Name: השתלה תוך צפקית ליצירת לוקמיה מיאלואידית חריפה בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T14:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: למדו להקים מודל של לוקמיה מיאלואידית חריפה בעכברים באמצעות הזרקה תוך צפקית של תאים לוקמיים. שיטה זו נוחה וזולה יותר מהשתלה תוך ורידית מסורתית, ומאפשרת מחקר אמין בתחום האונקולוגיה וההמטולוגיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים למתקן הליבה של ציטומטריית זרימה של מכון האק ולמתקן הליבה להיסטופתולוגיה של המעבדה לאבחון בעלי חיים, המחלקה למדעי הווטרינריה והביו-רפואה, אוניברסיטת פנסילבניה, על מתן תמיכה טכנית בזמן. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמכון האמריקאי לחקר הסרטן (KSP), מכללת פן סטייט למדעי החקלאות, מכון הסרטן פן סטייט, פרויקט USDA-NIFA 4771, הצטרפות מספר 00000005 ל- K.S.P. ו- R.F.P.

<ol><li>Dohner, H., Weisdorf, D. J., Bloomfield, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukemia.</a> The New England Journal of Medicine. 373 (12), 1136-1152 (2015).</li>
<li>Fortier, J. M., Graubert, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+and+Research%22%5BJournal%5D)">Murine models of human acute myeloid leukemia.</a> Cancer Treatment and Research. 145, 183-196 (2010).</li>
<li>Ernst, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definitive+hematopoiesis+requires+the+mixed-lineage+leukemia+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Definitive hematopoiesis requires the mixed-lineage leukemia gene.</a> Developmental Cell. 6 (3), 437-443 (2004).</li>
<li>Fisher, J. N., Kalleda, N., Stavropoulou, V., Schwaller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Impact+of+the+cellular+origin+in+acute+myeloid+leukemia%3A+learning+from+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Hemasphere%22%5BJournal%5D)">The Impact of the cellular origin in acute myeloid leukemia: learning from mouse models.</a> Hemasphere. 3 (1), 152(2019).</li>
<li>Zhan, Y., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cell+transplant+in+mice+by+intra-femoral+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cell transplant in mice by intra-femoral injection.</a> Methods in Molecular Biology. 430, 161-169 (2008).</li>
<li>Price, J. E., Barth, R. F., Johnson, C. W., Staubus, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+of+cells+and+monoclonal+antibodies+into+mice%3A+comparison+of+tail+vein+and+retroorbital+routes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Society+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Injection of cells and monoclonal antibodies into mice: comparison of tail vein and retroorbital routes.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology. 177 (2), 347-353 (1984).</li>
<li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Animal. 40 (5), 155-160 (2011).</li>
<li>Suckow, M. A., Danneman, P., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSuckow%2C+MA+%22The+Laboratory+Mouse%22">The Laboratory Mouse</a>. , CRC Press Inc. (2001).</li>
<li>Barr, J. E., Holmes, D. B., Ryan, L. J., Sharpless, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+the+chronic+cannulation+of+the+jugular+vein+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology%2C+Biochemistry%2C+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Techniques for the chronic cannulation of the jugular vein in mice.</a> Pharmacology, Biochemistry, and Behavior. 11 (1), 115-118 (1979).</li>
<li>Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cancer+stem+cell+metastasis+in+xenograft+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Analysis of cancer stem cell metastasis in xenograft animal models.</a> Methods in Molecular Biology. 568, 7-19 (2009).</li>
<li>Nungestee, W., Wolf, A., Jourdonais, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+gastric+mucin+on+virulence+of+bacteria+in+intraperitoneal+injections+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Society+for+Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effect of gastric mucin on virulence of bacteria in intraperitoneal injections in the mouse.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 30 (2), 120-121 (1932).</li>
<li>Gargiulo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+anesthesia%2C+analgesia%2C+and+part+I%3A+anesthetic+considerations+in+preclinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+journal%22%5BJournal%5D)">Mice anesthesia, analgesia, and part I: anesthetic considerations in preclinical research.</a> ILAR journal. 53 (1), 55-69 (2012).</li>
<li>Leong, S. -K., Ling, E. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labelling+neurons+with+fluorescent+dyes+administered+via+intravenous%2C+subcutaneous+or+intraperitoneal+route%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Labelling neurons with fluorescent dyes administered via intravenous, subcutaneous or intraperitoneal route.</a> Journal of Neuroscience Methods. 32 (1), 15-23 (1990).</li>
<li>Ma, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+injection+of+magnetic+Fe3O4-nanoparticle+induces+hepatic+and+renal+tissue+injury+via+oxidative+stress+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal injection of magnetic Fe3O4-nanoparticle induces hepatic and renal tissue injury via oxidative stress in mice.</a> International Journal of Nanomedicine. 7, 4809-4918 (2012).</li>
<li>Schwarze, S. R., Ho, A., Vocero-Akbani, A., Dowdy, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+protein+transduction%3A+delivery+of+a+biologically+active+protein+into+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">In vivo protein transduction: delivery of a biologically active protein into the mouse.</a> Science. 285 (5433), 1569-1572 (1999).</li>
<li>Muench, M. O., Chen, J. C., Beyer, A. I., Fomin, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+therapies+supplement%3A+the+peritoneum+as+an+ectopic+site+of+hematopoiesis+following+in+utero+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Cellular therapies supplement: the peritoneum as an ectopic site of hematopoiesis following in utero transplantation.</a> Transfusion. 51, Suppl_4 106-117 (2011).</li>
<li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+injection+of+mesenchymal+stem+cells+is+effective+in+treating+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Intravenous injection of mesenchymal stem cells is effective in treating liver fibrosis.</a> World Journal of Gastroenterology. 18 (10), 1048(2012).</li>
<li>Yousefi, F., Ebtekar, M., Soleimani, M., Soudi, S., Hashemi, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+in+vivo+immunomodulatory+effects+of+intravenous+and+intraperitoneal+administration+of+adipose-tissue+mesenchymal+stem+cells+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+%28EAE%29%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Comparison of in vivo immunomodulatory effects of intravenous and intraperitoneal administration of adipose-tissue mesenchymal stem cells in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE).</a> International Immunopharmacol. 17 (3), 608-616 (2013).</li>
<li>Cheng, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+bone+marrow-derived+MSCs+improves+cisplatinum-induced+renal+injury+through+paracrine+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Molecular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transplantation of bone marrow-derived MSCs improves cisplatinum-induced renal injury through paracrine mechanisms.</a> Experimental and Molecular Pathology. 94 (3), 466-473 (2013).</li>
<li>Castelo-Branco, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+but+not+intravenous+cryopreserved+mesenchymal+stromal+cells+home+to+the+inflamed+colon+and+ameliorate+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal but not intravenous cryopreserved mesenchymal stromal cells home to the inflamed colon and ameliorate experimental colitis.</a> PLoS One. 7 (3), 33360(2012).</li>
<li>Bazhanov, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneally+infused+human+mesenchymal+stem+cells+form+aggregates+with+mouse+immune+cells+and+attach+to+peritoneal+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneally infused human mesenchymal stem cells form aggregates with mouse immune cells and attach to peritoneal organs.</a> Stem Cell Research & Therapy. 7, 27(2016).</li>
<li>Liu, Q., Chen, L., Atkinson, J. M., Claxton, D. F., Wang, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atg5-dependent+autophagy+contributes+to+the+development+of+acute+myeloid+leukemia+in+an+MLL-AF9-driven+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">Atg5-dependent autophagy contributes to the development of acute myeloid leukemia in an MLL-AF9-driven mouse model.</a> Cell Death & Disease. 7 (9), 2361(2016).</li>
<li>Wognum, A. W., Eaves, A. C., Thomas, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+isolation+of+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Identification and isolation of hematopoietic stem cells.</a> Archives of Medical Research. 34 (6), 461-475 (2003).</li>
<li>Randall, T. D., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+population+of+cells+in+the+bone+marrow+that+phenotypically+mimics+hematopoietic+stem+cells%3A+resting+stem+cells+or+mystery+population%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Characterization of a population of cells in the bone marrow that phenotypically mimics hematopoietic stem cells: resting stem cells or mystery population.</a> Stem Cells. 16 (1), 38-48 (1998).</li>
<li>Gott, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+Cs-137+gamma+rays+and+320-kV+X-rays+in+a+mouse+bone+marrow+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Dose+Response%22%5BJournal%5D)">A comparison of Cs-137 gamma rays and 320-kV X-rays in a mouse bone marrow transplantation model.</a> Dose Response. 18 (2), 1559325820916572(2020).</li>
<li>Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+injection+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal injection of mice.</a> Applied Microbiology. 17 (2), 250-251 (1969).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neuroscience. 13 (1), 133-140 (2010).</li>
<li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (6), 655-658 (2014).</li>
<li>Ronan, J. L., Wu, W., Crabtree, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+neural+development+to+cognition%3A+unexpected+roles+for+chromatin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Review+Genetics%22%5BJournal%5D)">From neural development to cognition: unexpected roles for chromatin.</a> Nature Review Genetics. 14 (5), 347-359 (2013).</li>
<li>Qian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-4+treatment+reduces+leukemia+burden+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Interleukin-4 treatment reduces leukemia burden in acute myeloid leukemia.</a> FASEB Journal. 36 (5), 22328(2022).</li>
<li>Krivtsov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+from+committed+progenitor+to+leukaemia+stem+cell+initiated+by+MLL-AF9%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transformation from committed progenitor to leukaemia stem cell initiated by MLL-AF9.</a> Nature. 442 (7104), 818-822 (2006).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+transformation+initiated+by+Mll-AF9%3A+gene+dosage+and+critical+target+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Malignant transformation initiated by Mll-AF9: gene dosage and critical target cells.</a> Cancer Cell. 13 (5), 432-440 (2008).</li>
<li>Somervaille, T. C. P., Cleary, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+leukemia+stem+cells+in+murine+MLL-AF9+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of leukemia stem cells in murine MLL-AF9 acute myeloid leukemia.</a> Cancer Cell. 10 (4), 257-268 (2006).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין ניגוד עניינים.

