Name: הערכת התגובה החיסונית של חיסון אדגובנטי ננו-תחליב נגד זיהום סטפילוקוקוס אאורוס עמיד למתיצילין (MRSA) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-01T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: למד הכנת חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב נגד זיהום Staphylococcus aureus עמיד למתיצילין (MRSA). השיטה משתמשת באמולסיפיקציה באנרגיה נמוכה להערכת התגובה החיסונית וההגנה אינ-ויבו.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מס '2021YFC2302603 של תוכנית המחקר והפיתוח הלאומית של סין, מס '32070924 ו -32000651 של NSFC, ומס '2019jcyjA-msxmx0159 של תוכנית פרויקט הקרן למדעי הטבע של צ'ונגצ'ינג.

<ol><li>Cheung, G. Y. C., Bae, J. S., Otto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenicity+and+virulence+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Pathogenicity and virulence of Staphylococcus aureus.</a> Virulence. 12 (1), 547-569 (2021).</li>
<li>Lakhundi, S., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%3A+molecular+characterization%2C+evolution%2C+and+epidemiology%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: molecular characterization, evolution, and epidemiology.</a> Clinical Microbiology Reviews. 31 (4), e00020(2018).</li>
<li>Mancuso, G., Midiri, A., Gerace, E., Biondo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+antibiotic+resistance%3A+the+most+critical+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Bacterial antibiotic resistance: the most critical pathogens.</a> Pathogens. 10 (10), 1310(2021).</li>
<li>Goullé, J. P., Grangeot-Keros, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aluminum+and+vaccines%3A+Current+state+of+knowledge%5BTitle%5D)+AND+%22Medecine+et+Maladies+Infectieuses%22%5BJournal%5D)">Aluminum and vaccines: Current state of knowledge.</a> Medecine et Maladies Infectieuses. 50 (1), 16-21 (2020).</li>
<li>Shi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+adjuvants%3A+Understanding+the+structure+and+mechanism+of+adjuvanticity%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Vaccine adjuvants: Understanding the structure and mechanism of adjuvanticity.</a> Vaccine. 37 (24), 3167-3178 (2019).</li>
<li>Geoghegan, S., O'Callaghan, K. P., Offit, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+safety%3A+myths+and+misinformation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Vaccine safety: myths and misinformation.</a> Frontiers in Microbiology. 11, 372(2020).</li>
<li>Pandey, P., Gulati, N., Makhija, M., Purohit, D., Dureja, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion%3A+a+novel+drug+delivery+approach+for+enhancement+of+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Recent+Patents+on+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion: a novel drug delivery approach for enhancement of bioavailability.</a> Recent Patents on Nanotechnology. 14 (4), 276-293 (2020).</li>
<li>Ko, E. J., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+and+efficacy+of+MF59-adjuvanted+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccines+%26+Immunotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Immunology and efficacy of MF59-adjuvanted vaccines.</a> Human Vaccines & Immunotherapeutics. 14 (12), 3041-3045 (2018).</li>
<li>Chen, B. H., Inbaraj, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion+and+nanoliposome+based+strategies+for+improving+anthocyanin+stability+and+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion and nanoliposome based strategies for improving anthocyanin stability and bioavailability.</a> Nutrients. 11 (5), 1052(2019).</li>
<li>Zuo, Q. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+protective+immunity+of+a+novel+subunit+fusion+vaccine+in+a+murine+model+of+systemic+MRSA+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the protective immunity of a novel subunit fusion vaccine in a murine model of systemic MRSA infection.</a> PLoS One. 8 (12), e81212(2013).</li>
<li>Sun, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+systemic+and+mucosal+immunity+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+infection+by+a+novel+nanoemulsion+adjuvant+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Induction of systemic and mucosal immunity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection by a novel nanoemulsion adjuvant vaccine.</a> International Journal of Nanomedicine. 10, 7275-7290 (2015).</li>
