Name: יצירה וטיפוח של אורגנואידים שמקורם בסרטן השחלות הסרוסי ברמה גבוהה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T14:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: למד ליצור ולטפח אורגנואידים ממקור סרטני בשחלה סרוסי ברמה גבוהה. שיטה זו מאפשרת חקר תרופות חדשניות וזיהוי ביומרקרים חזויים במודל תלת-ממדי מדויק.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו אסירי תודה על הדרכתו של רון בוס, MD, PhD, ועל עזרתה של ברברה בלאחוט, MD, בביסוס פרוטוקול זה. ברצוננו גם להודות לבית הספר לרפואה של אוניברסיטת וושינגטון במחלקה למיילדות וגינקולוגיה בסנט לואיס ולמחלקה לאונקולוגיה גינקולוגית, לתוכנית מלגות הדיקן של אוניברסיטת וושינגטון ולתוכנית לפיתוח מדעני פוריות על תמיכתם בפרויקט זה.

<ol><li>Bray, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+statistics+2018%3A+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (6), 394-424 (2018).</li>
<li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Organoids in cancer research.</a> Nature Reviews Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li>
<li>Pauli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+in+vitro+and+in+vivo+cancer+models+to+guide+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Personalized in vitro and in vivo cancer models to guide precision medicine.</a> Cancer Discovery. 7 (5), 462-477 (2017).</li>
<li>Fujii, E., Kato, A., Suzuki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+%28PDX%29+models%3A+Characteristics+and+points+to+consider+for+the+process+of+establishment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft (PDX) models: Characteristics and points to consider for the process of establishment.</a> Journal of Toxicologic Pathology. 33 (3), 153-160 (2020).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+ovarian+cancer+organoids+in+precision+medicine%3A+Key+challenges+and+current+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Application of ovarian cancer organoids in precision medicine: Key challenges and current opportunities.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 701429(2021).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids%3A+A+promising+model+for+personalized+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology+Report%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids: A promising model for personalized cancer treatment.</a> Gastroenterology Report. 6 (4), 243-245 (2018).</li>
<li>Karakasheva, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+characterization+of+patient-derived+head+and+neck%2C+oral%2C+and+esophageal+cancer+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Stem+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Generation and characterization of patient-derived head and neck, oral, and esophageal cancer organoids.</a> Current Protocols in Stem Cell Biology. 53 (1), 109(2020).</li>
<li>Madison, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Let-7+represses+carcinogenesis+and+a+stem+cell+phenotype+in+the+intestine+via+regulation+of+Hmga2%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Let-7 represses carcinogenesis and a stem cell phenotype in the intestine via regulation of Hmga2.</a> PLoS Genetics. 11 (8), 1005408(2015).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li>
<li>Murray, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HER2+and+APC+mutations+promote+altered+crypt-villus+morphology+and+marked+hyperplasia+in+the+intestinal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">HER2 and APC mutations promote altered crypt-villus morphology and marked hyperplasia in the intestinal epithelium.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 12 (3), 1105-1120 (2021).</li>
<li>Hill, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+DNA+repair+inhibitor+response+in+short-term+patient-derived+ovarian+cancer+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Prediction of DNA repair inhibitor response in short-term patient-derived ovarian cancer organoids.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1404-1421 (2018).</li>
<li>Passarelli, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leucyl-tRNA+synthetase+is+a+tumour+suppressor+in+breast+cancer+and+regulates+codon-dependent+translation+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Leucyl-tRNA synthetase is a tumour suppressor in breast cancer and regulates codon-dependent translation dynamics.</a> Nature Cell Biology. 24 (3), 307-315 (2022).</li>
<li>Pleguezuelos-Manzano, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+culture+of+human+intestinal+organoids+derived+from+adult+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Establishment and culture of human intestinal organoids derived from adult stem cells.</a> Current Protocols in Immunology. 130 (1), 106(2020).</li>
<li>Stumm, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+a+postfixation+tissue+storage+and+transport+medium+to+preserve+histopathology+and+molecular+pathology+analyses+%28total+and+phosphoactivated+proteins%2C+and+FISH%29%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Validation of a postfixation tissue storage and transport medium to preserve histopathology and molecular pathology analyses (total and phosphoactivated proteins, and FISH).</a> American Journal of Clinical Pathology. 137 (3), 429-436 (2012).</li>
<li>Feldman, A. T., Wolfe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+processing+and+hematoxylin+and+eosin+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Tissue processing and hematoxylin and eosin staining.</a> Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).</li>
<li>Ooft, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+can+predict+response+to+chemotherapy+in+metastatic+colorectal+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids can predict response to chemotherapy in metastatic colorectal cancer patients.</a> Science Translational Medicine. 11 (513), (2019).</li>
<li>Aisenbrey, E. A., Murphy, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+alternatives+to+Matrigel%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Materials%22%5BJournal%5D)">Synthetic alternatives to Matrigel.</a> Nature Reviews Materials. 5 (7), 539-551 (2020).</li>
<li>Nanki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+ovarian+cancer+organoids+capture+the+genomic+profiles+of+primary+tumours+applicable+for+drug+sensitivity+and+resistance+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Patient-derived ovarian cancer organoids capture the genomic profiles of primary tumours applicable for drug sensitivity and resistance testing.</a> Scientific Reports. 10, 12581(2020).</li>
<li>Mead, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+for+modulators+of+the+cellular+composition+of+gut+epithelia+via+organoid+models+of+intestinal+stem+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Screening for modulators of the cellular composition of gut epithelia via organoid models of intestinal stem cell differentiation.</a> Nature Biomedical Engineering. 6 (4), 476-494 (2022).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