מחקרים אלה המתוארים לעיל מספקים ראיות תומכות לכך שהשתלת תאי לין דומה לתאי LSK בדור של AML מורין 1°. בנוסף, הנתונים הנוכחיים מראים גם כי הזרקת I.P. היא שיטה יעילה ונוחה לביסוס AML מורין בהשוואה להזרקה תוך ורידית (או r.o.).
בנוסף לתאי LSK, אוכלוסיות אחרות כגון אב גרנולוציטים-מונוציטים (GMP), אב לימפואידי משותף (CLP) ואב מיאלואידי משותף (CMP) דווחו כמחליפים כתאי תורם בדור של AML המושרה על ידי MLL-AF9 ב-1° עם משכי דגירה שונים31,32,</s...

לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) היא סוג של ממאירות המטולוגית של אטיולוגיה מגוונת עם פרוגנוזה גרועה1. דור המודלים של AML בבעלי חיים מניח את היסודות להבנת הווריאציות המורכבות והפתולוגיה שלו במאמץ לגלות טיפולים חדשניים2. לוקמוגנזה בעכברים כוללת השתלה של תאי תורם המבטאים אונקופרוטאינים היתוך, כולל איחוי המערב את הגן לוקמיה שושלת מעורבת (MLL) כדי לגרום ל- AML בעוצמה, כדי לחקות את המחלה בבני אדם3. מקורות תאיים שונים של תאי תורם דווחו בהשתלת AML4 הקשור לגן MLL, כאשר מעט מאוד ידוע על התאים האחראים למקור המחלה.
פותחו מסלולים רבים להשתלה בעכברים; במקום זריקה תוך-פמורלית, המחדירה ישירות תאי תורם מוטנטיים למח עצם5, נעשה שימוש נרחב בזריקה תוך-ורידית המשתמשת במקלעת הסינוסים הוורידית, וריד הזנב ווריד הצוואר ליצירת מודלים 6,7,8,9 של AML. במקרה של הזרקת רטרו-אורביטל (r.o.), חסרונות מובנים שונים, כגון הגבלת נפח, ביקוש טכני גבוה, סיכויים מעטים לניסיונות חוזרים או טעויות, ופגיעות עיניים פוטנציאליות, היו אבני נגף עיקריות עם חלופות מוגבלות או ללא קיימות7. הזרקת ורידים זנב יכולה להיות בעיות דומות מלבד פציעות מקומיות; כדי להקל על ההליך, עכברים לעתים קרובות צריך להיות מחומם כדי להרחיב את ורידי הזנב שלהם10. כמו כן, קשה לאתר את וריד הזנב ללא מקור אור נוסף, במיוחד בזן C57BL/6 של עכברים. עבור הזרקת ורידים Jugular, אנשי המחקר דורשים הכשרה מספקת כדי לאתר את הווריד ולהגביל סיבוכים אפשריים. בנוסף, הן סינוס ורידי זריקות ורידים jugular צריך להתבצע תחת הרדמה, אשר מוסיף רמה נוספת של מורכבות. לכן, מפתה לחקור מסלולים חדשים להשתלה כדי להקל על הקמת מודלים של AML murine.
הזרקה תוך צפקית (i.p.) משמשת בדרך כלל למתן תרופות, צבעים והרדמה 11,12,13,14,15; הוא שימש גם להחדרת תאים המטופויטיים להמטופויזיס חוץ רחמי16 ולהשתלת תאי גזע מזנכימליים שמקורם במח עצם במודלים שונים של עכברים 17,18,19,20,21. עם זאת, הוא שימש לעתים רחוקות כדי לבסס ממאירויות hematopoietic בעכברים, במיוחד כדי לחקור את התקדמות מחלת AML.
המחקר הנוכחי מתאר את ההיתכנות של הזרקת i.p. בדור של מודלים של עכברי AML, בנוסף להשוואת יעילות ההשתלה של אוכלוסיות שליליות בשושלת (Lin-) ו- Lin-Sca-1+c-Kit+ (LSK) כתאי תורם. ממצאים אלה מספקים דרך פשוטה ויעילה ליצור מודלים ניסיוניים של AML ולוקמיה מיאלואידית קשורה. לשיטה כזו יש פוטנציאל לקדם את הבנתנו את מנגנוני המחלה, כמו גם לספק מודל קל יחסית לבדיקת טיפולים ניסיוניים.

