Name: הדמיה של תאים חיים של Drosophila melanogaster מוח זחל כוכב שלישי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-23T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: חקור חלוקה אסימטרית בתאי גזע עצביים של Drosophila melanogaster באמצעות הדמיה ארוכת טווח של מוחות זחלים חיים. הפרוטוקול מדגים שימור איכות הדגימה לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי R35GM148160 (C. C.) ומענק הכשרה של המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) T32 GM007270 (R. C. S)

הדמיה צמחי מוח חיים מזחלי Drosophila melanogaster זחלי Instar שלישי

<ol><li>Delgado, M. K., Cabernard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+regulation+of+cell+size%2C+fate%2C+and+behavior+during+asymmetric+cell+division%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Mechanical regulation of cell size, fate, and behavior during asymmetric cell division.</a> Current Opinion in Cell Biology. 67, 9-16 (2020).</li>
<li>Sunchu, B., Cabernard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+and+mechanisms+of+asymmetric+cell+division%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Principles and mechanisms of asymmetric cell division.</a> Development. 147 (13), (2020).</li>
<li>Homem, C. C. F., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+neuroblasts%3A+A+model+for+stem+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Drosophila neuroblasts: A model for stem cell biology.</a> Development. 139 (23), 4297-4310 (2012).</li>
<li>Gallaud, E., Pham, T., Cabernard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+neuroblasts%3A+A+model+for+asymmetric+stem+cell+divisions%5BTitle%5D)+AND+%22Results+and+Problems+in+Cell+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster neuroblasts: A model for asymmetric stem cell divisions.</a> Results and Problems in Cell Differentiation. 61 (1489), 183-210 (2017).</li>
<li>Loyer, N., Januschke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Where+does+asymmetry+come+from%3F+Illustrating+principles+of+polarity+and+asymmetry+establishment+in+Drosophila+neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Where does asymmetry come from? Illustrating principles of polarity and asymmetry establishment in Drosophila neuroblasts.</a> Current Opinion in Cell Biology. 62, 70-77 (2020).</li>
<li>Pollington, H. Q., Seroka, A. Q., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+temporal+patterning+to+neuronal+connectivity+in+Drosophila+type+I+neuroblast+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cell+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">From temporal patterning to neuronal connectivity in Drosophila type I neuroblast lineages.</a> Seminars in Cell & Developmental Biology. 142, 4-12 (2023).</li>
<li>Oon, C. H., Prehoda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+recruitment+and+actin+dependent+cortical+flows+drive+the+neuroblast+polarity+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Asymmetric recruitment and actin dependent cortical flows drive the neuroblast polarity cycle.</a> eLife. 8, e45815(2019).</li>
<li>Ramat, A., Hannaford, M., Januschke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+miranda+localization+in+Drosophila+neuroblasts+involves+interaction+with+the+cognate+mRNA%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Maintenance of miranda localization in Drosophila neuroblasts involves interaction with the cognate mRNA.</a> Current Biology. 27 (14), 2101-2111 (2017).</li>
<li>Oon, C. H., Prehoda, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phases+of+cortical+actomyosin+dynamics+coupled+to+the+neuroblast+polarity+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Phases of cortical actomyosin dynamics coupled to the neuroblast polarity cycle.</a> eLife. 10, e66574(2021).</li>
<li>LaFoya, B., Prehoda, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin-dependent+membrane+polarization+reveals+the+mechanical+nature+of+the+neuroblast+polarity+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Actin-dependent membrane polarization reveals the mechanical nature of the neuroblast polarity cycle.</a> Cell Reports. 35 (7), 109146(2021).</li>
<li>Siller, K. H., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lis1%2Fdynactin+regulates+metaphase+spindle+orientation+in+Drosophila+neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Lis1/dynactin regulates metaphase spindle orientation in Drosophila neuroblasts.</a> Developmental Biology. 319 (1), 1-9 (2008).</li>
<li>Siller, K. H., Cabernard, C., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+NuMA-related+Mud+protein+binds+Pins+and+regulates+spindle+orientation+in+Drosophila+neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The NuMA-related Mud protein binds Pins and regulates spindle orientation in Drosophila neuroblasts.</a> Nature Cell Biology. 8 (6), 594-600 (2006).</li>
