Name: מודל אוזן עכבר להערכת דרמטיטיס במגע אלרגי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-24T14:55:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: חקור את מודל אוזן העכבר להערכת דרמטיטיס במגע אלרגי באמצעות DNFB. פרוטוקול זה מאפשר חקר מנגנוני מחלה ופיתוח טיפולים חדשים במחקר טרום-קליני.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (NSFC) ל- N.-N. י' (81904212); פרויקט המדע והטכנולוגיה של הרפואה הסינית המסורתית בג'יאנגסו (YB201995); ופרויקט המימון המיוחד לפוסט-דוקטורנטים בסין (2020T130562).

כל הטיפול והטיפול בעכברים היו בהתאם להנחיות שנקבעו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת יאנגג'ואו ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים תחת רישיון הפרויקט SYXK(SU) 2022-0044. במחקר זה נעשה שימוש בעכברים זכרים ונקבות BALB/c בגילאי 6-8 שבועות. כל קבוצה כללה שישה עכברים (ראו טבלת חומרים). הכלובים הוכנסו לתא מבוקר טמפרטורה (22 ± 2 מעלות צלזיוס, מחזור אור/חושך של 12 שעות) עם גישה חופשית למזון ומים. דיאגרמת זרימה ניסיונית מוצגת באיור 1.
1. הכנת בעלי חיים
<ol><li>התחל את הדוגמנות לאחר שבוע של התאקלמות לסביבה.</li>
	<li>השתמשו במנורה אולטרה סגולה ובחומר חיטוי 75% אלכוהול כדי לנקות ולחטא את הסביבה ואת משטחי העבודה לפני ביצוע מניפולציה על העכברים. הערה: על מנת למנוע השפעה של גורמים חיצוניים, לא ניתן לבצע סימון העכברים לזיהוי על אוזן העכבר; כתמים על הגב או על הזנב יכולים לשמש כחלופה.</li>
	<li>השתמש צמר גפן קטן כדי להחיל מי סבון על הבטן של העכברים (כ 1-2ס" מ גודל). יש לגלח את האזור בכיוון צמיחת השיער בעזרת להב או מכונת גילוח (ראו טבלת חומרים) בתחילת הדוגמנות (יום 0; איור 2A). הערה: השימוש בסכין גילוח ישר להסרת שיער דורש מפעיל מיומן. אם לא מבוצע כראוי, הוא עלול לגרום לגירוי בעור. שקלו להשתמש בקרם מסיר שיער, קוצץ או סכין גילוח בטיחותי להסרת שיער.</li>
	<li>שקלו את העכבר והשוו את שינויי המשקל בין כל קבוצה.</li>
</ol>2. גירוי רגישות בטן
<ol><li>להבטיח החלמה מלאה של כל פציעה קלה בעור הבטן הנגרמת על ידי גילוח. יש למרוח את רגישות הבטן יומיים לאחר הגילוח (יום 2).</li>
	<li>הכינו את תמיסת DNFB 0.5%: דללו DNFB בתערובת אצטון:שמן זית ביחס של 4:1 (למשל, 400 מיקרוליטר אצטון מעורבב עם 100 מיקרוליטר שמן זית; ראו טבלת חומרים). השתמש באקדח פיפטה כדי לנשוף ולערבב 20 פעמים כדי לערבב היטב את תמיסת DNFB. לפני כל מתן של פתרון DNFB לעכבר, לנשוף ולערבב אותו שלוש עד חמש פעמים. הערה: הכינו את התמיסה לפני השימוש ועטפו אותה ברדיד אלומיניום כדי להגן עליה מפני אור שמש ישיר.</li>
	<li>מרחו 25 μL של תמיסת DNFB 0.5% על העור של האזור המגולח על בטן העכברים עם פיפטור (איור 2B).</li>
	<li>טפטפו את תמיסת ה-DNFB על אמצע אזור גילוח הבטן ופזרו קלות עם הצד החלק של קצה הפיפטור לפיזור אחיד.</li>
	<li>בגיל 30 שניות לאחר גירוי DNFB, הניחו את העכברים בכלובים ריקים ללא מצעים כדי למנוע מהם לשפשף את תמיסת DNFB. כאשר תמיסת DNFB יבשה לחלוטין (כ-2 דקות), החזירו את העכברים לכלוב המקורי שלהם.</li>
