Name: חשיפה כרונית לאדי אתנול לסירוגין בשילוב עם בחירה בשני בקבוקים למודל הפרעת שימוש באלכוהול (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-23T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: למד את פרוטוקול בחירה בשני בקבוקים עם חשיפה כרונית לאדי אתנול בעכברים לחקר הפרעת שימוש באלכוהול. שיטה זו מאפשרת ניטור מדויק של התנהגות שתייה ומספקת תובנות לשינויים נוירוביולוגיים הקשורים לתלות באלכוהול.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים של המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) AA027301 ו-AA029985.

כל ההליכים אושרו על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת פרדו. המחקר הנוכחי השתמש בעכברי C57BL/6J בני 8 שבועות. בקבוצת CIE היו 5 עכברים (3 זכרים, 2 נקבות), ובקבוצת האוויר היו 10 עכברים (5 זכרים ו-5 נקבות). בעלי החיים הושגו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים) ושוכנו בקבוצה במחזור של 12 שעות אור-חושך עם גישה למזון. משקל הגוף של העכברים נמדד פעם בשבוע במהלך הניסוי.
1. תכנון ניסוי כללי
הערה: בחירה בשני בקבוקים (2BC)/חשיפה כרונית לאדי אתנול לסירוגין (CIE) היא מודל עכברי פרה-קליני לחקר תלות באתנול51.
<ol>
	<li>במהלך שבועות 2 לפנה"ס, ודאו שלעכברים יש גישה לבקבוק המכיל אתנול (15% משקל/נפח) ולבקבוק המכיל מים למשך שעתיים ביום (שני עד שישי), החל משעתיים לתוך מחזור החשיכה.</li>
	<li>בהתחלה, אפשר לעכברים לפחות שבועיים של שתייה בסיסית של 2BC עד שתגיע לרמה יציבה של צריכת אתנול. בהתאם לצרכי הניסוי, חלקו את העכברים לשתי קבוצות (קבוצת CIE וקבוצת Air) או יותר אם נכללים טיפולים נוספים על סמך צריכת האתנול הממוצעת בבסיס.</li>
	<li>לאחר שבועות הבסיס של 2BC, חשוף את העכברים מקבוצת CIE לאדי אתנול (CIE) במשך ארבעה ימים רצופים (שני עד חמישי) עם 16 שעות רצופות של אדים ו-8 שעות רצופות של אדים. כדי להבטיח ריכוזי אתנול יציבים ומתמשכים לאורך כל תקופת החשיפה, פיראזול ניתן במקביל כמעכב אלכוהול דהידרוגנאז, ובכך מנע חילוף חומרים מהיר של אתנול וקידם רמות אתנול מערכתיות עקביות. 
	הערה: כדי לשלוט במשתנים פוטנציאליים ספציפיים לתא כגון תאורה, רעידות, רעש וטמפרטורה, עכברים בקבוצת האוויר שוכנו בתא זהה באותם תנאים סביבתיים כמו קבוצת CIE, אך ללא חשיפה לאדי אלכוהול.</li>
	<li>במהלך שבוע CIE/Air, ודא ש-2BC לא יתרחש. לאחר שבוע אחד של CIE/Air, המשיכו את העכברים ב-2BC בימים שני עד שישי הבאים.</li>
	<li>אפשר לעכברים שבועות לסירוגין של CIE/Air ו-2BC למשך שארית ההליך עד להסלמה של שתיית אלכוהול בעכברי CIE. אסוף דם מהעכברים לפחות פעם בשבוע של CIE כדי לקבוע את ריכוז האתנול בדם שלהם (BEC)52.</li>
</ol>
2. הכנה לניסויים
<ol>
	<li>רכשו את כל האספקה הבאה לפני תחילת המחקר: עכברים, כלובים/כלובי מתכת, בקבוקי שתייה שיתאימו לשניים בכל כלוב זה לצד זה, מצעים, מזון, משקל, תא אדים לסירוגין כרוני ומכונת אנלוקס או שיטה אחרת לניתוח ה-BECs (ראה טבלת חומרים).</li>