<table><tbody><tr><td>א-בחר תאים מוסמכים&nbsp;</td><td>Bioline</td><td>BIO-85027</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום כלוריד (NH4Cl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# A-9434</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# A0797</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין סרום בקר (BSA), Fraction V&mdash; מוצרים ביולוגיים בדרגת אנדוטוקסין נמוכה</td><td>מזל תאומים</td><td>Cat# 700-102P</td><td></td></tr><tr><td>Ciprofloxacin HCl</td><td>GoldBio.com</td><td>Cat# C-861-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, גלוקוז גבוה, ללא גלוטמין</td><td>Gibco</td><td>Cat# 11960-044</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s תמיסת מלח פוספט (PBS)</td><td>קורנינג</td><td>Cat# 21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>EDTA, מלח דיסודיום (EDTA-2Na), דיהידרט, ביולוגיה מולקולרית כיתה</td><td>Calbiochem</td><td>Cat# 324503</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי - Premium Select</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>Cat# S11550</td><td></td></tr><tr><td>Holo-transferrin, בקר</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>Cat# T1283</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת אינסולין סיגמא אנושית</td><td></td><td>Cat# I-9278</td><td></td></tr><tr><td>Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM)</td><td>Gibco</td><td>Cat# 12440-053</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine 200 מ"מ (100&) תמיסת</td><td>HyClone, Gelifesciences</td><td>Cat# SH30034.01</td><td></td></tr><tr><td>LB מרק, Lennox</td><td>NEOGEN</td><td>Cat #: 7290A</td><td></td></tr><tr><td>LB מרק עם אגר (מילר)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# L-3147</td><td></td></tr><tr><td>עכבר נגד עכבר CD45.1 (FITC)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Cat# 130-124-211</td><td></td></tr><tr><td>עכבר אינטרלוקין-3 (IL-3)</td><td>מוצרי ביו של ג'מיני</td><td>Cat# 300-324P</td><td></td></tr><tr><td>עכבר אינטרלוקין-6 (IL-6)</td><td>מוצרים ביולוגיים של ג'מיני</td><td>Cat# 300-327P</td><td></td></tr><tr><td>גורם תאי גזע של עכבר (SCF)</td><td>מוצרים ביולוגיים של ג'מיני</td><td>Cat# 300-348P</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת פניצילין-סטרפטומיצין, 100x</td><td>קורנינג</td><td>Cat# 30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>תאי Phenix-Eco (pECO) ATCC</td><td></td><td>CRL-3214</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן ביקרבונט (KHCO3), גרגירי</td><td>JT. Baker</td><td>Cat# 2940-01</td><td></td></tr><tr><td>חולדה נגד עכבר CD117 (c-kit) (APC)</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>חתול # 105812</td><td></td></tr><tr><td>חולדה נגד עכבר Ly-6A/E (SCA-1) (PE-Cy7)</td><td>BD Pharmingen</td><td>Cat# 558162</td><td></td></tr><tr><td>עכברים רקומביננטיים Flt3-Ligand</td><td>Pepro Tech, INC.</td><td>Cat# 250-31L</td><td></td></tr><tr><td>RetroNectin שבר פיברונקטין אנושי רקומביננטי</td><td>TaKaRa</td><td>Cat# T100A</td><td></td></tr><tr><td>TransIT-293 Reagent</td><td>MirusBio</td><td>Cat# MIR 2705</td><td></td></tr><tr><td>TRI Reagent</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# T9424</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת טריפן כחולה, 0.4%</td> <td>Gibco</td><td>Cat # 15250061</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%), פנול אדום</td><td>Gibco</td><td>Cat# 25200-056</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoethanol (BME)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# M3148</td><td></td></tr><tr><td><חזק>בדיקות מסחריות&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EasySep עכבר המטופויאטי ערכת בידוד תאי אב&nbsp;</td><td>טכנולוגיות StemCell</td><td>Cat# 19856A</td><td></td></tr><tr><td>ערכת שעתוק הפוך cDNA בעלת קיבולת גבוהה&nbsp;</td><td>תרמו פישר&nbsp;</td><td>Cat# 4368813</td><td></td></tr><tr><td>PerfeCTa qPCR SuperMix</td><td>Quanta Bio</td><td>Cat# 95051-500</td><td></td></tr><tr><td>ערכת מקסי פלסמיד (25)</td><td>Qiagen</td><td>Cat#:12163<</td><td></td></tr><tr><td>strong>Animals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ai14TdTomato mice</td><td>Jackson Laboratory</td><td>Strain # 007914</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1 C57BL6/J עכברים& נ.ב.פ;</td>זן <td>מעבדה ג'קסון</td><td># 002014</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2 C57BL6/J עכברים&nbsp;</td><td>Jackson Laboratory</td><td>Strain # 000664</td><td></td></tr><tr><td>Instruments and Softwares</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adobe illustrator&nbsp;</td><td>גרסה 25.2.3</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD accuri C6 זרימה ציטומטר</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlowJo 10.8.0</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GeneSys תוכנה&nbsp;</td><td>גרסה 1.5.7.0</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism גרסה 6&nbsp;</td><td>GraphPad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>המווה 950FS&nbsp;</td><td>Drew Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7300 מערכת PCR בזמן אמת</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Syngene G:BOX Chemi XR5 כימילומינסנציה הדמיה פלואורסצנטית</td><td>G:Box Chemi</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

