Name: מדידת תפקוד מיטוכונדריאלי של תאי CD8 T נאיביים ואפקטורים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: חקור את השפעת חומצה ליזופוספטידית על חילוף החומרים של תאי CD8 T ועל הגמישות המטבולית שלהם באמצעות מבחן Mito Stress Test. שיטה זו מאפשרת ניתוח ביואנרגטי בזמן אמת של תאי T.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>Antimycin A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8674</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD28</td><td>Biolegend</td><td>102116</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD3/CD28 Dynabeads</td><td>ThermoFisher</td><td>11456D</td><td></td></tr><tr><td>Biotinylated anti-CD3</td><td>Biolegend</td><td>317320</td><td></td></tr><tr><td>בקר סרום אלבומין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108321-42-2</td><td></td></tr><tr><td>CD8a+ ערכת</td> <td>בידוד תאי TMiltenyi Biotec</td><td>130-104-075</td><td></td></tr><tr><td>מסנני תאים (100 ומיקרו; m)</td> <td>CELL TREAT</td><td>229485</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אתילנדיאמינטטראצטית</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>26873-85-8</td><td>מדיום שיפוע צפיפות&nbsp;</td></tr><tr><td>FCCP ((4-(trifluoromethoxy) phenyl) carbonohydrazonoyl dicyanide)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>גלוקוז</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-6152</td><td></td></tr><tr><td>גלוטמין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>עמודות LS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>עמודות בחירה חיוביות עמודת</td></tr><tr><td>הפרדת תאים מגנטיים</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-301</td><td></td></tr><tr><td>Microplate</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Oligomycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>75351</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>113-24-6</td><td></td></tr><tr><td>Recobinant IL-2</td><td>PeproTech</td><td>200-02</td><td></td></tr><tr><td>Rotenone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>סוסון ים מדיה</td><td>Agilent</td><td>103576-100</td><td></td></tr><tr><td>מחסנית חיישן</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9275</td><td></td></tr><tr><td>צלחת סטרילית 6 בארות</td><td>CELL TREAT</td><td>230601</td><td></td></tr><tr><td>צלחת סטרילית 24 בארות</td><td>CELL TREAT</td><td>229524</td><td></td></tr><tr><td>XF Calibrant</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr></tbody></table>

מדידת תפקוד מיטוכונדריאלי של תאי cd8 t נאיביים ואפקטורים

Measuring Mitochondrial Function of Na&#239;ve and Effector CD8 T Cells

ניתן למדוד את היכולות המטבוליות הגליקוליטיות והחמצוניות באמצעות מבחן תפקודי מיטוכונדריאלי המעריך יכולות על ידי התמקדות ברכיבים של שרשרת הובלת האלקטרונים בנקודות זמן מסוימות (איור 2A). ניתן לטעון סכמות הזרקה שונות על יציאות מחסנית החיישן כדי לשנות את הבדיקה המסורתית ולהעריך גירוי TCR חריף (איור 2B,C). יש לבצע אופטימיזציה של מספר התאים וריכוז התרופה עבור סוגי תאים שונים לפני פירוש התוצאות. כאן, דוח זה מתאר תנאים שעברו אופטימיזציה עבור תאי CD8 T (<...

מדידת תפקוד מיטוכונדריאלי של תאי CD8 T נאיביים ואפקטורים

Understanding how immunometabolism impacts the function, differentiation, and fate of lymphocytes has garnered significant interest and attention. ...

measuring-mitochondrial-function-of-nave-and-effector-cd8-t-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

Cell בתיווך (CML) מבחני lymphocytotoxicity ניתן להשתמש כדי לבדוק את התגובות autoreactive מנגנוני המחקר של מוות של תאים במבחנה. עם זאת, שימוש לחיות תאים confocal טכניקות הדמיה מיקרוסקופית עם צבעי ניאון, סוג קינטיקה של מוות של תאים, כמו גם את המסלולים מנוצל ניתן ללמוד ביתר פירוט.

שיטות להעריך מתווכת בטא מוות של תאים על ידי לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיות

סרטון זה מדגים את הערכת התפקוד המיטוכונדריאלי של תאי אנדותל כלי דם מוחיים (CVE) באמצעות בדיקת שטף חוץ-תאי. תאי CVE מצופים בלוח תרבית תאי שטף חוץ-תאי. חיישני שטף חוץ-תאיים עוברים הידרציה לפני טעינה וכיול לתוך הביואנלייזר. הלוח המכיל תאים נטען לאחר מכן לניתוח.

הערכת תפקוד מיטוכונדריאלי בתאי אנדותל כלי דם מוחיים

פרוטוקול זה מתאר בדיקת ציטוטוקסיות רגישה מבוססת תאים. על ידי ספירת הירידה בתדירות של תאי CD4+ T מטרה חיים בנוכחות מספר הולך וגדל של תאי CD8+ T אפקטיביים, בדיקה זו מאפשרת הערכה ישירה של הפעילות הציטוליטית של תאי CD8+ T ספציפיים לאנטיגן.