	<li>יש ללבוש כפפות בעת הטיפול בתמיסת DNFB מכיוון שהיא מגרה מאוד את עור האדם.</li>
</ol>3. גירוי רגישות האוזן
<ol><li>הכינו תמיסת DNFB 0.2% כאמור לעיל, תמיסת הרכב (תערובת 4:1 של אצטון ושמן זית) ומים טהורים.</li>
	<li>כיוון את גוף העכבר והפוך את הגבול החיצוני של האאוריקל כלפי מטה במהלך כל הניתוח כדי למנוע מהתמיסה להיכנס לתעלת האוזן במהלך גירוי DNFB.</li>
	<li>בימים 4, 6, 8 ו-10, השתמשו בפיפטור כדי למרוח 20 μL של תמיסת DNFB 0.2% או תמיסת רכב לאט ובאופן אחיד על פני השטח הפנימיים של האאוריקים השמאליים של העכברים. כדי למנוע מתמיסת DNFB להיכנס לתעלת האוזן, השתמש בצד החלק של קצה הפיפטור כדי לפזר בעדינות את תמיסת DNFB במהלך הממשל. השאירו את אוזני ימין ללא טיפול (איור 2C).</li>
	<li>המתינו עד שתמיסת DNFB יבשה והחזירו את העכברים לכלוב (כ-30 שניות).</li>
	<li>יש ללבוש כפפות בעת הטיפול בתמיסת DNFB.</li>
</ol>4. רישום משקל עכבר ותסמיני ACD
<ol><li>לשקול את העכבר כל יום, להתחיל ביום 1, ולהשוות עם המשקל המתאים שלה ביום 0; להעריך את ההשפעה של ACD על משקל הגוף של עכברים כמו שינוי משקל (g) ± שגיאת תקן של הממוצע (SEM).</li>
	<li>צלם תמונות ברזולוציה גבוהה של אוזני העכבר כדי להקליט תסמינים קליניים של ACD כל יומיים, החל מהיום הראשון.</li>
</ol>5. מדידת עובי האאוריקל
<ol><li>מדדו את עובי האאוריקל כל יומיים, החל מהיום הראשון. מדוד והקלט את שתי האוזניים בפירוט.</li>
	<li>השתמשו בקליפרים של ורנייה (ראו טבלת חומרים) כדי למדוד את עובי האאוריקל באותה שעה בכל יום לקבלת תוצאות מדויקות (איור 3A). עצור את קליפרים vernier מלהמשיך הידוק פנימה כאשר יש חסימה קלה, כדי למנוע נזק רקמות לאוזן העכבר. שמור על המיקום קבוע ורשום את הנתונים.</li>
	<li>אספו את העובי משלושה מיקומים שונים על כל אאוריקל (איור 3B). רשום את הממוצע של שלושת הנתונים כערך חוקי. להעריך את נפיחות האוזן במיקרומטרים (מיקרומטר) ± שגיאת תקן של הממוצע (SEM).</li>
</ol>6. הערכת מידת הנפיחות הדלקתית
<ol><li>הכינו 0.5% צבע כחול אוונס (ראו טבלת חומרים) פתרון: דללו את הצבע הכחול של אוונס במי מלח חוצצים פוספט (PBS) ביום ה-11. לבשו מעיל מעבדה וכפפות בכל עת, מכיוון שהצבע הכחול של אוונס רעיל מעט לבני אדם.</li>
	<li>לשתק את העכברים עם קיבוע: לפתוח את מכסה הקיבוע (ראה טבלת חומרים), להחזיק את זנב העכבר, לגרום לראש העכבר מול הקיבוע, ולגרום לעכבר לטפס אינסטינקטיבית לתוך הקיבוע. כסו את המכסה, גרמו לזנב העכבר לצאת מהחור במכסה וכווננו את אורך הקיבוע כך שיחשוף את זנב העכבר כולו.</li>
	<li>נגבו את הזנב שוב ושוב עם כדור צמר גפן אלכוהולי או השרו אותו במים חמים למשך 30 שניות, וצבטו בעדינות את שורש הזנב כדי למלא ולהרחיב את הוורידים משני הצדדים. בצע את ההזרקה תחת הקרנה של מקור אור קר.</li>
	<li>הזריקו באיטיות תמיסת צבע כחול של אוונס לווריד זנב העכבר באמצעות מחט אינסולין 1 מ"מ. המתן 15 דקות ולאחר מכן צלם את אוזני העכבר. הערה: הנח את העכבר על השולחן והחזק אותו בעדינות כדי לחשוף את אזור האוזן לצורך רכישת תמונה. זמן קצר לאחר ההזרקה עם תמיסת הצבע הכחול של אוונס והתבוננות באינדיקציות המתאימות, השתמש בנקע צוואר הרחם כדי להרדים את העכבר.</li>
</ol>