סרטן השחלות קטלני ביותר בשל השלב המתקדם שלו באבחון, כמו גם ההתפתחות הנפוצה של עמידות לכימותרפיה. התקדמות רבה במחקר סרטן השחלות נעשתה על ידי שימוש בקווי תאים סרטניים ומודלים PDX; עם זאת, יש צורך ברור במודל ייצוגי יותר ובמחיר סביר יותר במבחנה . PDOs הוכיחו שהם מייצגים במדויק את ההטרוגניות של הגידול, את המיקרו-סביבה של הגידול ואת התכונות הגנומיות והשעתוק של הגידולים העיקריים שלהם, ולכן הם מודלים פרה-קליניים אידיאליים לגישות מחקר מגוונות, כגון יישום מודלים אורגנואידים בטיפול תרופתי16.
<p ...

בשנת 2021, כ-21,410 נשים בארה"ב אובחנו לאחרונה עם סרטן שחלות אפיתל, ו-12,940 נשים נפטרו ממחלה זו1. למרות התקדמות מספקת נעשו בניתוחים וכימותרפיה, מעל 70% מהחולים עם מחלה מתקדמת לפתח עמידות כימותרפית למות בתוך 5 שנים של אבחנה 2,3. לפיכך, יש צורך דחוף באסטרטגיות חדשות לטיפול במחלה קטלנית זו ובמודלים מייצגים ואמינים למחקר פרה-קליני.
קווי תאים סרטניים וקסנוגרפטים שמקורם במטופלות (PDX) שנוצרו מגידולים ראשוניים בשחלות הם המכשירים העיקריים המשמשים במחקר סרטן השחלות. יתרון מרכזי של קווי תאים סרטניים הוא ההתרחבות המהירה שלהם. עם זאת, התרבית המתמשכת שלהם גורמת לשינויים פנוטיפיים וגנוטיפיים הגורמים לקווי התאים הסרטניים לסטות מדגימת הגידול הסרטני הראשונית המקורית. בשל ההבדלים הקיימים בין קו התאים הסרטניים לבין הגידול הראשוני, בדיקות תרופות שיש להן השפעות חיוביות בשורות תאים אינן מצליחות להשיג את אותן השפעות בניסויים קליניים2. כדי להתגבר על מגבלות אלה, מודלים PDX משמשים. מודלים אלה נוצרים על ידי השתלת רקמת סרטן שחלה טרייה בעכברים מדוכאי חיסון. מכיוון שהם מודלים in vivo , הם דומים יותר למאפיינים ביולוגיים אנושיים, ובתורם, מנבאים יותר את תוצאות התרופות. עם זאת, למודלים אלה יש גם מגבלות משמעותיות, כולל העלות, הזמן והמשאבים הדרושים כדי לייצר אותם4.
PDOs מציעים מודל חלופי למחקר פרה-קליני המתגבר על המגבלות של קווי תאים סרטניים ומודלים של PDX. PDOs משחזרים את הגידול ואת המיקרו-סביבה של המטופל, ובכך מספקים מודל טרקטיבי במבחנה אידיאלי למחקר פרה-קליני 2,3,5. למודלים תלת-ממדיים אלה יש יכולות ארגון עצמי המדמים את הגידול הראשוני, תכונה שאין לעמיתיהם בקו התא הדו-ממדי (2D). יתר על כן, מודלים אלה הוכחו כמייצגים גנטית ותפקודית את גידולי האב שלהם, ולכן הם מודלים אמינים לחקר טיפולים חדשניים ותהליכים ביולוגיים. בקיצור, הם מציעים יכולות הרחבה ואחסון ארוכות טווח הדומות לקווי תאים, אך גם מקיפות את המיקרו-סביבה ואת אינטראקציות התא-תא הטבועות בדגמי עכברים 4,6.
הפרוטוקול הנוכחי מתאר את היצירה של PDOs מגידולים, מיימת ודגימות נוזל פלאורלי שמקורם במטופל עם שיעור הצלחה גבוה מ-97%. לאחר מכן ניתן להרחיב את תרביות ה-PDO למשך דורות רבים ולהשתמש בהן לבדיקת רגישות לטיפול תרופתי וסמנים ביולוגיים מנבאים. שיטה זו מייצגת טכניקה שניתן להשתמש בה כדי להתאים אישית טיפולים המבוססים על התגובות הטיפוליות של PDOs.

