Name: פרוטוקול בדיקת גזירה לקביעת תכונות חומר חד-תאי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-19T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: למד איך לכמת תכונות מכניות של תאים סרטניים ותקינים באמצעות מכשירים מיקרופלואידיים וטכניקות גזירה. שיטה זו מאפשרת זיהוי ביומרקרים חדשים לאבחון מוקדם של סרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לחוקרים קודמים מקבוצת סובוייג'ו במכון הפוליטכני של וורצ'סטר שהיו החלוצים הראשונים בטכניקה זו: ד"ר ייפאנג קאו, ג'ינגג'יה הו וונסה אוזונוואן. עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לסרטן (NIH/NCI K22 CA258410 ל-M.D). דמויות נוצרו עם BioRender.com.

1. הכנה לבדיקת הגזירה החד-תאית
<ol><li>תרבית תאים<ol><li>זרעו כ-50,000 תאים בודדים מרחפים בצלוחית פטרי בגודל 35 מ"מ על 10 מ"מ המכילה 2 מ"ל של תרבית. הערה: מערבל את התאים המרחפים לפני הזריעה כדי לפרק את צברי התאים.</li>
		<li>לדגור על התאים ב 37 ° C ולאפשר בין 10 ל 48 שעות עבור חיבור תאים והיווצרות מלאה של חלבון השלד והשלד. הערה: יש לקחת בחשבון את משך ההתקשרות התאית, כמו גם את קצב ההתרבות והגדילה, כדי להבטיח גדילה והתקשרות תאים נאותים תוך הימנעות מצבירת תאים. פרמטרים אלה משתנים בהתאם לסוג התא.</li>
	</ol></li>
</ol>2. ניסוי מבחן גזירה
<ol><li>הכנת מדיית זרימה צמיגה של בדיקת גזירה<ol><li>כדי להבטיח מדיית זרימה צמיגה מעט (0.015-0.02 Pa·s), מדדו והוסיפו 0.05 wt% של מתילצלולוז לא רעיל ולא אלרגני (4 Pa·s) למדיית התרבית.</li>
		<li>כדי להבטיח תערובת הומוגנית, חממו מראש את מצע תרבית הבסיס למשך ~10-20 דקות בטמפרטורה של ~60-70 מעלות צלזיוס עם מערבל מגנטי/פלטה חשמלית. תוך ערבוב מתמשך של התקשורת, להוסיף בעדינות את מתילצלולוז כך שהוא מתפזר במהירות, כדי למנוע קרישה של חלקיקי מתילצלולוז. אפשר לתהליך זה להימשך ~ 15-24 שעות כדי להבטיח תמיסה ברורה של מדיה + תאית. הערה: הימנע מחימום מוגזם של התמיסה.</li>
		<li>כדי למדוד את צמיגות מדיית הזרימה, בדוק ~ 0.5-1 מ"ל של מדיית הזרימה המייצגת באמצעות ראומטר. מתוך הקריאה, קבע את צמיגות הנוזל והשתמש בערך זה כדי לייצג את צמיגות תווך נוזל הגזירה (μ) כדי לחשב מתח גזירה באמצעות משוואה (2).</li>
	</ol></li>
	<li>הגדרת מנגנון גזירה<ol><li>הגדירו את מערכת בדיקת הגזירה של מזרקים כפולים (60 מ"ל או 100 מ"ל) המחוברים למשאבת מזרקים ניתנת לתכנות לצורך עירוי ונסיגה של מצע התרבית הצמיגי (איור 1).</li>
		<li>חבר את שני המזרקים לתא הזרימה באמצעות צינורות ומחברי צינורות בגודל 1/16 אינץ'.</li>
		<li>הדקו אטם גומי כדי לספק זרימה מבוקרת ואחידה על תאים בודדים לאורך נתיב הזרימה (איור 1). אטם הגומי מגיע בגדלים שונים בהתאם לפרופיל הזרימה שיש להשיג (למינרי או טורבולנטי) ולאזור התצפית הרצוי (למשל, אורך של 22.5 מ"מ, רוחב של 2.5 מ"מ וגובה של 0.254 מ"מ) (איור 1).</li>
		<li>תכנת את המשאבה להחדיר ולמשוך נפח מסוים של נוזל (למשל, 60 מ"ל) בקצב מוגדר (למשל, 1 מ"ל/דקה) ובחר את המזרקים המתאימים (למשל, 60 מ"ל). הערה: קח בחשבון את הגדרות הנפח המרביות המוגדרות מראש של עירוי ומשיכה כדי למנוע חסימה או תקלה. השתמש במשוואה (2) לחישוב קצב הגזירה הנדרש של המשאבה (בהנחה שהלחץ והצמיגות הנדרשים ידועים).</li>
	</ol></li>
	<li>הגדרת טרום גזירה<ol><li>ממלאים את המזרק באמצעי הזרימה הצמיגי המוכן.</li>
		<li>חבר את המזרק, מלא 60 או 100 מ"ל (או לפי הצורך) של מדיה זרימה צמיגה, מזרק ריק 60 מ"ל למיקומם בהתאמה על משאבת מזרק לתכנות. באמצעות מחברי צינורות וצינורות, חבר את שני המזרקים לתא הזרימה.</li>