<ol><li>Neale, H., Garza-Mayers, A. C., Tam, I., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+allergic+contact+dermatitis.+Part+I%3A+Clinical+features+and+common+contact+allergens+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Pediatric allergic contact dermatitis. Part I: Clinical features and common contact allergens in children.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 84 (2), 235-244 (2021).</li>
<li>Koppes, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+knowledge+on+biomarkers+for+contact+sensitization+and+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Current knowledge on biomarkers for contact sensitization and allergic contact dermatitis.</a> Contact Dermatitis. 77 (1), 1-16 (2017).</li>
<li>Martin, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+chemical-induced+innate+immunity+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of chemical-induced innate immunity in allergic contact dermatitis.</a> Allergy. 66 (9), 1152-1163 (2011).</li>
<li>Kimber, I., Basketter, D. A., Gerberick, G. F., Dearman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Allergic contact dermatitis.</a> International Immunopharmacology. 2 (2-3), 201-211 (2002).</li>
<li>Vocanson, M., Hennino, A., Rozieres, A., Poyet, G., Nicolas, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector+and+regulatory+mechanisms+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Effector and regulatory mechanisms in allergic contact dermatitis.</a> Allergy. 64 (12), 1699-1714 (2009).</li>
<li>Gamradt, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+checkpoint+receptors+control+CD8%2B+resident+memory+T+cells+to+prevent+skin+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Inhibitory checkpoint receptors control CD8+ resident memory T cells to prevent skin allergy.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 143 (6), 2147.e9-2157.e9 (2019).</li>
<li>Fraginals, R., Blasi, N. A., Lepoittevin, J. P., Benezra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+successful+murine+model+for+contact+sensitization+to+a+sesquiterpene-alpha-methylene-gamma-butyrolactone%3A+sensitization+to+alantolactone+in+four+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">A successful murine model for contact sensitization to a sesquiterpene-alpha-methylene-gamma-butyrolactone: sensitization to alantolactone in four strains of mice.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 97 (3), 473-477 (1991).</li>
<li>Knop, J., Riechmann, R., Neumann, C., Macher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+suppressor+mechanisms+in+allergic+contact+dermatitis%3A+5.+Evidence+that+inhibition+of+suppressor+T+lymphocytes+by+Corynebacterium+parvum+is+mediated+by+interferon%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Modulation of suppressor mechanisms in allergic contact dermatitis: 5. Evidence that inhibition of suppressor T lymphocytes by Corynebacterium parvum is mediated by interferon.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 79 (6), 385-388 (1982).</li>
<li>Polak, L., Scheper, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-specific+T-cell+lines+in+DNCB-contact+sensitivity+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Antigen-specific T-cell lines in DNCB-contact sensitivity in guinea pigs.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 80 (5), 398-402 (1983).</li>
<li>Witten, V. H., March, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+the+mechanism+of+allergic+eczematous+contact+dermatitis.+II.+Use+of+C14+labelled+2%3A4-dinitrochlorobenzene+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Studies of the mechanism of allergic eczematous contact dermatitis. II. Use of C14 labelled 2:4-dinitrochlorobenzene in guinea pigs.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 31 (2), 97-102 (1958).</li>
<li>Knop, J., Riechmann, R., Macher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+suppressor+mechanism+in+allergic+contact+dermatitis.+IV.+Selective+inhibition+of+suppressor+T-lymphocytes+by+serum+obtained+from+Corynebacterium+parvum+treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Modulation of suppressor mechanism in allergic contact dermatitis. IV. Selective inhibition of suppressor T-lymphocytes by serum obtained from Corynebacterium parvum treated mice.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 77 (6), 469-473 (1981).</li>
<li>Rubic-Schneider, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPR91+deficiency+exacerbates+allergic+contact+dermatitis+while+reducing+arthritic+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">GPR91 deficiency exacerbates allergic contact dermatitis while reducing arthritic disease in mice.</a> Allergy. 72 (3), 444-452 (2017).</li>
<li>Stampf, J. L., Benezra, C., Byers, V., Castagnoli Jr, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tolerance+to+poison+ivy+urushiol+in+the+guinea+pig+by+epicutaneous+application+of+the+structural+analog+5-methyl-3-n-pentadecylcatechol%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Induction of tolerance to poison ivy urushiol in the guinea pig by epicutaneous application of the structural analog 5-methyl-3-n-pentadecylcatechol.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 86 (5), 535-538 (1986).</li>
<li>Dhingra, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+profiling+of+contact+dermatitis+skin+identifies+allergen-dependent+differences+in+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Molecular profiling of contact dermatitis skin identifies allergen-dependent differences in immune response.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 134 (2), 362-372 (2014).</li>
<li>Maguire Jr, H. C., Kaidbey, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+photoallergic+contact+dermatitis%3A+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Experimental photoallergic contact dermatitis: a mouse model.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 79 (3), 147-152 (1982).</li>
<li>Qiu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dysregulated+sebum-microbial+metabolite-IL-33+axis+initiates+skin+inflammation+in+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">A dysregulated sebum-microbial metabolite-IL-33 axis initiates skin inflammation in atopic dermatitis.</a> The Journal of Experimental Medicine. 219 (10), e2021397(2022).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+activities+of+Dictamnus+dasycarpus+Turcz.%2C+root+bark+on+allergic+contact+dermatitis+induced+by+dinitrofluorobenzene+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory activities of Dictamnus dasycarpus Turcz., root bark on allergic contact dermatitis induced by dinitrofluorobenzene in mice.</a> Journal of Ethnopharmacology. 149 (2), 471-477 (2013).</li>
<li>Zhou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+6%27-acetylpaeoniflorin+on+dinitrochlorobenzene-induced+allergic+contact+dermatitis+in+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunologic+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of 6'-acetylpaeoniflorin on dinitrochlorobenzene-induced allergic contact dermatitis in BALB/c mice.</a> Immunologic Research. 64 (4), 857-868 (2016).</li>
<li>Donglang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+on+different+skin+pruritus+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparative study on different skin pruritus mouse models.</a> Frontiers in Medicine. 8, 630237(2021).</li>
<li>Yang, N., Shao, H., Deng, J., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+pharmacology-based+analysis+to+explore+the+therapeutic+mechanism+of+Cortex+Dictamni+on+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Network pharmacology-based analysis to explore the therapeutic mechanism of Cortex Dictamni on atopic dermatitis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 304, 116023(2023).</li>
</ol>

