Name: עיכוב אופטוגנטי של התכווצות אקטומיוזין בתיווך Rho1 יחד עם מדידת מתח אפיתל בעוברי דרוזופילה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-14T14:50:00.000+00:00
Duration: 12 min 35 s
Description: חקור עיכוב אופטוגנטי של התכווצות אקטומיוזין בתיווך Rho1 בעוברי דרוזופילה. שיטה זו מאפשרת מדידה מדויקת של שינויים במתח האפיתל ומספקת כלי חשוב לחקר מורפוגנזה של רקמות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לאן לבנוויי על תמיכתה בהדמיה. המחברים מודים למעבדת וישאוס ולמעבדת דה רנזיס על שיתוף ריאגנטים ולמרכז המניות בלומינגטון דרוזופילה למניות זבובים. מחקר זה נתמך על ידי NIGMS ESI-MIRA R35GM128745 ומענק מחקר מוסדי של האגודה האמריקאית לסרטן #IRG-82-003-33 ל- BH.

עיכוב אופטוגנטי של התכווצות אקטומיוזין בתיווך Rho1 בדרוזופילה

המחברים מצהירים כי המחקר נערך בהיעדר קשרים מסחריים או פיננסיים שיכולים להתפרש כניגוד עניינים פוטנציאלי.

פרוטוקול זה תיאר את השימוש המשולב באופטוגנטיקה ובאבלציה בלייזר כדי לבחון שינויים במתח הרקמה מיד לאחר השבתת התכווצות האקטומיוזין. הכלי האופטוגנטי המתואר כאן מנצל את הצורה השלילית הדומיננטית של Rho1 (Rho1DN) כדי לעכב בחריפות את התכווצות האקטומיוזין האנדוגנית Rho1 והתלויה ב-Rho1. אפיון קודם של Opto-Rho1DN בהקשר של היווצרות תלמים גחונים של דרוזופילה הראה כי הכלי יעיל ביותר בתיווך ההשבתה המהירה של התכווצות אקטומיוזין אפיקלי באמצעות הפעלה סימולטנית של מיוזין ופירוק אקטין41. בפרט, גירוי העוברים ...