	<li>ודא שכל הכימיקלים הנדרשים מוכנים לניסוי: מי שתייה, 95% אתנול, פירזול, הפרין ותמיסת מלח סטרילית.</li>
</ol>
3. הרגלת בעלי חיים
<ol>
	<li>אם העכברים עדיין לא שוכנים באותו מיקום כמו הניסויים, אפשר להם לפחות שבוע אחד להתאקלם לסביבה החדשה. 
	הערה: במהלך תקופה זו, יש להרגיל עכברים גם לטיפול עדין כדי למזער בלבול הקשור ללחץ ולשפר את רווחת בעלי החיים. מפגשי הטיפול נערכו פעם ביום במשך חמישה ימים רצופים, כל אחד נמשך כ-2-3 דקות לכל בעל חיים. עכברים הונחו או הונחו בעדינות לתוך ידיו של הנסיין מבלי להרים את הזנב, מה שאפשר להם לחקור מרצונם את ידו של המטפל. טכניקה זו מאפשרת אינטראקציה שגרתית, מפחיתה מתח במהלך הליכי ניסוי עוקבים ומבטיחה נתונים התנהגותיים אמינים יותר. בנוסף, בעלי חיים הועברו לאזור הניסוי למשך 30 דקות מדי יום כדי להתאקלם עוד יותר בסביבת הניסוי.</li>
	<li>ודא שהעכברים מקבלים שבוע אחד של בחירה של שני בקבוקים כאשר שני הבקבוקים מלאים במים כדי לאפשר להם להסתגל למערך הכלוב השונה ולהכניס אותם לכלוב בודד לשתייה.</li>
</ol>
4. שני בקבוקים לבחירה עם 15% משקל אתנול ומים
<ol>
	<li>הרגל לבחירה בשני בקבוקים
	<ol>
		<li>פרדיגמת בדיקת בחירת שני בקבוקים זהה לאורך כל השבוע של בחירת שני בקבוקים עם מים והבדיקה המאוחרת יותר עם מים ואתנול. העבירו את העכברים בקבוצה לכלובי השתייה האישיים שלהם 30 דקות לפני כיבוי האורות, ולאחר מכן אפשרו לעכברים לשתות במשך שעתיים.</li>
		<li>רשום את הנפחים של כל בקבוק שתייה לפני ואחרי תקופת השתייה של שעתיים. כל קבוצה עוברת 2BC למשך 5 ימים, מיום שני עד שישי. 
		הערה: מטרת שבוע ההרגלה היא לאפשר לבעלי החיים להסתגל לשני בקבוקים שנמצאים בכלוב כדי למזער כל הטיה הנגרמת על ידי מיקום הצד הטבעי של בקבוק בודד. במהלך השבוע הזה, שני הבקבוקים מלאים במים. אם מיכל המתכת המצורף נועד להכיל בקבוק אחד בלבד, השתמש בזהירות ברווח בין הסורגים שלו הסמוך לבקבוק הראשון כדי ליצור מקום לבקבוק השני. הבקבוקים המשמשים לניסויי שתייה מיוצרים בהתאמה אישית באמצעות פיפטות של 10 מ"ל ו-25 מ"ל עם קצוות חתוכים כדי לאפשר הכנסת לגימה ישרה עם מיסב כדורי לעכברים לשתות ממנו. שימוש בקליפסים קלסר כדי להצמיד את הבקבוקים למכסה החוט יבטיח שהבקבוקים לא יזוזו במהלך תקופת השתייה (איור משלים 1 ואיור משלים 2).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>בחירה בסיסית של שני בקבוקים
	<ol>
		<li>לאחר ההתרגלות, אפשר לעכברים לעבור לפחות שבועיים של שתיית בסיס 2BC כדי לבסס צריכת אתנול יציבה. במהלך השתייה הבסיסית, בדקו את העכברים במשך שעתיים ביום ו-5 ימים בשבוע (שני עד שישי) עם בקבוק מים אחד ובקבוק שני עם 15% משקל/נפח אתנול. רשום את הנפחים של כל בקבוק שתייה לפני ואחרי תקופת השתייה של שעתיים. 
		הערה: כדי לקבוע קו בסיס יציב של צריכת אתנול, חזור על השבועות של 2BC עד שלכל עכבר יש שונות של פחות מ-15% בצריכה בין הימים.</li>