המחברים אינם מדווחים על ניגודי עניינים בעבודה זו.

הפרוטוקול המתואר כאן לגרימת תסמינים דמויי ACD באוזניהם של עכברים יכול לשמש לחקר הפתופיזיולוגיה של ACD וככלי סינון לפיתוח תרופות חדשות.
ישנם שני שלבים מרכזיים לביסוס מודל ACD: רגישות ראשונית, וגירוי עוקב. הבטן היא בדרך כלל האתר של רגישות ראשונית, אבל אתר הגירוי הבא נבחר מעט אחרת. מחקרים קודמים הראו כי רוב החוקרים בוחרים להשתמש בחומרים רגישים כימיים כגון DNFB/DNCB או אוקסזולון כדי לבסס מודלים של ACD על הגב או הצוואר של עכברים, וזה בלתי נמנע להשתמש בלהבים או גוזמים כדי לנטרל את אזור המידול של עכב...

דלקת עור אלרגית במגע (ACD) היא מחלת עור נפוצה המאופיינת בתסמינים דמויי אקזמה במקום המגע, בצקת ואריתמה במקרים מתונים, ופפולות, שחיקה, הפרשה או אפילו צלקות מסיביות במקרים חמורים1. זה משפיע על עד 20% מהאוכלוסייה והוא יכול להשפיע על אנשים בכל גיל2. ACD מתרחשת לעתים קרובות אצל אנשים שנחשפו לאלרגנים שוב ושוב ויכולה להיגרם על ידי התגובה החיסונית של הפרט לאלרגן אחד או יותר בביתאו במקום העבודה 3. רגישות יתר מאוחרת מסוג IV נחשבת לסוג העיקרי של תגובה חיסונית ב- ACD4. באזורים בעור שנחשפו שוב ושוב לאלרגנים, תאי זיכרון T מצטברים במספרים גדולים ומעוררים תגובות חיסוניות ודלקתיות 3,5,6. מטרת עבודה זו היא להציע טכניקת מעבדה אמינה לחקירה נוספת של תגובות אימונולוגיות ודלקתיות בפיתוח ACD.
הופעת ACD נובעת בדרך כלל מרגישות יתר למגע הנגרמת על ידי חשיפה חוזרת ונשנית לכימיקלים. חוקרים רבים פיתחו מודלים שונים של בעלי חיים ACD בעכברי בית7,8, שרקנים 9,10 ובעלי חיים אחרים במהלך העשורים האחרונים, על מנת לדמות את הופעת המחלה. רוב שיטות הניסוי מורכבות משני שלבים: רגישות בטן (אינדוקציה) ומתן גירויים על הגב או על תנוך האוזן (גירוי). חומרים כימיים נפוצים כוללים בעיקר 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB)/1-chloro-2,4-dinitrobenzene (DNCB)8,9,11, oxazolone 12, urushiol 13, וכו ' ביניהם, DNFB ו- DNCB הם הנפוצים ביותר, שדווחו לראשונה באוקטובר 195810. דגם רגישות ניקל14 ודרמטיטיס מגע פוטואלרגי מודל15 משמשים לעתים קרובות.
