Name: בדיקת תרופות במולקולות קטנות בתפוקה גבוהה להפרעות שינה הקשורות לגיל באמצעות Drosophila melanogaster (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-20T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: למד פרוטוקול סינון תרופות בתפוקה גבוהה להערכת השפעתן על שינה ב-Drosophila melanogaster. השיטה משתמשת בגילוי קרני אינפרא אדום ומציעה יכולות מהירות, הפחתת עלויות ופישוט תפעולי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לחברי מעבדתו של פרופ' ג'ונהאי האן על הדיון וההערות. עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין 32170970 ל- Y.T ו"פרויקט כחול ציאנין" של מחוז ג'יאנגסו ל- Z.C.Z.

פרוטוקול זה משתמש בזבובי w1118 בני 30 יום ממרכז המניות בלומינגטון דרוזופילה (BDSC_3605, ראה טבלת חומרים).
1. הכנת זבובי הפירות המיושנים
<ol><li>הכנת מזון<ol><li>הכינו תרבית עמילן תירס סטנדרטית על ידי ערבוב 50 גרם / ליטר קורנפלקס, 110 גרם / ליטר סוכר, 5 גרם / ליטר אגר ו 25 גרם / ליטר שמרים. מחממים את הקורנפלקס והשמרים במים כדי לג'לטין, ולאחר מכן ממיסים לחלוטין את כל החומרים.</li>
		<li>כאשר המדיום מתקרר ל 50-60 מעלות צלזיוס, מוסיפים 6 מ"ל / ליטר של חומצה פרופיונית ומיד לארוז אותם לתוך בקבוקי תרבית.</li>
	</ol></li>
	<li>גידול זבובים והכנת זבובים מזדקנים<ol><li>הרבו את זן הזבוב w1118בבקבוקים המכילים מדיום סטנדרטי לתרבית קורנפלור והכניסו את הבקבוקים לאינקובטור טמפרטורה קבועה בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס, 68% לחות יחסית, תנאי תאורה של 500-1000 לוקס ומחזור אור כהה של 12 שעות: 12 שעות.</li>
		<li>מעבירים זבובים לבקבוק חדש כל 7 ימים בהתאם למחזור הגדילה של הזבובים, תוך שמירה על גיל אחיד של הפרטים באותו בקבוק.</li>
		<li>אספו את קבוצת הזבובים החדשה שבקעה מהבקבוק המקורי 3 ימים לאחר העברתם והכניסו אותם לבקבוק חדש. בעקבות העיקרון של החלפת הבקבוק כל 7 ימים, הם יהיו בתרבית עד סביב גיל 30 ימים.</li>
	</ol></li>
</ol>2. הכנת מזון רפואי וצינורות זכוכית לניטור
הערה: הליך הכנת צינור זכוכית עוקב אחר עבודתם של ג'ין ואחרים עם שינויים34.
<ol><li>ניקוי וייבוש צינורות זכוכית<ol><li>מניחים את צינור הזכוכית (קוטר 5 מ"מ x 65 מ"מ אורך, ראו טבלת חומרים) לתוך גדולה, משרים אותה ומרתיחים אותה במים מזוקקים כפול למשך 20 דקות. חזור על הפעולה 3 פעמים.</li>
		<li>מוציאים וצרורים את צינור הזכוכית, שוטפים את החלק הפנימי במים מזוקקים כפול 3-5 פעמים ומכניסים לתנור לייבוש.</li>
	</ol></li>
	<li>הכנת מדיום תרבית פשוטה (100 מ"ל)<ol><li>ממיסים 1.5 גרם אגר ו-5 גרם סוכרוז במים מזוקקים כפול, מחממים ומתרכזים עד 100 מ"ל.</li>
		<li>הוסף 600 μL חומצה propionic כאשר המדיום מתקרר לכ 70 ° C, מונע ממנו להתמצק באמצעות אמבט מים טמפרטורה קבועה.</li>
		<li>הוסף כ 4 מ"ל של מדיום פשוט ו Reserpine (ראה טבלה של חומרים) לתוך קטנה 10 מ"ל עד התרופה מגיע 20 מיקרומטר או 50 מיקרומטר. להוסיף dimethyl sulfoxide (DMSO) לריכוז של 0.2% בקבוצת הביקורת שלילית.</li>
	</ol></li>
	<li>הכנת צינורות זכוכית המכילים תרופות<ol><li>כדי להקל על זרימת המדיום, הכנס בזהירות אורך מתאים של צינור זכוכית לתוך קטנה. התווך ייכנס באופן טבעי לצינור הזכוכית עקב לחץ אטמוספרי.</li>
		<li>משוך את צינור הזכוכית כאשר מדיום התרבית מוצק לחלוטין ונגב את הקיר החיצוני כדי לקבל צינור זכוכית ניטור עם מדיום תרבית המכיל סמים בקצה אחד.</li>
		<li>מחממים את הפרפין המוצק בכוס עד שהוא נמס ב 70 מעלות צלזיוס, מכניסים את קצה צינור הזכוכית קרוב למזון לתוך נוזל הפרפין כ -5 מ"מ, ומסירים אותו במהירות. המתן עד שהפרפין יתמצק כדי לאטום את קצה המזון של צינור הזכוכית.</li>
	</ol></li>
</ol>3. תכנון ניסויי וטיפול בזבובים
<ol><li>תכננו את הניסוי לטיפול בזבוב לפי טבלה 1.</li>
</ol>4. הרכבת דרוזופילה וניטור שינה
הערה: ההליך להרכבת דרוזופילה עוקב אחר עבודתם של ג'ין ואחרים 34 עם שינויים.
