Name: מדידות פיזור ראמאן משופרות על פני השטח של מולקולה אחת המופעלות על ידי ננו-אנטנות אוריגמי DNA פלסמוני (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-21T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 43 s
Description: למד מדידות פיזור ראמאן משופרות על פני השטח של מולקולה אחת באמצעות ננו-אנטנות אוריגמי DNA פלסמוניות. שיטה זו מאפשרת זיהוי בזמן אמת של מולקולות בודדות ומעקב אחר תגובות כימיות ברמת מולקולה יחידה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מועצת המחקר האירופית (ERC; מענק קונסולידטור מס '772752).

1. הרכבת מזלג אוריגמי DNA
<ol><li>הרכבה עצמית של מבנה האוריגמי DNA בסיר אחד. ראשית, הוסף גדיל פיגום עגול M13mp18 של 2.5 ננומטר (7,249 נוקלאוטידים, ראה טבלת חומרים) ו-100 ננומטר של 201 אוליגונוקלאוטידים קצרים (טבלה 1) ב-1x TAE (tris[hydroxymethyl]aminomethane [tris], חומצה אצטית, אתילאנדיאמין חומצה אצטית [EDTA]) בתוספת חיץ15 mM MgCl 2. לאחר מכן, התאם את הנפח הכולל ל -100 μL באמצעות מים טהורים במיוחד.</li>
	<li>אנאל את התמיסה לאחר מכן על ידי שיפוע טמפרטורה ב thermocycler, תחילה על ידי חימום מהיר ל 80 ° C, ולאחר מכן על ידי קירור מ 80 ° C ל 20 ° C ב 1 ° C / 12 דקות, ולאחר מכן מ 20 ° C ל 16 ° C ב 1 ° C / 6 דקות, ולאחר מכן קירור מהיר מ 16 ° C ל 8 ° C.</li>
	<li>השתמש במסנני Amicon של 100 kDa לחיתוך משקל מולקולרי (MWCO) (ראה טבלת חומרים) כדי לטהר את התערובת מעודפי סיכות.<ol><li>הוסף 100 μL של תמיסת אוריגמי DNA למסנני Amicon, כמו גם 400 μL של מים טהורים במיוחד, ולאחר מכן צנטריפוגה ב 6,000 x גרם במשך 8 דקות בטמפרטורת החדר (RT).</li>
		<li>השליכו את המסנן על ידי הסרת המסנן והפיכת הצינור כדי להסיר את השטיפה בכיור, ולאחר מכן הוסיפו שוב 400 מיקרוליטר מים טהורים במיוחד למסנן ולצנטריפוגה. חזור על שלב זה פעם נוספת.</li>
		<li>כדי לאסוף את תמיסת הננו-מבנה המטוהר, הפוך את המסנן בצינור ובצנטריפוגה חדשים (1,000 x גרם, 2 דקות, RT) בהתאם להוראות היצרן (ראה טבלת חומרים). פתרון זה ניתן לאחסן במקרר ב 8 ° C עד 2 שבועות. הערה: יש להשתמש במאגר TAE 1x או 1x TAE בתוספת חיץ 15 mM MgCl2 במקום מים טהורים במיוחד לשלב טיהור מסנן Amicon, מכיוון שמים מפחיתים את היציבות ומורידים את ריכוז מזלגות האוריגמי של ה- DNA המתקבלים. למדידת מולקולת צבע יחידה, תערובת גדילי סיכות הדנ"א מוחלפת בתערובת גדילים שונה המכילה צבע TAMRA בקצה 5 אינץ'. גדיל שונה זה נמצא באמצע גשר ננו-מזלג (טבלה 2).</li>
	</ol></li>
</ol>2. ציפוי ננו-חלקיקי זהב (AuNP)
הערה: גרסה שונה של פרוטוקול Liu et al.23 שימשה לציפוי AuNPs, ותהליך הציפוי כלל הקפאת תמיסת AuNP-DNA.
<ol><li>צנטריפוגה (3,500 x גרם, 5 דקות, RT) 400 μL של תמיסת AuNP בקוטר 60 ננומטר (מתקבלת מסחרית; ראה טבלת חומרים), ובאמצעות פיפטה, להסיר את supernatant. לאחר מכן, resolubilize את הגלולה ב 25 μL של מים טהורים במיוחד. הריכוז הסופי של AuNPs הוא ~ 0.3 nM.</li>
	<li>הוסף 1 μL של 100 mM תמיסת tris-(2-carboxyethyl)phosphine (TCEP) ל-4 μL של DNA מהונדס בתיול (100 μM כפי שסופק על-ידי היצרן; ראה טבלת חומרים) ודגור במשך 10 דקות ב-RT.</li>
	<li>לאחר הדגירה, מוסיפים את תערובת 5 μL לתמיסת AuNP המרוכזת (שלב 2.1), מערבולות למשך 5 שניות, ומקפיאים למשך שעתיים לפחות ב -20 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>לאחר הפשרה ב-RT, צנטריפוגה (3,500 x גרם, 5 דקות, RT) את התערובת כדי להסיר את ה-DNA הציפוי שנוסף יתר על המידה. בעזרת פיפטה, להסיר את supernatant, ו reublize את הגלולה ב 10 μL של מים. הערה: ישנם שני גדילי ציפוי עבור כל אחד מה-AuNPs בננו-מזלג (טבלה 2). השלבים זהים למעט רצף גדיל ציפוי הדנ"א. ברגע שהחלקיקים מצופים, הם יציבים מאוד; הם יכולים להישאר כפי שהם במשך חודשים במקרר ואפילו ניתן להקפיא אותם. עבור AuNPs של צבע בציפוי מלא, גדילי ה- DNA המצפים הם בעלי צבע TAMRA פנימי.</li>