התכווצות אקטומיוזין, כוח ההתכווצות המופעל על ידי מיוזין שאינו שריר II (להלן "מיוזין") ברשת F-actin, הוא אחד הכוחות החשובים ביותר בשינוי צורת התא ובהנעת מורפוגנזהברמת הרקמה 1,2. לדוגמה, הפעלת התכווצות אקטומיוזין בתחום האפי של תאי האפיתל גורמת להתכווצות אפיקלית, המאפשרת מגוון תהליכים מורפוגנטיים, כולל קיפול אפיתל, שחול תאים, דלמינציה וריפוי פצעים 3,4,5,6,7 . הפעלת מיוזין דורשת זרחן של שרשרת האור הרגולטורית שלו. שינוי זה מקל על הקונפורמציה המעכבת של מולקולות המיוזין, ומאפשר להן ליצור צרורות חוטי מיוזין דו-קוטביים עם תחומי ראש מרובים בשני הקצוות. חוטי המיוזין הדו-קוטביים מניעים את התנועה האנטי-מקבילה של חוטי האקטין ומביאים ליצירת כוח התכווצות 1,8,9.
GTPase RhoA הקטן ממשפחת Rho (Rho1 בדרוזופילה) ממלא תפקיד מרכזי בהפעלת התכווצות אקטומיוזין בהקשרים תאיים שונים10,11. Rho1 מתפקד כמתג דו-מולקולרי על ידי קשירת GTP (צורה פעילה) או GDP (צורה לא פעילה)12. המחזור בין Rho1 הקשור ל-GTP או לתמ"ג מווסת על-ידי חלבונים משפעלי GTPase (GAPs) וגורמי חילוף נוקלאוטידים בגואנין (GEFs)13. GEFs פועלים כדי להקל על חילופי התמ"ג עבור GTP ובכך להפעיל את פעילות Rho1. GAPs, לעומת זאת, משפרים את פעילות GTPase של Rho1 ובכך משביתים את Rho1. Rho1 מופעל מקדם התכווצות אקטומיוזין באמצעות אינטראקציה והפעלה של המשפיעים במורד הזרם, קינאז הקשור ל-Rho (Rok) ו-Diaphanous14. Rok גורם להפעלת מיוזין והתכווצות אקטומיוזין על ידי זרחון שרשרת האור הרגולטורית של מיוזין15. בנוסף, Rok גם מעכב את פוספטאז שרשרת האור הרגולטורית מיוזין, ולכן מקדם עוד יותר הרכבת חוט מיוזין16. Rok יכול גם phosphorylate LIM kinases, אשר, כאשר מופעל, למנוע פירוק אקטין על ידי phosphorylating ועיכוב גורם depolymerization actincofilin 17,18. Diaphanous הוא נוקלייטור אקטין ממשפחת הפורמינים המקדם פילמור אקטין ומספק בסיס למיוזין לאינטראקציה עם 19,20,21.
בעוד שהמנגנונים התאיים המפעילים את התכווצות האקטומיוזין הובהרו היטב, הבנתנו את תפקידה בוויסות עיצוב מחדש דינמי של רקמות נותרה חלקית. מילוי פער הידע הזה דורש גישות שיכולות להשבית במהירות אקטומיוזין באזורי רקמה ספציפיים in vivo ולתעד את ההשפעה המיידית על התנהגות הרקמה ותכונותיה. פרוטוקול זה מתאר את השימוש בגישה אופטוגנטית כדי לעכב בחריפות את התכווצות האקטומיוזין במהלך פלישת דרוזופילה מזודרם, ולאחר מכן מדידת מתח אפיתל באמצעות אבלציה בלייזר. במהלך גסטרולציה של דרוזופילה, תאי מבשר המזודרם הממוקמים בגחון עוברים התכווצות אפית ופולשים מפני השטח של העובר על ידי יצירת תלם קדמי-אחורי22,23. היווצרות תלמים גחונים כבר זמן רב משמש מודל לחקר מנגנון קיפול אפיתל. היווצרות התלם הגחוני מנוהלת על ידי מערכת הדפוס הגבית-גחונית בדרוזופילה24,25,26,27. הביטוי של שני גורמי שעתוק, פיתול וחלזון, הממוקם בצד הגחוני של העובר, שולט בהיווצרות התלם הגחוני ומציין את גורל התא המזודרמלי28. Twist ו-Snail מפעילים את הגיוס של Rho1 GEF RhoGEF2 לקודקוד של תאי קודמן מזודרם באמצעות מסלול קולטן מצומד לחלבון G וחלבון מתאם RhoGEF2, T48 29,30,31,32,33. לאחר מכן, RhoGEF2 מפעיל מיוזין בכל פני השטח האפיקליים של המזודרם הפוטנציאלי דרך מסלול Rho-Rho קינאז 34,35,36,37,38,39. מיוזין מופעל יוצר רשת אקטומיוזין על-תאית לאורך פני השטח האפי של המזודרם פרימורדיום, שהתכווצויותיה מניעות התכווצות אפית וגורמות לעלייה מהירה במתח הרקמה האפיקלית 14,37,40.
הכלי האופטוגנטי המתואר בפרוטוקול זה, Opto-Rho1DN, מעכב התכווצות אקטומיוזין באמצעות גיוס קרום פלזמה תלוי אור כחול של צורה שלילית דומיננטית של Rho1 (Rho1DN)41. מוטציה ב-T19N ב-Rho1DN מבטלת את יכולתו של החלבון המוטנטי להחליף תמ"ג ב-GTP ובכך הופכת את החלבון ללא פעיל באופן תמידי34. מוטציה עוקבת ב-Rho1DN, C189Y, מבטלת את אות המיקוד הנאיבי של הממברנה 42,43. כאשר Rho1DN מוחדר לקרום הפלזמה, הוא נקשר ל-Rho1 GEFs ומטיל אותו, ובכך חוסם את ההפעלה של Rho1 וכן את ההפעלה בתיווך Rho1 של מיוזין ואקטין34,44. גיוס קרום הפלזמה של Rho1DN מושג באמצעות מודול דימריזציה תלוי אור הנגזר מקריפטוכרום 2 ושותפו הקושר CIB1. Cryptochrome 2 הוא פוטורצפטור Cryptochrome מופעל אור כחול ב Arabidopsis thaliana45. קריפטוכרום 2 נקשר ל-CIB1, חלבון סליל-לולאה-סליל בסיסי, רק במצבו המעורר לאור45. מאוחר יותר נמצא כי אזור הומולוגיה N-terminal, photolyase (PHR), מקריפטוכרום 2 (CRY2PHR, להלן CRY2) ותחום N-terminal (aa 1-170) של CIB1 (להלן CIBN) חשובים לדימריזציה הנגרמת על ידי אור46. Opto-Rho1DN מכיל שני רכיבים. המרכיב הראשון הוא חלבון CIBN המאוחה עם עוגן CAAX, אשר ממקם את החלבון לקרום פלזמה47. הרכיב השני הוא mCherry-tagged CRY2 המשולב עם Rho1DN41. בהיעדר אור כחול, CRY2-Rho1DN נשאר בציטופלסמה. לאחר גירוי אור כחול, CRY2-Rho1DN מכוון לקרום הפלזמה באמצעות אינטראקציה בין CIBN מעוגן קרום ו- CRY2 נרגש. Opto-Rho1DN יכול להיות מופעל על ידי אור אולטרה סגול A (UVA) ואור כחול (400-500 ננומטר, הפעלת שיא ב 450-488 ננומטר), או על ידי לייזר פועם 830-980 ננומטר בעת ביצוע גירוי שני פוטונים41,46,47,48. לכן, Opto-Rho1DN מגורה על ידי אורכי גל המשמשים בדרך כלל עבור GFP מרגש (488 ננומטר עבור דימות פוטון בודד ו 920 ננומטר עבור דימות שני פוטונים). לעומת זאת, אורכי גל המשמשים בדרך כלל לדימות mCherry מרגש (561 ננומטר לדימות פוטון בודד ו-1,040 ננומטר לדימות שני פוטונים) אינם מעוררים את המודול האופטוגנטי ולכן ניתן להשתמש בהם לדימות טרום גירוי. הפרוטוקול מתאר את הגישות המשמשות למזעור הסיכון לגירוי לא רצוי במהלך מניפולציה של דגימה.
אבלציה בלייזר שימשה באופן נרחב כדי לזהות ולמדוד מתח בתאים וברקמות49. מחקרים קודמים הראו כי, כאשר עוצמת הלייזר נשלטת כראוי, אבלציה לייזר של שני פוטונים באמצעות לייזר פמטו-שנייה קרוב לאינפרא-אדום יכולה לפגוע פיזית בכמה מבנים תת-תאיים (למשל, רשתות אקטומיוזין בקליפת המוח) מבלי לגרום להתפרצות קרום פלזמה50,51. אם הרקמה נמצאת תחת מתח, אבלציה בלייזר של אזור עניין בתוך הרקמה גורמת לרתיעה מיידית כלפי חוץ של התאים הסמוכים לאזור האבלאט. מהירות הרתיעה היא פונקציה של עוצמת המתח והצמיגות של המדיה (ציטופלסמה) המקיפה את המבנים העוברים רתיעה49. בגלל עומק החדירה המעולה של לייזרים אינפרא אדום קרוב והיכולת להשיג אבלציה מוקדית מוגבלת היטב, אבלציה לייזר של שני פוטונים שימושית במיוחד לגילוי מתח רקמות in vivo. כפי שהודגם בפרוטוקול זה, ניתן לשלב שיטה זו בקלות עם אי-הפעלה בתיווך Opto-Rho1DN של התכווצות אקטומיוזין כדי לחקור את ההשפעה הישירה של התכווצות תאית תלוית Rho1 על מכניקת הרקמה במהלך עיצוב מחדש דינמי של רקמות.