<li>National Pharmacopoeia Committee. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Chinese+Pharmacopoeia%22">Chinese Pharmacopoeia</a>. , China Medical Science and Technology Press. Beijing. 1088(2020).</li>
<li>Kontomaris, S. V., Stylianou, A., Malamou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atomic+force+microscopy+nanoindentation+method+on+collagen+fibrils%5BTitle%5D)+AND+%22Materials%22%5BJournal%5D)">Atomic force microscopy nanoindentation method on collagen fibrils.</a> Materials. 15 (7), 2477(2022).</li>
<li>Zeng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immunodominant+epitope-specific+monoclonal+antibody+cocktail+improves+survival+in+a+mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+bacteremia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">An immunodominant epitope-specific monoclonal antibody cocktail improves survival in a mouse model of Staphylococcus aureus bacteremia.</a> The Journal of Infectious Diseases. 223 (10), 1743-1752 (2021).</li>
<li>Roy, U., Kornitzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme-iron+acquisition+in+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Heme-iron acquisition in fungi.</a> Current Opinion in Microbiology. 52, 77-83 (2019).</li>
<li>Saeed, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+toxins+in+musculoskeletal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Bacterial toxins in musculoskeletal infections.</a> Journal of Orthopaedic Research. 39 (2), 240-250 (2021).</li>
<li>Xu, Q., Zhou, A., Wu, H., Bi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+in+vivo+evaluation+of+baicalin-loaded+W%2FO+nanoemulsion+for+lymphatic+absorption%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Development+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Development and in vivo evaluation of baicalin-loaded W/O nanoemulsion for lymphatic absorption.</a> Pharmaceutical Development and Technology. 24 (9), 1155-1163 (2019).</li>
<li>Singh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion%3A+Concepts%2C+development+and+applications+in+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion: Concepts, development and applications in drug delivery.</a> Journal of Controlled Release. 252, 28-49 (2017).</li>
<li>Kadakia, E., Shah, L., Amiji, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mathematical+modeling+and+experimental+validation+of+nanoemulsion-based+drug+transport+across+cellular+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Mathematical modeling and experimental validation of nanoemulsion-based drug transport across cellular barriers.</a> Pharmaceutical Research. 34 (7), 1416-1427 (2017).</li>
<li>Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DLS+and+zeta+potential-What+they+are+and+what+they+are+not%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">DLS and zeta potential-What they are and what they are not.</a> Journal of Controlled Release. 235, 337-351 (2016).</li>
<li>Francis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+vaccine+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22The+Veterinary+Clinics+of+North+America.+Small+Animal+Practice%22%5BJournal%5D)">Recent advances in vaccine technologies.</a> The Veterinary Clinics of North America. Small Animal Practice. 48 (2), 231-241 (2018).</li>
<li>Tripathi, N. K., Shrivastava, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+recombinant+protein-based+dengue+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Recent developments in recombinant protein-based dengue vaccines.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1919(2018).</li>
<li>Wilder-Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+vaccine+development%3A+status+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Bundesgesundheitsblatt+Gesundheitsforschung+Gesundheitsschutz%22%5BJournal%5D)">Dengue vaccine development: status and future.</a> Bundesgesundheitsblatt Gesundheitsforschung Gesundheitsschutz. 63 (1), 40-44 (2020).</li>
<li>Korneev, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+sepsis+and+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse models of sepsis and septic shock.</a> Molecular Biology. 53 (5), 799-814 (2019).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין להם ניגודי עניינים בעבודה זו.