</ol>3. הרכבה של דונה
<ol><li>הוסף את תמיסת AuNP המצופה לתמיסת ננו-מזלג, עם יחס מולארי ריכוז של 1.5:1.</li>
	<li>הוסף את MgCl 2 לריכוז סופי של 4 mM באמצעות תמיסת מלאי MgCl2 של 50 mM. כוונן את הנפח הסופי ל- 20 μL באמצעות מים טהורים במיוחד.</li>
	<li>הכלאה של DONAs באמצעות שיפוע טמפרטורה בתרמוסייקלר. ראשית, יש לחמם במהירות ל-40°C, לאחר מכן לקרר מ-40°C עד 20°C ב-1°C/10 דקות, ולאחר מכן לקרר במהירות מ-20°C עד 8°C.</li>
</ol>4. אלקטרופורזה ג'ל
הערה: הננו-חלקיקים הבלתי קשורים בתמיסת DONA מוסרים על ידי אלקטרופורזה של ג'ל אגרוז.
<ol><li>הכינו ג'ל אגרוז 1%. לשם כך, להמיס 0.8 גרם של agarose ב 80 מ"ל של 1x TAE בתוספת 5 mM MgCl2.</li>
	<li>הוסף 2.25 μL של מאגר העמסה (30% גליצרול, 13 mM MgCl 2; ראה טבלת חומרים) ל- 18 μL של תמיסת DONA כדי להגיע לריכוז סופי של 5 mM MgCl 2 מ- 4 mM בשלב3.2. מאגר ההעמסה גם מבטיח שהדגימה תישאר בתוך כיס הג'ל.</li>
	<li>הפעל את הג'ל במשך 60 דקות ב 70 V באמבט מי קרח. מאגר הריצה הוא 1x TAE בתוספת 5 mM MgCl2.</li>
	<li>גזרו את הרצועה המעניינת והניחו אותה על שקופית מיקרוסקופיה עטופה בסרט פלסטיק פרפין, ולאחר מכן סחטו את התמיסה באמצעות שקופית מיקרוסקופית שנייה עטופה בסרט פלסטיק פרפין. בעזרת פיפטה, לאסוף את הנוזל סחוט לתוך צינור 500 μL.</li>
</ol>5. קולוקליזציה של מדידות AFM ורמאן
<ol><li>פלזמה לטפל שבב סיליקון (ראה טבלה של חומרים) במשך 10 דקות, ולאחר מכן לדגור 10 μL של תמיסת DONA מטוהר בתוספת 10 μL של 100 mM MgCl2 על השבב במשך 3 שעות. לאחר מכן, שטפו את השבב פעמיים בתערובת של 1:1 (לפי נפח) של אתנול ומים וייבשו במכה עם אוויר דחוס. לאחר מכן, הדביקו את השבב על דיסק מגנטי והכניסו אותו למכשיר להדמיה. הערה: לפני תחילת המדידות, המיקום של לייזר עירור ראמאן מותאם להיות על גבי קצה הבדיקה AFM. בעבודה הנוכחית נעשה שימוש במיקרוסקופ HORIBA LabRAM HR Evolution Raman המשולב ל-HORIBA Omegascope AFM. המכשיר נשלט באמצעות התוכנה LabSpec ו-AIST.</li>
	<li>למדידת AFM, השתמש במצב הקשה (מצב AC) עם עצות ACCESS-NC-A (תדר תהודה: 300 kHz; קבוע קפיץ: 45 N/m)24. מצב AC שולט אוטומטית בכל הפרמטרים, למעט קצב הסריקה, המוגדר ל- 1 הרץ. הערה: לאחר הדמיית AFM, קצה ה-AFM נסוג כך שהוא לא נמצא בנתיב של לייזר הרמאן. זה נעשה באמצעות פונקציית מאקרו, "בדיקה משם", מתוכנת במערכת. בדרך זו, עבור כל נקודה שנבחרה בתמונת AFM, הלייזר יהיה באותו מיקום ללא היסט בהשוואה ל- AFM.</li>
	<li>בחר את אורך גל הלייזר הרצוי, הספק וזמן הצטברות למדידות ראמאן, שכן כל הפרמטרים הללו תלויים במדגם הנמדד.<ol><li>השתמש בפרמטרים שהוזכרו למדידת TAMRA AuNP בציפוי מלא: לייזר 633 ננומטר, הספק 100 μW וזמן אינטגרציה של 1 שניות.</li>
		<li>השתמש בפרמטרים שהוזכרו למדידת TAMRA יחידה: לייזר 633 ננומטר, הספק 400 μW וזמן אינטגרציה של 4 שניות.</li>
	</ol></li>
	<li>לאחר התאמת הפרמטרים, מקם את הסמן על גבי ה- DONA הרצוי בתמונת AFM; הפונקציה "העבר סמן" בתוכנה עושה זאת. לאחר מכן, התחל את מדידת הרמאן. הערה: ישנם מצבים שונים לרכישת הספקטרה: מדידה של נקודה אחת - מיפוי זמן חד-ממדי - שבו נקודה בודדת נמדדת לאורך זמן25; ומיפוי שטח XY דו-ממדי, שבו שלב ממונע מועבר מתחת ללייזר כדי לקבל ספקטרום ממערך של נקודות ברשת XY26.</li>
</ol>

מדידות SERS של מולקולה יחידה המופעלות על ידי ננו-אנטנות אוריגמי DNA פלסמוני

<ol><li>Heck, C., Kanehira, Y., Kneipp, J., Bald, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placement+of+single+proteins+within+the+SERS+hot+spots+of+self-assembled+silver+nanolenses%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie%22%5BJournal%5D)">Placement of single proteins within the SERS hot spots of self-assembled silver nanolenses.</a> Angewandte Chemie. 57 (25), 7444-7447 (2018).</li>
<li>Dey, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+origami%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">DNA origami.</a> Nature Reviews Methods Primers. 1 (1), 13(2021).</li>
<li>Tasciotti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smart+cancer+therapy+with+DNA+origami%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Smart cancer therapy with DNA origami.</a> Nature Biotechnology. 36 (3), 234-235 (2018).</li>
<li>Ijäs, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+the+interaction+between+doxorubicin+and+DNA+origami+nanostructures+for+customizable+chemotherapeutic+drug+release%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Unraveling the interaction between doxorubicin and DNA origami nanostructures for customizable chemotherapeutic drug release.</a> Nucleic Acids Research. 49 (6), 3048-3062 (2021).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+origami-enabled+biosensors%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors%22%5BJournal%5D)">DNA origami-enabled biosensors.</a> Sensors. 20 (23), 6899(2020).</li>
<li>Kabusure, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+characterization+of+DNA+origami-shaped+silver+nanoparticles+created+through+biotemplated+lithography%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Optical characterization of DNA origami-shaped silver nanoparticles created through biotemplated lithography.</a> Nanoscale. 14 (27), 9648-9654 (2022).</li>
<li>Kershner, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placement+and+orientation+of+individual+DNA+shapes+on+lithographically+patterned+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Placement and orientation of individual DNA shapes on lithographically patterned surfaces.</a> Nature Nanotechnology. 4 (9), 557-561 (2009).</li>
<li>Dutta, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+states+and+spin+crossover+of+hemin+studied+by+DNA+origami+enabled+single-molecule+surface-enhanced+Raman+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Molecular states and spin crossover of hemin studied by DNA origami enabled single-molecule surface-enhanced Raman scattering.</a> Nanoscale. 14 (44), 16467-16478 (2022).</li>
<li>Langer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Present+and+future+of+surface-enhanced+Raman+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Present and future of surface-enhanced Raman scattering.</a> ACS Nano. 14 (1), 28-117 (2020).</li>
<li>Jones, R. R., Hooper, D. C., Zhang, L., Wolverson, D., Valev, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Raman+techniques%3A+fundamentals+and+frontiers%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale+Research+Letters%22%5BJournal%5D)">Raman techniques: fundamentals and frontiers.</a> Nanoscale Research Letters. 14 (1), 231(2019).</li>
<li>Blackie, E. J., Le Ru, E. C., Etchegoin, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-molecule+surface-enhanced+Raman+spectroscopy+of+nonresonant+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Single-molecule surface-enhanced Raman spectroscopy of nonresonant molecules.</a> Journal of the American Chemical Society. 131 (40), 14466-14472 (2009).</li>
<li>Sepúlveda, B., Angelomé, P. C., Lechuga, L. M., Liz-Marzán, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LSPR-based+nanobiosensors%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Today%22%5BJournal%5D)">LSPR-based nanobiosensors.</a> Nano Today. 4 (3), 244-251 (2009).</li>
<li>Kelly, K. L., Coronado, E., Zhao, L. L., Schatz, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+optical+properties+of+metal+nanoparticles%3A+The+influence+of+size%2C+shape%2C+and+dielectric+environment%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+B%22%5BJournal%5D)">The optical properties of metal nanoparticles: The influence of size, shape, and dielectric environment.</a> The Journal of Physical Chemistry B. 107 (3), 668-677 (2003).</li>
<li>Funston, A. M., Novo, C., Davis, T. J., Mulvaney, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmon+coupling+of+gold+nanorods+at+short+distances+and+in+different+geometries%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Plasmon coupling of gold nanorods at short distances and in different geometries.</a> Nano Letters. 9 (4), 1651-1658 (2009).</li>
<li>Niu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+origami-based+nanoprinting+for+the+assembly+of+plasmonic+nanostructures+with+single-molecule+surface-enhanced+Raman+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie%22%5BJournal%5D)">DNA origami-based nanoprinting for the assembly of plasmonic nanostructures with single-molecule surface-enhanced Raman scattering.</a> Angewandte Chemie. 60 (21), 11695-11701 (2021).</li>
<li>Fang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantizing+single-molecule+surface-enhanced+Raman+scattering+with+DNA+origami+metamolecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Quantizing single-molecule surface-enhanced Raman scattering with DNA origami metamolecules.</a> Science Advances. 5 (9), (2019).</li>
<li>Zhan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+origami+directed+assembly+of+gold+bowtie+nanoantennas+for+single-molecule+surface-enhanced+Raman+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie%22%5BJournal%5D)">DNA origami directed assembly of gold bowtie nanoantennas for single-molecule surface-enhanced Raman scattering.</a> Angewandte Chemie. 57 (11), 2846-2850 (2018).</li>
<li>Choi, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-molecule+surface-enhanced+Raman+scattering+as+a+probe+of+single-molecule+surface+reactions%3A+promises+and+current+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Accounts+of+Chemical+Research%22%5BJournal%5D)">Single-molecule surface-enhanced Raman scattering as a probe of single-molecule surface reactions: promises and current challenges.</a> Accounts of Chemical Research. 52 (11), 3008-3017 (2019).</li>
<li>Liu, N., Liedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA-assembled+advanced+plasmonic+architectures%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">DNA-assembled advanced plasmonic architectures.</a> Chemical Reviews. 118 (6), 3032-3053 (2018).</li>
<li>Acuna, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+enhancement+at+docking+sites+of+DNA-directed+self-assembled+nanoantennas%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fluorescence enhancement at docking sites of DNA-directed self-assembled nanoantennas.</a> Science. 338 (6106), 506-510 (2012).</li>
<li>Shen, B., Kostiainen, M. A., Linko, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+origami+nanophotonics+and+plasmonics+at+interfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">DNA origami nanophotonics and plasmonics at interfaces.</a> Langmuir. 34 (49), 14911-14920 (2018).</li>
<li>Tapio, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+versatile+DNA+origami-based+plasmonic+nanoantenna+for+label-free+single-molecule+surface-enhanced+Raman+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">A versatile DNA origami-based plasmonic nanoantenna for label-free single-molecule surface-enhanced Raman spectroscopy.</a> ACS Nano. 15 (4), 7065-7077 (2021).</li>
<li>Liu, B., Liu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Freezing-driven+DNA+adsorption+on+gold+nanoparticles%3A+tolerating+extremely+low+salt+concentration+but+requiring+high+DNA+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Freezing-driven DNA adsorption on gold nanoparticles: tolerating extremely low salt concentration but requiring high DNA concentration.</a> Langmuir. 35 (19), 6476-6482 (2019).</li>
<li>Aliano, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AFM%2C+tapping+mode%5BTitle%5D)+AND+%22Encyclopedia+of+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">AFM, tapping mode.</a> Encyclopedia of Nanotechnology. , 99(2012).</li>
<li>Recording Raman spectral images and profiles. Horiba Scientific. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.horiba.com/int/scientific/technologies/raman-imaging-and-spcetroscopy/recording-spectral-images-and=profiles/">https://www.horiba.com/int/scientific/technologies/raman-imaging-and-spcetroscopy/recording-spectral-images-and=profiles/</a> (2023).</li>
<li>Raman Images Explained. Renishaw. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.renishaw.com/en/raman-images-explained-25810">https://www.renishaw.com/en/raman-images-explained-25810</a> (2023).</li>
<li>Kogikoski, S., Tapio, K., von Zander, R. E., Saalfrank, P., Bald, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Raman+enhancement+of+nanoparticle+dimers+self-assembled+using+DNA+origami+nanotriangles%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Raman enhancement of nanoparticle dimers self-assembled using DNA origami nanotriangles.</a> Molecules. 26 (6), 1684(2021).</li>
<li>Heck, C., Kanehira, Y., Kneipp, J., Bald, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amorphous+carbon+generation+as+a+photocatalytic+reaction+on+DNA-assembled+gold+and+silver+nanostructures%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Amorphous carbon generation as a photocatalytic reaction on DNA-assembled gold and silver nanostructures.</a> Molecules. 24 (12), 2324(2019).</li>
</ol>

למחברים אין אינטרסים כלכליים מתחרים או ניגודי עניינים אחרים.

SM SERS הוא כלי רב עוצמה המאפשר לחוקרים לחקור את ההתנהגות והאינטראקציות של מולקולות בודדות בתוך מדגם1. טכניקה כזו מאפשרת ניתוח של מערכות ברמת רגישות חסרת תקדים, מספקת תובנות חדשות על ההתנהגות הבסיסית של מולקולות בודדות ועל התפלגות התכונות הכימיות או הפיזיקליות על פני אנסמבל של מולקולות, ומסייעת לזהות מתווכים רלוונטיים בתהליכים כימיים. עם זאת, הצבת מולקולה בודדת בנקודה החמה תוך וידוא שלנקודה החמה יש מספיק שיפור פני השטח יכולה להיות מאתגרת למדי27. הדונ"א המתואר בפרוטוקול זה יכול למקם במדויק מולקולה בודדת בנקודה החמה בין שני ננו-חלקיקי זהב תוך הבטחת שיפור פני השטח פי 10 פי11.
הפער בין הננו-חלקיקים הוא קריטי עבור מכלול DONA כדי להגיע לשיפור פני השטח הנדרש עבור מחקרי SM SERS. ה-DONAs מותאמים לננו-חלקיקים כדוריים בגדלים שבין 60 ל-80 ננומטר. יתר על כן, איכות הננו-חלקיקים יכולה להשפיע באופן משמעותי על הכלאת הננו-חלקיקים עם מזלגות האוריגמי של ה-DNA; כאשר הננו-חלקיקים המשמשים בשלב הציפוי הם מעל 6 חודשים, יעילות ההכלאה מתחילה לרדת.
היבט קריטי נוסף של הפרוטוקול הוא שיש לעקוב במדויק אחר השלבים הדורשים יחס מדויק בין רכיבים, אחרת ה- DONAs לא ייווצרו כראוי. מזלג האוריגמי DNA רגיש ביותר לפרוטוקול השתוללות הטמפרטורה, עם שינויים המשפיעים על שלמות המבנה או מונעים היווצרות מזלגות.
ייצור פחמן אמורפי הוא נושא משמעותי במהלך מדידות SERS מכיוון ששיאו הוא בדרך כלל באותו טווח כמו שטח טביעת האצבע של מולקולות רבות (1,200-1,700 סמ"ק-1). בעוד המבנה עדיין לא מובן במלואו, זה קשור בדרך כלל עם כוח לייזר גבוה או אינטגרציה ארוכה פעמים28. כאמצעי זהירות, יש להשתמש בעוצמת הלייזר הנמוכה ביותר ובזמן האינטגרציה הקצר ביותר האפשרי. עם זאת, זה לא קל להשגה כי יש לאזן בין קבלת אות SERS הרצוי לבין הימנעות מיצירת פחמן אמורפי.
ה-DONAs הם מאוד רב-תכליתיים כמערכת SM לגבי הסוגים והצורות השונים של ננו-חלקיקים שניתן להשתמש בהם, כגון כדורי כסף, פרחי זהב או כוכבים. בנוסף, המולקולה הנחקרת יכולה להיות מוחלפת בקלות על ידי שינוי גדיל הדנ"א בלבד במרכז הגשר, ללא שינויים בהליך. מעבר לחלבונים כמו ציטוכרום C יכול להיעשות על ידי גדיל לכידת DNA מהונדס פירידין בגשר, אשר יקשור את הציטוכרום C ויבטיח שהוא נמצא במקום החם למדידות SM SERS22. זה גם מתורגם לבחירה גמישה של הלייזר לקרינה, אולי באמצעות לייזר שנותן שיפור מקסימלי.
לסיכום, שיטה זו אמינה להרכבת מבני DONA ושימוש בהם למדידות ספקטרוסקופיית ראמאן משופרת על פני השטח של מולקולה אחת.