		<li>כדי להבטיח זיהוי קל של תאים בודדים וחיבור מהודק בין תא הזרימה לצלחת הפטרי, חברו את אטם הגומי לתא הזרימה.</li>
		<li>שאפו את תרבית התאים מצלוחית הפטרי המכילה את התאים המעניינים.</li>
		<li>שטפו תאים מתים ותאים המחוברים באופן רופף באמצעות מלח חוצץ פוספט (PBS).</li>
		<li>שאפו את PBS.</li>
		<li>הכנס וקבע את תא הזרימה ואטם הגומי (~ 34 מ"מ x 9 מ"מ) על צלחת הפטרי (35 מ"מ x 10 מ"מ) המכילה את התאים המחוברים.</li>
		<li>הניחו את תא הזרימה + התאים המיקרופלואידים המותאמים על צלחת מתורבתת על גבי מיקרוסקופ הפוך, עם מטרת מיקרוסקופ גבוהה מספיק כדי לקבל תמונות באיכות גבוהה עם ערכי פיקסלים גבוהים (בדרך כלל בין 40x להגדלה של 63x ) וצג תצוגה.</li>
		<li>בחר באפשרות Live Image (קיטועי זמן בתוכנות מסוימות) מתוכנת המיקרוסקופ בצג התצוגה. ודא שלתוכנת המיקרוסקופ במחשב יש פונקציונליות t (קיטועי זמן) או שהיא יכולה לצלם הקלטות וידאו.</li>
		<li>מקדו את מטרת המיקרוסקופ, תוך הבטחת ניגודיות מספקת וקצוות תאים ברורים. זה הכרחי עבור ניתוח התמונה לאחר גזירה. הזז את שלב המיקרוסקופ כדי לוודא שהתאים נראים בבירור על צג התצוגה והם תמונות חיות.</li>
		<li>בחר תא או תאים נפרדים מרובים בתוך נתיב ההדמיה/זרימה של תא הזרימה המותאם + צלחת פטרי (האזור/נתיב שנוצר על ידי התאמת האטם לתא הזרימה).</li>
	</ol></li>
	<li>גזירה והדמיה<ol><li>כדי לשמור על זרימה רציפה ואחידה, בחר קצבי עירוי ונסיגה דומים וודא זרימה למינרית של הנוזל, בדרך כלל בין 1 מ"ל / דקה ל -5 מ"ל / דקה. עבור משטרי זרימה למינרית נמוכה, ודא מספר Re &lt; 100 של ריינולד.</li>
		<li>לחץ על הפעל על משאבת הגזירה כדי להזריק ולמשוך את נוזל הגזירה (מדיה צמיגה מוכנה) בקצב רציף. ודא כי אין בועות במהלך עירוי נוזלים, כמו זה עלול לגרום לחץ חיצוני unaccount על התאים.</li>
		<li>התחל להקליט וידאו על ידי לחיצה על הקלט בתוכנת המיקרוסקופ לפני שנוזל הגזירה המוחדר יוצר מגע עם התא(ים) המעניינים מתחת למיקרוסקופ.</li>
		<li>המשיכו להקליט במשך 7 דקות, או למשך הזמן הרצוי של חשיפה ללחץ, או עד שהתאים המעניינים חותכים מתחתית המנה. לחץ על הפסק הקלטה בתוכנת המיקרוסקופ כאשר הריצה תושלם כרצונך.</li>
		<li>שמור את ההקלטה וחלץ כקבצי .tiff. רצוי, לחלץ תמונות ב 1 מסגרת לשנייה לניתוח facile.</li>
	</ol></li>
</ol>3. עיבוד נתונים
<ol><li>הליך מתאם תמונה דיגיטלי (ניתוח תמונה)<ol><li>אם ההקלטה מהמיקרוסקופ חולצה כקובץ וידאו, המירו אותה למסגרות תמונה (רצוי .tiff פורמט קובץ).</li>
		<li>ייבא את התמונות הנגזרות מהקלטת בדיקת הגזירה לתוכנת Davis 10.1.2 (תוכנת DIC) כדי לעקוב אחר התנועה של המבנים בעלי התבנית הטבעית של התא על-ידי איתור כל גוש פיקסל (תת-קבוצה) של תמונת הייחוס בתמונות החדשות המתאימות (תמונות מעוותות) (איור 2).</li>
		<li>למתאם ממוטב, השתמשו בגודל תת-ערכה של 31 x 31 פיקסלים, בגודל צעד (מרחק עיוות של כל תת-ערכה) של 20 פיקסלים ובאפשרות 'סכום המסלול הדיפרנציאלי', העוקבת אחר עיוות של תמונה חדשה ביחס לתמונה האחרונה. התוצאה של מתאם זה היא תרשים זמן-מתח (איור 3) שניתן לייצא כקובץ .csv לניתוח נוסף ב-MATLAB.</li>
		<li>מפה את אזור העניין עבור תא בודד שנבחר. בחר נקודות שרירותיות בתוך התא הממופה כדי לעקוב אחר דפורמציה. עבור צורה לא סדירה, כגון התא, השתמש במסיכת מצולע כדי למפות את הגיאומטריה של התא.</li>
		<li>לאחר המיפוי, בחר נקודות ספציפיות בתא (גרעין או ציטופלסמה) לניתוח על ידי לחיצה על הוסף מד מאמץ ושרטוט מדי מאמץ בודדים בנקודות בתוך הגבול התאי שהוגדר.</li>
		<li>לחץ על הפעל כדי להתחיל את עיבוד המאמץ ולקבל נתוני מאמץ לעומת זמן.</li>
