חזיר נורמתרמי מבודד כבד פרפוזיה

היקף המחקר שלנו הוא לשפר את השימור של שתלי כבד בסיכון גבוה על ידי הגברת ההבנה שלנו לגבי זלוף מכונה נורמותרמית, או NMP, המאפשר שיפוץ השתל, הערכה לפני ההשתלה, ומספק פלטפורמה לטיפול רגנרטיבי. ניסויים קליניים אחרונים מצביעים על כך שזלוף מכונה נורמותרמי מפחית את הפגיעה בכבד, בעוד שהערכת השתל יכולה להגדיל את שיעורי ניצול האיברים. עם זאת, מעט ידוע על הביולוגיה של תאי הכבד במהלך NMP.

מודלים של בעלי חיים היו מרכזיים באבולוציה של השתלת כבד. ובמעבדה שלנו, הקמנו מודל אימות של זלוף כבד מבודד חזיר, שניתן ליישם כדי לחקור NMP כאסטרטגיית שימור, כמו גם לחקות השתלה. היתרון העיקרי של המודל שלנו הוא ערך התרגום הגבוה בהשוואה לדגמי מכרסמים.

בנוסף, ההגדרה שלנו מאפשרת לחוקרים להתאים את כל ההגדרות הבודדות כדי לקבל שליטה מלאה על הזילוף. המחקר שלנו התמקד בהשפעת הרכב הפרפוזה ומידת הפגיעה על התגובה החיסונית המולדת של שתלי כבד במהלך זלוף מכונה נורמותרמית. בעתיד, אנו רוצים לחקור את NMP כפלטפורמה לטיפול רגנרטיבי, למשל, באמצעות מתן גורמים פרקריניים של תאי גזע.

התחל בהחדרת קטטר בגודל 22 לווריד האוזן של חזיר מורדם. חבר את הקטטר לשסתום תלת-כיווני, וגרם להרדמה על ידי התחלת טפטוף תוך ורידי של פלזמה-לייט במהירות של 40 מיליליטר לשעה. בצע חתך באורך שבעה סנטימטרים מהצד השמאלי הצדדי של החלק העליון של עצם החזה לשריר הסטרנוקלידומסטואיד.

לאחר הנחת מפסק אורתוסטטי, אתר את הווריד החוץ-צווארי ונתח אותו חופשי על ידי קשירת ענפי צד. הניחו שתי קשירה 2-0 סביב וריד הצוואר החיצוני, וקשרו את קשירה הגולגולת. חותכים את זנב הווריד לקשירה הקשורה ומכניסים קטטר ורידי צרפתי 12.

לאחר חשיפה וחזרה על הקשירה בעורק הצוואר, הכנס בזנב את קו העורקים לעורק הצוואר, וקבע עם קשירה 2-0. בצע חתך לאורך קו האמצע מהקיפואיד לעצם הערווה. לחצות את הרצועה הטבורית ולהניח מפסק בטן.

משוך את המעיים שמאלה לרוחב ולגולגולת כדי לדמיין את אבי העורקים והווריד הנבוב. כעת נתחו את שלושת הסנטימטרים החופשיים של אבי העורקים הגולגולת להתפצלות הכסל, והניחו שתי קשירה סביב אבי העורקים. נתחו את הווריד הנבוב חופשי באותה רמה כמו אבי העורקים, והניחו סביבו שתי קשירה.

החל מהצד הצדדי של הרצועה הקיבה בתריסריון, נתח את צינור המרה המשותף בחינם והקיף אותו בלולאת כלי דם. הסר בלוטת לימפה גדולה בצד הצדדי של וריד הפורטל, והעביר ענף מהקיבה ללבלב כדי לשחרר את הווריד. הקף את וריד הפורטל עם לולאת כלי בצד הכבד וקשירה בצד הלבלב.

משוך את וריד הפורטל לרוחב, וודא שהוא לא סגור. אתר את עורק הכבד המשותף והקיף אותו בלולאת כלי דם. כל המבנים ההילריים מזוהים כעת.