DNA אוריגמי היא טכניקת ננוטכנולוגיה הכוללת קיפול גדילי DNA לצורות ודפוסים ספציפיים. היכולת ליצור מבנים עם שליטה מדויקת בקנה מידה ננומטרי היא אחד היתרונות המרכזיים של DNA אוריגמי1. ליכולת לתמרן חומר בקנה מידה כה קטן יש פוטנציאל לחולל מהפכה במגוון רחב של תחומים, כולל רפואה, אלקטרוניקה ומדעי החומרים2. לדוגמה, מבני אוריגמי DNA שימשו להעברת תרופות ישירות לתאים סרטניים 3,4, ליצירת חיישנים ננומטריים לגילוי מחלות5,6, וליצירת תבניות מורכבות על פני השטח של חומרים 6,7. יתר על כן, היכולת להשתמש באוריגמי DNA כדי ליצור מבנים ננומטריים מורכבים יצרה הזדמנויות חדשות לחקר תהליכים ביולוגיים בסיסיים בקנה מידה ננומטרי8.
פיזור ראמאן משופר פני השטח (SERS) היא טכניקה אנליטית חזקה המזהה ומזהה מולקולות בריכוזים נמוכים ביותר9. הוא מבוסס על אפקט ראמאן, שהוא שינוי באורך הגל של אור מפוזר10. SERS דורש מצע מתכת פלסמוני כדי להגביר את אות הרמאן של מולקולות הנספגות עליו. שיפור זה יכול להיות גדול עד פי 10פי 11 מהאות המתקבל מאותה מולקולה שנמדדה על ידי ספקטרוסקופיית ראמאן קונבנציונלית, מה שהופך את SERS לשיטה רגישה ביותר לניתוח כמויות זעירות של חומרים11.
שיפור אות הרמאן של ננו-חלקיקים נובע בעיקר משיפור אלקטרומגנטי המבוסס על עירור של תהודה פלסמונית מקומית על פני השטח (LSPR)12. בתופעה זו, אלקטרונים בתוך ננו-חלקיק המתכת מתנודדים באופן קולקטיבי סביב פני השטח של ננו-חלקיק המתכת במהלך היארעות האור. התוצאה היא יצירת גל עומד של אלקטרונים המכונה פלסמון פני השטח, אשר יכול להדהד עם אור האירוע. ה-LSPR משפר מאוד את השדה החשמלי ליד פני השטח של החלקיק, והבליעה האופטית של החלקיק היא מקסימלית בתדר התהודה של פלסמון. האנרגיה של פלסמון פני השטח תלויה בצורה ובגודל של ננו-חלקיק המתכת, כמו גם בתכונות של התווך הסובב אותו13. שיפור גבוה יותר יכול להיות מושג עוד יותר על ידי צימודים פלסמוניים, כגון כאשר שני ננו-חלקיקים קרובים זה לזה במרחק של בערך פי 2.5 מהקוטר או פחותמ-14. הקרבה גורמת ל-LSPR של שני הננו-חלקיקים לתקשר זה עם זה, מה שמגביר את השדה החשמלי במרווח בין החלקיקים בכמה סדרי גודל, הרבה מעבר להשבחה של ננו-חלקיק בודד15,16,17. גודל ההשבחה עומד ביחס הפוך למרחק בין הננו-חלקיקים; ככל שהמרחק קטן, מופיעה נקודה קריטית שבה השיפור מספיק כדי לזהות מולקולות בודדות (SMs)18.
DNA אוריגמי מייצג טכנולוגיית מפתח שיכולה לארגן ביעילות ננו-חלקיקים פלסמוניים כדי לנצל ולייעל את הצימוד הפלזמוני19. יחד עם זאת, מולקולות מעניינות ניתן להציב בדיוק במקום שבו גילוי אופטי הוא היעיל ביותר. זה הוכח עם ננו-אנטנות פלסמוניות מבוססות DNA אוריגמי לזיהוי פלואורסצנטיות20. בניגוד לזיהוי תוויות פלואורסצנטיות, SERS מספק את האפשרות לזהות טביעת אצבע כימית ישירה של מולקולה, מה שהופך את SERS המולקולה הבודדת לאטרקטיבית מאוד לחישה, כמו גם לניטור תגובות כימיות ומחקרים מכניסטיים. דנ"א אוריגמי יכול לשמש גם כמסכה לייצור ננו-מבנים פלסמוניים בעלי צורות מוגדרות היטב21, אם כי האפשרות למקם מולקולות מטרה במדויק בנקודה החמה הולכת לאיבוד.
באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי מקומי (AFM) ומדידות ראמאן, אנו יכולים לקבל את ספקטרום הרמאן מננו-אנטנה אחת של אוריגמי DNA (DONA) ואולי ממולקולה בודדת אם היא ממוקמת במיקום של שיפור האות הגבוה ביותר. ה-DONA מורכב ממזלג אוריגמי DNA ושני ננו-חלקיקים הממוקמים במדויק, המצופים במלואם ב-DNA המשלים לגדילים המורחבים המחוברים לאוריגמי ה-DNA. עם הכלאת הדנ"א, הננו-חלקיקים קשורים למזלג האוריגמי של הדנ"א עם מרווח של 1.2-2.0 ננומטר בין משטחי הננו-חלקיקים22. הרכבה כזו יוצרת נקודה חמה בין הננו-חלקיקים עם שיפור אות של עד פי 10 פי11, כפי שמחושב מסימולציות תחום זמן הפרש סופי (FDTD)22, ובכך מאפשר מדידות SM SERS. עם זאת, נפח ההשבחה הגבוהה ביותר הוא קטן (בטווח של 1-10 ננומטר3 ), ולכן מולקולות המטרה צריכות להיות ממוקמות בדיוק בנקודה חמה זו. מזלג אוריגמי DNA מאפשר מיקום של מולקולה בודדת בין שני הננו-חלקיקים באמצעות גשר מזלג DNA וכימיית צימוד מתאימה. אף על פי כן, התבוננות בהודעות SM כאלה בספקטרום ראמאן מאתגרת מאוד22 . לחלופין, ניתן לצפות את הננו-חלקיקים באופן מלא במולקולת המטרה, כגון צבע TAMRA, כדי לאפשר מדידות DONA בודדות בעוצמת SERS גבוהה יותר21. במקרה זה, ה-TAMRA מחובר באופן קוולנטי לגדיל ציפוי הדנ"א (איור 1).