<li>Cabernard, C., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apical%2Fbasal+spindle+orientation+is+required+for+neuroblast+homeostasis+and+neuronal+differentiation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Apical/basal spindle orientation is required for neuroblast homeostasis and neuronal differentiation in Drosophila.</a> Developmental Cell. 17 (1), 134-141 (2009).</li>
<li>Cabernard, C., Prehoda, K. E., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spindle-independent+cleavage+furrow+positioning+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A spindle-independent cleavage furrow positioning pathway.</a> Nature. 467 (7311), 91-94 (2010).</li>
<li>Connell, M., Cabernard, C., Ricketson, D., Doe, C. Q., Prehoda, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+cortical+extension+shifts+cleavage+furrow+position+in+Drosophila+neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Asymmetric cortical extension shifts cleavage furrow position in Drosophila neuroblasts.</a> Molecular Biology of the Cell. 22 (22), 4220-4226 (2011).</li>
<li>Tsankova, A., Pham, T. T., Garcia, D. S., Otte, F., Cabernard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+polarity+regulates+biased+myosin+activity+and+dynamics+during+asymmetric+cell+division+via+Drosophila+rho+kinase+and+protein+kinase+N%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Cell polarity regulates biased myosin activity and dynamics during asymmetric cell division via Drosophila rho kinase and protein kinase N.</a> Developmental Cell. 42 (2), 143-155 (2017).</li>
<li>Montembault, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin+efflux+promotes+cell+elongation+to+coordinate+chromosome+segregation+with+cell+cleavage%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Myosin efflux promotes cell elongation to coordinate chromosome segregation with cell cleavage.</a> Nature Communications. 8 (1), 326(2017).</li>
<li>Roubinet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatio-temporally+separated+cortical+flows+and+spindle+geometry+establish+physical+asymmetry+in+fly+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Spatio-temporally separated cortical flows and spindle geometry establish physical asymmetry in fly neural stem cells.</a> Nature Communications. 8 (1), 1383(2017).</li>
<li>Januschke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Centrobin+controls+mother-daughter+centriole+asymmetry+in+Drosophila+neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Centrobin controls mother-daughter centriole asymmetry in Drosophila neuroblasts.</a> Nature Cell Biology. 15 (3), 241-248 (2013).</li>
<li>Januschke, J., Llamazares, S., Reina, J., Gonzalez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+neuroblasts+retain+the+daughter+centrosome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Drosophila neuroblasts retain the daughter centrosome.</a> Nature Communications. 2 (1), 243(2011).</li>
<li>Rebollo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionally+unequal+centrosomes+drive+spindle+orientation+in+asymmetrically+dividing+Drosophila+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Functionally unequal centrosomes drive spindle orientation in asymmetrically dividing Drosophila neural stem cells.</a> Developmental Cell. 12 (3), 467-474 (2007).</li>
<li>Januschke, J., Gonzalez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interphase+microtubule+aster+is+a+determinant+of+asymmetric+division+orientation+in+Drosophila+neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The interphase microtubule aster is a determinant of asymmetric division orientation in Drosophila neuroblasts.</a> The Journal of Cell Biology. 188 (5), 693-706 (2010).</li>
<li>Rusan, N. M., Peifer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+a+novel+centrosome+cycle+in+asymmetric+cell+division%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">A role for a novel centrosome cycle in asymmetric cell division.</a> The Journal of Cell Biology. 177 (1), 13-20 (2007).</li>
<li>Lerit, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interphase+centrosome+organization+by+the+PLP-Cnn+scaffold+is+required+for+centrosome+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Interphase centrosome organization by the PLP-Cnn scaffold is required for centrosome function.</a> Journal of Cell Biology. 210 (1), 79-97 (2015).</li>
<li>Gallaud, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+centriolar+localization+of+Polo+and+Centrobin+in+early+mitosis+primes+centrosome+asymmetry%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Dynamic centriolar localization of Polo and Centrobin in early mitosis primes centrosome asymmetry.</a> PLoS Biology. 18 (8), e3000762(2020).</li>