		<li>לחץ פעמיים (או לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני) על התוויית זמן המתח שנוצרה ובחר ייצוא נתונים כגיליון אלקטרוני.</li>
	</ol></li>
</ol>4. אפיון תכונות מכניות
<ol><li>אפיון תכונות ויסקו-אלסטיות<ol><li>שמרו את קובץ .csv המכיל את נתוני זמן המאמץ מתוכנת DIC בתיקייה נפרדת לקריאה קלה על ידי MATLAB.</li>
		<li>הפעל את MATLAB ולחץ על כרטיסיית העורך כדי לפתוח דף עורך לכתיבת קוד שקורא את הגיליון האלקטרוני, תא אחר תא.</li>
		<li>שנו את נתיב MATLAB (נתיב התיקיה שניגש לקובץ העניין) כדי לגשת לתיקייה המכילה את הנתונים לניתוח, לדוגמה, משתמשים/שם משתמש/שולחן עבודה/נתונים.</li>
		<li>בדף עורך MATLAB, גשו לנתוני הגיליון האלקטרוני באמצעות הקוד המותאם אישית. לדוגמה: a1= xlsread('data','run1','A4:A183'), כאשר a1 מייצג את המזהה, xlsread היא הפונקציה MATLAB הקוראת את קובץ .csv (במקרה זה, כגיליון אלקטרוני), data הוא שם הקובץ, run1 הוא שם הגיליון ו- A4:A183 הוא טווח הנתונים המעניינים בתא A של נתוני הגיליון האלקטרוני שיש לנתח. לקבלת התאמה מלאה, לנתח x ו- y (זמן ומתח, בהתאמה). לדוגמה: a1=xlsread('data','run1','A4:A183'); b1=xlsread('data','run1','B4:B183'); A1 = X (זמן), ו- B1 = Y (מתח).</li>
		<li>ב-MATLAB, לחצו על ' יישומים' | Curve Fitter | משוואה מותאמת אישית. נקה את המשוואה המותאמת אישית המייצגת והזן את משוואת המודל הוויסקו-אלסטי [משוואה (1)], כאשר ε מייצג את משתנה x ו- t מייצג את המשתנה y. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65333/65333eq01.jpg" style="margin: auto;">(1) כאן, ε מייצג את המתח, σ מייצג את מתח הגזירה, η1 מייצג את הצמיגות, E מייצג את הגמישות, t מייצג את הזמן, ו-τ מייצג את זמן ההרפיה, המאפיין את הזמן המרבי הדרוש לתא לחזור לצורתו המקורית לאחר עיוות ראשוני. הוא מבוטא כ-τ = <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/65333/65333eq02.jpg" style="margin: auto;">, כאשר η2 הוא מונח הצמיגות המשנית עבור הדשבורד השני (איור 4).</li>
		<li>הקצה מחדש משתנים חדשים לפרמטרים הוויסקו-אלסטיים בממשק המשוואה המותאם אישית. (ε, η1, E, σ, t ו-τ = <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/65333/65333eq02.jpg" style="margin: auto;">) ייצג (x, a, b, K, y ו- c), בהתאמה. כאן, x ו- y הם המשתנים הבלתי תלויים והתלויים, בהתאמה. ניתן לקבוע מתח גזירה (σ) באמצעות משוואה (2): <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/65333/65333eq03.jpg" style="margin: auto;">(2) כאן, μ מייצג את צמיגות תווך נוזל הגזירה, Q הוא קצב זרימת המשאבה, ו-w ו-h הם הרוחב והגובה של ערוץ הזרימה שמוצגים באיור 1C, בהתאמה.</li>
		<li>לחץ על בחר נתונים כדי לבחור את השעה (a1) ואת המתח (b1) עבור כל ערכת נתונים. </li>
		<li>ודא שהאפשרות התאמה אוטומטית מסומנת. פעולה זו מפעילה את ההתאמה באופן אוטומטי כאשר נתונים (x ו- y) נבחרים.</li>
		<li>בחר בשיטות ההתאמה כדי להדק את תנאי הגבול. לחץ על אפשרויות מתקדמות תחת הקטגוריה שיטות ובחר ריבועים לפחות לא ליניאריים. תחת חזק, בחר כבוי, ותחת אלגוריתם, בחר אזור אמון. השאר כל פרמטר אחר כפי שהוא.</li>
		<li>המשתנים החדשים לאחר ההתאמה (a, b ו-c) מייצגים את התכונות הוויסקו-אלסטיות, הצמיגות, האלסטיות וזמן ההרפיה (η1, E, EQUAT) של התא, בהתאמה (איור 5).</li>
		<li>חפש ערך R ריבועי גבוה של ההתאמה (R2 &gt; 80%) כדי להבטיח שפלט הנתונים יכול להיחשב כהתאמה אמיתית של המודל הוויסקו-אלסטי (איור 3)</li>
	</ol></li>
</ol>