		<li>לאחר שהעכברים משיגים קו בסיס יציב של צריכת אתנול, חלקו את העכברים באופן שווה על סמך צריכת האתנול שלהם לקבוצות שאינן תלויות באתנול (טיפול באוויר) ותלויות באתנול (טיפול CIE). לאחר שנקבעה צריכת האתנול הבסיסית, העכברים עוברים CIE (או חשיפה לאוויר) בשבוע שלאחר מכן. 
		הערה: לא כל הניסויים דורשים הכללה של קבוצה שאינה תלויה, ויש לקבוע זאת על סמך מיקוד המחקר. לדוגמה, עכברים תלויי אתנול עם ובלי טיפול ספציפי עשויים להיות השוואה רלוונטית יותר.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>שני בקבוקים לבחירה (2BC)
	<ol>
		<li>המשך את הליך 2BC כפי שבוצע במהלך השתייה הבסיסית לאחר השבוע הראשון של CIE. 
		הערה: נוסחת שתיית העכבר לבחירת שני בקבוקים היא תערובת אתנול של 15% w/v (1 ליטר): 95% אתנול (195 מ"ל) ומי שתייה של עכברים (805 מ"ל).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. חשיפה כרונית לאדי אתנול לסירוגין (CIE)
<ol>
	<li>סדרו את החומרים הבאים: תאי אדים CIE בהתאמה אישית (איור משלים 3), 95% אתנול, תמיסת אתנול-פירזול (68.1 מ"ג/ק"ג פירזול מעורבב ב-20% אתנול), תמיסת מלח-פירזול (68.1 מ"ג/ק"ג פירזול מעורבב במי מלח), מזרקים (1 מ"ל) ומחטים.</li>
	<li>הליך אדי אתנול כרוני לסירוגין (CIE).
	<ol>
		<li>לפני הכנסתם לתאי האדים עבור CIE, יש להזריק לעכברים תמיסת אתנול-פירזול (0.0075 מ"ל/גרם), המשמשת ליצירת שיכרון אתנול ראשוני, עיכוב אתנול דהידרוגנאז וחסימת חילוף החומרים של אתנול53.</li>
		<li>הזריק את כל בקרות האוויר וקבוצות אחרות עם אותו מינון פיראזול מעורבב עם מי מלח (0.0075 מ"ל/גרם) במקום אתנול. מומלץ לתת חצי מנה (0.00375 מ"ל/גרם) של תמיסות פירזול ביום הראשון וביום האחרון של CIE בכל שבוע.</li>
		<li>לאחר הזריקות, החזירו את עכברי האוויר/בקרה לכלובי הבית שלהם, והניחו את הכלובים של קבוצת ה-CIE בתוך תא האדים. 
		הערה: בהתחשב בסיכונים הבריאותיים הפוטנציאליים הקשורים לחשיפה כרונית לאדי אתנול, בעלי חיים היו במעקב צמוד לאורך כל הפרוטוקול כדי להבטיח את רווחתם ולזהות תופעות לוואי כלשהן. עכברים נשקלו לפחות פעמיים בשבוע, והערכות הבריאות כללו תצפית על סימני מצוקה קליניים. בעלי חיים שהפגינו ירידה במשקל הגוף העולה על 20% מנקודת ההתחלה או הראו סימנים כגון יציבה כפופה, עייפות, זקפה או פרווה לא מטופחת נחשבו כמי שהגיעו לנקודות קצה הומאניות והוסרו מיד מהמחקר בהתאם להנחיות מוסדיות מאושרות לטיפול ושימוש בבעלי חיים. במהלך CIE, עכברים רגישים ביותר לתוצאות בריאותיות גרועות לקראת סוף השבוע, כאשר הם נכנסים לתקופת גמילה ממושכת לאחר הפסקת החשיפה לאתנול. כדי למזער את חומרת הגמילה, חצי מנה של פירזול ניתנת ביום האחרון של החשיפה לאדים בכל שבוע. בנוסף, חצי מנה ניתנת בתחילת כל מחזור CIE חדש כדי להקל על בעלי החיים בחזרה לחשיפה לאתנול. פיראזול, מעכב אלכוהול דהידרוגנאז, משמש לייצוב והארכת ריכוזי האתנול בדם; המינונים נעים בדרך כלל בין 0.00375 מ"ל/גרם ל-0.0075 מ"ל/גרם וניתן להתאים אותם כדי להשיג את ריכוז האתנול הרצוי בדם.</li>
		<li>לאחר הכנסת העכברים לתאי האדים, נעל את הדלתות והגדר את המשאבה לרמת האדים המתאימה (למשל, 1-3). הגדר את זמן הריצה של הניסוי. במחקר הנוכחי, הניסוי החל בשעה 17:00 והסתיים בשעה 09:00 בבוקר, ונעשה שימוש בהגדרת משאבה של 1-2 (בשימוש לאורך כל הדרך).</li>