<table><tbody><tr><td>מסנני 100 kDa MWCO Amicon, 0.5 מ"ל</td><td>Merck</td><td>UFC5100BK</td><td></td></tr><tr><td>10x מאגר TAE (0.4 M Tris, 0.2 M חומצה אצטית, 0.01 M EDTA)</td><td>SIGMA Aldrich</td><td>T9650</td><td></td></tr><tr><td>60 ננומטר goldspheres, חשוף (ציטראט)</td><td>NanoComposix</td><td>AUCN60</td><td></td></tr><tr><td>ACCESS-NC-A AFM בדיקות</td><td>SCHAEFER-TEC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אבקת אגרוז</td><td>SIGMA Aldrich</td><td>9012-36-6</td><td></td></tr><tr><td>גדילי ציפוי DNA של AuNP</td> גדילי ציפוי <td>DNA IDT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AuNP (TAMRA)</td><td>SIGMA Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>SIGMA Aldrich</td><td>56-81-5</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה Heraeus Fresco 17 Thermo</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HORIBA OmegaScope עם אבולוציה של LabRAM HR</td><td>HORIBA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום כלוריד</td><td>SIGMA Aldrich</td><td>7786-30-3</td><td></td></tr><tr><td>גדיל גשר DNA ננו-מזלג (TAMRA)</td><td>Metabion</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nanofork DNA גדילי סיכות</td><td>SIGMA Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ParafilmM</td><td>Carl Roth</td><td>CNP8.1</td><td></td></tr><tr><td>Primus 25 Thermocycler</td><td>Peqlab/VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פרוסת סיליקון</td><td>Siegert BW14076</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNA פיגום חד-גדילי, סוג p7249 (M13mp18)</td><td>Tilibit ננו-מערכות</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פתרון TCEP</td><td>SIGMA Aldrich</td><td>51805-45-9</td><td></td></tr></tbody></table>

מדידות פיזור ראמאן משופרות על פני השטח של מולקולה אחת המופעלות על ידי ננו-אנטנות אוריגמי dna פלסמוני

Single-Molecule Surface-Enhanced Raman Scattering Measurements Enabled by Plasmonic DNA Origami Nanoantennas

לפיזור ראמאן משופר פני השטח (SERS) יש את היכולת לזהות מולקולות בודדות שעבורן נדרש שיפור שדה גבוה. SERS של מולקולה יחידה (SM) מסוגל לספק מידע ספקטרוסקופי ספציפי למולקולות על מולקולות בודדות ולכן מניב מידע כימי מפורט יותר מאשר טכניקות אחרות לזיהוי SM. יחד עם זאת, קיים פוטנציאל לפענח מידע ממדידות SM שנותר חבוי במדידות ראמאן של חומר בתפזורת. פרוטוקול זה מתאר את מדידות SM SERS באמצעות ננו-אנטנת אוריגמי DNA (DONA) בשילוב עם מיקרוסקופ כוח אטומי (AFM) וספקטרוסקופיית ראמאן. מבנה מזלג אוריגמי DNA ושני ננו-חלקיקי זהב משולבים ליצירת DONAs, עם פער של 1.2-2.0 ננומטר ביניהם. זה מאפשר שיפור אות SERS של עד פי11, המאפשר מדידות של מולקולות בודדות. הפרוטוקול מדגים גם את המיקום של מולקולת אנליט בודדת בנקודה חמה של SERS, את התהליך של דימות AFM, ואת הכיסוי הבא של דימות ראמאן כדי למדוד אנליט ב-DONA יחיד.