<ol><li>מרדימים זבובים בגזCO2 , מכניסים אותם לצינורות זכוכית אטומים בפרפין (אחד לכל צינור), וחוסמים את הקצה שאינו מזון עם כדור צמר גפן סופג כדי למנוע מזבובים לברוח ולהבטיח זרימת אוויר.</li>
	<li>טען צינורות על צג האינפרא אדום לצורך ניטורם.<ol><li>הרכיבו את צינורות הזכוכית המכילים זבובים על צג אינפרא אדום באותו כיוון, ורשמו את מספר הצג ומספר החור המתאימים לכל תרופה.</li>
		<li>התאימו את היישור של כל צינור, וגרמו לקרני האינפרא אדום לעבור אנכית דרך מרכז טווח הפעילות של הזבוב.</li>
		<li>מקם את הצג בתוך אינקובטור של 25 מעלות צלזיוס הממוקם בחדר החושך של הזבוב, בהתאם להגדרות שצוינו: טמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס, צייטגבר 12 (ZT12) (שווה ערך לזמן המקומי 08:00 בערב) ו- ZT24 (שווה ערך לזמן המקומי 08:00 בבוקר). מערך זה מבטיח שהזבובים יחוו לסירוגין פרקי זמן של 12 שעות של אור וחושך. הערה: נסה לא לפתוח את הדלת עד להשלמת איסוף הנתונים לניטור כדי לשמור על סביבה יציבה בחממה במהלך הניטור.</li>
		<li>התחל ניטור באמצעות מערכת DAM2 (ראה טבלת חומרים).</li>
		<li>לאחר השלמת הניטור, הורד את הנתונים שנאספו בפורמט .txt מהמערכת.</li>
	</ol></li>
</ol>5. עיבוד נתונים
הערה: עיבוד הנתונים באמצעות מערכת DAM, DAMFileScan107 ו- SCAMP בוצע בהתאם להוראות באתרי האינטרנט הרשמיים שלהם (ראה טבלת חומרים).
<ol><li>ייבא את קובץ txt לעיל לתוכנת DAMFileScan107 לסריקה וחלק אותו לפי הצורך כדי לקבל נתוני שינה.<ol><li>הגדר את שעת ההתחלה של נתוני הסגמנטציה ל- 8:01 (פילוח של דקה אחת) או 8:00 (פילוח של 30 דקות) בבוקר השלישי לאחר הפעלת המוניטורים, ושעת הסיום היא 8:00 בבוקר שלושה ימים לאחר שעת ההתחלה (איור 2A1). הערה: הזבובים חייבים להסתגל לסביבת הניטור למשך יום אחד לפחות. לכן, ניתן להגדיר את שעת ההתחלה של הנתונים המפוצלים ל-8 בבוקר ביום השלישי לאחר תחילת הצג.</li>
		<li>פצל את הנתונים במרווחי זמן של דקה ו- 30 דקות. שנה את האפשרות "אורך סל" לדקה אחת, שנה את האפשרות "סוג קובץ פלט" לקבצי ערוץ, שינוי שם ופלט. שיטת פילוח הנתונים של 30 דקות זהה לזו שלעיל (איור 2A2-5). הערה: בעת ביצוע פילוח נתונים במרווחים של דקה ו- 30 דקות, שינוי השם הסופי של שני הקבצים צריך להיות עקבי; אחרת, ייתכן שלא ניתן יהיה לקרוא אותו במהלך עיבוד Matlab לאחר מכן. במידת הצורך, ניתן לשנות את שם הקובץ לאחר הפלט כדי להקל על הבידול.</li>
	</ol></li>
	<li>עיבוד נתונים באמצעות SCAMP2020<ol><li>פתחו את חבילת התוכנית SCAMP2020 ב-Matlab, ולחצו פעמיים על Vecsey Sleep and Circadian Analysis MATLAB Program (SCAMP) (איור 2B).</li>
		<li>הוסף את תיקיית המשנה שלו "Vecsey SCAMP Scripts" לנתיב, מצא את הקובץ "scamp.m" בתיקיה זו והפעל אותו. בחלון המוקפץ הבא, בחרו את התיקיות של התהליך ברצף של דקה ו-30 דקות (איור 2C,D).</li>
		<li>בחר צג, לחץ על טען חלקות בודדות לתצוגה מקדימה (איור 3A1), ובדוק את התמונה שמופיעה. בטל את הסימון של הערוץ המתאים של זבובים מתים (איור 3A2, איור 3B).</li>
		<li>חזור על השלבים לעיל כדי לבדוק את כל הצגים.</li>
		<li>שנה את שם כל ערוץ בכל צג בהתבסס על התרופה המתאימה לבדיקה (איור 3A3), בחר את כל הצגים ולחץ על נתח נתונים נבחרים לניתוח (איור 3A4).</li>
		<li>ברירת מחדל לאפשרות שנבחרה, לחץ על נתח עבור סל נבחר, סמן ייצוא נתונים, ולבסוף לחץ על GRAPH 30 min סוגי נתונים עבור כל הימים עבור קבוצות נבחרות וייצוא כל הנתונים כדי להפיק את התוצאות (איור 3C).</li>
	</ol></li>
	<li>בחר את הקובץ בשם s30 מקובץ ה- CSV, מצא את הערך הממוצע המתאים ואת נתוני השגיאה הסטנדרטיים עבור כל צג, גבה אותו ב- Excel לצורך שינוי והתאמה והדבק אותו ב- GraphPad Prism (ראה טבלת חומרים) כדי לצייר דיאגרמת מצב שינה (איור 4A,B).</li>
	<li>מצאו את הקובץ שנקרא "stdur" וחשבו את הערכים הממוצעים של שעות היום, הלילה והשינה הכוללת עבור כל זבוב בתוך שלושה ימים (איור 4A,C). הדבק את הנתונים בתוכנת פריזמה כדי להשלים את בדיקת ההבדל ולצייר גרף.</li>
</ol>

