9 בפברואר 2024
פרוטוקול זה כולל סדרה של בדיקות פונקציונליות נויטרופילים שישמשו כשיטת סינון לכיסוי פונקציות ממסלולי איתות שונים. הפרוטוקול כולל הערכה ראשונית ופשוטה של כדאיות התא, טוהר, ייצור מיני חמצן תגובתי, נדידה בזמן אמת, פגוציטוזה, והצעה ראשונית של מלכודות חוץ-תאיות של נויטרופילים.
פרוטוקול המסך של NeutroFun מספק קבוצה של בדיקות פונקציונליות המשתמשות בכימיקלים בעלות נמוכה וניתן לבצע אותן בניסוי יחיד מנויטרופילים טריים. זה מאפשר הערכה ראשונית של כמה פונקציות נויטרופילים עיקריות כדי להנחות מחקרי מעקב מייגעים ויקרים יותר. מחקר נויטרופילים משתמש בתנאי אפנון שונים.
כגון ציטוקינים, פפטידים, מוצרים מיקרוביאליים וגירויים פיזיים. בנוסף, מנתח ציטומטריית זרימה, מולטיומיקס, התקנים מיקרופלואידים וציטוכימיה חיסונית. המותג הנרחב של תנאים ובדיקות המשמשים בשילוב הופך את זרימת העבודה של מחקר נויטרופילים ארוכה, מייגעת ויקרה.
בדרך כלל בהפחתות אלה, במספר התנאים שנבדקו או במספר הבדיקות שבוצעו, המצב הנוכחי של השיטות המתקדמות דורש הגדרות נרחבות, תאים רבים והליכי הכנה ארוכים. פרוטוקול NeutroFun Screen שלנו מציע גישה מהירה וחסכונית יותר להערכת פונקציונליות התא בהשוואה לשיטות אחרות. זאת באמצעות שילוב ניתוחים שונים בתוך הפרוטוקול, תוך שמירה על דיוק ומקיפות בתוצאות.
שני חוקרים ביצעו את תהליך העבודה הזה בו זמנית לסקירה מהירה של פונקציית הנויטרופילים. חוקר אחד מבודד את ה-PMNs, מתאים את הריכוז ודוגר על מערכות ההפעלה, ואילו חוקר שני מכין חומרים למקרים הבאים. לאחר מכן חוקר אחד מבצע בדיקות פאגוציטוזיס, ובדיקות NBT קולורימטריות בעוד חוקר שני מבצע נדידה בזמן אמת ומבחני שקופיות NBT.
פרוטוקול סריקת NeutroFun מציע סט של בדיקות תפקודיות עבור נויטרופילים, תוך שימוש בחומרים כימיים בעלות נמוכה בניסוי אחד. פרוטוקול זה מאפשר הערכה ראשונית של תפקודי מפתח של נויטרופילים, ובכך מסייע בתכנון של מחקרים נרחבים יותר.
סריקה מהירה ומולטיפלקסית של תפקודי נויטרופילים היא קריטית לשלבים מוקדמים של גילוי תרופות אימונולוגיות, ומאפשרת בחישה יעילה של היפותזות והסרת סיכונים מכניסטיים. פרוטוקול NeutroFun Screen מספק סקירה מקיפה וכלכלית של חיוניות נויטרופילים, ייצור ROS, נדידה, פגוציטוזה ויצירת NET, ובכך תומך במיון ותיעדוף של פורטפוליו הפיתוח. גישה זו ממקסמת את ניצול הדגימות ומאיצה את קבלת ההחלטות בנקודות מפתח בתהליך הגילוי.
סריקת ה-NeutroFun מתאימה לשלב המקשר בין הגילוי המוקדם לזיהוי המולקולות המובילות (lead identification), ומאפשרת אפיוני תפקודי מהיר לפני מחקרים פרה-קליניים הדורשים משאבים רבים.