<li>Ramdas Nair, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microcephaly-associated+protein+Wdr62%2FCG7337+is+required+to+maintain+centrosome+asymmetry+in+Drosophila+neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">The microcephaly-associated protein Wdr62/CG7337 is required to maintain centrosome asymmetry in Drosophila neuroblasts.</a> Cell Reports. 14 (5), 1100-1113 (2016).</li>
<li>Singh, P., Nair, A. R., Cabernard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+centriolar+protein+Bld10%2FCep135+is+required+to+establish+centrosome+asymmetry+in+Drosophila+neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">The centriolar protein Bld10/Cep135 is required to establish centrosome asymmetry in Drosophila neuroblasts.</a> Current Biology. 24 (13), 1548-1555 (2014).</li>
<li>LaFoya, B., Prehoda, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consumption+of+a+polarized+membrane+reservoir+drives+asymmetric+membrane+expansion+during+the+unequal+divisions+of+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Consumption of a polarized membrane reservoir drives asymmetric membrane expansion during the unequal divisions of neural stem cells.</a> Developmental Cell. 1534 (23), 00159(2023).</li>
<li>Sunchu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+chromatin+retention+and+nuclear+envelopes+separate+chromosomes+in+fused+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Communications+Biology%22%5BJournal%5D)">Asymmetric chromatin retention and nuclear envelopes separate chromosomes in fused cells in vivo.</a> Communications Biology. 5 (1), 953(2022).</li>
<li>Oliveira, A. C., Rebelo, A. R., Homem, C. C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+animal+development%3A+How+hormones+and+metabolism+regulate+developmental+transitions+and+brain+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Integrating animal development: How hormones and metabolism regulate developmental transitions and brain formation.</a> Developmental Biology. 475, 256-264 (2021).</li>
<li>Britton, J. S., Edgar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+control+of+the+cell+cycle+in+Drosophila%3A+nutrition+activates+mitotic+and+endoreplicative+cells+by+distinct+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Environmental control of the cell cycle in Drosophila: nutrition activates mitotic and endoreplicative cells by distinct mechanisms.</a> Development. 125 (11), 2149-2158 (1998).</li>
<li>Lee, C. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Aurora-A+kinase+inhibits+neuroblast+self-renewal+by+regulating+aPKC%2FNumb+cortical+polarity+and+spindle+orientation%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Drosophila Aurora-A kinase inhibits neuroblast self-renewal by regulating aPKC/Numb cortical polarity and spindle orientation.</a> Genes & Development. 20 (24), 3464-3474 (2006).</li>
<li>Homem, C. C. F., Reichardt, I., Berger, C., Lendl, T., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+live+cell+imaging+and+automated+4D+analysis+of+Drosophila+neuroblast+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Long-term live cell imaging and automated 4D analysis of Drosophila neuroblast lineages.</a> PLoS ONE. 8 (11), e79588(2013).</li>
<li>Cabernard, C., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+neuroblast+lineages+within+intact+larval+brains+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Live imaging of neuroblast lineages within intact larval brains in Drosophila.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2013 (10), 970-977 (2013).</li>
<li>Karpova, N., Bobinnec, Y., Fouix, S., Huitorel, P., Debec, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jupiter%2C+a+new+Drosophila+protein+associated+with+microtubules%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motility+and+the+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Jupiter, a new Drosophila protein associated with microtubules.</a> Cell Motility and the Cytoskeleton. 63 (5), 301-312 (2006).</li>
<li>Loyer, N., Januschke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+last-born+daughter+cell+contributes+to+division+orientation+of+Drosophila+larval+neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">The last-born daughter cell contributes to division orientation of Drosophila larval neuroblasts.</a> Nature Communications. 9 (1), 3745(2018).</li>
<li>Bostock, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immobilization+technique+for+long-term+time-lapse+imaging+of+explanted+Drosophila+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">An immobilization technique for long-term time-lapse imaging of explanted Drosophila tissues.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 590094(2020).</li>
</ol>