קידום טיפולים בהפרעות שינה: גישת סינון מבוססת דרוזופילה

<ol><li>Le Bon, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+between+REM+and+NREM+in+the+NREM-REM+sleep+cycle%3A+a+review+on+competing+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+Medicine%22%5BJournal%5D)">Relationships between REM and NREM in the NREM-REM sleep cycle: a review on competing concepts.</a> Sleep Medicine. 70, 6-16 (2020).</li>
<li>Krueger, J. M., Frank, M. G., Wisor, J. P., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+function%3A+Toward+elucidating+an+enigma%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+Medicine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Sleep function: Toward elucidating an enigma.</a> Sleep Medicine Reviews. 28, 46-54 (2016).</li>
<li>Ohayon, M. M., Carskadon, M. A., Guilleminault, C., Vitiello, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meta-analysis+of+quantitative+sleep+parameters+from+childhood+to+old+age+in+healthy+individuals%3A+developing+normative+sleep+values+across+the+human+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Meta-analysis of quantitative sleep parameters from childhood to old age in healthy individuals: developing normative sleep values across the human lifespan.</a> Sleep. 27 (7), 1255-1273 (2004).</li>
<li>Li, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperexcitable+arousal+circuits+drive+sleep+instability+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Hyperexcitable arousal circuits drive sleep instability during aging.</a> Science. 375 (6583), eabh3021(2022).</li>
<li>Rodriguez, J. C., Dzierzewski, J. M., Alessi, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+problems+in+the+elderly%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Sleep problems in the elderly.</a> Medical Clinics of North America. 99 (2), 431-439 (2015).</li>
<li>Gulia, K. K., Kumar, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+disorders+in+the+elderly%3A+a+growing+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Psychogeriatrics%22%5BJournal%5D)">Sleep disorders in the elderly: a growing challenge.</a> Psychogeriatrics. 18 (3), 155-165 (2018).</li>
<li>Wolkove, N., Elkholy, O., Baltzan, M., Palayew, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+and+aging%3A+1.+Sleep+disorders+commonly+found+in+older+people%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Medical+Association+Journal%22%5BJournal%5D)">Sleep and aging: 1. Sleep disorders commonly found in older people.</a> Canadian Medical Association Journal. 176 (9), 1299-1304 (2007).</li>
<li>Suzuki, K., Miyamoto, M., Hirata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+disorders+in+the+elderly%3A+Diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+and+Family+Medicine%22%5BJournal%5D)">Sleep disorders in the elderly: Diagnosis and management.</a> Journal of General and Family Medicine. 18 (2), 61-71 (2017).</li>
<li>Foley, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+complaints+among+elderly+persons+-+an+epidemiologic-study+of+3+communities%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Sleep complaints among elderly persons - an epidemiologic-study of 3 communities.</a> Sleep. 18 (6), 425-432 (1995).</li>
<li>Yu, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insomnia+Severity+Index%3A+psychometric+properties+with+Chinese+community-dwelling+older+people%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Advanced+Nursing%22%5BJournal%5D)">Insomnia Severity Index: psychometric properties with Chinese community-dwelling older people.</a> Journal of Advanced Nursing. 66 (10), 2350-2359 (2010).</li>
<li>Hoevenaar-Blom, M. P., Spijkerman, A. M., Kromhout, D., van den Berg, J. F., Verschuren, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+duration+and+sleep+quality+in+relation+to+12-year+cardiovascular+disease+incidence%3A+the+MORGEN+study%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Sleep duration and sleep quality in relation to 12-year cardiovascular disease incidence: the MORGEN study.</a> Sleep. 34 (11), 1487-1492 (2011).</li>
<li>Rebok, G. W., Rovner, B. W., Folstein, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+disturbance+and+Alzheimer%27s+disease%3A+relationship+to+behavioral+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Milano%29%22%5BJournal%5D)">Sleep disturbance and Alzheimer's disease: relationship to behavioral problems.</a> Aging (Milano). 3 (2), 193-196 (1991).</li>
<li>Schroeck, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+safety+and+efficacy+of+sleep+medicines+in+older+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Review of safety and efficacy of sleep medicines in older adults.</a> Clinical Therapeutics. 38 (11), 2340-2372 (2016).</li>
<li>Pericic, D., Strac, D. S., Jembrek, M. J., Vlainic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allosteric+uncoupling+and+up-regulation+of+benzodiazepine+and+GABA+recognition+sites+following+chronic+diazepam+treatment+of+HEK+293+cells+stably+transfected+with+alpha1beta2gamma2S+subunits+of+GABA+%28A%29+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn-Schmiedeberg%27s+Archives+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Allosteric uncoupling and up-regulation of benzodiazepine and GABA recognition sites following chronic diazepam treatment of HEK 293 cells stably transfected with alpha1beta2gamma2S subunits of GABA (A) receptors.</a> Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. 375 (3), 177-187 (2007).</li>