		<li>לאחר מכן, לחץ על כפתור התחל במסך הבקרה של תא האדים של CIE כדי להתחיל את הניסוי. 
		הערה: שלב זה עשוי להשתנות בהתאם לתא בו נעשה שימוש ולהבדלים בהגדרה. כאן, לאחר שכל העכברים מוזרקים ומכניסים לתא האתנול, התא צריך להתחיל לשאוב 95% אתנול לבקבוק זכוכית ולחמם את האתנול הנוזלי לאדים. האדים זורמים דרך החדר שבו העכברים מוחזקים במשך 16 שעות ביום במשך 4 ימים (שני בערב עד שישי בבוקר). בכל יום, העכברים חווים 8 שעות של כביית אדים. לאחר מכן העכברים מוציאים מהתא בסוף היום הרביעי (יום שישי בבוקר) ומתחילים בשעה 2 לפני הספירה ביום שני שלאחר מכן. בהתאם למערכת תא האדים וההגדרה הספציפית, ייתכנו שינויים ב-BECs הנגרמות על ידי ההגדרות/רמות האדים השונות. גורמים שונים, כגון הבדלים קלים ברכיבי המערכת, זרימת אוויר, פליטה וכו', יכולים לגרום לכך. התאמת רמת אדי האתנול במקום מינון הפירזול מתאימה לשמירה על BEC בטווח היעד. ככל שהסובלנות מתפתחת, ה-BECs עשויים להיות נמוכים מדי, וייתכן שיהיה צורך להתאים את רמת האדים. אם השיפוע בין רמות האדים תלול מדי להגדלת ה-BECs, מומלץ להתאים את מינון הפירזול בהתאם כדי לשנות את ה-BECs.</li>
		<li>מדוד את ה-BECs (ראה שלב 5.3) של העכברים לפחות פעם בשבוע במהלך CIE. בצע איסוף דם 30 דקות לפני שהאדים מפסיקים כדי לוודא שה-BECs לא התחילו לרדת. 
		הערה: ייתכן שיהיה צורך להתאים את רמת האדים במהלך הניסוי מכיוון שסובלנות האתנול מצטברת במהלך מספר שבועות. יש לבדוק BECs לפני ואחרי התאמת הגדרות האדים.</li>
		<li>החזר את העכברים לבדיקת 2BC בשבוע שלאחר ה-CIE. חזור על שלב 4 ושלב 5. שמור את העכברים לסירוגין בין CIE ל-2BC במשך ארבעה עד שמונה מחזורים (8-16 שבועות) עד שיש להם הסלמה משמעותית בצריכת האתנול בהשוואה לנפח השתייה הבסיסי שלהם.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>מדידות דם
	<ol>
		<li>סדר את החומרים הבאים: ציוד למדידת BECs, כגון מערכת אנלוקס, להב, צינור (0.2 מ"ל), הפרין/EDTA וצנטריפוגה (ראה טבלת חומרים).</li>
		<li>גזור את הזנב של עכברי CIE פעם אחת במהלך שבוע ה-CIE, 30 דקות לפני כיבוי מערכת האדים, כדי לאסוף דם לקביעת ה-BEC. ניתן לבצע את איסוף הדם במספר שיטות בהתאם להעדפות המעבדה54. 
		הערה: הדם נאסף לתוך צינורות של 0.5 מ"ל שעברו הפרין או מצופים EDTA (ראה טבלת חומרים).</li>
		<li>שמור על דגימות הדם שנאספו בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד לעיבוד.</li>
		<li>כדי לעבד את הדגימות, צנטריפוגה ראשונה ב-208 x גרם למשך 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס כדי להפריד את הפלזמה.</li>
		<li>קבע את ריכוזי האתנול בדם באמצעות מנתח אתנול בקצב חמצן (ראה טבלת חומרים) או מערכות אחרות המסוגלות לקבוע BECs.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Modeling Alcohol Use Disorder Using Chronic Intermittent Ethanol Vapor Exposure