IsdB, חלבון פני השטח מעוגן דופן תא חיידקי ומווסת ברזל, ממלא תפקיד חשוב בתהליך קבלת ברזל הם15. HLA, רעלן אלפא, הוא בין הרעלנים החיידקיים היעילים ביותר הידועים ב- MRSA, והוא יכול ליצור נקבוביות בתאים איקריוטים ולהפריע להידבקות ולתאי אפיתל16. במחקר שלנו, חלבון אנטיגן MRSA חדשני (HI) נבנה ובא לידי ביטוי בטכנולוגיית הנדסה גנטית המבוססת על גני האנטיגן של IsdB ו - HLA. לאחר מכן, פותח חיסון ננו-תחליב בשיטת תחליב דל אנרגיה, והוערכו יציבותו ויעילות...

סטפילוקוקוס זהוב עמיד למתיצילין (MRSA) הוא פתוגן אופורטוניסטי עם אחד משיעורי הזיהום הגבוהים ביותר ביחידה לטיפול נמרץ (ICU) מחלקות1, מחלקות קרדיולוגיה ומחלקות כוויות ברחבי העולם. MRSA מציג שיעורים גבוהים של זיהום, תמותה ועמידות רחבה לתרופות, מה שמציג קשיים גדולים בטיפול קליני2. ברשימת העדיפות העולמית של חיידקים עמידים לאנטיביוטיקה שפורסמה על ידי ארגון הבריאות העולמי (WHO) בשנת 2017, MRSA היה רשום בקטגוריה3 הקריטית ביותר. לכן יש צורך דחוף בחיסון נגד זיהום MRSA.
אדג'ובנט אלומיניום נמצא בשימוש מזה זמן רב, ומנגנון העזר האדג'ובנטי ברור יחסית, בטוח, יעיל ונסבל היטב4. אדג'ובנטים מאלומיניום הם כיום סוג נפוץ של אדג'ובנט. מקובל לחשוב כי אנטיגנים הנספחים על חלקיקי מלח אלומיניום יכולים לשפר את היציבות ולשפר את היכולת של אתר ההזרקה לספוג אנטיגנים, לספק ספיגה טובה ושחרור איטי5. נכון לעכשיו, החיסרון העיקרי של אדג'ובנטים מאלומיניום הוא שהם חסרים אפקט אדג'ובנטי או מציגים רק השפעה אדג'ובנטית חלשה על חלק מהאנטיגנים המועמדים לחיסון6. בנוסף, אדג'ובנטים מאלומיניום גורמים לתגובות רגישות יתר בתיווך IgE5. לכן, יש צורך לפתח אדג'ובנטים חדשים כדי לעורר תגובה חיסונית חזקה יותר.
אדג'ובנטים של ננו-תחליב הם מערכות פיזור קולואידיות המורכבות מנפט, מים, חומרים פעילי שטח וקוסורפקטנטים7. בנוסף, האדג'ובנטים יציבים מבחינה תרמודינמית ואיזוטרופיים, ניתנים לאוטוקלאבינג או לייצוב על ידי צנטריפוגה במהירות גבוהה, ויכולים להיווצר באופן ספונטני בתנאי הכנה מתונים. מספר אדג'ובנטים של תחליב (כגון MF59, סדרת NB001-002, סדרת AS01-04 וכו ') נמצאים כיום בשוק או בשלב המחקר הקליני, אך גודל החלקיקים שלהם גדול מ -160 ננומטר8. לכן, היתרונות של תכשירים רפואיים ננומטריים (1-100 ננומטר) (כלומר, שטח פנים ספציפי גדול, גודל חלקיקים קטנים, אפקט פני שטח, אנרגיית שטח גבוהה, אפקט גודל קטן ואפקט מנהור קוונטי מאקרו) אינם ניתנים לניצול מלא. בפרוטוקול הנוכחי, אדג'ובנט חדשני המבוסס על טכנולוגיית ננו-תחליב בקוטר של 1-100 ננומטר דווח כבעל פעילות אדג'ובנטית טובה9. בדקנו את חלבון האנטיגן של החיסון מסוג רקומבינציה HI (מוטנט α-המוליזין [Hla] ומשטח יון Fe הקובע גורם B [IsdB] תת-יחידה N2 חלבון היתוך מקטע פעיל); סדרה של נהלים נקבעו כדי לבחון את התכונות הפיזיות והיציבות, להעריך את תגובת הנוגדנים הספציפית שלו לאחר מתן תוך שרירי, ולבחון את ההשפעה המגנה של החיסון באמצעות מודל זיהום מערכתי בעכבר.