למחברים אין גילויים כספיים להצהיר.

פרוטוקול זה מתווה גישה אחת לדימות של מוחות צמחים חיים מזחלי Drosophila melanogaster . הפרוטוקול המתואר כאן מאפשר לצפות במוחות של צמחים במשך 12-20 שעות בתנאי הניסוי המתאימים. יש לתת תשומת לב מיוחדת להכנת הדגימות ולתכנון הניסויים הרצויים. כאמור, אחד הגורמים הקריטיים ביותר הקובעים את איכות הרקמה המנותחת הוא בריאות הזחלים. כדי להשיג את האיכות הגבוהה ביותר האפשרית, יש לוודא כי הזחלים מוזנים היטב לפני האיסוף. זחלים לא בריאים מקורם לרוב בצפיפות. כדי להתמודד עם זה, יש להבטיח את צמצום הצפיפות, בין אם על ידי הגברת תדירות ...

חלוקת תאים אסימטרית (ACD) היא התהליך שבו רכיבים תת-תאיים כגון רנ"א, חלבונים ואברונים מחולקים באופן לא שווה בין תאי בת 1,2. תהליך זה נפוץ בתאי גזע, אשר עוברים ACD כדי ליצור תאי בת עם גורלות התפתחותיים שונים. דרוזופילה NBs מתחלקים באופן א-סימטרי כדי לייצר NB אחד, ששומר על הגבעול שלו, ותא אם גנגליון אחד (GMC). GMC עובר חלוקות נוספות כדי לייצר נוירונים מתמיינים או גליה3. NBs המתחלקים באופן א-סימטרי נמצאים בשפע במוחות המתפתחים של זחלי כוכב שלישי, אשר נצפים בקלות באמצעות מיקרוסקופיה. בשלב הזחל השלישי של הכוכב, ישנם בערך 100 NBs נוכחים בכל אונת מוח מרכזית 3,4,5,6.
חלוקת תאים אסימטרית היא תהליך דינמי ביותר. פרוטוקולי הדמיה של תאים חיים שימשו למדידה וכימות של הדינמיקה של קוטביות התא 7,8,9,10, כיוון ציר 11,12,13, הדינמיקה של קליפת המוח אקטומיוזין14,15,16,17,18, מיקרוטובול וביולוגיה צנטרוזומית 19,20,21,22,23,24,25,26,27, וממברנה 10,28 ודינמיקה של כרומטין 29. תיאורים איכותיים וכמותיים של ACD מסתמכים על שיטות ופרוטוקולים חזקים כדי לדמיין חלוקת NBs במוחות חיים שלמים. הפרוטוקול הבא מתאר שיטות להכנה, ניתוח ותמונה של מוחות זחלי כוכב שלישי להדמיית תאים חיים in vivo באמצעות שתי גישות הרכבה שונות. שיטות אלה מתאימות ביותר לחוקרים המתעניינים בדינמיקה מרחבית-זמנית של חלוקות תאי גזע, כמו גם חלוקות בתאי מוח אחרים, שכן הן מאפשרות תצפיות קצרות וארוכות טווח של אירועים תאיים. בנוסף, טכניקות אלה נגישות בקלות למצטרפים חדשים לתחום. אנו מדגימים את היעילות ויכולת ההסתגלות של גישה זו עם מוחות זחלים המבטאים מיקרוטובולים מתויגים פלואורסצנטית וחלבוני היתוך קליפת המוח. כמו כן נדון בשיטות ניתוח ובשיקולים ליישום במחקרים אחרים.