מאורי קול הוא הבעלים והמפעיל של La Jolla Alcohol Research Inc.

הפרעת שימוש באלכוהול מייצגת בעיה עולמית של בריאות הציבור עם שכיחות גבוהה ועלות גבוהה לחברה56. כדי לחקור AUD במודלים פרה-קליניים של בעלי חיים, שיטה נפוצה בעכברים היא2BC/CIE 20,34,43,44,51,57,58,59. כאן, נעשה שימוש במודל מבוסס זה של תל...

הפרעת שימוש באלכוהול (AUD), הכוללת צריכת אלכוהול מופרזת כרונית, היא אחת ההפרעות הפסיכיאטריות הנפוצות ביותר ומהווה בעיה עולמית. תסמיני AUD כוללים מחזורים חוזרים ונשנים של שיכרון, גמילה והשתוקקות ומאופיינים בצריכה מתמדת של אלכוהול ללא התחשבות בהשלכות החברתיות, התעסוקתיות והבריאותיות1,2,3,4,5,6,7. הפרעת שימוש באלכוהול מתרחשת לעתים קרובות בשילוב עם הפרעות נפשיות נפוצות, מתמשכות ופוגעות אחרות8, כגון ADHD9, anxiety10, או depression11 ואחראית לכ-88,000 מקרי מוות מדי שנה בארצות הברית לבדה2. שימוש מופרז או תכוף באלכוהול יכול להשפיע על מצב העבודה והקשרים החברתיים של אדם12 ועלול להוביל לאלימות מוגברת13. מבחינה פיזית, גמילה חריפה מאלכוהול עלולה לגרום לחרדה, עצבנות, רעד, הזעת יתר, שינוי תודעה והזיות14,15. יתר על כן, אנשים עשויים להרגיש תסמיני גמילה בעת הפחתת או הפסקת השתייה ולהיות עצבניים או עצבניים16. בנוסף, צריכת אלכוהול כרונית עלולה לגרום לאובדן זיכרון17 ועלולה לגרום למחסור בתיאמין, הידוע גם בשם תסמונת ורניקה-קורסאקוף (WKS), התורם באופן משמעותי לדמנציה18.
כדי לקדם עוד יותר את מחקר ה-AUD, יש צורך במודלים רלוונטיים של המחלה בבעלי חיים. המודל הנפוץ ביותר של AUD במכרסמים הוא חשיפה כרונית לאדי אתנול לסירוגין (CIE), שהיא גישה מבוססת היטב להשראת תלות באלכוהול באמצעות שאיפה חוזרת ונשנית של אלכוהול vapor4,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30. הליכי CIE של מכרסמים גורמים לתסמיני גמילה כגון עוויתות הנגרמות על ידי טיפול31, ריגוש יתר, התנהגות דמוית עצבנות, התנהגות דמוית חרדה והפרעות שינה וגורמים להסלמה של שתיית אלכוהול22,32,33,34,35. יתר על כן, CIE מוביל להסלמה משמעותית בצריכת אלכוהול מרצון, המשקפת את הצריכה הכפייתית שנצפתה ב-AUD36. במהלך שלבי השיכרון, עכברים מציגים סימנים התנהגותיים ופיזיולוגיים התואמים לשיכרון אלכוהול בבני אדם, כולל אטקסיה, טשטוש ופגיעה בהיפותרמיה37,38,39. תוצאות אלו מדגישות את התועלת של מודל CIE בלכידת ההיבטים הנוירוביולוגיים וההתנהגותיים של תלות באלכוהול, מה שהופך אותו לכלי רב ערך להבהרת מנגנוני AUD ובדיקת התערבויות טיפוליות פוטנציאליות. במודלים פרה-קליניים של AUD, כגון חשיפה כרונית לאתנול לסירוגין (CIE), עכברים מציגים סימנים התנהגותיים ופיזיולוגיים המקבילים לשיכרון ותלות באלכוהול אנושי. במהלך שלבי השיכרון, עכברים עשויים להראות סימנים הכוללים אטקסיה, טשטוש, ירידה בהתנהגות חקר ופגיעה ברפלקס הימני. בהתחשב בסיכונים אלה, בעלי חיים היו במעקב צמוד במהלך ואחרי חשיפה לאדי אתנול כדי לזהות סימנים של שיכרון חמור או הידרדרות בריאותית.
בחולדות, מודל CIE כולל לעתים קרובות מתן עצמי אופרנטי של אלכוהול כדי למדוד את ההסלמה של הצריכה40,41,42, בעוד שמודל העכבר כולל CIE ובחירה של שני בקבוקים (2BC) שתייה43,44. מודלים פרה-קליניים של תלות באלכוהול הראו באופן עקבי שבעלי חיים מגדילים את צריכת האתנול שלהם לאחר חשיפה כרונית לאדי אתנול23,45,46,47. בעכברים ספציפית, מחזורים חוזרים ונשנים של CIE הוכחו כמסלימים את צריכת האתנול מרצון3,21,48,49,50. בסך הכל, מחקרים קודמים מראים כי מודל CIE מספיק כדי להגדיל את צריכת האתנול ולדגמן AUD במכרסמים.
מחקר זה נועד להדגיש את שיטת CIE לחקר AUD וליתר דיוק, להתמקד במודל העכבר 2BC/CIE. אנו עוברים תהליך מפורט של השלבים הדרושים לביצוע 2BC/CIE ומציגים דוגמה להסלמה של שתיית אלכוהול לאחר CIE.

<table><tbody><tr><td>500 Eppendorf Tubes</td><td>Eppendorf</td><td>L203896J</td><td></td></tr><tr><td>95% אתנול</td><td>Decon מעבדות</td><td>2816</td><td></td></tr><tr><td>Analox מכונה</td><td>Analox מכשירים</td><td>Analox-AM1</td><td></td></tr><tr><td>בעלי חיים שקילה סולם</td><td>קנט</td><td>מדעי SCL-4000</td><td></td></tr><tr><td>קלסר קליפים</td><td>Office Depot</td><td>560394</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J עכברים</td><td> מעבדת ג'קסון</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Eppendorf</td><td>5418R</td><td></td></tr><tr><td>תא אדים לסירוגין</td><td>כרוני La Jolla Alcohol Research Inc</td><td></td><td>חומרים בהתאמה אישית</td></tr><tr><td>Heparin/EDTA</td><td>Sagent Pharmaceuticals</td><td>TS/DRUGS/2/2015</td><td></td></tr><tr><td>מצעי עכבר</td><td>Bed-o' Cobs</td><td>8B</td><td>מילוי עם בקבוק</td></tr><tr><td></td><td></td><td>שתייה עכבר</td> עמוק 1/8 אינץ' <td>חומרים בהתאמה אישית</td></tr><tr><td>Pyrazole</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>bccc6397</td><td></td></tr><tr><td>Teklad גלובלי 18% חלבון (מזון עכבר)</td> <td>Teklad global</td><td>Envigo 2018</td><td></td></tr></tbody></table>

חשיפה כרונית לאדי אתנול לסירוגין בשילוב עם בחירה בשני בקבוקים למודל הפרעת שימוש באלכוהול

Chronic Intermittent Ethanol Vapor Exposure Paired with Two-Bottle Choice to Model Alcohol Use Disorder

