Analysis of Transgenerational Epigenetic Inheritance in <em>C. elegans</em> Using a Fluorescent Reporter and Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

Chengyin Li; Phoebe A. W. Bhagoutie; Victor Lao; Arneet L. Saltzman

doi:10.3791/65285

ניתוח תורשה אפיגנטית בין-דורית ב- C. elegans באמצעות כתב פלואורסצנטי ומשקעים חיסוניים של...

JoVE Journal
Genetics

This content is Free Access.

JoVE Journal Genetics

Analysis of Transgenerational Epigenetic Inheritance in C. elegans Using a Fluorescent Reporter and Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

ניתוח תורשה אפיגנטית בין-דורית ב- C. elegans באמצעות כתב פלואורסצנטי ומשקעים חיסוניים של כרומטין (ChIP)

Full Text

4,438 Views

10:28 min

May 5, 2023

DOI: 10.3791/65285-v

Chengyin Li*¹, Phoebe A. W. Bhagoutie*¹, Victor Lao¹, Arneet L. Saltzman¹

¹Department of Cell and Systems Biology,University of Toronto

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

פרוטוקול זה מתאר התאבכות RNA ובדיקת ChIP כדי לחקור את התורשה האפיגנטית של השתקה הנגרמת על ידי RNAi ושינויים כרומטינים הקשורים ב- C. elegans.

המחקר במעבדה שלנו בוחן כיצד חלבונים הקשורים לכרומטין, שינויים בהיסטון וגורמי מסלול RNA קטנים פועלים יחד בהקשר של התפתחות ותורשה אפיגנטית בין-דורית. בדיקת ירושת RNA, באמצעות כתב GFP, הפכה לכלי רב עוצמה. פרוטוקול זה מתאר כיצד לתקנן את ההכנה, הניקוד והמסירה של תולעים, ואת הכנת דגימות ChIP, שיכולות לסייע ביצירת תוצאות הניתנות לשחזור.

אחד האתגרים הניסיוניים בחקר טרנסגנים המבוטאים בנבט הוא בידוד ההשפעות בקו הנבט של החיה. כיום אנו משתמשים בבעלי חיים שלמים עבור ChIP, אך בעתיד נרצה לפתח בדיקות לבדיקת כרומטין, במיוחד בקו הנבט. המעבדה שלנו מתעניינת במתילציה של היסטון ובחלבונים שמזהים את הסימנים האלה.

בהמשך, ברצוננו לחקור את יחסי הגומלין בין קוראי הכרומטין הללו לבין מסלולי רנ"א קטנים בהקשר של תורשה של RNAi בטרנסגנים והרגולציה של רצפים אנדוגניים.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos