנית איסוף הדם הרציפה המקוונת מבוססת המיקרודיזה מלב חולדה הבטיחה מאוד את איכות דגימות הדם, קידמה והמריצה את הרציונליות המדעית של המחקר על מחלות לב וכלי דם מערכתיות והערכת טיפול אתנו-רפואי מנקודת מבט של המטולוגיה.

הפרוטוקול הנוכחי איפשר קבלת דם לב מחולדות בהכרה על פי פרמטרי הדגימה שנקבעו בציוד המיקרודיאליזה. דגימות דם רגילות חייבות להיות אדומות בוהקות, בעוד שבעלי חיים עם היפוקסיה, קרישי דם פוטנציאליים או מחלה אנמית עשויים להיות סגולים כהים או אדומים כהים. דגימות המתקבלות באמצעות טכניקת מיקרודיאליזה בדם הן חסרות צבע, ברורות ושקופות, אשר ניתן להשתמש בהן כדי לנתח את הסמנים בסרום של מחלות שונות ואת התפלגות הדם של תרופות ואת המטבוליטים שלהם על ידי שימוש כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים או ספקטרומטריית מסה. הפרמטרים שנקבעו ונפח הדם היח...

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה פשוטה ויעילה לאיסוף בזמן אמת ודינמי של דם לב חולדה באמצעות טכניקת המיקרודיאליזה.

Dynamic analysis of blood components is of great importance in understanding cardiovascular diseases and their related diseases, such as myocardial ...

טכניקת איסוף הדם הרציפה והדינמית שלנו מלב חולדה חשובה מאוד לניתוח מרכיבי הדם, ותורמת להבנת מחלות לב וכלי דם והמחלות הקשורות אליהן. בהשוואה לשיטות דגימה מסורתיות, לטכניקה זו יש את היתרונות של in vivo, בזמן אמת, דינמית, והיא לא פולשנית, ללא מיקרו מולקולרים ביולוגיים ודגימת טיטר בתהליך מקדים לבדיקה זרה. טכניקה זו אינה ישימה רק למחלות לב וכלי דם, אלא גם צריכה לעבוד לאבחון מחלות וטיפול בהן על ידי איתור סמנים ביולוגיים בדם בשילוב עם כרומטוגרפיה נוזלית בשלב גבוה וספקטרומטריית מסות.שיטה זו יכולה לשמש לחקר מחלות לב וכלי דם כגון אוטם שריר הלב, דום נשימה וטרשת עורקים. בנוסף, הוא חל גם על בצקת ריאות קרדיוגנית ותסחיף ריאתי ומוחי. לאחר ביצוע ההכנה הניסיונית, חבר את פתח הבדיקה של יחידת הדיאליזה עם מחט המזרק, מתאם הצינור וצינור FEP.בדוק את הפטנט של מערכת צנרת המיקרודיאליזה על ידי החדרת תמיסת דקסטרוז ציטראט נוגד קרישה למערכת הצנרת. בצע חתך כדי לחשוף את הווריד הצווארי הימני על ידי דיסקציה קהה של רקמות רכות ו fascia perivascular. באמצעות תפר כירורגי 4-0, בצע קשר החלקה ניתק בווריד הצוואר הימני בקצה הדיסטלי של הלב כדי לחסום את זרימת הדם באופן זמני.ואז לעשות חתך בווריד הצוואר הימני ליד הלב. החדירו קטטר בצורת מחט לווריד הצוואר הימני לכיוון הקצה הפרוקסימלי של לב החולדה. יש להכניס את בדיקת המיקרודיאליזה לדם בצנתר ולהשתיל את הבדיקה במלקחיים אופתלמיים לאורך החתך האלכסוני של הצנתר.הסר את הצנתר המודרך וטבול באופן מלא את הקרום החדיר למחצה של הבדיקה בווריד הצוואר הימני. לפרום את קשר ההחלקה הנתיק בקצה הדיסטלי של הלב כדי להחזיר את זרימת הדם בווריד הצוואר הימני. לאחר מכן השתמש 4-0 תפרים כירורגיים כדי לקשור את הבדיקה עם הווריד הצווארי הימני.הניחו את החולדה הערה במיכל הנע בחופשיות וחברו את הגשושית למערכת המיקרודיאליזה. לאחר מכן השקו את תמיסת דקסטרוז ציטראט נוגד הקרישה בקצב של שני מיקרוליטר לדקה למשך שעה אחת כדי לאזן את קרום הדיאליזה של הבדיקה. לאסוף דגימות דם microdialysis ולשמור אותם באופן זמני במיכל שבר ארבע מעלות צלזיוס.כדי לאשר מחדש כי הבדיקה היא בווריד הצוואר הימני, לנתח את החולדה. הסר את בדיקת מיקרודיאליזה מן הווריד הצווארי הימני ולשים אותו לתוך מים טהורים במיוחד. חברו את הגשושית לצנרת ושטפו למשך הלילה במים טהורים במיוחד כדי לשטוף היטב את שאריות המלח שבצינור ובבדיקה.דגימות הדם הרגילות נראו אדומות בוהקות בעוד קרישי דם פוטנציאליים נצפו בדגימות היפוקסיות. הדגימות שהתקבלו בטכניקת מיקרודיאליזה בדם היו חסרות צבע, שקופות ושקופות. כדי למנוע את הרס הממברנה ואת הבדיקה של החלקה או עקירה, אנחנו צריכים לשים לב כאשר אנו מניחים וטובלים את הבדיקה בווריד jugular חולדה.דגימות הדם המתקבלות באמצעות טכניקת מיקרודיאליזה ניתן להשתמש כדי לנתח את הסמנים הביולוגיים של מחלות שונות ואת התפלגות הדם של תרופות מטבוליטים נדירים.

dynamic-continuous-blood-extraction-from-rat-heart-via-noninvasive

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

פרוטוקול זה מתאר שיטה לאסוף נוזל interstitial לב מבודדים, בלב עכברוש perfused. כדי להפריד פיזית transudate interstitial מ perfossate כלילי ורידי לב, הלב Langendorff perfused הוא הפוך, ואת transudate (נוזל interstitial) נוצר על פני הלב נאסף באמצעות כובע לטקס רכה.