<table><tbody><tr><td>1% HEPES</td><td>Life Technologies</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>1% פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Fisher Scientific</td><td>30002CI</td><td></td></tr><tr><td>1.5 מ"ל שפופרות אפנדורף&nbsp;</td><td>Genesee Scientific</td><td>14125</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית רקמות 10 ס"מ&nbsp;</td><td>TPP</td><td>93100</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל פיפט</td><td></td><td></td><td></td>סרולוגי</tr><tr><td>100 ומיקרו; m מסנן תא</td><td>MidSci</td><td>100ICS</td><td></td></tr><tr><td>15 מ"ל צינורות צנטריפוגה</td><td>קורנינג</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>2 מ"ל Cryovial</td><td>Simport Scientific</td><td>T301-2</td><td></td></tr><tr><td>2% Paraformaldehyde Fixative</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>37 &deg; אמבט מים C&nbsp;</td><td>NEST</td><td>602052</td><td></td></tr><tr><td>3dGRO R-Spondin-1 תוסף מדיה ממוזג</td><td>Millipore Sigma</td><td>SCM104</td><td></td></tr><tr><td>6 צלחות באר</td><td>TPP</td><td>92006</td><td></td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>R31541GA</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>SML0788</td><td></td></tr><tr><td>מתקדם DMEM/F12</td><td>ThermoFisher</td><td>12634028</td><td></td></tr><tr><td>אגר</td><td>למדא ביוטק</td><td>C121</td><td></td></tr><tr><td>B-27</td><td>טכנולוגיות חיים</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cultrex סוג 2</td><td>R& D Systems</td><td>3533-010-02</td><td>תמצית קרום מרתף</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>ניו אינגלנד ביו מעבדות</td><td>M0303S</td><td></td></tr><tr><td>DNase I מאגר תגובה</td><td>ניו אינגלנד ביו מעבדות</td><td>M0303S</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>FBS&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td></td></tr><tr><td>FGF-10</td><td>PeproTech</td><td>100-26</td><td></td></tr><tr><td>FGF2</td><td>PeproTech</td><td>100-18B</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS C Tubes</td><td>Miltenyi BioTech</td><td>130-096-334</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS Octo Dissociator עם תנורי חימום</td><td>Miltenyi BioTech</td><td>130-096-427</td><td>אנו משתמשים בפרוטוקול היצרנים.</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Life Technologies</td><td>35050061</td><td>דיפפטיד, ערכת צביעה L-alanyl-L-גלוטמין</td></tr><tr><td>המטוקסילין ואאוזין</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1470670</td><td></td></tr><tr><td>שעוות פרפין Histoplast</td><td>Fisher Scientific</td><td>22900700</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוצנטריפוגה&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיכל הקפאה של מר פרוסטי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>07202363S</td><td></td></tr><tr><td>N-acetylcysteine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>ניקוטינמיד</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>p1000 פיפטה עם טיפים&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>p200 פיפטה עם טיפים&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>פיפטות פסטר 9 אינץ'</td> <td>פישר סיינטיפיק</td><td>1367820D</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>פישר MT21031CM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מדעי בקר</td><td></td><td></td><td></td>פיפט</tr><tr><td>פרוסטגלנדין E2</td><td>R& D Systems</td><td>2296</td><td></td></tr><tr><td>Puromycin&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>A1113802</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant עכברים נוגין</td><td>PeproTech</td><td>250-38</td><td></td></tr><tr><td>תרבית תאים לשחזור הקפאת תרבית תאים בינונית</td><td>Invitrogen</td><td>12648010</td><td></td></tr><tr><td>מאגר ליזה של תאי דם אדומים</td><td>BioLegend</td><td>420301</td><td></td></tr><tr><td>מעכב ROCK (Y-27632)</td> <td>R& D Systems</td><td>1254/1</td><td></td></tr><tr><td>SB202190</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7076</td><td></td></tr><tr><td>T75 בקבוק</td><td>MidSci</td><td>TP90076</td><td></td></tr><tr><td>מכסה מנוע תרבית רקמות&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>קלטת</td><td></td><td></td><td></td>הטמעת רקמות</tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Invitrogen</td><td>12604013</td><td>אנזים רקומביננטי</td></tr><tr><td>מסוג II מסוג II Collagenase</td><td>Life Technologies</td><td>17101015</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