<li>Lader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+benzodiazepine+dependence%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Substance+Abuse+Treatment%22%5BJournal%5D)">History of benzodiazepine dependence.</a> Journal of Substance Abuse Treatment. 8 (1-2), 53-59 (1991).</li>
<li>Chen, P. L., Lee, W. J., Sun, W. Z., Oyang, Y. J., Fuh, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+dementia+in+patients+with+insomnia+and+long-term+use+of+hypnotics%3A+a+population-based+retrospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Risk of dementia in patients with insomnia and long-term use of hypnotics: a population-based retrospective cohort study.</a> Plos One. 7 (11), e49113(2012).</li>
<li>Kang, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zolpidem+use+and+risk+of+fracture+in+elderly+insomnia+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Preventive+Medicine+and+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Zolpidem use and risk of fracture in elderly insomnia patients.</a> Journal of Preventive Medicine and Public Health. 45 (4), 219-226 (2012).</li>
<li>Kao, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+zolpidem+and+cancer+risk%3A+a+Taiwanese+population-based+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clinic+Protocols%22%5BJournal%5D)">Relationship of zolpidem and cancer risk: a Taiwanese population-based cohort study.</a> Mayo Clinic Protocols. 87 (5), 430-436 (2012).</li>
<li>Sateia, M. J., Kirby-Long, P., Taylor, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+clinical+safety+of+ramelteon%3A+an+evidence-based+review%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+Medicine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Efficacy and clinical safety of ramelteon: an evidence-based review.</a> Sleep Medicine Reviews. 12 (4), 319-332 (2008).</li>
<li>Friedrich, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-induced+liver+injury+during+antidepressant+treatment%3A+results+of+amsp%2C+a+drug+surveillance+program%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Drug-induced liver injury during antidepressant treatment: results of amsp, a drug surveillance program.</a> The International Journal of Neuropsychopharmacology. 19 (4), pyv126(2016).</li>
<li>Entzeroth, M., Flotow, H., Condron, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Overview of high-throughput screening.</a> Current Protocols in Pharmacology. Chapter 9, (2009).</li>
<li>Ferreira, L. G., Dos Santos, R. N., Oliva, G., Andricopulo, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+docking+and+structure-based+drug+design+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Molecular docking and structure-based drug design strategies.</a> Molecules. 20 (7), 13384-13421 (2015).</li>
<li>Campbell, S. S., Tobler, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+sleep+-+a+review+of+sleep+duration+across+phylogeny%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">Animal sleep - a review of sleep duration across phylogeny.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 8 (3), 269-300 (1984).</li>
<li>Hendricks, J. C., Sehgal, A., Pack, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+need+for+a+simple+animal+model+to+understand+sleep%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The need for a simple animal model to understand sleep.</a> Progress in Neurobiology. 61 (4), 339-351 (2000).</li>
<li>Hendricks, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rest+in+Drosophila+is+a+sleep-like+state%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Rest in Drosophila is a sleep-like state.</a> Neuron. 25 (1), 129-138 (2000).</li>
<li>Shaw, P. J., Cirelli, C., Greenspan, R. J., Tononi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlates+of+sleep+and+waking+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Correlates of sleep and waking in Drosophila melanogaster.</a> Science. 287 (5459), 1834-1837 (2000).</li>
<li>Ly, S., Pack, A. I., Naidoo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobiological+basis+of+sleep%3A+Insights+from+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+%26+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The neurobiological basis of sleep: Insights from Drosophila.</a> Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 87, 67-86 (2018).</li>
<li>Jeibmann, A., Paulus, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+as+a+model+organism+of+brain+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster as a model organism of brain diseases.</a> International Journal of Molecular Sciences. 10 (2), 407-440 (2009).</li>
<li>Morse, D., Sassone-Corsi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+after+time%3A+inputs+to+and+outputs+from+the+mammalian+circadian+oscillators%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Time after time: inputs to and outputs from the mammalian circadian oscillators.</a> Trends in Neuroscience. 25 (12), 632-637 (2002).</li>
<li>De Nobrega, A. K., Lyons, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%3A+an+emergent+model+for+delineating+interactions+between+the+circadian+clock+and+drugs+of+abuse%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plasticity%22%5BJournal%5D)">Drosophila: an emergent model for delineating interactions between the circadian clock and drugs of abuse.</a> Neural Plasticity. 2017, 4723836(2017).</li>