השתלה תוך צפקית ליצירת לוקמיה מיאלואידית חריפה בעכברים

Intra-Peritoneal Transplantation for Generating Acute Myeloid Leukemia in Mice

קיים צורך בלתי מסופק בטיפולים חדשניים לטיפול בלוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) והישנות הנלווית הכוללת תאי גזע לוקמיה מתמשכת (LSCs). מודל ניסיוני של מכרסמים AML לבדיקת טיפולים המבוססים על השתלה מוצלחת של תאים אלה באמצעות זריקות רטרו-מסלוליות בעכברים מושתלים טומן בחובו אתגרים. מטרת מחקר זה הייתה לפתח שיטה קלה, אמינה ועקבית ליצירת מודל מורין חזק של AML באמצעות מסלול תוך פריטוניאלי. בפרוטוקול הנוכחי, תאי מח עצם הומרו עם רטרו-וירוס המבטא אונקופרוטאין היתוך MLL-AF9 אנושי. נבדקה יעילותן של אוכלוסיות שליליות בשושלת (Lin-) ו- Lin-Sca-1+c-Kit+ (LSK) כ- LSCs תורמים בפיתוח AML ראשוני, והזרקה תוך צפקית אומצה כשיטה חדשה ליצירת AML. השוואה בין זריקות תוך פריטוניאליות ורטרו-אורביטליות נעשתה בהשתלות סדרתיות כדי להשוות ולהשוות בין שתי השיטות. תאי לין ו-LSK שהותמרו עם נגיף MLL-AF9 אנושי הושתלו היטב במח העצם ובטחול של המושתלים, מה שהוביל ל-AML במלוא מובן המילה. הזרקה תוך-צפקית של תאי תורם ביססה AML במושתלים לאחר השתלה סדרתית, וחדירת תאי AML זוהתה בדם, במח העצם, בטחול ובכבד של המושתלים על ידי ציטומטריית זרימה, qPCR וניתוחים היסטולוגיים. לפיכך, הזרקה תוך צפקית היא שיטה יעילה להשראת AML באמצעות השתלה סדרתית של תאים לוקמיים מתורם.

השוואה של יעילות ההשתלה של תאי AML מורין באמצעות r.o. ו- I.P. נתיבי השתלה בעבר, דווח על הקמת AML של 1° בעכברים מושתלים שהושתלו רטרו עם תאי LSK מומרים MLL-AF9, ויכולת ההשתלה של תאי AML 1° הודגמה על ידי השתלה סדרתית30. המחקר הנוכחי הוא הראשון להעריך את האפשרות להשתמש בתאי מח עצם לביצוע השתלה. הנוכחות של לויקוציטוזה חריגה (איור 2A) והסננה מוגברת של תאים לוקמיים (CD45.1+) במח העצם ובטחול (איור 2B) תומכים בהיתכנות<strong class="xfi...

כאן, הזרקה תוך פריטוניאלית של תאי לוקמיה מנוצלת כדי לבסס ולהפיץ לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) בעכברים. שיטה חדשה זו יעילה בהשתלה סדרתית של תאי AML ויכולה לשמש חלופה למי שעלול לחוות קשיים וחוסר עקביות עם הזרקה תוך ורידית בעכברים.

There is an unmet need for novel therapies to treat acute myeloid leukemia (AML) and the associated relapse that involves persistent leukemia stem cells ...