בעקבות הפרוטוקול, יש לוודא כי מזלג אוריגמי DNA מורכב כראוי; השיטה המועדפת לבחינת מבנה המזלגות היא הדמיית AFM. רוב המזלגות צפויים להיות מוצקים, ללא זרועות שבורות. מצד שני, קשה לדמיין את הגשר בין הזרועות בגלל קוטרו הקטן וגמישותו הגבוהה; הוא גם דורש קצה AFM חד מאוד (איור 2).
שינוי צבע הפתרון בכל שלב בתהליך ציפוי AuNP מציין שהכל פועל כראוי. הצבע מתחיל באדום עמוק רק עם AuNPs, אבל ברגע שהדנ"א מתווסף, הוא משתנה לאדום ארגמני כהה. הקפאה משנה את הצבע לסגול, ולאחר ההפשרה מחזירה אותו לאדום עמוק (איור 3A). איור 3B מתאר את ספקטרום הבליעה של AuNPs חשופים ו-AuNPs מצופים דנ"א.
לאחר מכן, בשלבי ההרכבה של DONA, הצבע נשאר אדום עמוק לאורך כל התהליך. במהלך טיהור ג'ל האגרוז, מופיעה רצועת דימר מעל רצועת AuNP החופשית, הרצועה המהירה ביותר בסגימה. רצועת הדימר הזו מקבילה ל-DONAs ולאחר מכן נחתכת ונלחצת כדי לחלץ את הדגימה (איור 4).
לבסוף, עבור מדידות קולוקליזציה, הדמיית AFM של הדגימה מבוצעת בחיפוש אחר DONA (איור 5). לאחר מכן, ספקטרום ראמאן מ-DONA יחיד נאסף ומושווה כדי לוודא שהספקטרום המתקבל הוא ממולקולות TAMRA (איור 6).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65310/65310fig01.jpg"> איור 1: ייצוג סכמטי של מזלג האוריגמי של הדנ"א וה-DONA שהורכב במלואו. (A) מידות מזלג האוריגמי של הדנ"א עם גשר באורך 90 נוקלאוטידים. (B) מבט צדדי סכמטי של DONA מורכב, עם שני AuNPs ומזלג אוריגמי DNA ביניהם. (C) תצוגה סכמטית עליונה של ה-DONA שהורכבה המראה את מיקום ה-SM במרכז הגשר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65310/65310fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65310/65310fig02.jpg"> איור 2: תמונת AFM של מזלגות האוריגמי של הדנ"א לאחר ההרכבה. המזלגות מעוצבים היטב, כאשר הגשר נראה בחלק מהמזלגות. המזלגות יש גובה בין 1.5-2 ננומטר. סרגל קנה מידה = 500 ננומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65310/65310fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65310/65310fig03.jpg"> איור 3: ספקטרום התפתחות הצבע והספיגה של AuNPs . (A) צינורות המציגים את הצבע של תמיסת AuNP בשלבים שונים. (1) צבע אדום עמוק של תמיסת AuNP החשופה. (2) אדום ארגמני-כהה לאחר הוספת הדנ"א המצפה ל-AuNPs. (3) צבע סגול לאחר הקפאת תערובת הציפוי DNA-AuNP. (4) הצבע חוזר לאדום עמוק לאחר הפשרת התערובת. (B) ספקטרום ספיגה של AuNPs 60 ננומטר, המראה את השינוי בשיא הספיגה מ-AuNPs חשופים (צינור 1) ל-AuNPs מצופים DNA (צינור 4). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65310/65310fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65310/65310fig04.jpg"> איור 4: ג'ל אגרוז של תמיסת דונה. לשני הנתיבים יש את אותה דגימה, וגם רצועת הדימר (DONA) וגם רצועת AuNP החופשית נראות בבירור. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65310/65310fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65310/65310fig05.jpg"> איור 5: תמונת AFM של DONAs. (A) התמונה מראה מבני DONA מרובים; תמונת AFM זו משמשת למדידות קולוקליזציה. (B) תמונה מוגדלת של ה-DONA המעוגל וחתך רוחב אנכי של ה-DONA. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65310/65310fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65310/65310fig06.jpg"> איור 6: ספקטרום SERS של DONAs המצוידים ב-TAMRA AuNPs בעלי ציפוי מלא ובמולקולת TAMRA יחידה. קווי הרשת האנכיים מציינים את פסגות טמרה העיקריות. פסגות TAMRA העיקריות נראות ב-TAMRA AuNP המצופה במלואו. למרות שיחס האות לרעש עבור ספקטרום SM TAMRA נמוך יותר, הפסגות העיקריות ניתנות לזיהוי: 1,360 ס"מ-1: מתיחת C-C; 1,509 ס"מ-1: C=C מתיחה; 1,536 ס"מ-1: C=C מתיחה; 1,654 ס"מ-1: C=O מתיחה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65310/65310fig06large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
טבלה 1: רשימת סיכות מזלג אוריגמי DNA. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65310/65310_Table%201_Nanofork%20staple%20%20strands%20list.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.</a>
טבלה 2: רשימה של גדילי דנ"א שעברו שינוי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65310/65310_Table%202_DNA%20modified%20%20strands.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.</a>

פרוטוקול זה מדגים מדידות פיזור ראמאן משופר פני שטח (SERS) של מולקולה אחת באמצעות ננו-אנטנת אוריגמי של DNA (DONA) בשילוב עם מיקרוסקופ כוח אטומי מקומי (AFM) ומדידות ראמאן.

מדידות פיזור ראמאן משופרות על פני השטח של מולקולה אחת המופעלות על ידי ננו-אנטנות אוריגמי DNA פלסמוני

Surface-enhanced Raman scattering (SERS) has the capability to detect single molecules for which high field enhancement is required. Single-molecule (SM) ...

מטרת המחקר שלנו היא לפתח כלים חדשים לזיהוי מולקולות בודדות על ידי פיזור או מקור ראמאן משופר על פני השטח. זוהי הטכניקה היחידה המספקת טביעת אצבע כימית של מולקולה ורגישה מספיק כדי לזהות מולקולות בודדות. בדרך זו, מידע מכניסטי מפורט על תגובות כימיות ניתן להשיג.ננו-מבנים של אוריגמי DNA שימשו למיקום מדויק הן של ננו-חלקיקים פלסמוניים והן של מולקולות מטרה. וזה נדרש מכיוון שפיזור הרמאן המשופר מקורו בנפח ננומטרי קטן בין הננו-חלקיקים שאנו מכנים נקודות חמות. וכעת יצרנו ננו-אנטנה חדשה של DNA אוריגמי פלסמוני, בדיוק למטרה זו.האתגר העיקרי הוא למקם מולקולות מטרה בנקודות חמות כאלה בין שני ננו-חלקיקים ולאסוף נתוני ראמאן ממבנה ננו-אנטנה אחד בדיוק. כדי לאסוף כמויות גדולות של נתונים ומתאם יעיל בין מיקרוסקופ כוח אטומי יש לבצע ספקטרוסקופיית ראמאן. ננו-אנטנות האוריגמי של הדנ"א הפלזמוני מאפשרות ייצור בר-שחזור של מספר רב של דימרים פלסמוניים שבהם מולקולת המטרה ממוקמת במדויק בין הננו-חלקיקים בנקודה החמה.ובאמצעות קורלציה של נתוני AFM ורמאן, אנו יכולים כעת לוודא שיש רק מולקולה אחת שזוהתה. כעת אנו יכולים לעקוב בזמן אמת אחר מולקולות בודדות כמו מולקולות צבע או חלבונים, אחר התנהגותן בנקודות חמות ותגובותיהן לשינויים כימיים בסביבה. לדוגמה, שינוי מצב הספין של מולקולות אנושיות בודדות נוטר לאחרונה.בעתיד, אנו שואפים לעקוב אחר תגובות כימיות ברמה המולקולרית היחידה ולחקור את מנגנוני התגובה שלהן. בנוסף, אנו יכולים להשתמש בטכנולוגיה זו כדי לזהות ביומולקולות רלוונטיות מבחינה רפואית עם רגישות גבוהה מאוד.

single-molecule-surface-enhanced-raman-scattering-measurements

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

אנו מתארים את הייצור והאפיון של מערכות ננו-ביולוגיות המממשקות מצעים ננו-מובנים עם חלבונים ואפטמרים משותקים. מדווחים על השלבים הניסויים הרלוונטיים הכוללים ייצור ליטוגרפי של מצעים ננו-מבניים, ביו-פונקציונליזציה ואפיון ספקטרוסקופיה רמאן משופרת פני השטח (SERS). זיהוי SERS של חלבונים משותקים על פני השטח, ובדיקה של קשירת חלבון-ליגנד ואפטאמר-ליגנד מודגמת.