<table><tbody><tr><td>5424-צנטריפוגה קטנה במהירות גבוההFA-45-24-11</td><td>Eppendorf, גרמניה&nbsp;</td><td></td><td></td>5424000495</tr><tr><td>צלחות 96 בארות</td><td>Corning Incorporated, ארה"ב</td><td>CLS3922</td><td></td></tr><tr><td>AFM Dimension FastScan</td><td>BRUKER, גרמניה&nbsp;</td><td></td><td>מנורת אלכוהול אפס</td></tr><tr><td></td><td>שנזן Yibaxun טכנולוגיה ושות', סין</td><td>YBS-AA-11408</td><td></td></tr><tr><td>Balb / c עכברים&nbsp;</td><td>בייג'ינג HFK ביוסיינס ושות' בע"מ&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BCIP / NBT</td><td>Fuzhou Maixin חברת פיתוח ביוטכנולוגיה, סין</td><td>BCIP / NBT</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad 6.0 קורא מיקרופלטות</td><td>Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, ארה"ב</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>BL21 תא מוסמך</td><td>Merck millipore, גרמניה</td><td>70232-3CN</td><td></td></tr><tr><td>BSA-100G</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>B2064-100G</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה 5810 R</td><td>Eppendorf, גרמניה&nbsp;</td><td></td><td></td>5811000398</tr><tr><td>Coomassie כחול בהיר G-250 פתרון מכתים</td><td>MIKX, סין</td><td>DB236</td><td></td></tr><tr><td>פתרון הסרת צבע</td><td>BOSTER, סין</td><td>AR0163-2</td><td></td></tr><tr><td>מטפח טמפרטורת עמידה לחימום אלקטרו HH-B11-420</td><td>מפעל המכשור הרפואי שנחאי Yuejin, סין</td><td></td> מכשיר אלקטרופורזה אפס <td></td></tr><tr><td></td><td>מפעל מכשירים בייג'ינג Liuyi, סין</td><td>DYCZ-25D</td><td></td></tr><tr><td>ג'ל תמונה</td><td>טאנון, ארה"ב</td><td>אפס</td><td></td></tr><tr><td>גלוטתיון-ספרוז שרף GST</td><td>Mei5bio, סין</td><td>שרף</td><td></td>כרומטוגרפיה זיקה</tr><tr><td>H2SO4</td><td>Chengdu KESHI Chemical Co., LTD, סין</td><td>7664-93-9</td><td></td></tr><tr><td>HI חלבון רקומביננטי</td><td>האוניברסיטה הרפואית הצבאית השלישית, סין</td><td>110-27-0</td><td></td></tr><tr><td>HRP - עיזים נגד עכבר IgG</td><td>Biodragon, סין</td><td>BF03001</td><td></td></tr><tr><td>HRP- עיזים נגד עכבר IgG1</td><td>Biodragon, סין</td><td>BF03002R</td><td></td></tr><tr><td>HRP- עז נגד עכבר IgG2a</td><td>Biodragon, סין</td><td>BF03003R</td><td></td></tr><tr><td>HRP- עז נגד עכבר IgG2b</td><td>Biodragon, סין</td><td>BF03004R</td><td></td></tr><tr><td>לולאת חיסון</td><td>Haimen Feiyue Co., LTD, סין</td><td>YR-JZH-1UL</td><td></td></tr><tr><td>שיבוטי IsdB ו- Hla</td><td>שנחאי Jereh ביוטכנולוגיה ושות', סין</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>איזופרופיל אגוז מוסקט (אדג'ובנט פרמצבטי)</td> <td>SEPPIC, צרפת</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>isopropyl- &beta;-D-1-mercaptogalactopyranoside</td><td>fdbio, סין</td><td>FD3278-1</td><td></td></tr><tr><td>LB תרבות מרק-בינוני</td><td>בייג'ינג AOBOX ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td>02-136</td><td></td></tr><tr><td>מנורת פיזיותרפיה Lnfrared</td><td>גואנגג'ואו רונמן ציוד רפואי ושות', סין</td><td>7600</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה מקוררת בטמפרטורה נמוכה</td><td>אפנדורף, גרמניה&nbsp;</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Malvern NANO ZS</td><td>Malvern Instruments Ltd., בריטניה</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>MH (A) בינוני</td><td>בייג'ינג AOBOX ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td>02-051</td><td></td></tr><tr><td>MH (B) בינוני</td><td>בייג'ינג AOBOX ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td>02-052</td><td></td></tr><tr><td>מכונת כביסה מיקרו צלחת 405 LSRS</td><td>Bio Tek Instruments, Inc Highland&nbsp; פארק, ארה"ב</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Mini-TBC מכשיר העברת סרט קומפקטי</td><td>BeiJingDongFangRuiLi ושות', בע"מ, סין</td><td>1658030</td><td></td></tr><tr><td>אריזת MMC</td><td>TOSOH (שנחאי) ושות', בע"מ</td><td></td><td></td></tr> 0022818 <tr><td>MRSA252</td><td>ארה"ב, ATCC</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר אולטרה סגול Nanodrop</td><td>תרמו מדעי, ארה"ב</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>חלבון פלאש חדש כל דף KD ערכת ג'ל אלקטרופורזה חלבון</td><td>DAKEWE, סין</td><td>8012011</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>biosharp, סין</td><td>אפס</td><td></td></tr><tr><td>PCR, מגבר</td><td>מחזור תרמי, ארה"ב</td><td>אפס</td><td></td></tr><tr><td>pGEX-יעד גן רקומביננטי פלסמיד</td><td>שנחאי Jereh ביוטכנולוגיה ושות', סין</td><td>B3528G</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פוספוטונגסטית</td><td>G-CLONE, סין</td><td>CS1231-25g</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה</td><td>Eppendorf, גרמניה&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3120000844 שמן קיק פוליאוקסיאתיל (אדג'ובנט פרמצבטי)</td><td>אלאדין, סין</td><td>K400327-1 ק"ג</td><td></td></tr><tr><td>נוגדנים ראשוניים</td><td>תוצרת בית במעבדה: מעכברים מחוסנים עם סרום אפס חיובי</td><td></td><td>ראה הפניה 11 לפרטים</td></tr><tr><td>פרופילן גליקול (אדג'ובנט פרמצבטי)</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>P4347-500ML</td><td></td></tr><tr><td>סמן חלבון</td><td>תרמו סיינטופוק, ארה"ב</td><td>26616</td><td></td></tr><tr><td>PVDF העברת קרום</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>88518</td><td></td></tr><tr><td>סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים</td><td>JEOL, יפן</td><td>JSM-IT800</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פנטוברביטל</td><td>Merck, גרמניה</td><td>Tc-P8411</td><td></td></tr><tr><td>Talos L120C TEM</td><td>תרמו פישר, ארה"ב</td><td>אפס</td><td></td></tr><tr><td>TMB פתרון צבע</td><td>TIAN GEN, סין</td><td>PA107-01</td><td></td></tr><tr><td>ערכות צב</td><td>Xiamen Bioendo Technology Co., LTD</td><td>ES80545</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Macklin, סין</td><td>9005-64-5</td><td></td></tr></tbody></table>

הערכת התגובה החיסונית של חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב נגד זיהום סטפילוקוקוס אאורוס עמיד למתיצילין (mrsa)

Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Infection

חיסונים אדג'ובנטיים של ננו-תחליב משכו תשומת לב נרחבת בגלל גודל החלקיקים הקטן שלהם, יציבות תרמית גבוהה ויכולתם לגרום לתגובות חיסוניות תקפות. עם זאת, קביעת סדרה של פרוטוקולים מקיפים להערכת התגובה החיסונית של חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב חדשני היא חיונית. לכן, מאמר זה כולל הליך קפדני לקביעת המאפיינים הפיזיקוכימיים של חיסון (על ידי מיקרוסקופ אלקטרונים שידור [TEM], מיקרוסקופ כוח אטומי [AFM], ופיזור אור דינמי [DLS]), יציבות האנטיגן והמערכת של החיסון (על ידי בדיקת צנטריפוגה במהירות גבוהה, בדיקת יציבות תרמודינמית, SDS-PAGE וכתם מערבי), והתגובה החיסונית הספציפית (IgG1, IgG2a, ו- IgG2b). באמצעות גישה זו, חוקרים יכולים להעריך במדויק את ההשפעה המגנה של חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב חדשני במודל קטלני של עכבר MRSA252. בעזרת פרוטוקולים אלה, ניתן לזהות את האדג'ובנט המבטיח ביותר של חיסון ננו-תחליב במונחים של פוטנציאל אדג'ובנטי יעיל. בנוסף, השיטות יכולות לסייע באופטימיזציה של חיסונים חדשים לפיתוח עתידי.