אנו מציגים שיטה ניסיונית לבניית מודל ACD. שיטה זו מסוכמת ומותאמת על בסיס מחקרים קודמים והשוואה עם ניסויים מרובים. בהשוואה למודלים אחרים של ACD, למודל זה יש כמה יתרונות, כגון הבדלים בודדים קטנים, תקופות ניסוי קצרות, כמות קטנה של גירוי כימי וכו '. בנוסף, מחקר זה חל על עכברים, שהם לא רק חסכוניים אלא גם יש אפשרויות רבות יותר עבור נוקאאוט גנים או הכנת עכברים טרנסגניים16. אנו מתארים גם את השיטות השונות המשמשות למעקב אחר התקדמות ACD בניסוי, כגון מדידת עובי האוזן, שימוש בצבע כחול אוונס למדידת הפרשה דלקתית ועוד. מודל זה יכול לא רק לנתח אוזני עכבר, דם, טחול ודגימות אחרות באמצעי מעבדה כדי לחקור את הפתוגנזה של ACD, אלא גם ישים להערכה פרה-קלינית של שיטות טיפוליות חדשות, שיש לה משמעות פרסומית מסוימת.

<table><tbody><tr><td>1-פלואורו-2,4-דיניטרובנזן (DNFB)</td><td>Merck</td><td>200-734-3</td><td>1-פלואורו-2,4-דיניטרובנזן, &ge; 99%</td></tr> <tr><td>אצטון</td><td>סינופארם ריאגנט כימי ושות 'בע"מ</td><td>10000418</td><td>&ge; 99.5%</td></tr> <tr><td>רדיד אלומיניום&nbsp;</td><td>Cleanwrap</td><td>CF-2</td><td></td></tr><tr><td>Evans צבע כחול</td><td>Solarbio</td><td>314-13-6</td><td>תכולת צבע כ. 80%</td></tr> <tr><td>מקבע עכבר</td><td>ZHUYANBANG</td><td>GEGD-SM1830</td><td></td></tr><tr><td>שמן זית</td><td>Solarbio</td><td>8001-25-0</td><td>500 מ"ל</td></tr><tr><td>קצה פיפט</td><td>Biofount</td><td>FT-200</td><td>10 - 200 &mu; l</td></tr><tr><td>פיפטור</td><td>אפנדורף AG</td><td>3123000250</td><td>20 - 200 &mu; l</td></tr><tr><td>סכין גילוח</td><td>שנחאי ג'ילט ושות' בע"מ</td><td>74-S</td><td></td></tr><tr><td>קליפרים ורנייה</td><td>דליקסי אלקטריק</td><td>DECHOTVCS1200</td><td></td></tr></tbody></table>

מודל אוזן עכבר להערכת דרמטיטיס במגע אלרגי

A Mouse Ear Model for Allergic Contact Dermatitis Evaluation

העור הוא קו ההגנה הראשון של גוף האדם ואחד האיברים החשופים ביותר לכימיקלים סביבתיים. דרמטיטיס מגע אלרגי (ACD) היא מחלת עור נפוצה המתבטאת בפריחה מקומית, אדמומיות ונגעים בעור. המופע וההתפתחות של ACD מושפעים מגורמים גנטיים וסביבתיים כאחד. למרות שחוקרים רבים בנו סדרה של מודלים של ACD בשנים האחרונות, הפרוטוקולים הניסיוניים של מודלים אלה שונים זה מזה, מה שמקשה על הקוראים לבסס אותם היטב. לכן, מודל יציב ויעיל של בעלי חיים הוא בעל משמעות רבה למחקר נוסף של הפתוגנזה של אטופיק דרמטיטיס. במחקר זה, אנו מפרטים שיטת מידול באמצעות 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) כדי לגרום לתסמינים דמויי ACD באוזניים של עכברים ומתארים מספר שיטות להערכת חומרת דרמטיטיס במהלך דוגמנות. פרוטוקול ניסויי זה יושם בהצלחה בכמה ניסויים ויש לו תפקיד קידום מכירות מסוים בתחום מחקר ACD.