<table><tbody><tr><td>צלחת תחתית זכוכית 35 מ"מ</td><td>MatTek</td><td>P35G-1.5-10-C</td><td>משמשת להכנת דגימה</td></tr><tr><td>60 מ"מ ופעמים; צלחת פטרי 15 מ"מ עם מכסה</td><td>פלקון</td><td>351007</td><td>משמש להכנת דגימה</td></tr><tr><td>בד שחור לכיסוי המיקרוסקופ</td><td>באינטרנט</td><td>NA</td><td>משמש למניעת גירוי אור לא רצוי</td></tr><tr><td>Clorox Ultra Germicadal Bleach (8.25% נתרן היפוכלוריט)</td> <td>VWR</td><td>10028-048</td><td>משמש לפירוק עוברים</td></tr><tr><td>CO2 pad</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-114</td><td>משמש להתקנה צולבת</td></tr><tr><td>ddH2O</td><td>NA</td><td>NA</td><td>משמש להכנת דגימה</td></tr><tr><td>פינצטה Dumont Style 5</td><td>VWR</td><td>102091-654</td><td>משמש להכנת דגימה</td></tr><tr><td>כלי ריסים (עשוי ממברשת עגולה סייבל אדומה טהורה #2)</td> <td>VWR</td><td>22940-834</td><td>משמש להכנת דגימה</td></tr><tr><td>FluoView (תוכנה)</td> <td>Olympus</td><td>NA</td><td>משמש לרכישת תמונות וגירוי אופטוגנטי</td></tr><tr><td>שמן הלוקרבון 27</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H8773-100ML</td><td>משמש להדמיה של שלב העובר</td></tr><tr><td>ImageJ/FIJI</td><td>NIH</td><td>NA</td><td>משמש לניתוח תמונה</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>NA</td><td>משמש לניתוח תמונה</td></tr><tr><td>סטריאוסקופ Nikon SMZ-745</td><td>Nikon</td><td>NA</td><td>משמש להכנת דגימה</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ מולטיפוטון Olympus FVMPE-RS עם לייזרים מהירים במיוחד InSight DS Dual-line להדמיה מרובת פוטונים באורך גל כפול בו-זמנית, יעד טבילה במים 25x/NA1.05 (XLPLN25XWMP2), ויחידת גירוי IR/VIS להפעלה/גירוי צילום. מערכת זו מצוידת גם במסנן TRITC (39005-BX3; AT-TRICT-REDSHFT 540/25x, 565BS, 620/60M), ויחידת תאורה פלואורסצנטית הפולטת אור לבן.</td><td>אולימפוס</td><td>NA</td><td>משמש לרכישת תמונה וגירוי אופטוגנטי</td></tr><tr><td>SP Bel-Art קופסת אחסון מקפיא פוליפרופילן 100 מקומות (שחורה, קופסה חסינת אור להעברת דגימות)</td> <td>VWR</td><td>30621-392</td><td>משמש למניעת גירוי אור לא רצוי</td></tr><tr><td>מגן מסנן UV עבור FM1403 פלואורס (מגן פלסטיק כתום-אדום)</td><td>Bolioptics</td><td>FM14036151</td><td>משמש למניעת גירוי</td></tr> <tr><td>אור לא רצויפנס ראש VITCHELO V800 עם נורות LED לבנות ואדומות</td><td>Amazon</td><td>NA</td><td>משמש למניעת גירוי אור לא רצוי</td></tr></tbody></table>