נבדק הפרוטוקול להכנת החיסון האדג'ובנטי ננו-תחליב ובדיקות in vitro ו-in vivo של חיסון זה. TEM, AFM ו-DLS שימשו כדי לקבוע את המאפיינים החשובים של פוטנציאל הזטה וגודל החלקיקים על פני השטח של הדגימה הזו (איור 1). SDS-PAGE ו-Western Blotting הראו שכמות האנטיגן במשקע ובסופרנאטנט לא ירדה משמעותית לאחר הצנטריפוגה, מה שמצביע על כך שהחיסון היה שלם מבחינה מבנית, ספציפי ואימונוגני (איור 2). החיסון האדג'ובנטי ננו-תחליב הגדיל משמעותית את סך נוגדני IgG, IgG1 ...

הפרוטוקול הנוכחי מכין ומעריך את התכונות הפיזיקליות, התגובה החיסונית וההשפעה המגנה in vivo של חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב חדשני.

הערכת התגובה החיסונית של חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב נגד זיהום סטפילוקוקוס אאורוס עמיד למתיצילין (MRSA)

Nanoemulsion adjuvant vaccines have attracted extensive attention because of their small particle size, high thermal stability, and ability to induce ...

הפרוטוקול שהודגם הדגיש את הגישה הניסויית הישירה והיעילה ואת הצעדים המפורטים להשפעות התגובה החיסונית של אדג'ובנטים נגיפיים חדשים. פרוטוקול זה מספק למחקר לא רק שיטת הערכה חיסונית בסיסית לחיסון אדג'ובנטי, אלא גם יכול לקבוע את יציבות המסה שלהם. כדי להתחיל, לקחת את 10 מיליגרם למיליליטר פתרון עבודה של חלבון אנטיגן MRSA HI, ואליו, להוסיף ברצף את שלושת excipients, isopropyl myristate, שמן קיק פוליאוקסאתילן, פרופילן גליקול, שמירה על יחס מסה של אחד הוא לשישה הוא לשלושה.מערבבים היטב את התערובת, ואז מוסיפים בהדרגה מים טהורים מעוקרים כדי להגיע לנפח מערכת של 10 מיליליטר. כדי להכין את החיסון ננו-תחליב בשיטת תחליב אנרגיה נמוכה, ערבבו אותו במהירות של 500 סיבובים לדקה ו-25 מעלות צלזיוס במשך כ-20 דקות. לאחר מכן, חיסון ננו-תחליב המכיל מיליגרם אחד לחלבון מיליליטר מתקבל כנוזל שקוף שקוף.עבור ציפוי אנטיגן של אנזים מקושר immunosorbent assay או צלחת ELISA, לדלל אנטיגן חלבון HI ל 10 מיקרוגרם למיליליטר עם תמיסת ציפוי, ולהוסיף 100 מיקרוליטר של אנטיגן מדולל לכל באר בצלחת ELISA. דוגרים על הצלחת בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה. לאחר הדגירה, לשטוף את הצלחת עם 300 מיקרוליטר של PBST לכל באר.אטמו את הבארות עם 300 מיקרוליטר של תמיסת האיטום לכל באר למשך שעתיים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן דללו שלושה מיקרוליטרים של נסיוב העכברים מכל קבוצת ניסוי 100 פעמים על ידי הוספת 297 מיקרוליטר של PBST, וערברו את הסרום המדולל. הוסף 100 מיקרוליטר של סרום מדולל לכל באר בצלחת ELISA המצופה עבור כל דגימת סרום. באופן דומה, דללו את סרומי הבקרה החיוביים והשליליים 100 פעמים עם PBST על ידי הוספת ארבעה מיקרוליטרים של סרום בקרה חיובי או שלילי ל-396 מיקרוליטר של PBST, ולאחר מכן ערבוב מערבולות.