תחת גירוי DNFB חוזר, אוזני העכבר של קבוצת DNFB הראו תסמינים קליניים ברורים דומים ל- ACD, כאשר אזורים רגישים הראו את הסימפטומים האופייניים של אדמומיות, יובש ואפילו שחיקה והפרשה. אולם מתן אוזניים של מים טהורים (קבוצת ביקורת) או בקרת ממס (קבוצת רכב) לא הניב תסמינים דומים (איור 4).
בינתיים, בקבוצת DNFB, בהשוואה לאוזן ימין שלא טופלה, עובי האוזן השמאלית גדל באופן משמעותי לאחר גירוי DNFB (איור 5A), בעוד שלא היה הבדל משמעותי בקבוצת הביקורת וב...

כאן, אנו מתארים את השיטות לגרימת דרמטיטיס מגע אלרגי באוזני עכבר על ידי 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) וכיצד להעריך את חומרת דרמטיטיס מגע אלרגי.

Skin is the human body&#39;s first line of defense and one of the most exposed organs to environmental chemicals. Allergic contact dermatitis (ACD) is a ...

מודל זה יכול לשמש לא רק כדי לחקור את הפתוגנזה של ACD, אלא גם ישים עבור האבולוציה הפרה-קלינית של שיטות טיפוליות חדשות, אשר יש משמעות חשובה. זהו מודל בעל חיים יציב ויעיל בעל יתרונות רבים, כגון תקופת ניסוי קצרה, ניתוח קל, תסמינים ברורים ואחוזי הצלחה גבוהים. פרוטוקול הניסוי שלנו מפורט מאוד וקל לתפעול.הקפד לבצע כל שלב בפרוטוקול כראוי. לפני תחילת הדוגמנות, התאקלמו את העכברים לסביבה למשך שבוע עם גישה חופשית למזון ומים. ביום הדוגמנות, באמצעות מנורה אולטרה סגולה ו 75% אלכוהול, לנקות ולחטא את הסביבה ואת משטחי העבודה.יש למרוח מי סבון על בטן העכברים באמצעות צמר גפן, ולגלח את האזור בכיוון צמיחת השיער בעזרת להב או מכונת גילוח. שקלו את העכבר והשוו את שינויי המשקל בין כל קבוצה. לפני ביצוע גירוי רגישות הבטן, יש לוודא החלמה מלאה של כל פגיעה קלה בעור בטן העכבר הנגרמת על ידי גילוח.הכינו תמיסת 0.5% DNFB ודללו אותה בתערובת אצטון לשמן זית ביחס של 4 ל-1. בעזרת אקדח פיפטה, נושף וערבב 20 פעמים כדי לערבב היטב את תמיסת DNFB. יש למרוח 25 מיקרוליטר של תמיסת DNFB 0.5% על מרכז אזור גילוח הבטן בעזרת צינור, ולמרוח קלות עם הצד החלק של קצה הפילטר כדי לפזר אותו באופן אחיד.לאחר 30 שניות של גירוי DNFB, הכנס את העכבר לכלוב ריק ללא מצעים כדי למנוע מהעכבר לשפשף את תמיסת DNFB. כאשר התמיסה יבשה לחלוטין, החזירו את העכבר לכלוב המקורי שלו עם גישה חופשית למזון ומים. לגירוי רגישות האוזן, כוונו את גוף העכבר והפכו את הגבול החיצוני של האאוריקל כלפי מטה כדי למנוע מהתמיסה להיכנס לתעלת האוזן במהלך גירוי DNFB.בימים 4 ו-10, באמצעות צינור, יש למרוח 20 מיקרוליטר של הרכב, או תמיסת DNFB 0.2% לאט ובאופן אחיד על פני השטח הפנימיים של הפתח השמאלי, ולפזר בעדינות את התמיסה באמצעות הצד החלק של הבורר. השאירו את אוזן ימין ללא טיפול. המתן עד שתמיסת DNFB יבשה והחזיר את העכבר לכלוב.לאחר גירוי רגישות הבטן והאוזניים, יש לשקול את העכברים כל יומיים החל מהיום הראשון. השוו את משקלו של כל עכבר ליום אפס, והעריכו את ההשפעה של ACD על משקל הגוף של העכברים כאשר המשקל משתנה. צלם תמונות ברזולוציה גבוהה של אוזני העכבר כדי לתעד תסמינים קליניים של ACD כל יומיים, החל מהיום הראשון.