ניתוח ובדיקות התנהגותיות במודל טרנספוזיציית נוירומה טיביאלית בחולדות
6 בינואר 2023
פרוטוקול זה מתאר את מודל הטרנספוזיציה של נוירומה טיביאלית, הכרוך בנגע של העצב הטיביאלי עם טרנספוזיציה עוקבת של קצה העצב הפרוקסימלי לכיוון מנח פרטיביאלי או לטרלי תת עורי. בדיקה התנהגותית של כאב נוירומה והיפראלגזיה פלנטרית מכומתת באמצעות מונופילמנטים של פון פריי.
שיטה זו מסייעת למצוא טיפולים טובים יותר לכאבי נוירומה. היתרון של טכניקה זו הוא שאתה יכול למדוד הן כאב נוירומה וכאב כללי באופן עצמאי באותו מודל חזרה. מודל TNT מותאם במיוחד לבדיקת כאב נוירומה, שכן הנוירומה עצמה ניתנת לגירוי מכני באמצעות מונופילמנטים של פון פריי.
התחילו בהנחת החולדה המורדמת על גבה כשראשה משמאל או מימין. הניחו את הרגל לניתוח ליד המנתח. Exorotate את הגפה האחורית התחתונה כך malleolus המדיאלי פונה כלפי מעלה.
לפני הנחת החולדה תחת מיקרוסקופ כירורגי סטריאופוני עם הגדלה פי 6, יש לחטא את האזור המגולח בלפחות שלושה סבבים לסירוגין של פילינג על בסיס יוד ואלכוהול. אתר את הברך ובצע בעדינות חתך אורכי של שניים עד שלושה סנטימטרים מעל הצד המדיאלי של הכף האחורית מאמצע השוק לקרסול באמצעות אזמל. במידת הצורך, לפתוח את העור ואת subcutis עוד יותר עם microscissors עד שכבות השריר גלויים.
זהה את הצרור הנוירו-וסקולרי השטחי כשניים עד שלושה קווים לבנים, סגולים או אדומים שיכולים לנוע בחופשיות על שכבות השריר. שמור על הצרור הנוירו-וסקולרי שלם. נתחו את החלק האחורי מהצרור הזה.
לאחר מכן, לנתח כדי לפתוח את fascia בין שרירי gastrocnemius. בין הפאשיה של השרירים, ניתן למצוא את הצרור הנוירו-וסקולרי העמוק יותר עם העצב הטיביאלי, שהוא בערך פי שלושה מגודלו של הצרור הנוירו-וסקולרי השטחי. השתמש בעצם הטיביאלית כנקודת ציון נוספת, מכיוון שהעצב הטיביאלי טס רק אחורית לעצם הטיביאלית.
כדי לנתח את העצב הטיביאלי ללא צרורות כלי הדם שמסביב, הזיזו בבוטות את העצב הטיביאלי וחתכו את הרקמה החשופה שמראה מתיחה מסוימת תוך כדי הזזת העצב הטיביאלי. לאחר שכל העצב הטיביאלי נחשף, הניחו את שכבות השריר לאחור כדי למנוע התייבשות של העצב עד לנתיחת העור הקדמי מהשריר התת עורי. כדי לנתח את העור הקדמי משכבת השריר התת עורית וליצור תעלה תת עורית, החזיקו את העור למעלה ודחפו את הקצה הקהה לתוך הרקמה במקביל לעור באמצעות כלי מיקרו-כירורגיה קהה.
ודא כי קצה המנהרה ממוקם מראש או לרוחב עבור נגישות קלה של האזור לבדיקת הנוירומה. לאחר חיתוך העצב הטיביאלי בקצה הדיסטלי ליד הקרסול, יש לשנות את הגדלת המיקרוסקופ ל 10x או 16x ולזהות את epineurium של עצב טיביאלי פרוקסימלי לחתך שנעשה ליד הקרסול. או, במקרה של ביפורקציה פרוקסימלית יותר של העצב הטיביאלי, לזהות את epineurium של שני ענפי עציץ המדיאלי לרוחב פרוקסימלי לחתך שנעשה ליד הקרסול.
מניחים בזהירות 8-0 תפר ניילון דרך epineurium של קצה העצב הפרוקסימלי על ידי החזקת epineurium עם פינצטה לשים את המחט בין העצב epineurium עם נשיכה של כ 0.5 מ"מ. קח ביס עם המחט תת עורית בקצה התעלה התת עורית ומשוך את התפר כדי להעביר את העצב לרוחב לתוך התעלה התת עורית. תקן את התפר על ידי ביצוע קשר.
מניחים תפר עבה יותר של 4-0 עם צבע כהה סמוק לקצה העצב המקובע מבלי לחדור לעור. ודא כי התפר גלוי מחוץ לעור. בדוק אם העצב נשאר במקום לאחר הזזת הכף והשרירים.
חותכים את קצוות התפר עם קצה תפר מעט ארוך יותר ב-4-0, ואז ב-8-0 תפר. לשנות את ההגדלה של המיקרוסקופ בחזרה 6x ולסגור את העור עם תפרים intraepidermal באמצעות 8-0 תפר. נקו בעדינות את העור עם 0.9% נתרן כלורי באמצעות צמר גפן.