שיפור אבחון סרטן ממוקד על ידי כימות מכניקה של תא בודד

<ol><li>Sethi, S., Ali, S., Philip, P. A., Sarkar, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+advances+in+molecular+biomarkers+for+cancer+diagnosis+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Clinical advances in molecular biomarkers for cancer diagnosis and therapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 14 (7), 14771-14784 (2013).</li>
<li>Runel, G., Lopez-Ramirez, N., Chlasta, J., Masse, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanical+properties+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Biomechanical properties of cancer cells.</a> Cells. 10 (4), 887(2021).</li>
<li>Hu, J., Zhou, Y., Obayemi, J. D., Du, J., Soboyejo, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+investigation+of+the+viscoelastic+properties+and+the+actin+cytoskeletal+structure+of+triple+negative+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Mechanical+Behavior+of+Biomedical+Materials%22%5BJournal%5D)">An investigation of the viscoelastic properties and the actin cytoskeletal structure of triple negative breast cancer cells.</a> Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials. 86, 1-13 (2018).</li>
<li>Onwudiwe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+creep+properties+and+the+cytoskeletal+structures+of+non-tumorigenic+breast+cells+and+triple-negative+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Investigation of creep properties and the cytoskeletal structures of non-tumorigenic breast cells and triple-negative breast cancer cells.</a> Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 110 (5), 1004-1020 (2022).</li>
<li>Ani, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+shear+assay+study+of+single+normal%2Fbreast+cancer+cell+deformation+and+detachment+from+poly-di-methyl-siloxane+%28PDMS%29+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Mechanical+Behavior+of+Biomedical+Materials%22%5BJournal%5D)">A shear assay study of single normal/breast cancer cell deformation and detachment from poly-di-methyl-siloxane (PDMS) surfaces.</a> Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials. 91, 76-90 (2019).</li>
<li>Suresh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanics+and+biophysics+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Biomechanics and biophysics of cancer cells.</a> Acta Biomaterialia. 3 (4), 413-438 (2007).</li>
<li>Cao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+the+viscoelasticity+of+human+osteosarcoma+cells+using+a+shear+assay+method%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Research%22%5BJournal%5D)">Investigation of the viscoelasticity of human osteosarcoma cells using a shear assay method.</a> Journal of Materials Research. 21 (8), 1922-1930 (2006).</li>
<li>Cao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+measurement+of+human+osteosarcoma+cell+elastic+modulus+using+shear+assay+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Science.+Materials+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">On the measurement of human osteosarcoma cell elastic modulus using shear assay experiments.</a> Journal of Materials Science. Materials in Medicine. 18 (1), 103-109 (2007).</li>
<li>Onwudiwe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+cytoskeletal+structure+and+the+statistical+variations+of+the+mechanical+properties+of+non-tumorigenic+breast+and+triple-negative+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Mechanical+Behavior+of+Biomedical+Materials%22%5BJournal%5D)">Actin cytoskeletal structure and the statistical variations of the mechanical properties of non-tumorigenic breast and triple-negative breast cancer cells.</a> Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials. 119, 104505(2021).</li>
<li>Kirmizis, D., Logothetidis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atomic+force+microscopy+probing+in+the+measurement+of+cell+mechanics%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Atomic force microscopy probing in the measurement of cell mechanics.</a> International Journal of Nanomedicine. 5, 137-145 (2010).</li>
<li>Haase, K., Pelling, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+cell+mechanics+with+atomic+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society.+Interface%22%5BJournal%5D)">Investigating cell mechanics with atomic force microscopy.</a> Journal of the Royal Society. Interface. 12 (104), 20140970(2015).</li>
<li>Zhang, H., Liu, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+tweezers+for+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society.+Interface%22%5BJournal%5D)">Optical tweezers for single cells.</a> Journal of the Royal Society. Interface. 5 (24), 671-690 (2008).</li>
<li>Peterman, E. J. G., Gittes, F., Schmidt, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+heating+in+optical+traps%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Laser-induced heating in optical traps.</a> Biophysical Journal. 84, 1308-1316 (2003).</li>
<li>Hochmuth, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropipette+aspiration+of+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Micropipette aspiration of living cells.</a> Journal of Biomechanics. 33 (1), 15-22 (2000).</li>
<li>Evans, E., Yeung, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apparent+viscosity+and+corticcal+tension+of+blood+granulocytes+determined+by+micropipet+aspiration%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Apparent viscosity and corticcal tension of blood granulocytes determined by micropipet aspiration.</a> Biophysical Journal. 56 (1), 151-160 (1989).</li>
<li>Van Vliet, K. J., Bao, G., Suresh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biomechanics+toolbox%3A+experimental+approaches+for+living+cells+and+biomolecules%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Materialia%22%5BJournal%5D)">The biomechanics toolbox: experimental approaches for living cells and biomolecules.</a> Acta Materialia. 51 (19), 5881-5905 (2003).</li>
<li>Moeendarbary, E., Harris, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+mechanics%3A+principles%2C+practices%2C+and+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdisciplinary+Reviews.+Systems+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cell mechanics: principles, practices, and prospects.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews. Systems Biology and Medicine. 6 (5), 371-388 (2014).</li>
<li>Choi, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrodynamic+shear+stress+promotes+epithelial-mesenchymal+transition+by+downregulating+ERK+and+GSK3beta+activities%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Hydrodynamic shear stress promotes epithelial-mesenchymal transition by downregulating ERK and GSK3beta activities.</a> Breast Cancer Research. 21 (1), 6(2019).</li>
<li>Northcott, J. M., Dean, I. S., Mouw, J. K., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeling+stress%3A+The+mechanics+of+cancer+progression+and+aggression%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Feeling stress: The mechanics of cancer progression and aggression.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 6, 17(2018).</li>
<li>Onwudiwe, K., Najera, J., Siri, S., Datta, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+tumor+mechanical+stresses+promote+cancer+immune+escape%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Do tumor mechanical stresses promote cancer immune escape.</a> Cells. 11 (23), 3840(2022).</li>
<li>Heldin, C. H., Rubin, K., Pietras, K., Ostman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+interstitial+fluid+pressure+-+an+obstacle+in+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Cancer%22%5BJournal%5D)">High interstitial fluid pressure - an obstacle in cancer therapy.</a> Nature Reviews. Cancer. 4 (10), 806-813 (2004).</li>
<li>Krog, B. L., Henry, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanics+of+the+circulating+tumor+cell+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Biomechanics of the circulating tumor cell microenvironment.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 1092, 209-233 (2018).</li>
<li>Moose, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+cells+resist+mechanical+destruction+in+circulation+via+RhoA%2Factomyosin-dependent+mechano-adaptation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Cancer cells resist mechanical destruction in circulation via RhoA/actomyosin-dependent mechano-adaptation.</a> Cell Reports. 30 (11), 3864-3874 (2020).</li>
<li>Mao, B. H., Nguyen Thi, K. M., Tang, M. J., Kamm, R. D., Tu, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interface+stiffness+and+topographic+feature+dictate+interfacial+invasiveness+of+cancer+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">The interface stiffness and topographic feature dictate interfacial invasiveness of cancer spheroids.</a> Biofabrication. 15 (1), (2023).</li>
<li>Kashani, A. S., Packirisamy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+cells+optimize+elasticity+for+efficient+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Royal+Society+Open+Science%22%5BJournal%5D)">Cancer cells optimize elasticity for efficient migration.</a> Royal Society Open Science. 7 (10), 200747(2020).</li>
<li>Riehl, B. D., Kim, E., Bouzid, T., Lim, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microenvironmental+cues+and+mechanical+loading+milieus+in+breast+cancer+cell+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">The role of microenvironmental cues and mechanical loading milieus in breast cancer cell progression and metastasis.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, 608526(2021).</li>
</ol>