עיכוב אופטוגנטי של התכווצות אקטומיוזין בתיווך rho1 יחד עם מדידת מתח אפיתל בעוברי דרוזופילה

Optogenetic Inhibition of Rho1-Mediated Actomyosin Contractility Coupled with Measurement of Epithelial Tension in Drosophila Embryos

כוחות התכווצות הנוצרים על ידי אקטין ומיוזין שאינו שריר II ("התכווצות אקטומיוזין") הם קריטיים לשינויים מורפולוגיים של תאים ורקמות בסקאלות אורך מרובות, כגון חלוקת תאים, נדידת תאים, קיפול אפיתל ומורפוגנזה מסתעפת. הבנה מעמיקה של תפקיד התכווצות האקטומיוזין במורפוגנזה דורשת גישות המאפשרות השבתה מהירה של אקטומיוזין, דבר שקשה להשיג באמצעות גישות גנטיות או פרמקולוגיות קונבנציונליות. הפרוטוקול המוצג מדגים את השימוש במערכת דימריזציה אופטוגנטית מבוססת CRY2-CIBN, Opto-Rho1DN, כדי לעכב התכווצות אקטומיוזין בעוברי דרוזופילה עם בקרות זמניות ומרחביות מדויקות. במערכת זו, CRY2 מאוחה לצורה השלילית הדומיננטית של Rho1 (Rho1DN), בעוד CIBN מעוגן לקרום הפלזמה. דימריזציה בתיווך אור כחול של CRY2 ו-CIBN גורמת לטרנסלוקציה מהירה של Rho1DN מהציטופלסמה לקרום הפלזמה, שם הוא משבית אקטומיוזין על ידי עיכוב Rho1 אנדוגני. בנוסף, מאמר זה מציג פרוטוקול מפורט לצימוד אי-הפעלה בתיווך Opto-Rho1DN של אקטומיוזין עם אבלציה בלייזר כדי לחקור את תפקידו של אקטומיוזין ביצירת מתח אפיתל במהלך היווצרות תלמים גחונים של דרוזופילה . פרוטוקול זה יכול להיות מיושם על תהליכים מורפולוגיים רבים אחרים הכוללים התכווצות אקטומיוזין בעוברי דרוזופילה עם שינויים מינימליים. בסך הכל, כלי אופטוגנטי זה הוא גישה רבת עוצמה לנתח את הפונקציה של התכווצות אקטומיוזין בשליטה על מכניקת רקמות במהלך עיצוב מחדש דינמי של רקמות.