<table><tbody><tr><td>0.22 ומיקרו; m polyethersulfone (PES) ממברנה</td><td>Genesee</td><td>25-231</td><td>מסננים מונעי ואקום</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Genesee</td><td>20-248</td><td>אגר מגורען</td></tr><tr><td>מחשב אנליטי</td><td>Dell</td><td>NA</td><td>Intel Xeon Gold 5222 CPU עם שני מעבדי 3.80 GHz המריצים Windows 10 במערכת הפעלה 64 סיביות</td></tr><tr><td>Bovine Growth Serum</td><td>HyClone</td><td>SH30541.02</td><td></td></tr><tr><td>Chambered Imaging Slides</td><td>Ibidi</td><td>80826</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>Nikon</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>שקופית מתכת במכונה אישית</td><td>NA</td><td>NA</td><td>ראה Cabernard and Doe 2013 (Ref. 34) למפרטים</td></tr><tr><td>Dissection Dishes</td><td>Fisher Scientific</td><td>5024343</td><td>3-well פורצלן מיקרו ספוט צלחת</td></tr><tr><td>דיסקציה מלקחיים</td><td>World Precision Instruments</td><td>Dumont #5</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ דיסקציה</td><td>Leica</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>מספריים לדיסקציה</td><td>כלי מדע עדינים (FST)</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>כלוב איסוף עוברים</td><td>Genesee</td><td>59-100</td><td></td></tr><tr><td>Flypad עם גישה ל-CO2 להרדמת זבובים בוגרים</td><td>Genesee</td><td>59-172</td><td></td></tr><tr><td>קרום חדיר גז</td><td>YSI</td><td>98095</td> כיסוי זכוכית <td>ממברנה חדיר גז</td></tr><tr><td> שקופיות</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>72204-03</td><td># 1.5; 22 מ"מ x 40 מ"מ כיסויי זכוכית</td></tr><tr><td>Imaris</td><td>Oxford Instruments</td><td>NA</td><td>חלופות: פיג'י, Volocity, Aivia</td></tr><tr><td>Imaris ממיר קבצים</td><td>Oxford Instruments</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>שמרים מיידיים</td><td>Saf-Instant</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>מולסה</td><td>Genesee</td><td>62-117</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי</td><td>גריינר ביו-אחד</td><td>628161</td><td>60 מ"מ x 15 מ"מ צלחת פטרי</td></tr><tr><td>וזלין</td><td>וזלין</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>מדיום חרקים של שניידר עם L-גלוטמין ונוזל נתרן ביקרבונט</td><td>Millipore Sigma</td><td>S0146</td><td></td></tr><tr><td>SlideBook רכישת תוכנה</td><td>3i</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>יחידת סינון מונעת ואקום עם 0.22 ומיקרו; ומיקרו; m מסנן ממברנה PES</td><td>Genesee Scientific, GenClone</td><td>25-231</td><td></td></tr></tbody></table>

הדמיה של תאים חיים של drosophila melanogaster מוח זחל כוכב שלישי

Live-Cell Imaging of Drosophila melanogaster Third Instar Larval Brains

תאי גזע עצביים דרוזופילה (נוירובלסטים, NBs להלן) עוברים חלוקות אסימטריות, מחדשות את הנוירובלסט המתחדש מעצמו, תוך יצירת תא אם גנגליון מתמיין (GMC), שיעבור חלוקה אחת נוספת כדי ליצור שני נוירונים או גליה. מחקרים ב- NBs חשפו את המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס קוטביות התא, כיוון הציר, התחדשות עצמית של תאי גזע עצביים והתמיינות. חלוקות תאים אסימטריות אלה ניתנות לצפייה בקלות באמצעות הדמיה של תאים חיים, מה שהופך את NBs הזחלים למתאימים באופן אידיאלי לחקר הדינמיקה המרחבית-זמנית של חלוקת תאים אסימטרית ברקמה חיה. כאשר מנתחים אותם כראוי ומדמיינים אותם במדיום עם תוספי תזונה, NBs במוחות explant מתחלקים בצורה חזקה במשך 12-20 שעות. שיטות שתוארו קודם לכן הן קשות מבחינה טכנית ועשויות להיות מאתגרות לאלה החדשים בתחום. כאן, מתואר פרוטוקול להכנה, נתיחה, הרכבה והדמיה של צמחי מוח חיים של זחל שלישי באמצעות תוספי גוף שמנים. בעיות פוטנציאליות נדונות גם, ודוגמאות מסופקות כיצד טכניקה זו ניתן להשתמש.