למחברים אין אינטרסים כלכליים מתחרים לחשוף.

שיטת בדיקת הגזירה, הכוללת הקמת סביבה פסאודו-מכנוביולוגית המדמה את האינטראקציה של תאים עם המיקרו-סביבה המכנית הסובבת אותם ואת תגובותיהם לעקות מכניות, יצרה קטלוג של תכונות מכניות תאיות, שדפוסיהן מראים אטיפיה פיזית שמורה בין שורות תאים סרטניים 3,4,5,7,8 . שיטה זו משלבת הבנה של מכניקת זורמים בסיסית ופיזיקה כדי לאפיין תכונות מכניות ייחודיות של תאים ומספקת חומר פוטנ...

חקר ההבדלים הביופיזיים בין תאים סרטניים ולא-סרטניים מאפשר הזדמנויות אבחוניות וטיפוליות חדשות1. הבנת האופן שבו הבדלים בביומכניקה/מכנוביולוגיה תורמים להתקדמות הגידול ולעמידות לטיפול תחשוף דרכים חדשות לטיפול ממוקד ואבחון מוקדם2.
בעוד שידוע כי תכונות מכניות של תאים סרטניים שונות מתאים נורמליים (למשל, צמיגות קרום הפלזמה והמעטפת הגרעינית)3,4,5, חסרות שיטות חזקות וניתנות לשחזור למדידת תכונות אלה בתאים חיים6. שיטת בדיקת הגזירה משמשת לכימות התכונות המכניות של תאים על ידי חשיפת תאים בודדים ללחץ גזירה נוזלי וניתוח תגובותיהם האישיות והתנגדותם ללחץ המופעל 3,4,5,7,8,9. למרות שמספר שיטות וטכניקות שימשו לאפיון התכונות המכניות של תאים בודדים, אלה נוטות להשפיע על תכונות חומר התא על ידי i) ניקוב/פגיעה בקרום התא עקב עומק הכניסה, גיאומטריות קצה מורכבות, או הקשחת מצע הקשורים למיקרוסקופ כוח אטומי (AFM)10,11, ii) גרימת נזק לאור תאי במהלך לכידה אופטית 12, 13, או iii) גרימת מצבי לחץ מורכבים הקשורים לשאיפת מיקרופיפטה14,15. השפעות חיצוניות אלה קשורות לאי-ודאות משמעותית בדיוק מדידות צמיגות התא 6,16,17.
כדי להתמודד עם מגבלות אלה, שיטת בדיקת הגזירה המתוארת כאן מספקת גישה מאוד נשלטת ופשוטה להדמיית זרימה פיזיולוגית בגוף מבלי להשפיע על תכונות החומר התאי בתהליך. לחצים לגזירת נוזלים בבדיקה זו מייצגים לחצים מכניים שחווים תאים בגוף או על ידי נוזלים בתוך אינטרסטיציום הגידול או בדם במהלך מחזורהדם 18,19,20. יתר על כן, לחצים נוזליים אלה מקדמים התנהגויות ממאירות שונות בתאים סרטניים, כולל התקדמות, נדידה, גרורות ומוות תאי 19,21,22,23 המשתנים בין תאים גידוליים ולא גידוליים. יתר על כן, התכונות המכניות המשתנות של תאים סרטניים (כלומר, הם לעתים קרובות "רכים" יותר מתאים נורמליים הנמצאים באותו איבר) מאפשרות להם להתמיד במיקרו-סביבות גידול עוינות, לפלוש לרקמות נורמליות הסובבות אותם, ולשלוח גרורות לאתרים מרוחקים24,25,26. על ידי יצירת סביבה פסאודו-ביולוגית שבה תאים חווים רמות פיזיולוגיות של עקה גזירה נוזלית, מושג תהליך שהוא רלוונטי פיזיולוגית ולא הרסני לתא. התגובות התאיות ללחצים אלה של גזירת נוזלים מאפשרות לנו לאפיין תכונות מכניות של תאים.
מאמר זה מספק פרוטוקול בדיקת גזירה למחקר מקיף של התכונות המכניות וההתנהגות של תאים סרטניים ולא סרטניים תחת לחץ גזירה מופעל. תאים מגיבים לכוחות חיצוניים בצורה אלסטית וצמיגית ולכן ניתן להפוך אותם לחומר ויסקו-אלסטי3. טכניקה זו מסווגת ל: (i) תרבית תאים של תאים בודדים מפוזרים, (ii) יישום מבוקר של לחץ גזירה נוזלי, (iii) הדמיה באתרו ותצפית על התנהגות התא (כולל עמידות ללחץ ועיוות), (iv) ניתוח מאמץ של תאים כדי לקבוע את מידת העיוות, ו (v) אפיון התכונות הוויסקו-אלסטיות של תאים בודדים. על ידי חקירת התכונות וההתנהגויות המכניות האלה, ניתן לזקק מכנוביולוגיה תאית מורכבת לנתונים הניתנים לכימות. פרוטוקול המתווה שיטה זו מאפשר קיטלוג והשוואה בין סוגי תאים ממאירים ולא ממאירים שונים. לכימות הבדלים אלה יש פוטנציאל לבסס סמנים ביולוגיים אבחוניים וטיפוליים.