כדי לבצע דילול יחס כפול, הוסף 200 מיקרוליטר של סרום ניסיוני מדולל בעבר לשורה הראשונה של צלחת ELISA מצופה, ולאחר מכן הוסף 100 מיקרוליטר של PBST לכל הבארות, למעט אלה בשורות 1 ו -12. לאחר מכן, להתאים את אקדח פיפטה ל 100 מיקרוליטר ולהעביר 100 מיקרוליטר של סרום מהשורה הראשונה לשורה השנייה המכילה PBST. מערבבים את התוכן בשורה השנייה 10 פעמים באמצעות אקדח פיפטה.באופן דומה, לבצע אחד הוא לשני דילולים רצופים של הסרום עד שורה 11. לאחר שתסיים, השליכו 100 מיקרוליטר נוזל משורה 11. הוסף 100 מיקרוליטר של סרום שלילי וחיובי מדולל לכל באר מתאימה בשורה 12 לאחר תבנית הדגימה.אטמו את צלחת ELISA בניילון נצמד ודגרו בחום של 37 מעלות למשך שעה. בינתיים, לדלל נוגדנים משניים נגד עכבר IgG HRP 10, 000 פעמים על ידי הוספת PBST. לאחר הדגירה של שעה, לשטוף את צלחת ELISA עם 300 מיקרוליטר של PBST לכל באר כדי לנקות את הנוגדנים unbound, ולאחר מכן להוסיף 100 מיקרוליטר של נוגדן משני מדולל לכל באר לדגור את הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס במשך 40 דקות.לשטוף את הצלחת עם 300 מיקרוליטר של PBST לכל באר, ולאחר מכן להוסיף 100 מיקרוליטר של פתרון פיתוח צבע TMB לכל באר. מניחים את הצלחות על 37 מעלות צלזיוס הרחק מהאור במשך 10 דקות. לאחר מכן, לסיים את התגובה מיד עם 50 מיקרוליטר של שתי חומצה גופרתית מולרית.זהה את הצפיפות האופטית או ערכי OD ב- 415 ננומטר באמצעות סמן אנזים תוך 15 דקות לאחר הסיום. המאפיינים הפיזיים של חיסון ננו-תחליב חדשני נותחו באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת ומיקרוסקופ כוח אטומי. פיזור אור דינמי שימש לקביעת התפלגות גודל החלקיקים ופוטנציאל הזטה של הדגימה.SDS-PAGE ו-Western Blotting הראו כי כמות האנטיגן במשקע ובסופרנאטנט לא פחתה באופן משמעותי לאחר הצנטריפוגה, מה שמצביע על כך שהחיסון היה שלם מבחינה מבנית, ספציפי ואימונוגני. החיסון האדג'ובנטי ננו-תחליב הגדיל משמעותית את סך טיטרי הנוגדנים IgG, IgG1 ו-IgG2a של העכברים. האימונוגניות של החיסון החלבוני השתפרה משמעותית.ערכי OD IgG2b בסרום ב 450 ננומטר היו הגבוהים ביותר כאשר PBS שימש בדילול אחד הוא 5, 000. המודל הקטלני של עכברי MRSA 252 שיקף כי החיסון נגד ננו-תחליב הראה אפקט מגן טוב ועיכב ביעילות זיהום חיידקי עם MRS A 252, מה ששיפר את שיעור ההישרדות של עכברים נגועים. הכנת ננו-תחליב והוספת סרום לצמח הם החשובים ביותר.כמו כן, כאשר מזהים את טיטר הנוגדנים, יש לשים לב לתקן ליציאה רחבה ונוזלית. מלבד אדג'ובנטים, שיטה זו יכולה לשמש גם לאבולוציה חיסונית של מערכים מתמטיים אחרים, כגון פלסטיק או מערכות מסירה.

evaluating-immune-response-nanoemulsion-adjuvant-vaccine-against

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

סרטון זה מדגים טכניקת הומוגניזציה יעילה ליצירת תחליב אנטיגן-אדג'ובנטי כדי לגרום לאנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE) במודל מורין. התחליב מכיל אנטיגן עצמי - גליקופרוטאין אוליגודנדרוציטים מיאלין (MOG) - בשלב המים, מוקף בשלב שמן רציף הכולל חיידק פתוגני בלתי פעיל. האמולסיה מבטיחה שחרור מתמשך של אנטיגנים לתגובה חיסונית ממושכת.