בעוברים לא מגורים שעברו כיווץ אפיקלי, Sqh-mCherry הועשר באזור הבינוני של התאים המזודרמליים הגחונים, בעוד ש-CRY2-Rho1DN-mCherry היה ציטוסולי (איור 1A). אבלציה בלייזר בתחום ההתכווצות הובילה לרתיעה מהירה של רקמות לאורך ציר A-P (איור 1B,C). בעוברים המגורים, האות CRY2-Rho1DN-mCherry הפך לקרום פלזמה מקומי, בעוד שהאות הבינוני של Sqh-mCherry נעלם לחלוטין (איור 1A). אבלציה בלייזר בעוברים המגוריים לא גרמה לרתיעה ברורה של הרקמ...

התכווצות אקטומיוזין ממלאת תפקיד חשוב במורפוגנזה של תאים ורקמות. עם זאת, זה מאתגר לתפעל התכווצות actomyosin in vivo בחריפות. פרוטוקול זה מתאר מערכת אופטוגנטית המעכבת במהירות את התכווצות האקטומיוזין בתיווך Rho1 בעוברי דרוזופילה , וחושפת את האובדן המיידי של מתח אפיתל לאחר השבתת אקטומיוזין in vivo.

עיכוב אופטוגנטי של התכווצות אקטומיוזין בתיווך Rho1 יחד עם מדידת מתח אפיתל בעוברי דרוזופילה

Contractile forces generated by actin and non-muscle myosin II ("actomyosin contractility") are critical for morphological changes of cells and tissues at ...

המחקר שלנו חוקר מורפוגנזה של רקמות, היווצרות של מבני רקמה תלת ממדיים מורכבים בהתפתחות. אנו מתעניינים בגנים ובמולקולות המווסתים את המורפוגנזה ומבקשים להבין את העקרונות הפיזיקליים העומדים בבסיס המורפוגנזה. לדוגמה, כיצד נוצרים כוחות מכניים וכיצד הם מניעים שיקום רקמות.כוחות התכווצות הנוצרים על ידי אקטין נימה ומיוזין שאינו שריר II, הידוע גם בשם התכווצות אקטומיוזין, הוא אחד הכוחות החשובים ביותר המניעים מורפוגנזה של רקמות. המחקר הנוכחי שלנו עוסק באופן שבו התכווצות אקטומיוזין מתווכת את קיפול יריעות תאי האפיתל בדם, מנגנון בסיסי לבניית רקמות בהתפתחות. הבנה מעמיקה של תפקיד התכווצות האקטומיוזין בקיפול אפיתל ובתהליכים מורפוגנטיים אחרים דורשת גישות שיכולות להשבית במהירות אקטומיוזין בזמן ובמיקום ייעודיים, ומתעדות את ההשפעה המיידית של התנהגות הרקמה ותכונותיה.עם זאת, קשה להשיג זאת באמצעות גישות גנטיות קונבנציונליות. הגישה המתוארת בפרוטוקול זה נועדה לטפל באופן שבו תאים ורקמות מגיבים לשינויים פתאומיים בכוחות מכניים שבדרך כלל מניעים עיצוב מחדש של רקמות. זוהי שאלה חשובה, אך קשה להתמודד איתה בשל גישות מוגבלות שיכולות לשנות במהירות כוחות מכניים ברקמות שלמות.במחקר זה פיתחנו כלי אופטוגנטי להשבתת אקטומיוזין באזורי רקמה ספציפיים בעוברי דרוזופילה במהירות. מצאנו כי שילוב שני אלה עם אבלציה בלייזר כדי לחקור את ההשפעה הישירה של התכווצות אקטומיוזין על מכניקת הרקמות בקיפול אפיתל. הממצאים שלנו מספקים תובנות חדשות על המנגנון המכאני: אמצעי כיווץ אפיקלי לקיפול אפיתל.עם שינויים ידניים, ניתן להתאים את הפרוטוקול בקלות כדי ללמוד את הפונקציה של התכווצות אקטומיוזין במגוון רחב של תהליכים מורפוגנטיים.

optogenetic-inhibition-rho1-mediated-actomyosin-contractility-coupled

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

כאן אנו מתארים פרוטוקול עבור המניפולציה optogenetic פעילות motoneuronal תוך מעקב אחר שינויים בתפוקת מנוע (התכווצות שרירים) בחצי ללא...