אם החדר קר, הניחו כרית חימום מתחת לחלק מכלוב נקי והניחו את החולדה בכלוב מתחת למגבת נייר בתנוחה נוחה. הבטיחו גישה נוחה למזון ומים. כדי לעורר את העצב הסטרילי לרגישות יתר, יש למרוח את המונופילמנט בצד הצידי קרוב לגבול השערה מבלי לגעת בכריות כף הרגל.
כדי לעורר את העצב הטיביאלי עבור hyposensitivity, להחיל את monofilament באמצע משטח עציץ של הכף האחורית. לבדיקת אתר נוירומה, החזיקו את החולדות כשאפן מכוון לכיוון קפל המרפק. אם החולדה מוחזקת ביד ימין, כפה אחורית שמאל צריכה להיות תלויה בחופשיות בין האגודל הימני לאצבע המורה.
לאחר שווידאתם שהחולדה רגועה ונינוחה בזמן שהיא אוחזת, בקו הבסיס, הניחו את המונופילמנט במשקל 15 גרם בעדינות על המשטח הקדמי של הכף האחורית החשופה. לאחר הניתוח, הניחו את המונופילמנט במשקל 15 גרם על התפר הנראה לעין והפעילו כוח מספיק על המונופילמנט כדי לכופף את השיער ולהחזיק למשך שנייה אחת. פון פריי מאתר נוירומה הראה כי בתחילת המחקר, חולדות הגיבו ל-10%-15% מהיישומים של מונופילמנט במשקל 15 גרם.
שבוע לאחר ניתוח הטרנספוזיציה של נוירומה טיביאלית, שיעור התגובה עלה מ 45% ל 50% בצד הנגדי, התגובות לאחר הניתוח היו דומות לקו הבסיס. כ-20% מהחולדות לא פיתחו נוירומה כואבת ושיעור התגובה לא עלה בהשוואה לנקודת ההתחלה. בסוף גדם העצב הטיביאלי שעבר טרנסנדציה וטרנספוזה, 12 שבועות לאחר הניתוח, כל החולדות פיתחו נוירומה.
חתך של העצב הטיביאלי הפחית את הרגישות המכנית באמצע הצד העציץ של הכף האחורית העצבנית על ידי העצב הטיביאלי. תת-רגישות שהייתה קיימת שבוע לאחר הניתוח הייתה שונה באופן משמעותי מהצד הנגדי וקו הבסיס משלושה שבועות לאחר הניתוח ונשארה עד 12 שבועות לאחר הניתוח. בחלק הלטרלי של צד העציץ של הכף האחורית העצבוב על ידי העצב הסוריאלי השלם, החולדות פיתחו רגישות יתר מכנית שונה באופן משמעותי מהצד הנגדי וקו הבסיס משבוע לאחר הניתוח.
זה נמשך 12 שבועות לאחר הניתוח. בכפה הנגדית, הרגישות המכנית לא הושפעה בהשוואה לקו הבסיס באזורים העצבניים על ידי העצב הסורי או הטיביאלי. זכור ליצור אורך של העצב הטיביאלי לטווח תנועה עבור טרנספוזיציה לטרלית.
זכור גם לסמן את אתר הנוירומה הזה בתפר כהה.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
מחקר זה מציג פרוטוקול למודל של תעתוע נוירומה של העצב השוקי (tibial neuroma transposition), הכולל פגיעה בעצב השוקי ולאחריה תעתוע שלו לצורך בדיקה התנהגותית של כאב נוירומה והיפראלגזיה באמצעות מונופילמנטים של Von Frey. שיטה זו מאפשרת כימות עצמאי הן של כאב נוירומה והן של כאב כללי במודל יחיד.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- מדעי המוח
- ניתוח התנהגותי
- מודלים של פגיעה עצבית
רקע
- כאב נוירומה מהווה אתגר קליני משמעותי.
- ייתכן שדגמים קיימים אינם מאפשרים מדידות עצמאיות של כאב מקומי וכאב כללי.
- דגם העתקת העצב הטיביאלי (tibial nerve transposition) מספק פלטפורמה לחקר מנגנוני כאב.
מטרת המחקר
- פיתוח מודל הניתן לשחזור לחקר כאבי נוירומה.
- בחינת היעילות של טיפולים להקלה על כאב.
- כימות תגובות התנהגותיות הקשורות לפגיעה בעצב ולהתרגשותו.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- המודל כולל דיסקציה כירורגית של עצב השוקה (tibial nerve) בחולדות.
- הערכות התנהגותיות משתמשות בסיבי מונופילמנט של Von Frey למדידת היפראלגזיה.
- הניתוחים מבוצעים תחת מיקרוסקופ כירורגי סטריאוסקופי תוך שימוש בטכניקות דיסקציה מדויקות.
- הערכות פוסט-אופרטיביות מבוצעות בנקודת הבסיס, שבוע אחד ועד 12 שבועות לאחר הניתוח.