דיסקציה והדמיה של NBs של אונת המוח המרכזית המבטאים סיכות::EGFP ודובדבן::יופיטר כדי להציג את הפרוטוקול הזה, הזחלים מבטאים דובדבן מונע כטב"ם::יופיטר13 ומתויגים אנדוגנית סיכות::EGFP16 (w; worGal4, UAS-cherry::jupiter/CyO; פינים::EGFP/TM6B, Tb) צולמו במשך 4 שעות באמצעות הפרוטוקול המתואר באמצעות שקופיות הדמיה מרובות בארות (איור 5C,D). נתונים נוספים נלקחו מזחלים המבטאים דובדבן מונע כטב"מים::יופיטר<sup class="xref"...

כאן, אנו דנים בתהליך עבודה להכנה, ניתוח, הרכבה ותמונה של מוחות צמחים חיים מזחלי Drosophila melanogaster Third instar כדי לצפות בדינמיקה התאית והתת-תאית בתנאים פיזיולוגיים.

הדמיה של תאים חיים של Drosophila melanogaster מוח זחל כוכב שלישי

Drosophila neural stem cells (neuroblasts, NBs hereafter) undergo asymmetric divisions, regenerating the self-renewing neuroblast, while also forming a ...

המחקר שלנו מתמקד בחקר ההשפעה של חלוקת תאים אסימטרית או ACD, על התרבות והתמיינות תאי גזע. אנו משתמשים בתאי גזע עצביים דרוזופילה או נוירובלסטים כמודל להבנת המנגנונים, התקנות וההשפעות של חלוקת תאים אסימטרית על התפתחות ויצירת תאי עצב. ההתפתחויות האחרונות בתחום הבינה המלאכותית עושות התקדמות משמעותית בכימות וניתוח תמונה, מה שקידם משמעותית את תחום הדמיה של תאי חיים.שמירה על איכות הדגימה של סרט לטווח ארוך היא אתגר ארוך שנים. בעוד שצפייה בדגימה במשך שמונה עד 10 שעות היא תובנה, אילוצים לוגיסטיים, כמו דרישות ההדמיה של הדגימה וכלי ההדמיה הזמינים, מקשים עליה. הפרוטוקול שלנו מטפל בכך על ידי הדגמת הדמיה לטווח ארוך מבלי להשפיע על איכות הדגימה.הטכניקה שלנו יכולה להיות מאומצת בקלות ומיושמת בשטח על ידי מצטרפים חדשים. עם קצת זמן ותרגול, אפשר להפיק סרטים לטווח קצר וארוך, שיש להם פוטנציאל להניב נתונים תובנה ומשמעותיים.

live-cell-imaging-drosophila-melanogaster-third-instar-larval

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

כאן אנו מתארים פרוטוקול לבחון את ההגירה של ותאי גלייה לתוך העין תסיסנית מתפתחות באמצעות ניתוח מיקרוסקופי לחיות יחד עם התאים GFP גליה מתויג.

הדמיה חיה של נדידת תאים גליה את הדיסק העין דמותי תסיסנית

Hemocytes תסיסנית לפזר מעל מכלול של העובר המתפתח. פרוטוקול זה מדגים כיצד הר התמונה באמצעות העברות אלה עוברים עם hemocytes שכותרתו fluorescently.

הדמיה חיה של תסיסנית melanogaster Hemocyte נדידות עובריים

הכנת פיתוח למבוגרים תסיסנית מוח רשתיות עבור הדמיה חיה

הזחלים תסיסנית melanogaster לספק מערכת מודל אידיאלי לחקור את המנגנונים של תחבורה axonal בתוך העצבים סגמנטלי הזחל. באמצעות הליך זה, 3 rd הזחלים instar נושאת מוטציות שונות ניתן להשוות את הזחלים סוג בר.

