מערך ההרדמה הסדרתי לחקירה בתפוקה גבוהה של חומרים נדיפים באמצעות Drosophila melanogaster

SAA מאפשר עיבוד בתפוקה גבוהה לחקר הפרמקולוגיה של חומרים נדיפים באורגניזמים מודל חסרי חוליות שניחנו במוח מתוחכם וברפרטואר רחב של התנהגויות. בשילוב עם ארגז הכלים הגנטי הזמין ב- Drosophila melanogaster, טכניקה זו מאפשרת לחקור את הפרמקוגנטיקה של חומרים נדיפים במהירות ובמחיר סביר. אנשים רבים נחשפים לחומרים נדיפים כמזהמים או כחומרים טיפוליים.

בנוסף להרדמה, להרדמה נדיפה יש השפעות נלוות רעילות ומועילות רבות. מידת ההשפעה נקבעת בחלקה על ידי גנטיקה, שנותרה במידה רבה בלתי נחקרת. לאחר הכנת מסגרת העץ, שנה מכסי צינור כרוניקה של 50 מיליליטר על ידי קידוח שני חורים בכל כובע עם מקדח 9/32 אינץ '.

חול את החורים כדי לנקות את הפלסטיק המרופט. כמו כן חול את החלק העליון של הכובע כדי לחספס את פני השטח. לאחר מכן חתכו פיפטות סרולוגיות של חמישה מיליליטר לגודל על ידי ניקוד הפלסטיק ושבירתו הנקייה בקו הניקוד.

חול את הקצוות של פיפטות חתוכות או שבורות. לאחר מכן, מדביקים רשת לצינורות וחותכים את הרשת לגודל הצינור ברגע שהדבק מתייבש. הכנס את הצינורות לתוך החורים של הכובעים החרוטיים כאשר שני הצינורות נמשכים מעל המכסה.

ודא שצינור הזרימה נמשך זמן רב יותר לתוך הצינור מאשר היציאה. מרחו דבק על החלק העליון של הפקקים סביב הצינורות כדי להצמיד את החלקים זה לזה ולאפשר להם להתייבש. חבר למסגרת אזיקוני כבלים דביקים.

הדביקו את הכובעים למסגרת באמצעות אזיקונים וגזרו את קצוות תג האזיקון קצר. חתכו וחברו את אורך צינורות הטיגון לצינורות הזרימה והזרימה בכל מכסה שונה. החל מהקצה במעלה הזרם, חבר את הצינור תחילה לזרימה, ולאחר מכן מהזרימה החוצה לזרימה של המיקום הבא.

לאחר מכן, הוסף מחוון זרימה לזרימה במורד הזרם. שים צינור חרוטי 50 מיליליטר במיקום הראשון וסמן את סימן מילוי המים. הסר את הצינור.

מלאו אותו במים מתחת לצינור הזרימה והחזירו אותו למקומו. הכינו את התממשקות למכשיר האידוי. הסירו את הבוכנות, חתכו חריצים משני מזרקי ניפוק של 10 מיליליטר, והכניסו אותם לזרם הוופורייזר והחוצה כשהחריצים פונים ישירות לכיוון חזית הוופורייזר כדי ליישר קו עם החורים.

חבר את המערכת כולה. השתמש בצינורות טייגון כדי לחבר את מיכל הגז המוביל לווסת, מד זרימה ספציפי לגז, וופורייזר ו- SAA. מלא עמדות ריקות במערך עם צינורות כרוניקה ריקים של 50 מיליליטר.

עכשיו להפעיל את מיכל הדלק. פתח את מד הזרימה לשני ליטר לדקה והפעל את הוופורייזר ל- 0% אשר את זרימת הגז במערכת על ידי בדיקת מד הזרימה במעלה הזרם של הוופורייזר ומחוון הזרימה במורד הזרם של התא האחרון של SAA לזרימה. לחלופין, הכניסו את קצה הצינור במורד הזרם למים וחפשו בועות.

24 שעות או יותר לפני החשיפה להרדמה מיין את קבוצות הזבובים לפי הצורך לניסוי בשיטה המועדפת. מעבירים זבובים מבקבוקוני מזון לצינורות חרוטיים ריקים של 50 מיליליטר. ספור ותעד זבובים מתים לפני החשיפה.

לפתוח ולהבריג צינורות חרוטי 50 מיליליטר עם זבובים על SAA. הפעל את גז המוביל והגדר אותו לקצב הזרימה הרצוי. כוונו את מכשיר ההרדמה לריכוז הרצוי וחשפו את הזבובים למשך הזמן הרצוי.

בתום החשיפה שוטפים את המערכת בזרימת גז טרי בנפח של 1.5 ליטר לדקה למשך חמש דקות, המקביל לנפחים של כפי 10 מנפח SAA הכולל. פתח את וסת הלחץ הגבוה לחלוטין ולאחר מכן סגור אותו חצי סיבוב כדי להבטיח זרימת גז מוביל. יש לעקוב אחר הצינוריות לכל קו אל מדי הזרימה והוופורייזר, ולבדוק את רמת ההרדמה במכשירי האידוי.

ודא שכאשר גז זורם, הוא מציין זרימה במד הזרימה ובמחוון הזרימה במורד הזרם. בסוף הניסוי, יש לאפשר ארבע עד חמש דקות של זרימת אוויר כדי לשטוף את חומר ההרדמה. שבעה קווים שבודדו מאוכלוסייה אחת באמצעות מפגשים של זוג יחיד הראו שונות בתמותה כתוצאה מרעילות איזו-פלואור כתוצאה מלחץ אבולוציוני בזבובי ND23 60114.

טיסה מוקדמת עם 15 דקות של 2% ISO פלואור לפני פגיעה מוחית טראומטית הפחיתה את מדד התמותה לאחר 24 שעות בזנים לבנים 1118 וצהובים/לבנים. מדד התמותה לאחר 24 שעות לא היה נמוך משמעותית בקווי אורגון R וקנטון S שהיו לפני כן. במהלך ההרכבה, החריצים במזרקים ששונו חייבים להתיישר עם החורים של יציאות הוופורייזר.

במהלך החשיפה, לבדוק מעת לעת כי יש זרימה דרך המערכת. ניתן לבצע הליך זה במגוון רחב של מחקרים התנהגותיים, הישרדותיים ומולקולריים שיכולים להוביל לתובנות לגבי הפרמקולוגיה של חומרים נדיפים.