בדיקת ציטומטריית זרימה מבוססת תאים למדידת פעילות ציטוטוקסית

שתואר כאן הוא שיטה לאיתור וללכמת חלבוני קרום חיצוני של המיטוכונדריה ידי immunolabeling של מיטוכונדריה מבודדת מרקמת מכרסמים וניתוח על ידי cytometry זרימה. שיטה זו ניתנת להארכה על מנת להעריך היבטים פונקציונליים של אוכלוסיות המיטוכונדריה.

Immunodetection של החלבונים בממברנה חיצוניים על ידי cytometry הזרימה של מיטוכונדריה מבודדת

מאמר זה מדגים שיטה חזקה לכמת המיטוכונדריה או lysosomes בתאים חיים. השילוב של צבעי ספציפיים ליזוזום או המיטוכונדריה עם נוגדנים fluorescently מצומדת סמני פני השטח מאפשר כימות של אלה organelles אוכלוסיות מעורבות לתאים, כמו ראשי תאים שנקטפו דגימות רקמה, באמצעות cytometry זרימה ססגוניות.

כימות מבוססי Cytometry זרימה ססגוניות של המיטוכונדריה, Lysosomes בתאי T

אנו מתארים כאן הזרימה cyvivo try מבוסס בתוך שיטת ההרג המאפשרת לבדוק את החיסונית של האימונוטוקסיט T לימפוציטים (CTL) התגובות של הגידול מודל אנטיגן. אנו מספקים דוגמאות לאופן השימוש בבחינה אלגנטית זו למחקרים מכניסטיים ולבדיקת יעילות בסמים.

תפירה Vivo ציטורעילות Assays ללמוד אימונומימינינס ב-CD8 התגובות הספציפיות לגידול של תאים

כאן אנו מתארים שיטה אמינה למדוד מסה מיטוכונדריאלי פוטנציאל קרום בתאי גזע vivo המטפאות לשעבר תאים T.

מדידת מיסת מיטוכונדריאלי ופוטנציאל ממברנה בתאי גזע ותאי T-תאים על ידי זרימה Cy,

הסתגלות מטבולית היא בסיסית עבור תאי T כפי שהיא מכתיבה בידול, התמדה, וציטוטוקסיות. כאן, פרוטוקול ממוטב לניטור נשימה מיטוכונדריאלית בתאי T ראשוניים אנושיים מובחנים ex vivo .

ניטור בזמן אמת של נשימה מיטוכונדריאלית בתאי T ראשוניים אנושיים מובחנים בציטוקינים

מתואר הליך לחקר הדינמיקה של מטבוליזם של דנ"א מיטוכונדריאלי (mtDNA) בתאים באמצעות פורמט צלחת מרובת בארות והדמיה אימונופלואורסצנטית אוטומטית כדי לזהות ולכמת סינתזה והפצה של mtDNA. זה יכול לשמש גם כדי לחקור את ההשפעות של מעכבים שונים, לחצים תאיים והשתקת גנים על חילוף החומרים mtDNA.

כימות מבוסס תמונה בתפוקה גבוהה של סינתזה והפצה של DNA מיטוכונדריאלי

טכניקה זו מתארת זרימת עבודה יעילה כדי להמחיש ולמדוד כמותית את פוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלית ואת רמות הסופראוקסיד בתוך תאי HeLa באמצעות הדמיה חיה מבוססת פלואורסצנטיות.

כימות מבוסס פלואורסצנטיות של פוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלית ורמות הסופראוקסיד באמצעות הדמיה חיה בתאי HeLa

השיטות לחקר ביו-אנרגטיקה מיטוכונדריאלית תחת ריכוזי מצע רלוונטיים פיזיולוגית בתאי מערכת החיסון מוגבלות. אנו מספקים פרוטוקול מפורט המשתמש בפלואורספירומטריה ברזולוציה גבוהה כדי להעריך שינויים בתגובה של פוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלית לדרישת אנרגיה בתאי T אנושיים, מונוציטים ותאים חד-גרעיניים היקפיים.

פלואורספירומטריה ברזולוציה גבוהה להערכת שינויים דינמיים בפוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלית בתאי מערכת החיסון האנושית

חקור את השפעת חומצה ליזופוספטידית על חילוף החומרים של תאי CD8 T ועל הגמישות המטבולית שלהם באמצעות מבחן Mito Stress Test. שיטה זו מאפשרת ניתוח ביואנרגטי בזמן אמת של תאי T.

מדידת תפקוד מיטוכונדריאלי של תאי CD8 T נאיביים ואפקטורים

גלה סרטונים נוספים