הפרעת שימוש באלכוהול (AUD) היא הפרעה כרונית הקשורה לאלכוהול המופיעה בדרך כלל כשתייה בלתי מבוקרת ועיסוק באלכוהול. מרכיב מרכזי במחקר AUD הוא שימוש במודלים פרה-קליניים רלוונטיים לתרגום. במהלך העשורים האחרונים, נעשה שימוש במגוון מודלים של בעלי חיים כדי לחקור AUD. מודל בולט אחד של AUD הוא מודל החשיפה הכרונית לאדי אתנול לסירוגין (CIE), שהיא גישה מבוססת היטב להשראת תלות באלכוהול במכרסמים באמצעות מחזורים חוזרים ונשנים של חשיפה לאתנול באמצעות שאיפה. כדי לדגמן AUD בעכברים, החשיפה ל-CIE משולבת עם בחירה מרצון של שני בקבוקים (2BC) של שתיית אלכוהול ומים כדי למדוד את ההסלמה של שתיית אלכוהול. הליך 2BC/CIE כולל שבועות לסירוגין של שתיית 2BC ו-CIE, שחוזרים על עצמם עד להשגת הסלמה של שתיית אלכוהול. במחקר הנוכחי, אנו מתארים את הנהלים לביצוע 2BC/CIE, כולל שימוש יומיומי בתא האדים CIE, ומספקים דוגמה לשתיית אלכוהול מוגברת בעכברי C57BL/6J באמצעות גישה זו.

במחקר מייצג זה, צריכת אתנול (g/kg) במהלך 2BC מדווחת במהלך השתייה הבסיסית ולאחר שבועות של CIE (פוסט-אידוי). בקצרה, כפי שמתואר בפרוטוקול, במהלך 2BC, לעכברים הייתה גישה לשני בקבוקים: אחד הכיל מים והשני הכיל אתנול 15% (w/v). לאחר שנקבעו כמויות הצריכה הבסיסיות, חולקו הנבדקים והוקצו באופן שווה לקבוצת ה-CIE או לקבוצת האוויר (Air). צריכת האתנול הבסיסית הראשונית במהלך תקופה של 3 שבועות התייצבה על 2.00 g/kg ± 0.21 g/kg (n = 15) לפני ה-CIE (איור 1A,B).
בבחינ...

מוצג כאן פרוטוקול למודל 2BC/CIE של תלות באלכוהול בעכברים לחקר הפרעת שימוש באלכוהול.

Alcohol use disorder (AUD) is a chronic alcohol-related disorder that typically presents as uncontrolled drinking and preoccupation with alcohol. A key ...

chronic-intermittent-ethanol-vapor-exposure-paired-with-two-bottle

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

הפרעה לשימוש באלכוהול (AUD) היא בעיה בריאותית לאומית גדולה ונדרש ההתפתחות של טיפולים יעילים יותר כדי לקזז את הצרכים של האוכלוסייה המטופלת הזו. לשם כך, הפרוטוקול הבא מנצל שני דגמים שתייה פשוטה מכרסמים כדי להעריך את היעילות פרה של תרכובות נגד אלכוהול עופרת.

מאתר שותה מודלים בהתפתחות Pharmacotherapies לאלכוהול: הבחירה אפל, שני-בקבוק שתייה

פרוטוקול זה מתאר פרדיגמת שתייה סטנדרטית של שני בקבוקים בכלוב ביתי לבחירה לסירוגין כדי להדגים צריכת אלכוהול בחולדות. בנוסף, הוא מספק הוראות שלב אחר שלב להגדלת הפרוטוקול הסטנדרטי עם מערכת זיהוי ליקוק עשה זאת בעצמך המאפשרת ניתוח מיקרו-מבני של התנהגות השתייה.

מידול צריכת אלכוהול במכרסמים באמצעות שתיית כלוב ביתי לבחירה בשני בקבוקים וניתוח מיקרו-מבני

Assay פשוט למדוד את ההשפעות מרגיעים של אתנול...