הפרעות optogenetic של פעילות עצבית עם תאורת לייזר בחצי ללא פגע<em&gt; דרוזופילה</em&gt; זחלים בתנועה

אנו מציגים כיוונון של מלקחיים אופטיים מצמידים מיקרוסקופ אור גיליון, ואת יישומו כדי לחקור מכניקה תא בלי חרוזים ב העובר דרוזופילה .

בודק את התא מכניקה עם מלקחיים אופטיים ללא חרוז בתוך העובר דרוזופילה

כאן נתאר וזמינותו contractility באמצעות דרוזופילה S2R + תאי. היישום של ליגנד אקסוגני, gastrulation מקופל (ערפל), מוביל ההפעלה של הערפל איתות contractility מסלול וסלולר. Assay זה יכול לשמש כדי לחקור ברגולציה של חלבונים contractility הסלולר בערפל איתות.

וזמינותו מבוססת תא לחקור שרירים שאינם צולבות הקישור חוטים שרירן II Contractility ויה gastrulation מקופל איתות לשביל בתאים S2R + דרוזופילה

פרוטוקול זה מספק מתודולוגיה ידידותית למשתמש המבוססת על פיג'י, יחד עם הוראות ברורות המסבירות כיצד לנתח באופן אמין את התנהגות actomyosin בתאים בודדים ורקמות אפיתל מעוקל. כישורי תיכנות אינם נדרשים לבצע את הלימוד; כל השלבים מתבצעים באופן חצי אינטראקטיבי באמצעות ממשק המשתמש הגרפי של פיג'י ותוספים משויכים.

ניתוח של Actomyosin בסולמות הסלולר והרקמה המקומית באמצעות הזמן- סרטים פקיעה של מתורבת ביצת ביצה צ'יימברס

כאן, אנו מציגים שיטה להקליט התכווצויות שרירים עובריים בעוברי דרוזוהילה בצורה לא פולשנית ומונחה פרטים.

הדמיה חיה וניתוח של התכווצויות שרירים בתוך העובר דרוזופילה

המטרה של פרוטוקול זה היא להזריק רודמין מצומד אקטין כדורי לתוך עוברים Drosophila ואת התמונה הרכבה מוט actin תוך גרעיני בעקבות עומס חום.

הדמיה מוטות Actin תוך-גרעיניים בחום חי הדגישו עוברי דרוזופילה

מתואר פרוטוקול ליצירת מערכת תרבית משותפת המורכבת מתאי עצב שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs), נוירונים ראשוניים בקליפת המוח ואסטרוציטים. מערכת קו-תרבית זו מאפשרת לזהות היווצרות של מגעים ומעגלים סינפטיים בין נוירונים חדשים שמקורם ב-iPSC לבין נוירונים קיימים בקליפת המוח המבטאים channelrhodopsin-2.

גישת optogenetic להערכת יצירת קשרים עצביים במערכת Co-תרבות

כדי לחקור את מנגנון ניצול השומנים בקרומי שק החלמון בשלבים המאוחרים של התפתחות עוברי העופות, הקמנו מערכת תרבית תאי אפיתל אנדודרמלי עובריים ראשונית של שליו יפני.

הראשי Endodermal אפיתל תרבית תאים מן קרום צק החלמון של עוברים יפניים שליו

אנו מתארים הליך רב-יעד chromogenic כל הר הכלאה באתר (MC-תרצה) בעוברים שלמים תסיסנית מאפשרים זיהוי סימולטני וספציפי של שלושה דפוסי הפצת mRNA שונים על ידי מנוגד משקעים צבע.

רב-יעד Chromogenic כל הר<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה להשוואת תחומים ביטוי גנים ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; עוברים

פרוטוקול שונה עבור מניפולציה ploidy משתמשת הלם החום להשפיע על דוכן אחד-מחזור ב cytokinesis בעובר המוקדם. פרוטוקול זה מודגם דג הזברה אבל עשוי לחול על מינים אחרים.

מניפולציה ploidy של עוברי דג הזברה עם חום 2 הלם טיפול

חקור עיכוב אופטוגנטי של התכווצות אקטומיוזין בתיווך Rho1 בעוברי דרוזופילה. שיטה זו מאפשרת מדידה מדויקת של שינויים במתח האפיתל ומספקת כלי חשוב לחקר מורפוגנזה של רקמות.

עיכוב אופטוגנטי של התכווצות אקטומיוזין בתיווך Rho1 יחד עם מדידת מתח אפיתל בעוברי דרוזופילה

גלה סרטונים נוספים