החזר את הוושט לצד ימין, וחשוף את אבי העורקים החזי. לאחר מתן 500 יחידות לק"ג הפרין לחזיר, קושרים קשירה זנבית סביב אבי העורקים, ולאחר מכן מכניסים צינורית צרפתית 20 לאבי העורקים ומקבעים. לחקות DCD על ידי הידוק אבי העורקים החזי למשך כ-60 דקות כדי לגרום לאיסכמיה חמה.

לאחר שטיפת צינורית אבי העורקים בנוזל שימור קר כקרח, הניחו באופן מקומי קרח רפש על הבטן כדי לקרר אותה. לאחר השלמת השטיפה, הסר את צינורית אבי העורקים, קשר את הקשירה סביב וריד הפורטל, קנה וקבע את הצינורית בווריד הפורטל עם לולאת כלי. שטפו את הכבד בשני ליטר נוזל שימור קר כקרח דרך וריד הפורטל.

לאחר מכן, חשוף את הווריד הנבוב התת-כבדי על ידי נסיגת המעיים שמאלה. נתח את הווריד הנבוב החופשי מהרטרופריטונאום, וחלק אותו גולגולת מוורידי הכליה. כעת נתח את עורק הכבד המשותף עד לעורק הצליאק ואבי העורקים.

לאחר מכן, חלקו את עורק התריסריון וחתכו את עורק הצליאק עם טלאי של אבי העורקים. לאחר כריתת הווריד הנבוב העל-הפטי וכל שאר הקבצים המצורפים שנותרו, הסר את הכבד המשוחרר ושקול אותו. קנול את וריד השער של הכבד הנשקל בעזרת צינורית צרפתית 25, ואבטח אותו בעזרת קשירה.

לאחר מכן, קנול את עורק הכבד עם צינורית מחוזקת צרפתית 14 וקיבע. קנולציה וקיבוע של הווריד הנבוב התת-כבדי. קנול את צינור המרה וקבע בעזרת חוט ארנק.

הסר את צינורית הפורטל ובדוק אם יש נזילות על ידי שטיפה חוזרת של וריד הפורטל עם 250 מיליליטר של מרחיב פלזמה קרה. הנח את כבד החזיר שנכרת בכלי הקיבול. לאחר מכן, חבר את הצינוריות לצינורות הזרימה והיציאה המתאימים באמצעות מחבר T.

התקן ברזים תלת כיווניים על מחבר ה- T וחבר אותם לקווי הלחץ. הניחו את צינורית צינור המרה במיכל מתחת לשמן מינרלי והתחילו את הזילוף. וריד הפורטל תורם לכ-75% מזרימת הדם הכוללת בכבד, בעוד שעורק הכבד תורם ל-25% מזרימת הכבד הכוללת.

נצפתה התנגדות יציבה לכלי הדם התוך-כבדיים, כאשר וריד הפורטל הראה התנגדות נמוכה יותר ביחס לעורק הכבד. זלוף יציב ועקבי הוביל לרמות קבועות של שחרור טרנסאמינאז אספרטט תוך שש עד 12 שעות. ה-pH של פרפוזה היה מווסת מעצמו ונשמר בטווחים נורמליים על ידי הכבד.

פרפוזאט לקטט נצפה מנוקה שעה מתחילת הזלוף, והפרשת המרה נשמרה במשך 24 שעות. מיקום לא נכון של הצינורית בווריד הנבוב השמאלי הוביל לפגיעה בזרימה החוצה, מה שגרם להתנגדות כפולה של וריד הפורטל, מה שהוביל לירידה בזרימת הדם בווריד הפורטלי ולעלייה מפצה בזרימת עורק הכבד. חסימת זרימה החוצה הייתה קשורה גם לדימום תוך כבדי ונמק הפטו-תאי, כפי שהודגם על ידי ריכוז מוגבר של אספרטט טרנסמינאז בפרפוזה.