פרוטוקול זה משמעותי מכיוון שלתאים שליליים לין ותאי SK שבודדו מאותם עכברים תורמים לא היה הבדל נראה לעין ביצירת AML המושרה על ידי MLL-AF9. כמו כן, הזרקת IP של תאים לוקמיים יכולה לפתח בהצלחה מודל עכבר של AML. בהשוואה לשיטות השתלה קונבנציונליות, טכניקה זו נוחה יותר וזולה יותר.כדי להתחיל, לעקר את העכבר CD45.1 נקבה C57BL/6J בן 8 עד 10 שבועות עם 70% אתנול. הניחו את העכבר על כרית ניתוחים סטרילית על לוח קלקר ונעצו את הרגליים דרך כריות כפות העכבר. חותכים את העור מעל חלל הבטן בקו האמצע ומרחיבים את החלל התת עורי לכיוון הרגליים האחוריות בעזרת מספריים סטריליים חדים.האריכו את החתך מקו האמצע של הבטן עד לקרסוליים והרחיבו את החלל התת עורי מתחת לרגליים האחוריות בעזרת להבי מספריים חדים. חותכים את גיד אכילס עם מספריים חדים. החזיקו את הגיד באמצעות מלקחיים עם שיניים וחתכו את הקצה השני המחובר לעצם הירך כדי להסיר את שריר הגסטרוקנמיוס.חותכים את גיד הארבע ראשי המחובר לברך בעזרת מספריים חדים. החזיקו את הגיד וחתכו את ראש השריר המחובר לעצם הירך כדי להסיר את שריר הגסטרוקנמיוס. חותכים את השרירים האחרים המקיפים את עצם הירך בקצה המחובר לשוקה.לאחר מכן, לחתוך את הקרסול עם מספריים חדים, להבטיח כי השוקה נשאר שלם. החזיקו את הקצה הדיסטלי של עצם הירך וחתכו את מפרק הירך במספריים חדים, כדי להבטיח שראש עצם הירך יישאר שלם. מעבירים את עצם העצם ואת עצם הירך לחיץ זרימה בצינור של 15 מיליליטר.להפריד את השוקה ואת עצם הירך על ידי שבירת הברך ביד. הסר את הפטלה, הסחוס וקונדיל הירך כדי לחשוף את הרמה הטיביאלית ואת עצם הירך הדיסטלית. הסר את השרירים באמצעות גזה סטרילית והשרה את העצמות בחיץ זרימה.חותכים את צוואר הירך ושוטפים את תאי מח העצם עם חיץ זרימה משני קצוות עצם הירך באמצעות מזרק 10 מיליליטר עם מחט 23 מד. לאחר מכן, לחתוך את malleolus tibial ולשטוף את תאי מח העצם עם חיץ זרימה משני הקצוות של השוקה. לפזר את התאים על ידי pipeting למעלה ולמטה באמצעות מזרק 10 מיליליטר עם מחט 18 מד.צנטריפוגו את המתלה החד-תאי בארבע מעלות צלזיוס וב-400 גרם למשך שלוש דקות. השליכו את הסופרנאטנט והשהו מחדש את התאים בחמישה מיליליטר של תאי דם אדומים, או RBC, חיץ ליזיס כדי לשכב את RBCs למשך שלוש דקות. הוסף חמישה מיליליטר של חיץ זרימה כדי לעצור את הליזה.לאחר מכן צנטריפוגו את מתלה התא והשהו מחדש את הגלולה בחמישה מיליליטר של חיץ זרימה. מניחים מסננת תאים של 70 מיקרון על צינור של 50 מיליליטר ומעבירים את המתלה דרך המסננת כדי לאסוף את התאים. כוונן את ריכוז התא עם חיץ זרימה לאחת פעמים 10 לשמונה למיליליטר בצינורות פוליפרופילן תחתונים עגולים.בחר תאים שליליים לשושלת באמצעות ערכת בידוד תאים המטופויטיים של עכבר בהתאם להוראות היצרן. לאחר שסיימתם, צנטריפוגו את תאי הגזע ההמטופויטיים הממוינים ואת התאים השליליים של השושלת הלא ממוינת והשהו מחדש בשלושה מיליליטר של פי 2 ציטוקינים, מדיה IMDM, ושלושה מיליליטר של סופרנאטנט ויראלי בצלחת מצופה רטרו-רדוקציה. לדגור על המנה באינקובטור לח של 5% פחמן דו חמצני בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 6 או 24 שעות.לאחר הטרנסדוקציה, קצרו את התאים בצנטריפוגה. במידת הצורך, השתמש טריפסין כדי לאסוף את התאים המחוברים לתחתית הצלחת. השליכו את הסופרנאטנט והשעו מחדש את הגלולה ב-PBS שחומם מראש.