<table><tbody><tr><td><תרבית תאים חזקה></חזקה></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>.25% טריפסין, 2.21 מ"מ EDTA, 1x[-] נתרן ביקרבונט</td><td>קורנינג</td><td>25-053-ci</td><td>לניתוק תאים מהמצע בתרבית תאים</td></tr><tr><td>15 מ"ל צינורות צנטריפוגה</td><td>פלקון של קורנינג</td><td>05-527-90</td><td></td></tr><tr><td>35 מ"מ צלחות פטרי</td><td>קורנינג</td><td>430165</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות צנטריפוגה</td><td>Falcon by Corning</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>כל</td><td></td><td>לתרבית תאים סטרילית</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modification of Eagle's Medium (DMEM) 1x</td><td>Corning</td><td>10-013-cv</td><td>או כל מדיה אחרת לתרבית תאים. DMEM שימש לתרבית תאי U87</td></tr><tr><td>כפפות</td><td>כל</td><td></td><td>לתרבית תאים סטרילית</td></tr><tr><td>Heracell Vios 160i CO2 Incubator</td><td>Thermo Scientific</td><td>51033770</td><td>לדגירה במהלך תרבית תאים</td></tr><tr><td>מכסה המנוע</td><td>כל</td><td></td><td>לתרבית תאים סטרילית</td></tr><tr><td>Micropipette</td><td>כל</td><td></td><td>לתרבית תאים סטרילית</td></tr><tr><td>קצות מיקרופיפטה</td><td>כל</td><td></td><td>לתרבית תאים סטרילית</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>Leica / כל</td><td></td><td>לתרבית תאים סטרילית</td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח ללא סידן ומגנזיום PBS, 1x</td><td>קורנינג</td><td>21-040-CM</td><td></td></tr><tr><td>Pipetman</td><td>כל</td><td></td><td>לתרבית תאים סטרילית</td></tr><tr><td>טיפים פיפטה</td><td>כל</td><td></td><td>לתרבית תאים סטרילית</td></tr><tr><td>דיוק GP 10 חממה נוזלית</td><td>Thermo Scientific</td><td>TSGP02</td><td></td></tr><tr><td>T25 בקבוק</td><td>קורנינג</td><td>430639</td><td></td></tr><tr><td>T75 בקבוק</td><td>קורנינג</td><td>430641U</td><td></td></tr><tr><td><חזק>בדיקת גזירה</חזקה></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>100 מ"ל</td><td>כל</td><td></td><td>ליצירת DMEM + מתיל תאית מדיה גזירה צמיגה</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>קורנינג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תא זרימה + אטם גומי</td><td>Glycotech</td><td>31-001</td><td>ערכת תא זרימה מעגלית (עבור צלחות תרבית רקמות 35 מ"מ)</td></tr> <tr><td>ריאומטר היברידי</td><td>HR-2 Discovery ריאומטר</td><td></td> היברידי <td>לקביעת צמיגות נוזל גזירה</td></tr><tr><td>מוט ערבוב מגנטי</td><td>כל</td><td></td><td>ליצירת DMEM + מתיל צלולוז צמיגה</td></tr><tr><td>צלחת ערבוב מגנטית</td><td>כל</td><td></td><td>ליצירת DMEM + מתיל צלולוז מדיית גזירה צמיגה</td></tr><tr><td>מתיל תאית</td><td>כל</td><td></td><td>כדי להגביר את הצמיגות של DMEM במדיה זרימה</td></tr><tr><td>משאבת מזרק</td><td>KD Scientific Geminin 88 plus</td><td>788088</td><td>לתכנות עירוי נוזלים ונסיגה</td></tr><tr><td>מזרקים, צינורות ומחברים</td><td></td><td></td><td>להגדרת מכשירי גזירה</td></tr> <tr><td><חזק>תוכנה</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ABAQUS תוכנה</td><td>Simulia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Digitial Image Correlation תוכנה</td><td>LaVision, גרמניה</td><td>DAVIS 10.1.2</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת הדמיה</td><td>Leica / כל תוכנת</td><td></td><td></td>מיקרוסקופ</tr><tr><td>MATLAB</td><td></td><td>MATLAB MATLAB_R2020B</td><td></td></tr></tbody></table>