משטח משופר ראמאן ספקטרוסקופיה איתור של מולקולות ביולוגיות באמצעות EBL מצעי Nanostructured המפוברק

מתוארים תהליכי ניקוי הניתנים לשחזור עבור מצעים המשמשים במחקר אוריגמי DNA, כולל ניקוי RCA על ספסל ונגזרת של תחמוצת סיליקון. מומחשים פרוטוקולים להכנת פני השטח, שקיעת אוריגמי DNA, פרמטרי ייבוש ומערכים ניסיוניים פשוטים.

הכנת מצעים נציץ והסיליקון לDNA אוריגמי ניתוח וניסויים

אנו מתארים את פרוטוקול מפורט עבור DNA מבוסס-אוריגמי הרכבה של nanorods זהב לתוך כיראלי metamolecules plasmonic עם chiroptical חזקה תגובות. הפרוטוקול אינה מוגבלת תצורות כיראלי ולא ניתן להתאים בקלות על הזיוף של ארכיטקטורות שונות plasmonic.

הרכבה של Nanorods זהב לתוך כיראלי Metamolecules Plasmonic באמצעות תבניות אוריגמי דנ א

כאן, אנו מתארים פרוטוקול ליצור ננו מבנים אורגניים בדידים ומדויקים על מצעים באמצעות צורות DNA אוריגמי כמו תבניות המנחה. השיטה מוכחת על ידי יצירת אנטנות זהב בצורת עניבת הפלסטיק על מצע שקוף (ספיר).

DNA אוריגמי-תיווך המצע Nanopatterning של מבנים אורגניים עבור יישומים חישה

במחקר זה, פיתחנו ננו-פרובש טביעות אצבע מבוסס פיזור ראמאן (SERS) בעלות נמוכה עם תאימות ביולוגית חיובית כדי להראות הדמיה ביולוגית של תאים חיים ללא תוויות ולזהות שני זני חיידקים, ולהראות בפירוט כיצד להשיג ספקטרום SERS של תאים חיים בשיטה לא הרסנית.

ביואנליזה של פיזור ראמאן משופרת ללא תוויות ללא תוויות המבוססת על ננו-גשושיות Au@Carbon נקודות

אנו מתארים שיטה לpassivating משטח זכוכית באמצעות פוליאתילן גליקול (PEG). פרוטוקול זה מכסה ניקוי פני השטח, functionalization פני השטח, וציפוי PEG. אנחנו מציגים את האסטרטגיה חדשה לטיפול במשטח עם מולקולות PEG יותר משני סיבובים, אשר מניב איכות מעולה של פסיבציה בהשוואה לשיטות קיימות.

פסיבציה משטח ללימודי חלבון מולקולה בודדת

אוריגמי DNA היא שיטה רבת עוצמה לייצור אובייקטים ננומטריים מדויקים על ידי תכנות ההרכבה העצמית של מולקולות DNA. כאן אנו מתארים פרוטוקול לקיפול של רובוט מגיב ביולוגית מאוריגמי DNA, טיהורו וצביעתו השלילית להעברת הדמיה מיקרוסקופית אלקטרונית (TEM).

מתקפל ואפיון של רובוט ביו-תגובה מה- DNA אוריגמי

כאן, אנו מתארים פרוטוקול לסינתזה של חלקיקי מגנטים plasmonic עם מומנט מגנטי חזק וספיג חזק קרוב אינפרא אדום (NIR). הפרוטוקול כולל גם נטיית נוגדן לחלקיקים דרך מחצית Fc עבור יישומים ביו שונים הדורשים מיקוד ספציפי מולקולרי.

Nanoclusters סינתזה של Immunotargeted מגנטתי plasmonic

הליך עבור ייצור וביצוע פני השטח מבוסס-מסנן משופרת ראמאן ספקטרוסקופיות (SERS) assay לצורך זיהוי של מזהמים כימיים (כלומר, הדברה ferbam ו אמפיצילין אנטיביוטי) מוצג.

משטח מסנן מבוססי משופר ראמאן Assay ספקטרוסקופיות עבור איתור מהיר של מזהמים כימיים

מוצגת דרך חדשה לייצור אירוג'לים מבוססי ביופולימר על ידי ג'לציה המושרה על ידי פחמן דו חמצני (CO2). הטכניקה משתמשת בפחמן דו חמצני בלחץ (5 MPa) לייצור הידרוג'לים ביופולימרים ו-CO2 סופר-קריטי (12 MPa) להמרת ג'לים לאירוג'לים. הממיסים היחידים הדרושים מלבד CO2 הם מים ואתנול.

הכנת Aerogels biopolymer בעזרת ממיסים גרין

למד מדידות פיזור ראמאן משופרות על פני השטח של מולקולה אחת באמצעות ננו-אנטנות אוריגמי DNA פלסמוניות. שיטה זו מאפשרת זיהוי בזמן אמת של מולקולות בודדות ומעקב אחר תגובות כימיות ברמת מולקולה יחידה.

מדידות פיזור ראמאן משופרות על פני השטח של מולקולה אחת המופעלות על ידי ננו-אנטנות אוריגמי DNA פלסמוני

גלה סרטונים נוספים