מודל הלב הפוכה עבור אוסף transstate Interstitial מן הלב עכברוש מבודד

כאן, אנו מתארים שיטה ויוו microdialysis לניתוח שחרור אספרטט ולא גלוטמט בהיפוקמפוס הגחון של חולדות אפילפסיה ואפילפטי, בשילוב עם הקלטות EEG. חוץ-תאית ריכוזי אספרטט גלוטמט יכול להיות בקורלציה עם השלבים השונים של המחלה.

Microdialysis של חומצות אמינו מעוררות במהלך ההקלטות EEG בחופשיות העברת חולדות

כאן, אנו מתארים הכנה הקלטה בו זמנית של אלקטרוקרדיוגרם ואת לחץ הדם התוך עורקי (BP) בחולדות ניסיוני, אשר ניתן לעשות עם ציוד סטנדרטי במתקנים בעלי חיים, ניתן להחיל על פיזיולוגית או תרופתי מחקרים לחקור מנגנונים פתוגניים או טיפולית ברפואה לב וכלי דם.

ההקלטה סימולטני אלקטרוקרדיוגרם ודם פולשנית בלחץ מדידה בחולדות

מאמר זה מציג שיטה יעילה לבצע איסכמיה שריר הלב ואת reperfusion כרונית הבאים חולדות באמצעות גישה פולשנית מינימלית. בנוסף, הפונקציה השמאלית התפקוד התפקודי של חולדות מוערך על ידי הד ושיטות עבודה מבודדים לב.

חצי מינימלי שיטה פולשנית כדי לגרום אוטם שריר הלב בחולדות הערכה של תפקוד הלב על ידי מערכת לב עבודה מבודדת

תקן הזהב בקרדיולוגיה לניסויים פונקציונליים תאיים ומולקולריים הוא קרדיומיוציטים. מאמר זה מתאר התאמות לטכניקה שאינה לנגנדורף לבידוד קרדיומיוציטים של עכברים.

שיטה פשוטה ויעילה לבודד באופן עקבי קרדיומיוציטים עכבר

הפרוטוקול הנוכחי מתאר תותח אבי העורקים וזליפה מדרדרת של לב מורין ילודים לשעבר .  אסטרטגיה של שני אנשים, באמצעות מיקרוסקופ ניתוח ומחט מד קטנה קהה, מאפשרת תותח אמין. כימות מתח התכווצות אורכי מושג באמצעות מתמר כוח המחובר לפסגת החדר השמאלי.

טכניקה שונה לשימוש בלבבות מורין יילודים בהכנת לנגנדורף

הפרוטוקול כאן מספק דגימה דינמית מפורטת בזמן אמת של נוזל חוץ-תאי מההיפוקמפוס של חולדות ערות באמצעות מערכת מיקרודיאליזה.

איסוף דינמי בזמן אמת של נוזל חוץ-תאי בהיפוקמפוס מחולדות מודעות באמצעות מערכת מיקרודיאליזה

הפרוטוקול מראה איסוף חוזר של נוזל המוח השדרה ודם מחולדות אפילפטיות, המבוצע במקביל לניטור וידאו-אלקטרואנצפלוגרם רציף (EEG). אלה חיוניים לחקר קשרים אפשריים בין שינויים במולקולות שונות של נוזל הגוף לבין פעילות התקפים.

דגימת נוזל מוחי ודם מווריד זנב לטרלי בחולדות במהלך רישומי EEG

פרוטוקול זה מתאר שיטה למדידת לחץ ונפח בחדר שמאל באמצעות טכניקת מוליכות לחץ-נפח. שיטה זו מאפשרת ניטור רציף בזמן אמת של השפעות התרופות על הלב.

זיהוי בזמן אמת של השפעות חומצה פרולית על החדר השמאלי של חולדה באמצעות צנתר מוליכות בנפח לחץ

פרוטוקול זה מתאר ייצור חומרים מתקדם ושיטות לב חולדות ex vivo לממשק ביולוגי דו-כיווני אופטי וחשמלי, המאפשר גירוי לבבי מדויק, הקלטה ומידול אוטם למחקר ביו-אלקטרוניקה.

ממשקים חשמליים ואופטו-אלקטרוניים דו-כיווניים בלבבות חולדות ex vivo בריאים ואיסכמיים

למד שאיבת דם דינמית רציפה מלב חולדה באמצעות מיקרודיאליזה לא פולשנית. שיטה זו מאפשרת ניטור בזמן אמת של רכיבי דם וניתוח ביומרקרים למחלות לב וכלי דם.

שאיבת דם דינמית רציפה מלב חולדה באמצעות טכניקת מיקרודיאליזה לא פולשנית

גלה סרטונים נוספים