פרוטוקול בדיקת גזירה לקביעת תכונות חומר חד-תאי

Shear Assay Protocol for the Determination of Single-Cell Material Properties

ביומכניקה לא סדירה היא סימן ההיכר של ביולוגיה של סרטן הנתונה למחקר מקיף. התכונות המכניות של תא דומות לאלה של חומר. עמידותו של התא בפני לחץ ומתח, זמן ההרפיה שלו וגמישותו הם כולם תכונות שניתן להפיק ולהשוות לסוגים אחרים של תאים. כימות התכונות המכניות של תאים סרטניים (ממאירים) לעומת תאים נורמליים (לא ממאירים) מאפשר לחוקרים להמשיך ולחשוף את היסודות הביופיזיקליים של מחלה זו. בעוד התכונות המכניות של תאים סרטניים ידועות כשונות באופן עקבי מהתכונות המכניות של תאים נורמליים, הליך ניסיוני סטנדרטי כדי להסיק תכונות אלה מתאים בתרבית לוקה בחסר. 
מאמר זה מתאר הליך לכימות התכונות המכניות של תאים בודדים במבחנה באמצעות בדיקת גזירה נוזלית. העיקרון מאחורי בדיקה זו כרוך בהפעלת לחץ גזירה נוזלי על תא בודד וניטור אופטי של העיוות התאי שנוצר לאורך זמן. תכונות מכניות של תאים מאופיינות לאחר מכן באמצעות ניתוח מתאם תמונה דיגיטלית (DIC) והתאמת מודל ויסקו-אלסטי מתאים לנתונים הניסיוניים המופקים מניתוח DIC. בסך הכל, הפרוטוקול המתואר כאן נועד לספק שיטה יעילה וממוקדת יותר לאבחון של סוגי סרטן קשים לטיפול.

פרוטוקול בדיקת הגזירה יחד עם ניתוח דפורמציה באמצעות DIC ומודל ויסקו-אלסטי מצליח לכמת את התכונות המכניות של תא בודד במבחנה. שיטה זו נבדקה על קווי תאים אנושיים ומורין, כולל תאי שד אנושיים רגילים (MCF-10A)3,4,9, תאי סרטן שד טריפל נגטיב גרורתיים פחות (MDA-MB-468)3, תאי סרטן שד טריפל נגטיב (MDA-MB-231)3, תאי אוסטאוסרקומה אנושיים7,8, ולאחרונה תאי גליובלסטומה (איור</stron...

פרוטוקול זה מתאר את כימות התכונות המכניות של קווי תאים סרטניים ולא סרטניים במבחנה. הבדלים שמורים במכניקה של תאים סרטניים ונורמליים יכולים לשמש כסמן ביולוגי שעשוי להיות בעל השלכות על הפרוגנוזה והאבחנה.

Irregular biomechanics are a hallmark of cancer biology subject to extensive study. The mechanical properties of a cell are similar to those of a ...

סימני ההיכר הפיזיים של סרטן הם נושאים חדשים ומרגשים יחסית בחקר הסרטן. המחקר שלנו מבקש לאפיין באופן ספציפי את התכונות המכניות של תאים סרטניים ולא-סרטניים כדי להבין טוב יותר את המנגנונים הפיזיים שבאמצעותם תאים סרטניים שורדים כוחות גזירה בגוף ופולשים למערכת החיסון. ההתפתחות האחרונה בתקופת המחקר שלי היא השימוש בהתקנים מיקרופלואידים ובטכניקות בעלות תפוקה גבוהה כדי לחקור בקנה מידה גדול יותר, עיוות תאי ואת התכונות הויסקו-אלסטיות של תאים, וגם בזיהוי סמנים ביולוגיים חדשים כגון ויסות חלבוני שלד ציטו-שלד וחלבוני מטריצה חוץ-תאיים לאבחון מוקדם של סרטן.האתגרים הניסיוניים הנוכחיים המעורבים בתחום זה הם המורכבות של מיקרו-סביבת הגידול, קנה מידה של תפוקה, תרגום קליני, סטנדרטיזציה ושחזור, ושילוב של נתונים רב-מודאליים. לכן, חלק מהממצאים המשמעותיים שביססתי בתחום זה ממחקרי הקודמים ומהמחקר הנוכחי שלי הוא שניתן להבדיל בין תאים סרטניים לתאים נורמליים בהתבסס על תגובותיהם לגורמי עקה מכניים. והמידה שבה התנגדות ללחצים מכניים תלויה בשלמות המבנית, המוכתבת במידה סבירה על ידי נוכחותם של חלבונים ציטו-שלדיים כמו אקטין נימה וחלבונים מבניים אחרים בתוך התא.הפרוטוקול שלנו מציע גישה פשוטה, חוזרת ולא הרסנית לאפיון תאים בתרבית באופן מכני. זאת בניגוד לטכניקות אחרות כמו AFM ופינצטה אופטית, הדורשות רמה מסוימת של מומחיות טכנית על מנת לבצע ניסוי בתפוקה נמוכה יחסית. במסגרת השימוש בטכניקת חומצת הגזירה, תקדם מאוד את האפיון המכני של התא הבודד, ותסייע גם בתחומי חתך רבים ושונים כגון אבחון מחלות נדירות, אבחון וטיפול מותאמים אישית, וניטור אינטראקציות בין תרופתיות חד-תאיות.

shear-assay-protocol-for-determination-single-cell-material

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

תא גזירה היא פיתחה עבור מדידות פיזור ניטרונים זווית קטנה במישור שיפוע מהירות-המהירות של גזירה ומשמש לאפיון נוזלים מורכבים. מדידות נפתרו מרחבית בכיוון שיפוע המהירות אפשריות לחקר חומרי גזירת פסים. יישומים כוללים חקירות של תפוצות colloidal, פתרונות פולימר, ומבנים עצמי התאספו.

מדידת חומר מיקרו תחת זרם באמצעות 1-2 מטוס זרימה קטן זווית ניוטרון פיזור

assay הידבקות זרימה זו מספק מודל השפעה פשוט, גבוה של אינטראקציות תא אפיתל T. משאבת מזרק משמש להפקת מאמץ הגזירה, וכן במיקרוסקופ confocal לוכדת תמונות כימות. מטרת המחקרים אלה היא לכמת הידבקות תא T ביעילות באמצעות תנאי זרימה.