<li>Reppert, S. M., Weaver, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordination+of+circadian+timing+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Coordination of circadian timing in mammals.</a> Nature. 418 (6901), 935-941 (2002).</li>
<li>Koudounas, S., Green, E. W., Clancy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliability+and+variability+of+sleep+and+activity+as+biomarkers+of+ageing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Biogerontology%22%5BJournal%5D)">Reliability and variability of sleep and activity as biomarkers of ageing in Drosophila.</a> Biogerontology. 13 (5), 489-499 (2012).</li>
<li>Nall, A. H., Sehgal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+screen+in+adult+Drosophila+identifies+VMAT+as+a+regulator+of+sleep%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Small-molecule screen in adult Drosophila identifies VMAT as a regulator of sleep.</a> Journal of Neuroscience. 33 (19), 8534-8464 (2013).</li>
<li>Jin, X., Gu, P., Han, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+Drosophila+sleep+deprivation+using+single-chip+board%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Protocol for Drosophila sleep deprivation using single-chip board.</a> STAR Protocols. 2 (4), 100827(2021).</li>
<li>Kashyap, A., Singh, P. K., Silakari, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+on+fragment+based+drug+design+approach+for+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Counting on fragment based drug design approach for drug discovery.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 18 (27), 2284-2293 (2018).</li>
<li>Qi, W., Ding, D., Salvi, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+effects+of+dimethyl+sulphoxide+%28DMSO%29+on+cochlear+organotypic+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic effects of dimethyl sulphoxide (DMSO) on cochlear organotypic cultures.</a> Hearing Research. 236 (1-2), 52-60 (2008).</li>
<li>Nishimura, M., Ueda, N., Naito, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+dimethyl+sulfoxide+on+the+gene+induction+of+cytochrome+P450+isoforms%2C+UGT-dependent+glucuronosyl+transferase+isoforms%2C+and+ABCB1+in+primary+culture+of+human+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+and+Pharmaceutical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Effects of dimethyl sulfoxide on the gene induction of cytochrome P450 isoforms, UGT-dependent glucuronosyl transferase isoforms, and ABCB1 in primary culture of human hepatocytes.</a> Biological and Pharmaceutical Bulletin. 26 (7), 1052-1056 (2003).</li>
<li>Solovev, I. A., Shaposhnikov, M. V., Moskalev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronobiotics+KL001+and+KS15+extend+lifespan+and+modify+circadian+rhythms+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Clocks+Sleep%22%5BJournal%5D)">Chronobiotics KL001 and KS15 extend lifespan and modify circadian rhythms of Drosophila melanogaster.</a> Clocks Sleep. 3 (3), 429-441 (2021).</li>
<li>Cavas, M., Beltran, D., Navarro, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+effects+of+dimethyl+sulfoxide+%28DMSO%29%3A+changes+in+sleep+architecture+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Letters%22%5BJournal%5D)">Behavioural effects of dimethyl sulfoxide (DMSO): changes in sleep architecture in rats.</a> Toxicology Letters. 157 (3), 221-232 (2005).</li>
<li>Pfeiffenberger, C., Lear, B. C., Keegan, K. P., Allada, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotor+activity+level+monitoring+using+the+Drosophila+Activity+Monitoring+%28DAM%29+System%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Locomotor activity level monitoring using the Drosophila Activity Monitoring (DAM) System.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2010 (11), 5518(2010).</li>
<li>Gilestro, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Video+tracking+and+analysis+of+sleep+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Video tracking and analysis of sleep in Drosophila melanogaster.</a> Nature Protocols. 7 (5), 995-1007 (2012).</li>
<li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nature Methods. 6 (6), 451-457 (2009).</li>
<li>Kabra, M., Robie, A. A., Rivera-Alba, M., Branson, S., Branson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JAABA%3A+interactive+machine+learning+for+automatic+annotation+of+animal+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">JAABA: interactive machine learning for automatic annotation of animal behavior.</a> Nature Methods. 10 (1), 64-67 (2013).</li>
<li>Donelson, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+positional+tracking+for+long-term+analysis+of+Drosophila+sleep+and+locomotion+using+the+%26%2334%3Btracker%26%2334%3B+program%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">High-resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the &#34;tracker&#34; program.</a> Plos One. 7 (5), e37250(2012).</li>
<li>Cichewicz, K., Hirsh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ShinyR-DAM%3A+a+program+analyzing+Drosophila+activity%2C+sleep+and+circadian+rhythms%5BTitle%5D)+AND+%22Communications+Biology%22%5BJournal%5D)">ShinyR-DAM: a program analyzing Drosophila activity, sleep and circadian rhythms.</a> Communications Biology. 1, 25(2018).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין אינטרסים מתחרים.