הזריקו תאים לעכבר המושתל הראשי רטרו-אורביטלית או תוך צפקית עם חצי מחט של 27 מד. נטר את העכבר מדי יום. לאחר חודש, לאסוף דם מדי שבוע על ידי דימום רטרו-אורביטלי כדי לפקח על לויקוציטוזה על ידי הערכת ספירת הדם המלאה על HEMAVET.Proptose את העין עם האגודל ואת האצבע המורה, ולאחר מכן לחדור את מקלעת הסינוס ורידי עם צינור נימי hematocrit סטרילי דרך canthus הפנימי. לאסוף 20 עד 25 מיקרוליטר של דם לתוך צינור איסוף דם EDTA ולסגור את העפעפיים כדי לעצור את הדימום. החל טיפה אחת של תמיסה אופתלמית ג gentamycin סולפט על העין.כאשר תאי הדם הלבנים מגיעים ארבע פעמים 10 לארבעת התאים למיקרוליטר, בודדו את תאי מח העצם על ידי שטיפת עצם הירך והטיביאס עם חיץ זרימה, ואחריו ליזה RBC כפי שתואר קודם לכן. לאחר מכן, כדי לקצור את הטחול, הניחו את העכבר על כרית כירורגית סטרילית על לוח קלקר ונעצו את הרגליים דרך כריות כפות העכבר. לעקר את העכבר עם 70% אתנול.חותכים את העור והשריר בקו האמצע כדי לחשוף את חלל הבטן עם מספריים סטריליים חדים. בודדו את הטחול והכניסו אותו למאגר זרימה בצינור של 15 מיליליטר. ערבבו את הטחול דרך מסננת של 70 מיקרון בצלחת של שישה סנטימטרים עם שלושה מיליליטר של חיץ זרימה.מעבירים את התאים מהצלחת לצינור של 15 מיליליטר, ואז צנטריפוגו את המתלה החד-תאי, משליכים את הסופרנטנט ומשעיפים מחדש את הגלולה בחמישה מיליליטר של חיץ ליזיס RBC למשך שלוש דקות. הוסף חמישה מיליליטר של חיץ זרימה כדי לעצור את הליזיס וצנטריפוגה את מתלה התא. השהה מחדש את הגלולה בחמישה מיליליטר של חיץ זרימה, ערבב ועבור דרך מסננת תאים של 70 מיקרון כדי לאסוף תאים לתוך צינור 50 מיליליטר.זיהוי תאי לוקמיה מיאלואידית חריפה ראשונית, או AML, על ידי צביעת הטחול ותאי מח העצם עם נוגדן CD45.1 מצומד נגד עכבר FITC וזיהוי על ציטומטר זרימה. התאים מגודרים תחילה על FSC-A, FSC-H ו- FSC-A, SSC-A, כדי לרכוש סינגלטים. האוכלוסייה החיובית CD45.1 מגודרת על חלקת FL1 על ידי השוואתה לתאים לא מוכתמים.להשתלה שניונית, השהה מחדש תאים ספלניים CD45.1 AML ממושתלים רטרו-אורביטליים ראשוניים ב- PBS והזריק אותם רטרו-אורביטלית לעכבר זכר CD45.2. נוכחות של לויקוציטוזה חריגה וחדירה מוגברת של תאים לוקמיים במח העצם ובטחול תומכת בהיתכנות של שימוש בתאים שליליים לשושלת מח העצם ליצירת AML ראשוני. לא נצפו הבדלים משמעותיים בנמענים ראשוניים שתורגמו עם LSK או תאים שליליים לשושלת.תאי AML התפשטו בחלל הבטן של מושתלים ראשוניים על ידי לוקמיה מעורבת של שושלת או תאים שליליים לשושלת MLL-AF9. תוצאות אלה גם אישרו את הקמתו של AML ראשוני באמצעות הזרקה תוך צפקית של תאים שליליים לשושלת מח עצם MLL-AF9 בצורה של לויקוציטוזה ונוכחות של תאי AML במח העצם ובטחול של עכברים מושתלים. עם זאת, השתלה ראשונית באמצעות הזרקה תוך צפקית לקחה זמן רב יותר לפתח AML מאשר באמצעות הזרקה רטרו-אורביטלית למרות מספר זהה של תאי תורם.המושתלים המשניים הראו לויקוציטוזה והפטוספלנומגליה משמעותית תוך פחות מחודש לאחר ההשתלה. תאי AML התגלו גם בדם ההיקפי, במח העצם ובטחול, כמו גם בחלל הצפק. הזרקה תוך-צפקית של שמונה פעמים 10 לחמשת תאי AML השיגה קליטה דומה להזרקה רטרו-אורביטלית של שמונה פעמים 10 לחמש AML.העכברים המושתלים השלישוניים הציגו סימני AML חריפים כולל לויקוציטוזה והפטוספלנומגליה, נוכחות תאים לוקמיים בדם, מח העצם והטחול, תצפית היסטולוגית של עצם הירך והטחול הדגימה עוד יותר את חדירת התאים הלוקמיים. בהשוואה להשתלות השניוניות והשלישוניות, ההשתלה השלישונית התקדמה הרבה יותר מהר מההשתלה השניונית. עבור המודל הנוכחי, מיון תאי LSK הוא מיותר.תאים שליליים לין יכול להיות מומר עם וירוס AML במשך 6 שעות או 24 שעות. זה לא ישפיע על היעילות של הקמת המודל.