הכנת תחליב אנטיגן-אדג'ובנטי להשראת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית

סרטון זה מדגים שיטה להערכת התגובה החיסונית של נוגדנים לחיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב חדשני בעכברים טרום-מחוסנים. החיסון משפר את תגובת הנוגדנים כפי שאושר על ידי קביעת נוגדני IgG.

מדידת רמות G של אימונוגלובולין כנגד חיסון ניסוי בסרום עכברים

סרטון זה מדגים את הייצור של חיסונים נגד גידולי ננו-תחליב. מחסני מאגר הנפט היציבים הנושאים פפטידים ואדג'ובנטים סינתטיים מיוצרים על ידי ננו-תחליב באנרגיה נמוכה, מה שמציע הבטחה משמעותית לאימונותרפיה של גידולים.

הכנת חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב

אנו מתארים הדמיה של בעלי חיים שלמים וטכניקות מבוססות ציטומטריית זרימה לניטור התרחבות של תאי CD8+ T ספציפיים לאנטיגן בתגובה לחיסון עם ננו-חלקיקים במודל חיסון עכברי.

טכניקות הדמיה כל-החיה והזרימה Cytometric לתגובות ניתוח של אנטיגן ספציפי CD8 + T תא לאחר Nanoparticle חיסון

הפרוטוקול מציג שיטות מפורטות להערכה אם ננו-אמולסיה אופיופוגונין D אדג'ובנט מקדם תגובות חיסוניות תאיות יעילות.

במבחנה הערכת פעילות תאית של חיסון ננו-אמולסיה אדג'ובנט אופיופוגונין D

כאן, אנו מציגים שיטות מפורטות להכנה והערכה של החיסון לגידול ננו-תחליב בהרכבה עצמית באף במבחנה  ו-in vivo.

הכנה, מאפיינים, רעילות והערכת יעילות של החיסון לגידול ננו-תחליב באף בהרכבה עצמית במבחנה וב-Vivo

כדי לגרום לאנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית, מודל חייתי של טרשת נפוצה, עכברים מחוסנים בתחליב מים בשמן המכיל אוטואנטיגן ואדג'ובנט שלם של פרוינד. בעוד שקיימים מספר פרוטוקולים להכנת אמולסיות אלה, מוצג כאן פרוטוקול הומוגניזציה מהיר, פשוט וסטנדרטי להכנת אמולסיה.

שיטת הומוגניזציה מהירה, פשוטה וסטנדרטית להכנת אמולסיות אנטיגן/אדג'ובנטיות לגרימת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

אנו מציגים ארבע שיטות להערכת הפעילות האנטי-מיקרוביאלית של ננו-חלקיקים ומשטחים ננו-מבניים באמצעות טכניקות in vitro . שיטות אלה יכולות להיות מותאמות לחקר האינטראקציות של ננו-חלקיקים ומשטחים ננו-מבניים שונים עם מגוון רחב של מיני מיקרובים.

הערכת פעילויות אנטי-מיקרוביאליות של ננו-חלקיקים ומשטחים ננו-מבניים במבחנה

בפרוטוקול זה, פיתחנו חומצה רטינואית קטיונית בעטוף תחליב ננו-תחליב (RA) שתשמש כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות לאנטיגן. על ידי הוספת RA שאושר על ידי ה- FDA לננו-תחליב, sIgA ספציפי לאנטיגן קודם בנרתיק ובמעי הדק לאחר הזרקה תוך שרירית של ננו-תחליב.

חומצה רטינואית קטיונית בעטוף ננו-תחליב כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות ל-OVA

הפרוטוקולים של ניצול לפתוח זרימת biofilms מערכת עם כורים זרימה טפטוף וסיבוב כורים דיסק מוצגים בפירוט.

השימוש זרימה טפטוף ו כורים דיסק סיבוב עבור Staphylococcus aureus Biofilm ניתוח

למד הכנת חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב נגד זיהום Staphylococcus aureus עמיד למתיצילין (MRSA). השיטה משתמשת באמולסיפיקציה באנרגיה נמוכה להערכת התגובה החיסונית וההגנה אינ-ויבו.

הערכת התגובה החיסונית של חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב נגד זיהום סטפילוקוקוס אאורוס עמיד למתיצילין (MRSA)

גלה סרטונים נוספים