ויזואליזציה של עצבים המגזרי הזחל ב 3 Rd Instar תסיסנית הכנות הזחל

מקור: Hellerman, M. B., et al. Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye. J. Vis. Exp. (2015)הסרטון מדגים טכניקת הדמיה חיה לחקר דפוסי עיניים בגולם Drosophila melanogaster. סמנים מתויגים בחלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) מאפשרים הדמיה של ארגון התאים והתמיינות במהלך היווצרות מבנה העין המתפתח.

הדמיה חיה של עין הגולם של דרוזופילה באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית

מסמך זה מדגים את השימוש במיקרוסקופ confocal סריקה מהירה לתמונת התנהגות תא ישירות דרך הגולם. מאת עוזב את המקרה גלמי שלם, שיטה זו מאפשרת תצפית ומדידה של תהליכים בתא דינמיים בשלב של פיתוח דרוזופילה שקשה ללמוד באופן ישיר.

הדמיה באמצעות המקרה גלמי של<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

פרוטוקול זה מפרט שיטה יעילה המשמשת לביצוע הדמיה תא חי בהקשר של מוח זחל בשלמותה. גישות הדמיה תא חי הן לא יסולא בפז לחקר חלוקות תא גזע עצביים סימטריות כמו גם תהליכים עצביים והתפתחותיות אחרים, לחשוף באופן עקבי מנגנונים שהתעלמו בעבר.

הדמיה חיה של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; הזחל Neuroblasts

פרוטוקול זה מציג שיטה יעילה להדמיה של נוירואפיתל עין גולם חי של דרוזופילה. שיטה זו מפצה על תנועת רקמות וטופולוגיה לא אחידה, משפרת את ההדמיה של גבולות התא באמצעות שימוש בחלבוני צומת מרובים המתויגים ב-GFP, ומשתמשת במתקן הדמיה המורכב בקלות.

Live-הדמיה של דרוזופילה גלמי עין

המטרה של פרוטוקול זה היא ליצור שמחוץ דרוזופילה המוח זחל תרבות בצורה מיטבית כדי לפקח על היממה מולקולרית מקצבים עם הדמיה בצילום מואץ לטווח ארוך של זריחה. היישום של שיטה זו מבחני תרופתי גם נדון.

קרינה פלואורסצנטית תא בודד רזולוציה לחיות הדמיה של שעונים היממה דרוזופילה בתרבות המוח זחל

כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט לביצוע הדמיה חיה של החלוקה הא-סימטרית של תאי גזע של קו הנבט (GSCs) בנישת השחלות של דרוזופילה. אנו משתמשים בקו טרנסגני המבטא בכל מקום היתוך חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) של חלבון הספקטרוזום Par-1.

הדמיה חיה מורחבת של נישות תאי גזע נקבות Drosophila melanogaster

אנו מציגים פרוטוקולי הדמיית סידן עבור נוירון ריח של זחל דרוזופילה, באמצעות דבק רקמות מקומי לקיבוע. שיטה זו משפרת את היציבות, ומאפשרת ניסויים אמינים in vivo ו-ex-vivo. סקריפטים מותאמים אישית של R מנתחים אותות סידן, ומספקים פלטפורמה יעילה למחקר נוירופיזיולוגי מפורט.

הדמיית סידן in vivo ו-ex-vivo של נוירון במעגל הריח בזחל Drosophila melanogaster בכוכב השלישי

חקור חלוקה אסימטרית בתאי גזע עצביים של Drosophila melanogaster באמצעות הדמיה ארוכת טווח של מוחות זחלים חיים. הפרוטוקול מדגים שימור איכות הדגימה לאורך זמן.

הדמיה של תאים חיים של Drosophila melanogaster מוח זחל כוכב שלישי

גלה סרטונים נוספים