השיטה המתוארת מתאימה לסינון מהיר של תרופות שינה קטנות ובינוניות. כיום, רוב שיטות סינון התרופות המקובלות בתפוקה גבוהה מבוססות על רמות ביוכימיות ותאיות. לדוגמה, המבנה והתכונות של הקולטן נבדקים כדי לחפש ליגנדות ספציפיות שיכולות להיקשר אליו22. גישה אחרת כוללת ניתוח מצב הקשירה והחוזק של מקטעים מולקולריים של תרופות נבחרות באמצעות תהודה מגנטית גרעינית (NMR) עם ספקטרומטריית מסות35. עם זאת, לשיטות אלה יש לעתים קרובות שיעור שגיאות סינון גבוה יחסית, והתרופות שנבחרו באמצעותן לעתים קרוב...

שינה, אחת ההתנהגויות החיוניות להישרדות האדם, מאופיינת בשני מצבים עיקריים: שינה של תנועת עיניים מהירה (REM) ושינה של תנועת עיניים לא מהירה (NREM)1. שנת NREM מורכבת משלושה שלבים: N1 (המעבר בין ערות לשינה), N2 (שינה קלה) ו-N3 (שינה עמוקה, שנת גלים איטיים), המייצגים את ההתקדמות מעירות לשינה עמוקה1. שינה ממלאת תפקיד מכריע בבריאות הגופנית והנפשית2. עם זאת, הזדקנות מפחיתה את משך השינה הכולל, יעילות השינה, אחוז השינה בגלים איטיים ואחוז שנת REM אצל מבוגרים3. אנשים מבוגרים נוטים לבלות יותר זמן בשינה קלה בהשוואה לשנת גלים איטיים, מה שהופך אותם לרגישים יותר להתעוררויות ליליות. ככל שמספר ההתעוררויות עולה, זמן השינה הממוצע יורד, וכתוצאה מכך דפוס שינה מקוטע אצל קשישים, אשר עשוי להיות קשור לעירור יתר של נוירוני Hcrt בעכברים4. נוסף על כך, ירידה תלוית גיל במנגנונים צירקדיים תורמת לשינוי מוקדם יותר במשך השינה 5,6. בשילוב עם מחלות פיזיות, לחץ פסיכולוגי, גורמים סביבתיים ושימוש בתרופות, גורמים אלה הופכים מבוגרים לרגישים יותר להפרעות שינה, כגון נדודי שינה, הפרעת התנהגות בשינה REM, נרקולפסיה, תנועות רגליים תקופתיות, תסמונת רגליים חסרות מנוחה והפרעות נשימה בשינה 7,8.
מחקרים אפידמיולוגיים הראו כי הפרעות שינה קשורות קשר הדוק למחלות כרוניות בקרב קשישים9, כולל דיכאון 10, מחלות לב וכלי דם11 ודמנציה12. לטיפול בהפרעות שינה תפקיד מכריע בשיפור וטיפול במחלות כרוניות ובשיפור איכות החיים של אנשים מבוגרים. כיום, חולים מסתמכים בעיקר על תרופות כגון בנזודיאזפינים, שאינם בנזודיאזפינים ואגוניסטים לקולטני מלטונין כדי לשפר את איכות השינה13. עם זאת, בנזודיאזפינים יכולים להוביל לירידה ברגולציה של קולטנים ותלות לאחר שימוש ארוך טווח, מה שגורם לתסמיני גמילה חמורים עם הפסקת14,15. תרופות שאינן בנזודיאזפינים נושאות גם סיכונים, כולל דמנציה 16, שברים17 וסרטן18. אגוניסט קולטן מלטונין נפוץ, ramelteon, מפחית את חביון השינה אבל לא מאריך את משך השינה ויש לו חששות הקשורים לתפקוד הכבד עקב חיסול נרחב של מעבר ראשון19. אגומלטין, אגוניסט לקולטן מלטונין ואנטגוניסט לקולטן סרוטונין, משפר נדודי שינה הקשורים לדיכאון אך גם מהווה סיכון לנזק לכבד20. כתוצאה מכך, יש צורך דחוף בתרופות בטוחות יותר לטיפול או הקלה על הפרעות שינה. עם זאת, אסטרטגיות סינון התרופות הנוכחיות, המבוססות על ניסויים מולקולריים ותאיים בשילוב עם מערכות אוטומטיות וניתוח ממוחשב, הן יקרות וגוזלות זמןרב 21. אסטרטגיות תכנון תרופות מבוססות מבנה, המסתמכות על מבנה הקולטן ותכונותיו, דורשות הבנה ברורה של המבנה התלת-ממדי של הקולטן וחסרות יכולות ניבוי להשפעות התרופה22.
בשנת 2000, בהתבסס על קריטריוני השינה שהוצעו על ידי קמפבל וטובלר בשנת 1984 23, חוקרים הקימו מודלים פשוטים של בעלי חיים כדי לחקור שינה 24, כולל Drosophila melanogaster, אשר הציג מצבים דמויי שינה25,26. למרות ההבדלים האנטומיים בין דרוזופילה לבני אדם, מרכיבים נוירוכימיים רבים ומסלולי איתות המווסתים את השינה בדרוזופילה נשמרים בשנת יונקים, מה שמקל על חקר מחלות נוירולוגיות אנושיות 27,28. דרוזופילה נמצאת בשימוש נרחב גם במחקרי שעון ביולוגי, למרות הבדלים במתנדי הליבה בין זבובים ליונקים 29,30,31. לכן, דרוזופילה משמשת כאורגניזם מודל רב ערך לחקר התנהגות השינה וביצוע בדיקות סקר הקשורות לשינה.
מחקר זה מציע גישה חסכונית ופשוטה מבוססת פנוטיפ לסינון תרופות במולקולות קטנות לטיפול בהפרעות שינה באמצעות זבובים מזדקנים. ויסות השינה בדרוזופילה נשמר מאוד25, והירידה בשינה שנצפתה עם הגיל עשויה להיות הפיכה באמצעות מתן תרופות. לפיכך, שיטת סינון זו המבוססת על פנוטיפ שינה יכולה לשקף באופן אינטואיטיבי את יעילות התרופה. אנו מאכילים את הזבובים בתערובת של התרופה הנחקרת ומזון, מנטרים ומתעדים התנהגות שינה באמצעות Drosophila Activity Monitor (DAM)32, ומנתחים את הנתונים שנרכשו באמצעות חבילת הנתונים SCAMP2020 בקוד פתוח ב-MATLAB (איור 1). ניתוח סטטיסטי מתבצע באמצעות סטטיסטיקה ותוכנות גרפים (ראה טבלת חומרים). לדוגמה, אנו מדגימים את יעילותו של פרוטוקול זה על ידי הצגת נתונים ניסיוניים על Reserpine, מעכב מולקולות קטנות של טרנספורטר מונואמין שלפוחית שדווח כמגביר שינה33. פרוטוקול זה מספק גישה חשובה לזיהוי תרופות לטיפול בבעיות שינה הקשורות לגיל.