באמצעות קליפרים ורנייר, למדוד את עובי auricle באותה שעה בכל יום לקבלת תוצאות מדויקות. עצור את קליפרים vernier מלהמשיך הידוק פנימה כאשר יש חסימה קלה כדי למנוע נזק רקמות לאוזן העכבר. שמור על המיקום קבוע ורשום את הנתונים עבור שתי האוזניים.רשום את הממוצע של שלושת הנתונים ולהעריך את נפיחות האוזן במיקרומטרים. כדי להעריך את מידת הנפיחות הדלקתית ביום ה -11, הכינו תמיסת צבע כחול 0.5% של אוונס ודללו אותה עם PBS. כדי לשתק את העכבר עם קיבוע, פתח את המכסה, החזק את זנב העכבר, הפוך את ראש העכבר מול הקיבוע, ואפשר לעכבר לטפס אינסטינקטיבית לתוך הקיבוע.מכסים את המכסה. גרום לזנב העכבר לצאת מהחור במכסה והתאם את אורך הקיבוע כדי לחשוף את זנב העכבר כולו. נגבו את הזנב שוב ושוב עם כדור צמר גפן אלכוהולי, או השרו אותו במים חמים למשך 30 שניות, וצבטו בעדינות את שורש הזנב למילוי, והרחיבו את הוורידים משני הצדדים.הזריקו באיטיות תמיסת Evans Blue Dye לווריד זנב העכבר באמצעות מחט אינסולין 1 מ"מ תחת הקרנה של מקור אור קר. המתן 15 דקות כדי לצלם את אוזני העכבר. אוזני עכבר מקבוצת DNFB הראו תסמינים קליניים ברורים דומים ל-ACD, כאשר אזורים רגישים הראו תסמינים אופייניים של אדמומיות, יובש, שחיקה והפרשת דם.עם זאת, מתן באוזן של מים טהורים או בקרת ממס לא גרם לתסמינים דומים לקבוצת DNFB. בקבוצת DNFB, בהשוואה לאוזן ימין שלא טופלה, עובי האוזן השמאלית גדל באופן משמעותי לאחר גירוי DNFB. לא היה הבדל משמעותי בין קבוצות הבקרה והרכב.האוזן השמאלית של עכברי קבוצת DNFB הפכה לכחול כהה לאחר הזרקת הצבע הכחול של אוונס, שהיה שונה חזותית מאוזן ימין. האוזן השמאלית והימנית של עכברים בקבוצת ביקורת ושל קבוצות רכב היו בערך באותו צבע. העלייה במשקל של עכברים הואטה מעט על ידי DNFB, או גירוי פשוט של הרכב, אך לא הביאה לירידה משמעותית במשקל.גירוי DNFB חוזר באוזן העכבר הביא להגדלת הטחול ולעלייה במדד הטחול. לעומת זאת, מדד הטחול של עכברים בקבוצת הרכב לא השתנה באופן משמעותי. ודא שתמיסת DINFB מעורבבת במלואה ונמרחת באופן שווה על אוזן העכבר מבלי לזרום לתעלת האוזן.זהו המפתח להצלחת הדוגמנות.

a-mouse-ear-model-for-allergic-contact-dermatitis-evaluation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מודלים העכבר ניסיוני של אסטמה אלרגית להציע אפשרויות חדשות ללימוד בהיווצרות המחלה ופיתוח ותרופות חדשות. דגמים אלה מתאימים גם לגורמים השולטים מדידה תגובה חיסונית אלרגית, דלקת בדרכי הנשימה, ו פתופיזיולוגיה ריאתי.

דגם Murine של אסטמה אלרגן מושרה

סרטון וידאו זה מתאר שיטה למדידת רגישות לקרינת UV במודל עכבר אנושי – מודל עכבר המחקה עור אנושי. אנו קובעים את המינון המינימלי של קרינת UV (MED) שעלולה לגרום לאריתמה או בצקת על העור. השיטה יכולה לעזור לגלות את היעילות של תרופות המשמשות להפחתת רגישות UV.