יצירה וטיפוח של אורגנואידים שמקורם בסרטן השחלות הסרוסי ברמה גבוהה

Generation and Culturing of High-Grade Serous Ovarian Cancer Patient-Derived Organoids

אורגנואידים הם מודלים תלת-ממדיים של גידולים דינמיים שניתן לגדל בהצלחה מרקמת גידול שחלה שמקורה במטופלת, מיימת או נוזל פלאורלי ולסייע בגילוי טיפולים חדשניים וסמנים ביולוגיים מנבאים לסרטן השחלות. מודלים אלה משחזרים הטרוגניות שבטית (clonal heterogeneity), את המיקרו-סביבה של הגידול (tumor microenvironment) ואת האינטראקציות בין תאים לתאים ולמטריצות תאים. בנוסף, הם הוכחו כמתאימים לגידול הראשוני מבחינה מורפולוגית, ציטולוגית, אימונוהיסטוכימית וגנטית. לפיכך, אורגנואידים מאפשרים מחקר על תאי הגידול ועל המיקרו-סביבה של הגידול והם עדיפים על קווי תאים. הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטות שונות ליצירת אורגנואידים של סרטן השחלות שמקורם במטופלות מגידולים, מיימת ודגימות נוזל פלאורלי עם שיעור הצלחה גבוה מ-97%. דגימות המטופל מופרדות לתרחיפים תאיים על ידי עיכול מכני ואנזימטי כאחד. לאחר מכן התאים מצופים באמצעות תמצית קרום מרתף (BME) ונתמכים במצע גדילה אופטימלי המכיל תוספים ספציפיים לגידול סרטן שחלות סרוסי בדרגה גבוהה (HGSOC). לאחר יצירת אורגנואידים ראשוניים, PDOs יכולים לקיים תרבית ארוכת טווח, כולל מעבר להרחבה לניסויים הבאים.

כדי ליצור PDOs, הדגימות עוכלו באופן מכני ואנזימטי לתרחיפים חד-תאיים. התאים הושעו מחדש ב-BME ונוספו להם מדיה מהונדסת במיוחד (איור 3). אורגנואידים נוצרים בדרך כלל על פני מסגרת זמן של 10 ימים, שלאחריה הם מדגימים אורגנואידים נפרדים בתרבית (איור 4).
<img alt="דיאגרמת תהליך גידול לאורגנואיד; עיכול מכני; תרבית תאים בודדים; מחקר גידולים; הטמעת BME." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64878/64878f...