<table><tbody><tr><td>Ager</td><td>BIOFROXX</td><td>8211KG001</td><td></td></tr><tr><td>קופסת אקלים מלאכותית</td><td>PRANDT</td><td>PRX-1000A</td><td>אתר רשמי:https://www.nbplt17.com/PLTXBS-Products-20643427/</td></tr><tr><td>DAM2 Drosophila Activity Monitor</td><td>TriKineics</td><td>DAM2</td><td>האתר הרשמי:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>DAM2system</td><td>גרסת TriKineics</td><td>:v3.03</td><td>האתר הרשמי:https:// www.trikinetics.com/</td></tr> <tr><td>DAMFileScan</td><td>גרסת TriKineics</td><td>:1.0.7.0</td><td>האתר הרשמי:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>SIGMA</td><td>276855</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila Activity Monitoring Incubator</td><td>Tritech Research</td><td>DT2-CIRC-TK</td><td>האתר הרשמי:https://www.tritechresearch.com/DT2-CIRC-TK.html</td></tr><tr><td>Drosophila Bottles</td><td>Biologix</td><td>51-17720</td><td>האתר הרשמי:http://biologixgroup.com/goods.php?id=48</td></tr><tr><td>דרוזופילה: w1118</td><td>Bloomington Drosophila Stock Center&nbsp;</td><td></td><td></td>BDSC_3605</tr><tr>גרסת<td>אקסל</td><td>מיקרוסופט</td>:האתר הרשמי <td>של Excel 2016</td><td>:https://www.microsoftstore.com.cn/software/office/excel</td></tr><tr><td>צינורות זכוכית</td><td>TriKinetics</td><td>PPT5x65</td><td>האתר הרשמי:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>MATLABR2022b</td><td>MathWorks</td><td>גרסה:9.13.0.2049777</td><td>האתר הרשמי:https://ww2.mathworks.cn/products/matlab.html</td></tr><tr><td>Prism</td><td>GraphPad</td><td>גרסה:Prism 8.0.1</td><td>האתר הרשמי:https://www.graphpad.com/features</td></tr><tr><td>Reserpine</td><td>MACKLIN</td><td>R817202-1g</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>SIGMA</td><td>1245GR500</td><td></td></tr><tr><td>SCAMP</td><td>Vecsey Lab</td><td>N/A</td><td>אתר רשמי:https://academics.skidmore.edu/blogs/cvecsey/</td></tr></tbody></table>

בדיקת תרופות במולקולות קטנות בתפוקה גבוהה להפרעות שינה הקשורות לגיל באמצעות drosophila melanogaster

High-Throughput Small Molecule Drug Screening For Age-Related Sleep Disorders Using Drosophila melanogaster

שינה, מרכיב חיוני של בריאות ורווחה כללית, מציבה לעתים קרובות אתגרים לאנשים מבוגרים שחווים לעתים קרובות הפרעות שינה המאופיינות במשך שינה מקוצר ודפוסים מקוטעים. הפרעות שינה אלה קשורות גם לסיכון מוגבר למחלות שונות בקרב קשישים, כולל סוכרת, מחלות לב וכלי דם והפרעות פסיכולוגיות. למרבה הצער, התרופות הקיימות להפרעות שינה קשורות לתופעות לוואי משמעותיות כגון פגיעה קוגניטיבית והתמכרות. כתוצאה מכך, יש צורך דחוף בפיתוח תרופות חדשות, בטוחות ויעילות יותר להפרעות שינה. עם זאת, העלות הגבוהה ומשך הניסוי הממושך של שיטות סינון התרופות הנוכחיות נותרו גורמים מגבילים.
פרוטוקול זה מתאר שיטת סינון חסכונית ובעלת תפוקה גבוהה המשתמשת ב- Drosophila melanogaster, מין בעל מנגנון ויסות שינה שמור מאוד בהשוואה ליונקים, מה שהופך אותו למודל אידיאלי לחקר הפרעות שינה אצל קשישים. על-ידי מתן תרכובות קטנות שונות לזבובים מזדקנים, אנו יכולים להעריך את השפעתם על הפרעות שינה. התנהגויות השינה של זבובים אלה נרשמות באמצעות מכשיר ניטור אינפרא אדום ומנותחות באמצעות חבילת הנתונים בקוד פתוח Sleep and Circadian Analysis MATLAB Program 2020 (SCAMP2020). פרוטוקול זה מציע גישת סינון זולה, ניתנת לשחזור ויעילה לוויסות שינה. זבובי פירות, בשל מחזור החיים הקצר שלהם, עלות הגידול הנמוכה וקלות הטיפול, משמשים כנושאים מצוינים לשיטה זו. לשם המחשה, רסרפין, אחת התרופות שנבדקו, הדגימה את היכולת לקדם את משך השינה אצל זבובים קשישים, והדגישה את יעילותו של פרוטוקול זה.