Assay הדבקה תחת מאמץ גזירה לחקר T לימפוציטים-הדבקה אינטראקציות מולקולה

כאן מוצג זרימת עבודה עבור ניתוח ביטוי תרבות, גנים של תאי אנדותל תחת גזירה נוזלים. כלול הוא סידור הפיזי בו זמנית דיור וניטור צ'יימברס מרובים זרימה בסביבה מבוקרת, את השימוש RNA אקסוגני עזר עבור ה-PCR כמותי.

ניתוח ביטוי גנטי של תאי אנדותל נחשף להטיית מתח באמצעות מרובות במקביל-plate זרימה צ'יימברס

כאן, אנו מתארים את השימוש תפוקה גבוהה יותר microfluidic מגיב ביולוגי בשילוב עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי לניתוח של גזירה השפעות על biofilms Pseudomonas aeruginosa המבטאים חלבונים ניאון ירוק, כולל כלי להגדיר, הקביעה של כיסוי biofilm, שיעור הצמיחה ומאפיינים מורפולוגי.

חיים תא ניתוח של גזירה על Pseudomonas aeruginosa באמצעות מערכת אוטומטית Microfluidic תפוקה גבוהה

פרוטוקול זה מתאר את הדור של מטופלים שמקורם בחולים, וניתוח במורד הזרם כולל כימות של התפשטות, בדיקות ציטורעילות, הזרמת cy, כתמים והדמיה מיקוד, על מנת להעריך את התרופה פוטנציאל המועמדים כtherapeutics אנטינאופלסטית. פרוטוקול זה תומך ברפואה מדויקת עם זיהוי תרופות ספציפיות לכל מטופל ולשלב המחלה.

החולה הפיזיולוגי הנגזרות 3D Spheroids עבור הקרנת תרופות אנטי-נאופלסטית כדי למקד את תאי גזע הסרטן

אנו מתארים שיטה בפתרון כדי להחיל להטות אחיד כדי קולטני משטח טסיות באמצעות קונוס-צלחת ויסבנסה. ניתן להשתמש בשיטה זו גם באופן כללי יותר כדי להחיל הטיה על סוגי תאים אחרים ושברי תאים, ואין צורך לייעד זוג מסוים של ליגולי-קולטן.

מדים להטות שיטת של טסיות האדם וקולטני פני שטח התא דרך קונוס-וזיקוק הלוח

מוצגת כאן שיטה לפנוטיפ מכני של תאים בודדים באמצעות פלטפורמה מיקרופלואידית מבוססת אלקטרוניקה הנקראת חישת נקבוביות מכאנו-צומת (mechano-NPS). פלטפורמה זו שומרת על תפוקה מתונה של 1-10 תאים לשנייה תוך מדידת התכונות הביופיזיות האלסטיות והצמיגיות של התאים.

חישת נקבוביות Mechano-node: פלטפורמה מהירה ונטולת תוויות למדידות ויסקואלסיות של תאים בודדים מרובי פרמטרים

מוצגת כאן טכניקה מבוססת ציטומטריית זרימה המאפשרת למדוד בו זמנית את מספר חלוקות התא, פנוטיפ תאי פני השטח וקרבה תאית. ניתן לבדוק תכונות אלה באופן סטטיסטי באמצעות מסגרת מבוססת תמורות.

הערכה סימולטנית של קרבה, מספר חלוקה ופנוטיפ באמצעות ציטומטריית זרימה עבור תאי גזע המטופויטיים ותאי אב

אנו מתארים פרוטוקול לבידוד ותרבית תאי אנדותל של ורידים ספניים אנושיים (hSVECs). אנו מספקים גם שיטות מפורטות לייצור לחץ גזירה ומתיחה כדי לחקור לחץ מכני ב- hSVECs.

בידוד תאי אנדותל של וריד ספנוס אנושי וחשיפה לרמות מבוקרות של לחץ גזירה ומתיחה

שיטה זו מודדת את נטייתו של התא לקרוע דופלקסים משותקים של DNA המציגים ליגנד כדי לדווח על כוחות משיכה תאיים יחסיים. אוליגואים פלואורסצנטיים קרועים מועברים לתא ומנותחים על ידי ציטומטריית זרימה, ומתעדים את ההיסטוריה המכנית של התא. זה מאפשר מדידה בתפוקה גבוהה של יצירת כוח סלולרי בהקשר של מכנינוטיפ תאי.

מדידת זרימה-ציטומטריה בתפוקה גבוהה של מכאנוטיפ תאי המבוססת על קרע ואספקה של בדיקות מתח DNA לתאים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשגת תליות חד-תאיות איכותיות מקרניות עכבר שלמות באמצעות עיכול רציף עם קולגנאז A וטריפסין. שיטה זו מניבה תאים בודדים ברי קיימא עם שלמות RNA גבוהה, מה שהופך אותם לתואמים ליישומים בהמשך כמו ריצוף RNA חד-תאי וציטומטרי זרימהy.

פרוטוקול לאיסוף תלייה חד-תאית מקרנית עכברים

למד איך לכמת תכונות מכניות של תאים סרטניים ותקינים באמצעות מכשירים מיקרופלואידיים וטכניקות גזירה. שיטה זו מאפשרת זיהוי ביומרקרים חדשים לאבחון מוקדם של סרטן.

פרוטוקול בדיקת גזירה לקביעת תכונות חומר חד-תאי

גלה סרטונים נוספים