פרוטוקול לבניית מודל פצע חולדה של סוכרת מסוג 1

פרטים רבים על תהליך מידול פצעי סוכרת מסוג 1 מועדים לטעויות. זהו אתגר קשה לחוקרים מנוסים. כתוצאה מכך, יש צורך להשתמש בפרוטוקול זה.

בצורה הפשוטה ביותר האפשרית, טכניקה זו יכולה לשכפל ביעילות כמה מאפיינים של פצעים סוכרתיים כרוניים כגון ללא ריפוי פצעים, אפיתל מחדש מאוחר, אנגיוגנזה מופחתת. הפתרון streptozotocin יש להשתמש מיד לאחר ההכנה. בעת יצירת הפצע, נראה כי גודל ומיקום הפצע חייב להיות מוסדר.

התחל על ידי המסת אבקת סטרפטוזוטוצין בכמות מתאימה של 0.1 שומות לליטר מאגר נתרן ציטראט כדי להשיג ריכוז של 1% ונער אותו במשך 30 שניות באמצעות מתנד סמים לפני הנחתו בקופסה יפה. להזרקה תוך צפקית של תמיסת סטרפטוזוטוצין 1%, תפסו את החולדה וחשפו את עור הבטן במקום ההזרקה. יש לחטא את אזור ההזרקה פעמיים באמצעות כדור צמר גפן ספוג ב-75% אלכוהול ולהניח את ראש החולדה מתחת לבטן.

הכנס את המחט במקביל לקו האמצע של הבטן ב 45 מעלות. לאחר מכן להקטין את זווית המחט ל 30 מעלות ולהכניס שניים עד שלושה מילימטרים. משוך בעדינות את פקק המחט, הזריק את תמיסת הסטרפטוזוצין ומשוך את המחט לפני מריחת צמר גפן.

כדי למדוד את רמות הגלוקוז הסיבתיות בדם בשעה 9:00 בבוקר ביום 3 וביום 7, מצא את המיקום של הווריד הקאודלי. יש לחטא את זנב החולדה פעמיים באמצעות 75% אלכוהול לפני ניקוב הווריד הקאודלי כדי לגרום לדימום ולמדוד את רמת הסוכר בדם באמצעות גלוקומטר. לאחר שתסיים, עצור את הדימום עם צמר גפן.

יש לגלח את האזור בגודל 5 על 5 ס"מ בצד הגבי של החולדה עם סכין גילוח חשמלי יום אחד לפני מידול הפצע. נגבו את האזור המגולח בכדור צמר גפן חמים ורגיל ותנו לו להתייבש למריחת קרם מסיר שיער למשך חמש דקות. נקה את האזור עם גזה לשטוף כל שאריות קרם depilatory עם מלוחים נורמלי חם.

לאחר מכן יש לחטא את העור הגבי פעמיים באמצעות כדורי צמר גפן ספוגים ביוד, ו-75% אלכוהול בסבבים החלופיים. לאחר הייבוש, חותכים את העור עם ניקוב ביופסיה עגול בקוטר 20 מ"מ. טפלו בעור במלקחיים ולאחר מכן השתמשו במספריים כירורגיים כדי להסיר את כל עובי העור לאורך סימני חיתוך האגרוף.

לאחר שתסיים, עצור את הדימום עם כדור צמר גפן מלוחים רגיל. מכסים את הפצע באמצעות גזה וזלין. סוכרת נגרמה בכל החולדות לאחר שלושה ימים של הזרקת סטרפטוזוטוצין, כאשר רמת הגלוקוז בדם גבוהה מ-16.7 מילימולים לליטר.

רמת הגלוקוז התייצבה חמישה שבועות לאחר הזירוז. משקלה של קבוצת הסוכרת עלה בהדרגה לאחר הזרקת סטרפטוזוטוצין. המשקל ירד בשבוע 3 ולאט לאט עלה שוב משבוע 4.

לעומת זאת, משקלה של חולדת הקבוצה הרגילה עלה בהתמדה. משקלם הממוצע לאחר שלושת ימי השראת הסוכרת היה גבוה יותר מקבוצת הסוכרת. הניתוח המקרוסקופי שבוצע בימים 7 ו -14 לאחר הפציעה גילה כי האפיתל מחדש היה בולט יותר בחולדות בקבוצה הרגילה מאשר בקבוצת הסוכרת.

התוצאות הכמותיות של יום 7 ויום 14 הראו כי שיעור ריפוי הפצעים היה נמוך משמעותית בקבוצה הסוכרתית מאשר בקבוצה הרגילה. עם זאת, ביום ה -14, שיעור ריפוי הפצעים היה מעל 90% בקבוצת הסוכרת. פצעי הסוכרת הראו אובדן חלקי של זקיקי השיער ובלוטות החלב עם פחות נימים גלויים.

באנגיוגנזה של פצעים שנותחה על ידי CD31 immunostaining, הצפיפות האופטית הממוצעת של ביטוי CD31 הראתה כי האנגיוגנזה באתר הפצע הייתה גבוהה משמעותית בנורמה מאשר בקבוצת הסוכרת. בעת מידול הפצע, יש לוודא כי העור בעובי הקדמי מוסר כולל האפידרמיס, הדרמיס והרקמה התת עורית.