תוצאות עיקריות
- במחקר נמצא כי חולדות הפגינו רגישות מוגברת באתר הנוירומה 12 שבועות לאחר הניתוח.
- ארבעים וחמישה עד חמישים אחוזים מהחולדות הראו תגובות מוגברות לגירוי מכני לאחר הניתוח.
- נצפתה גם תת-רגישות, המעידה על שינויים בשיעורי התגובה לאורך זמן בהשוואה למדידות הבסיס.
מסקנות
- מחקר זה מדגים שיטה חדשה להערכת כאב מנוירומה ויעילותם של טיפולים.
- המודל מאפשר הבנות לגבי מנגנוני הכאב ותגובת הפגיעה בפגיעה בעצב הפריפרי.
- הוא מספק בסיס למחקרים עתידיים על אסטרטגיות לניהול כאב.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למנהלים
מודל החולדה להעתקת נוירומה של עצב השוקה (TNT) מאפשר כימות נפרד של כאב ספציפי לנוירומה וכאב כללי, ובכך תומך בהפחתת סיכונים מנגנוניים במחקר של כאב נוירופתי. מודל זה מספק פלטפורמה חסונה להערכת התערבויות כירורגיות ופארמקולוגיות המכוונות למודליות כאב שונות. יכולת השחזור שלו והאפשרות להערכה בשני אתרים משפרות את הביטחון החזוי עבור פיתוח טיפולים תרגומיים בכאב.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביופארמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- מאפשר בחינה של מנגנוני כאב על ידי בידוד של אלודניה המתווכת על ידי נוירומה והעצב הסורלי.
- תומך בתיקוף תפקודי של מטרות עבור משככי כאבים מועמדים והתערבויות כירורגיות.
- מסייע בהפחתת סיכונים מכניסטיים על ידי הבחנה בין תגובות כאב מקומיות לתגובות כלליות.
סריקה ופיתוח בדיקה (Assay)
- מספק מערכת in vivo מתוקפת לבדיקות התנהגותיות כמותיות של כאב באמצעות סיבי Von Frey.
- מאפשר מדידה הדירה של רגישות יתר מכנית באתרים אנטומיים שונים.
- תומך בסטנדרטיזציה של הבדיקה לצורך השוואה בין מחקרים ובין צוותים שונים.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- מתואם עם נקודות קצה של כאב נוירופתי רלוונטי למחלה שנצפו במקרי נוירומה קליניים.
- מאפשר רצף משלב תיקוף המטרה (target validation) בשלב הגילוי ועד לבדיקת יעילות פרה-קלינית של טיפולים לכאב.
- תומך בהחלטות קידום מבוססות ניהול סיכונים על ידי אספקת פנוטיפים של כאב עקביים וכמותיים.
שילוב תהליכי עבודה וצינורות עיבוד
מודל ה-TNT משתלב ברצף שבין הגילוי המוקדם לתיקוף הפרה-קליני במחקר של כאב נוירופתי, ומגשר בין מחקרים מכניסטיים להערכת מועמדים לתרגום קליני.
- ביולוגיה של גילוי: תומך בבדיקת השערות לגבי מעורבות של נתיבי כאב ומנגנונים ספציפיים לנוירומה.
- סריקה: מספק מדדי התנהגות כמותיים וספציפיים לאתר לצורך הערכת תרכובות או התערבויות.
- אנליטיקה: מאפשר השוואה סטטיסטית של תגובות כאב לאורך נקודות זמן וזרועות טיפול שונות.
- מחקר תרגומי: מספק פנוטיפים של כאב כרוני הרלוונטיים לכאב נוירומה קליני לצורך תיקוף פרה-קליני.
- שימוש חוזר ארגוני: מציע מודל סטנדרטי וניתן לשחזור שניתן להתאימו לתוכניות מחקר מגוונות בתחום הכאב.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון החיזוי בתיקוף מטרות כאב ובמחקרים מכניסטיים.
- ערך תפעולי: משפר את השחזוריות והסטנדרטיזציה של בדיקות התנהגותיות לכאב.
- ערך אסטרטגי: משפר את קבלת ההחלטות לגבי המשך או הפסקת פיתוח (go/no-go) של מועמדים לטיפול בכאב.
- השפעה על הפורטפוליו: תומך בתעדוף מותאם סיכונים של תוכניות להתערבויות כירורגיות ואנלגזיות.
שיקולי יישום
- דורש מומחיות במיקרו-כירורגיה והיכרות עם נוירו-אנטומיה של חולדות.
- נדרשת גישה לסטריאו-מיקרוסקופיה ותשתית לבדיקות התנהגותיות.
- דורש סטנדרטיזציה קפדנית של פרוטוקולים כירורגיים והתנהגותיים בין צוותים שונים.
- המודל מוגבל לחולדות; בדיקה של אתר הנוירומה אינה ישימה בעכברים.
- כ-20% מהחולדות עלולות לא לפתח נוירומה כואבת, מה שמצריך בחירה קפדנית של הקוהורט.