אורגנואידים שמקורם בחולה (PDO) הם תרבית תלת ממדית (3D) שיכולה לחקות את סביבת הגידול במבחנה. בסרטן שחלות סרוסי בדרגה גבוהה, PDOs מייצגים מודל לחקר סמנים ביולוגיים וטיפולים חדשים.

Organoids are 3D dynamic tumor models that can be grown successfully from patient-derived ovarian tumor tissue, ascites, or pleural fluid and aid in the ...

מודלים אורגנואידים מניעים של מטופלים מייצגים גנטית ותפקודית את גידולי האב שלהם ולכן הם מודלים אמינים לחקר טיפולים חדשניים ותהליכים ביולוגיים מורכבים בסרטן השחלות. על ידי שחזור הטרוגניות שבטית (clonal heterogeneity), המיקרו-סביבה של הגידול ואינטראקציות בין תאים במבחנה לתאים, מודלים אלה מתגברים על המגבלות של קווי תאים סרטניים ושל קסנוגרפטים שמקורם במטופלים. אורגנואידים שמקורם במטופל מציעים יכולות הרחבה ואחסון ארוכות טווח ומחקים את הפיזיולוגיה של הגידול.כתוצאה מכך, הם מודלים אידיאליים לחקר טיפולים חדשניים וסמנים ביולוגיים מנבאים. התחל לקצור את האורגנואידים על ידי הנחת דגימות הגידול בצלחת תרבית רקמה של 10 ס"מ וטחינת הרקמה ליצירת תערובת הומוגנית באמצעות אזמל חד פעמי. מניחים את תערובת הרקמה ההומוגנית לתוך צינור דיסוציאציה באמצעות מלקחיים.עבור כל מיליליטר עד שני מיליליטר של רקמה הומוגנית, הוסף שבעה עד שמונה מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר מסוג שני תמיסת קולגנאז בתווך בסיס אורגנואיד ומיליליטר אחד של תמיסת DNase One. מערבלים את התמיסה ב 458 G.Liquefy הרקמה בזמן שהיא בתמיסת collagenase באמצעות מכונת דיסוציאציה. הפעל את התוכנית 37 C קו תחתון H קו תחתון TDK שלוש שעה אחת עד שהוא השעיה תא יחיד.לאחר שתסיים, העבר את התערובת ההומוגנית לצינור חרוטי חדש של 50 מיליליטר. הוסף 20 עד 40 מיליליטר של תוו

generation-culturing-high-grade-serous-ovarian-cancer-patient-derived

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטות להערכת חלבונים לתיקון נזקי DNA באורגנואידים של סרטן השחלות שמקורם במטופלות. להלן שיטות ציפוי וצביעה מקיפות, כמו גם הליכי כימות מפורטים ואובייקטיביים.

הדמיה של חלבונים לתיקון נזקי DNA באורגנואידים של סרטן השחלות שמקורם במטופל באמצעות בדיקות אימונופלואורסנציה

פרוטוקול מפורט מסופק כאן לקביעת אורגנואידי שד אנושיים מכריתות גידולי שד שמקורם במטופל או מרקמת שד רגילה. הפרוטוקול מספק הוראות מקיפות שלב אחר שלב לגידול, הקפאה והפשרה של אורגנואידי שד אנושיים שמקורם במטופלות.

הקמה ותרבות של אורגנואידי שד שמקורם במטופל

אנו מציגים פרוטוקול שניתן להשתמש בו לביצוע בדיקות תרופתיות טיפוליות עם אורגנואידים מסרטן השחלות שמקורם במטופלות.

מודלים אורגנואידים שמקורם בחולות סרטן השחלות לבדיקת תרופות פרה-קליניות

אורגנואידים סרטניים חוללו מהפכה בחקר הסרטן ובגישה לרפואה מותאמת אישית. הם מייצגים מודל גידול רלוונטי מבחינה קלינית המאפשר לחוקרים להישאר צעד אחד לפני הגידול במרפאה. פרוטוקול זה מבסס אורגנואידים סרטניים מדגימות טריות של רקמת גידול בלבלב וקסנוגרפטים שמקורם באדנוקרצינומה של הלבלב.