בדיקת מינון אריתמטי מינימלי: שיטה למדידת רגישות UV במודלים עכבריים

סרטון זה מדגים טכניקה in vivo להערכת אנטיגן בדיקה על ידי גרימת דלקת עור במודל מורין. האנטיגן הנבדק - הפטן בתמיסת שמן/אצטון - נמרח באופן מקומי על עור אוזן העכבר, ודלקת העור מוערכת לאחר תקופה מספקת.

טכניקה להערכת התגובה החיסונית נגד אנטיגן על ידי גרימת דלקת בעור

סרטון זה מדגים זיהום עור הנגרם על ידי מלסזיה בעכברים. השעיית שמן Malassezia מוחל על האוזן הפגועה, מפעיל דלקת ונפיחות של רקמת האוזן. מאוחר יותר, האוזניים מנותחות, הומוגניות, ומפוזרים על צלחת אגר לצמיחה. מספר המושבות מצביע על העומס הפטרייתי הנובע מדלקת בעור.

דלקת עור הנגרמת על ידי מלסזיה וניתוח עומס פטרייתי במודל מורין

תגובות אלרגיות, המתאפיינות בהפעלת תאי מאסט ובזופילים, מונעות על ידי הקישור הצולב של IgE והשחרור של מתווכים מעודדי דלקת. הערכה כמותית של תגובות אלרגיות יכולה להיות מושגת על ידי שימוש בצבע כחול אוונס לעקוב אחר שינויים בחדירות כלי דם לאחר אתגר אלרגן.

מדידת אנפילקסיס המקומי בעכברים

כאן נתאר שיטת הדמיה כולה-הר ברזולוציה גבוהה בעור האוזן והעכבר כולו למבוגרים, אשר מאפשרת לנו לדמיין מורפוגנזה מסעף והמתבנת של העצבים ההיקפיים, כלי הדם, כמו גם התפלגות תא החיסון.

כולה-הר מיקרוסקופיה קונפוקלית לעור מבוגר האוזן: מערכת מודל ללמוד מורפוגנזה מסעף נוירו-וסקולרית והפצה תא החיסון

גישה זו מתוארת זיהוי בזמן אמת של התגובה החיסונית מולדת ופצעו עורית, Staphylococcus aureus זיהום של עכברים. מאת LysM בהשוואת-EGFP עכברים (אשר מחזיקים נויטרופילים פלורסנט) עם LysM-EGFP crossbred immunodeficient עכבר זן, נוכל לקדם את ההבנה שלנו של זיהום ופיתוח של גישות כדי להילחם זיהום.

דגם העכבר כדי להעריך מולדת התגובה החיסונית לזיהום Staphylococcus aureus

רגישות יתר למגע (CHS) היא מודל ניסיוני של מורין של דרמטיטיס מגע אלרגי (ACD). CHS מבוסס על רגישות עם hapten תגובתי על ידי צביעת העור המגולח של החזה והבטן, עם אתגר עור אוזן לאחר מכן עם hapten מדולל, הגורם לתגובת נפיחות כי הוא מוערך בדרכים שונות.

צור רגישות יתר כמודל מורין של דרמטיטיס מגע אלרגי

פרוטוקול זה מתאר את ההליך לגרימת דלקת אקנה בעור חולדה עם חומצה אולאית ואקנה Cutibacterium.

מודל חולדה של אקנה מורכב

המחקר מדגים את תפקידו של העור בוויסות התגובות החיסוניות בעכברים באמצעות חיסון אפיעורי (EC). חיסון EC עם אנטיגן חלבון יכול לדכא תגובות חיסוניות ברגישות יתר למגע או להפוך דיכוי המושרה על ידי העור בשילוב עם דפוסים מולקולריים הקשורים לפתוגן. חיסון EC מראה הבטחה כגישה יעילה ונטולת מחטים לאימונותרפיה.

מודל עכברי של אימונומודולציה המושרה אפיעורית

חקור את מודל אוזן העכבר להערכת דרמטיטיס במגע אלרגי באמצעות DNFB. פרוטוקול זה מאפשר חקר מנגנוני מחלה ופיתוח טיפולים חדשים במחקר טרום-קליני.

מודל אוזן עכבר להערכת דרמטיטיס במגע אלרגי

גלה סרטונים נוספים