intra-peritoneal-transplantation-for-generating-acute-myeloid

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

בסרטון זה, אנו מבצעים הזרקה תוך צפקית של תרחיף תאי סרטן השחלות במודל עכבר כדי לחקור את ההתיישבות של תאי סרטן השחלות ברקמות שומן הצפק ואת גרורותיהן לאחר מכן.

הזרקה תוך צפקית של תאים: שיטה להעברת תאים סרטניים לרקמת השומן הצפקית של מודל מורין

סרטון זה מדגים את השראת מחלת השתל נגד המאכסן של המעי, GvHD, בעכבר מושתל המוקרן באופן קטלני באמצעות תאי גזע המטופויטיים אלוגניים ולימפוציטים מסוג T אלוריאקטיביים מעוררי GvHD. פרוטוקול זה מסייע לבסס מודל GvHD חמור במעי כדי להבין את מנגנון המחלה ולפתח אפשרויות טיפוליות חדשניות.

השראת מחלת השתל לעומת המאכסן במודלים של עכברים באמצעות השתלת מח עצם אלוגנית והשתלת תאים טחול

אנו מתארים פרוטוקול לפיו התניה של בוסולפן מאפשרת להחליף את מח העצם של עכבר נמען בתאי מח עצם מעכברים תורמים המבטאים בכל מקום חלבון פלואורסצנטי ירוק, בהיעדר הקרנה. טכניקה זו שימושית לחקר הצטברות תאי מח עצם במערכת העצבים המרכזית.

Busulfan כסוכן Myelosuppressive ליצירת ברמה גבוהה יציבה מח עצם chimerism בעכברים

מיקרוסקופ זריחה intravital (IVFM) של החילונית מוחל בשילוב עם דגמים גנטיים בעלי חיים כדי ללמוד את יונת ואת engraftment של תאים hematopoietic גומחות מח עצם (מוניטור).

שילוב של מיקרוסקופ פלואורסצנטי Intravital (IVFM) עם דגמים גנטיים בחקר דינמיקה Engraftment Hematopoietic תאים במח העצם נישות

כתב יד זה מספק תיאור של המתודולוגיה המשמשת להקמת מודלים של עכברי התמרה-השתלה. ניתן תיאור מפורט של טעויות טכניות שיש להימנע מהן בעת ביצוע השתלות מח עצם. יש להשיג הבנה ברורה של החשיבות של טיטר ויראלי גבוה, טרנספקציה/התמרה והקרנה.

התמר-השתלה במודל עכבר של מחלה מיילופרוליפרטיבית

כאן, אנו מתארים פרוטוקול שבו מודל xenograft הנגזר מחולה לוקמיה לימפובלסטית חריפה משמש כאסטרטגיה להערכה וניטור רעילות הקשורה לקולטן אנטיגן כימרי ממוקד CD19 תאי T.

הערכה של רעילות הקשורה לקולטן אנטיגן כימרי T באמצעות מודל עכבר קסנוגרפט שמקורו בלוקמיה לימפובלסטית חריפה

פרוטוקול זה מתאר הזרקה תוך-פמורלית של כמה תאי גזע המטופויטיים או לוקמיים, כולל תאים ערוכים גנטית, במודלים של קסנוגרפט מורין, אשר לא רק יאפשרו השתלה מהירה ובטוחה של תאים אלא גם ניתוחים סדרתיים של מח העצם.

הזרקות תוך עצם הירך הפשוטות באמצעות עכברים חיים מאפשרות ניתוח רציף של מח עצם

זריקות תוך פמורליות מאפשרות קליטה של מספר קטן של תאי גזע ותאי אב המטופויטיים (HSPCs), על ידי הצבת התאים ישירות בחלל מח העצם. כאן אנו מתארים פרוטוקול ניסיוני של הזרקה תוך-פמורלית של HSPCs אנושיים לעכברים מדוכאי חיסון.

הזרקה תוך-פמורלית של תאי גזע ותאי אב המטופויטיים אנושיים לעכברים מדוכאי חיסון 

כאן, מתוארת שיטה מבוססת ציטומטריית פוספופלואו לניתוח איתות במורד הזרם של מסלולי mTORC1, JAK/STAT5 ו-MAPK בתאי לוקמיה מיאלואידית אנושית חריפה שהושתלו בעכברים ומתקבלים מאספיראטים של מח עצם. רמות p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 ו-p-ERK1/2 נמדדות בו זמנית באמצעות ציטומטר זרימה ספקטרלי מהדור הבא עם רגישות גבוהה.

ציטומטריית פוספו-פלואו תוך-תאית של השתלות קסנו-השתלות שמקורן בלוקמיה מיאלואידית חריפה

הפרוטוקול נועד לתאר מודל עכברי ליצירת הישנות של לוקמיה לימפובלסטית חריפה, בהתבסס על הדינמיקה של התגובה לכימותרפיה אינדוקציה.

מודל עכברי של הישנות לוקמיה לכימותרפיה אינדוקציה ללוקמיה לימפובלסטית חריפה

פרוטוקול זה מדגים הזרקת וריד טמפורלי למתן תאי סרטן ילדים לתוך-ורידיים לעכברים יילודים, ומאפשר מודל מדויק וניתן לשחזור של תגובות חיסוניות בחיים המוקדמים נגד סרטן. השיטה מאפשרת הערכה של השפעת התערבויות, כגון אימונומודולציה או טיפול, כאשר הן מיושמות במהלך תקופת הניואונטל.

מודל השתלה תוך-ורידית יילודים להערכת פעילות חיסונית מוקדמת נגד תאי סרטן

למדו להקים מודל של לוקמיה מיאלואידית חריפה בעכברים באמצעות הזרקה תוך צפקית של תאים לוקמיים. שיטה זו נוחה וזולה יותר מהשתלה תוך ורידית מסורתית, ומאפשרת מחקר אמין בתחום האונקולוגיה וההמטולוגיה.

השתלה תוך צפקית ליצירת לוקמיה מיאלואידית חריפה בעכברים

גלה סרטונים נוספים