הקמת אורגנואידים ופיברובלסטים מגידולים שמקורם בסרטן הלבלב מרקמה טרייה

פרוטוקול זה מציע מסגרת שיטתית להקמת אורגנואידים של סרטן השחלות משלבי מחלה שונים ונותן מענה לאתגרים של שונות ספציפית למטופלת כדי להגדיל את התשואה ולאפשר התרחבות חזקה לטווח ארוך ליישומים הבאים. הוא כולל שלבים מפורטים לעיבוד רקמות, זריעה, התאמת דרישות מדיה וצביעה אימונופלואורסצנטית.

אסטרטגיה לביו-בנקאות של אורגנואידים של סרטן השחלות: טיפול בהטרוגניות הבין-אשפוזית על פני תת-סוגים היסטולוגיים ושלבי מחלה

פרוטוקול זה מתאר הקמת אורגנואידים תלת-ממדיים (תלת-ממדיים) של רקמה מתאי אפיתל ראשוניים של פני השחלות האנושיות (hOSE). הפרוטוקול כולל בידוד של hOSE מהשחלות הטריות שנאספו, הרחבה תאית של hOSE, הליכי הפשרה בהקפאה וגזירת אורגנואידים. Immunofluorescence, ניתוח כמותי, והצגת השירות כפלטפורמת סינון כלולים.

אורגנואידים אפיתל פני השטח של השחלות האנושיות כפלטפורמה לחקר התחדשות רקמות

פרוטוקול זה מפרט את הפיתוח של מודלים של עכברים בדרגה גבוהה של קרצינומה שחלות סרוזית (HGSOC) במבחנה וב-vivo. מגזירת אורגנואידים של חצוצרות עכברים, השינוי הגנטי שלהם לסיכום גנטיקה של HGSOC אנושי, והחדרתם לבורסה השחלתית של עכברים סינגניים להתפתחות גידולים in vivo .

פיתוח קווי אורגנואידים שמקורם בעכבר מתאי אפיתל חצוצרות למידול קרצינומה של שחלות סרוזיות בדרגה גבוהה

אנו מתארים שיטות לבידוד תאי סומטיקה של שחלות העכבר מחלק מועשר בסטרומה של השחלה וליצירת אורגנואידים סומטיים של שחלות העכבר בגישה ללא פיגומים.

חקירת מיקרו-סביבת השחלות: שיטות לבידוד, תרבית דו-ממדית ותרבות אורגנואידית של תאי סומטיקה בשחלות בעכברים

כדי לאפשר זיהוי רגישה מאוד של סרטן המעי הגס האנושי disseminating (CRC) תאים להמדינות רקמות, במסמך זה נראה עבור התמרה חושית יעילה של חלקיקים lentiviral חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) לתוך תאים תא צורב PDX-derived CRC פרוטוקול לפני הזרקת שלהם לתוך עכברים הנמען, עם תצפית מיקרוסקופית סטריאו-זריחה.

רגישות גבוהה זיהוי של Micrometastases שנוצרו על-ידי Organoids Lentivirus transduced GFP תרבותי מגידול נגזר המטופל הגס

המטופל נגזר מבע (pdx) דגמים נוספים ביותר בסדר מלנומה מולקולרית תכונות ביולוגיות, הם ניבוי יותר של תגובת הטיפול לעומת רקמה פלסטית מסורתית התרבות מבוסס assays. כאן אנו מתארים את פרוטוקול ההפעלה הסטנדרטית שלנו להקמת דגמי PDX חדשים ואפיון/ניסויים של דגמי PDX קיימים.

מלנומה מטופלת-נגזר מודל Xenograft

למד ליצור ולטפח אורגנואידים ממקור סרטני בשחלה סרוסי ברמה גבוהה. שיטה זו מאפשרת חקר תרופות חדשניות וזיהוי ביומרקרים חזויים במודל תלת-ממדי מדויק.

יצירה וטיפוח של אורגנואידים שמקורם בסרטן השחלות הסרוסי ברמה גבוהה

גלה סרטונים נוספים