דרך פשוטה למדוד את רגישות אתנול זבובים

דו"ח זה מדגים טכניקה בידוד מכני של נוירונים בודדים קיימא שמירה boutons presynaptic המצורפת. נוירונים Vibrodissociated יש את היתרונות של ייצור מהיר, שליטה מעולה תרופתי ושיפור חלל מהדק ללא השפעה של תאים שכנים. שיטה זו יכולה לשמש עבור הדמיה של אלמנטים הסינפטי ו-clamp תיקון ההקלטה.

Vibrodissociation של נוירונים בין פרוסות המוח מכרסמים לחקר הילוכים Synaptic ותמונה מסופי Presynaptic

שיטה כדי לקבוע את מהלך הזמן של ריכוז אתנול במוחם של חולדות במהלך אתנול אופרנטית מנהל עצמי מתוארת. גז כרומטוגרפיה עם זיהוי יינון להבה משמשת לכימות אתנול בדגימות dialysate, כי יש לו את הרגישות הנדרשת לנפחים הקטנים שנוצרו.

Microdialysis של אתנול במהלך אתנול נחישות ממשל עצמי ואתנול אופרנטית על ידי גז כרומטוגרפיה

Olfactometer אנכי, T-מבוך מתואר לassaying התגובה התנהגותית של פרוקי רגליים. Olfactometer מאפשר הנסיין למדוד בחירות שבוצעו על ידי נבדקים, כאשר נתון שני שדות ריח פוטנציאליים. שניהם המשיכה ולדחייה מodorants ניתן למדוד במכשיר זה.

Assay בחירה האנכי T-מבוך לתגובת פרוקי רגליים לodorants

דרוזופילה התפתחה כמערכת מודל משמעותית עבור לנתח את הבסיס התאי ומולקולרית של תגובות התנהגותיות לאלכוהול. כאן אנו מציגים פרוטוקול לאיסוף נתונים רגישות אלכוהול בהקשר היממה שיכולה להיות מיושם בקלות לניסויים אחרים, והוא מתאים היטב למחקר לתואר ראשון.

FlyBar: מתן אלכוהול לזבובים

הקלטות זוגות הן הקלטות סימולטניות של מהדק טלאי תא שלם משני נוירונים המחוברים סינפטית, מה שמאפשר אפיון אלקטרופיזיולוגי ופרמקולוגי מדויק של הסינפסות בין נוירונים בודדים. כאן אנו מתארים את המתודולוגיה והדרישות המפורטות לביסוס טכניקה זו בתרביות פרוסות היפוקמפוס אורגנוטיפיות בכל מעבדה המצוידת באלקטרופיזיולוגיה.

הקלטות תא כל לזווג בפרוסות בהיפוקמפוס Organotypic

בדיקות פשוטות למדידת רגישות לאתנול וסבילות מהירה בדרוזופילה מקלות על השימוש באורגניזם מודל זה לחקירת התנהגויות חשובות אלה הקשורות לאתנול. כאן מתוארת בדיקה פשוטה יחסית וניתנת להרחבה למדידת רגישות לאתנול וסבילות מהירה בזבובים.

Assay זול, Scalable התנהגות למדידת אתנול הרגעת רגישות וסובלנות מהירה ב<em&gt; דרוזופילה</em

C. elegans הוא מודל שימושי לחקר ההשפעות של אתנול על ההתנהגות. אנו מציגים בדיקת התנהגותית שמכמתת את ההשפעות של אתנול על מהירות התנועה של תולעים זוחלות; ניתן למדוד עם הבדיקה הזו גם את הרגישות הראשונית וגם את התפתחות הסובלנות התפקודית החריפה לאתנול.

Assay למדידת ההשפעות של אתנול במהירות התנועה של<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

למד את פרוטוקול בחירה בשני בקבוקים עם חשיפה כרונית לאדי אתנול בעכברים לחקר הפרעת שימוש באלכוהול. שיטה זו מאפשרת ניטור מדויק של התנהגות שתייה ומספקת תובנות לשינויים נוירוביולוגיים הקשורים לתלות באלכוהול.

חשיפה כרונית לאדי אתנול לסירוגין בשילוב עם בחירה בשני בקבוקים למודל הפרעת שימוש באלכוהול

גלה סרטונים נוספים