Reserpine הוא מעכב מולקולה קטנה של טרנספורטר מונואמין שלפוחית (VMAT), אשר מעכב את ספיגה מחדש של מונואמינים לתוך שלפוחיות presynaptic, המוביל שינה מוגברת33. ההשפעות מעודדות השינה של רסרפיין נבדקו בזבובים בני 30 יום, כאשר קבוצת הביקורת ניזונה אך ורק מדימתיל סולפוקסיד הממס (DMSO). בקבוצת Reserpine, זבובים מבוגרים יותר הציגו שינה מוגברת באופן משמעותי הן ביום והן בלילה בהשוואה לקבוצת DMSO. איור 5A,E ממחיש את דפוסי השינה של זבובי Reserpine ו-DMSO במשך שלושה ימים רצופים<stro...

מוצג פרוטוקול לבדיקת תרופות בתפוקה גבוהה לשיפור השינה על ידי ניטור התנהגות השינה של זבובי פירות במודל דרוזופילה קשיש.

בדיקת תרופות במולקולות קטנות בתפוקה גבוהה להפרעות שינה הקשורות לגיל באמצעות Drosophila melanogaster

Sleep, an essential component of health and overall well-being, often presents challenges for older individuals who frequently experience sleep disorders ...

טכניקות סינון תרופות כוללות סינון בתפוקה גבוהה, המשתמש באוטומציה לגילוי תרופות, תכנונים מבוססי מבנה, ומציאת מולקולות קושרות קולטן המבוססות על המבנה, ועיצוב מבוסס פרגמנטים, המשתמש בתהודה מגנטית גרעינית ובספקטרומטריית מסות כדי לייעל מקטעים מולקולריים ולזהות את התרכובות. מערכת DAM מודדת שנת זבובים על ידי גילוי לבני קרן אינפרא אדום. עם זאת, שיטה זו יכולה להעריך יתר על המידה את השינה אם הזבובים נשארים סטטיים בקצה אחד של הצינור, או אם הזבוב אינו נייד במיוחד.יתר על כן, הסדר של כל תרופה שנבדקה עלול להשפיע על צריכת פרי הזבוב, מה שעלול להטות את תוצאות הניסוי. לכן, הניסוי שלנו ישלב מתיחות שונות כדי למתן גורמים אלה ולשפר את הדיוק. בהשוואה לשיטות מבוססות ניתוח וידאו, השיטה שלנו מציעה יכולות תפוקה גבוהה, מפחיתה את העלות ומפשטת את התפעול.כך שתהליך הנתונים הניסיוניים הוא גם פשוט יחסית, כאשר הגרף המתקבל מייצג חזותית את השפעות התרופה.

high-throughput-small-molecule-drug-screening-for-age-related-sleep

Research

JoVE Journal

Behavior

התנהגות

אנו מתארים נוהלי רישום פעילות של תנועה יומי של...

Assaying פעילות של תנועה כדי ללמוד בקצב היממה ושינה פרמטרים תסיסנית</em

Nanoinjection לזווג ו Assay Electrophysiology למסך עבור bioactivity של תרכובות באמצעות תסיסנית melanogaster סיבים הענק מערכת

בדיקות פשוטות למדידת רגישות לאתנול וסבילות מהירה בדרוזופילה מקלות על השימוש באורגניזם מודל זה לחקירת התנהגויות חשובות אלה הקשורות לאתנול. כאן מתוארת בדיקה פשוטה יחסית וניתנת להרחבה למדידת רגישות לאתנול וסבילות מהירה בזבובים.

Assay זול, Scalable התנהגות למדידת אתנול הרגעת רגישות וסובלנות מהירה ב<em&gt; דרוזופילה</em

פרוטוקול זה מתאר בדיקת תפוקה גבוהה לבדיקת העדפות הטלת ביצים של Drosophila melanogaster ברזולוציה של בעל חיים יחיד.  בדיקה זו מספקת פלטפורמה פשוטה, יעילה וניתנת להרחבה לזיהוי גנים ורכיבי מעגלים השולטים בתהליך קבלת החלטות פשוט.

Assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט<em&gt; תסיסנית</em

אנו מציגים פרוטוקול באמצעות גישה גנטית הקדמי למסך עבור מוטציות המציגות ניוון נוירוזוסופילה מלאנוגסטר. היא משלבת שיטת טיפוס, ניתוח היסטולוגיה, מיפוי גנים ורצפי דנ א בסופו של דבר לזהות גנים חדשניים הקשורים לתהליך של הגנה עצבית.

ב Vivo Forward המסך הגנטי כדי לזהות גנים נוירוגינים הרומן ב Drosophila ילה melanogaster

דרוזופילה הוא מודל ניסיוני נפוץ המתאים לסינון תרופות עם יישומים פוטנציאליים לטיפול בסרטן. כאן, אנו מתארים את השימוש של דרוזוהילה מגוונים העין פנוטיפים כשיטה להקרנה תרכובות קטנות מולקולה לקדם את היווצרות הטרוכרומטין.

שיטת הקרנה לזיהוי הטרוכרומטין-קידום תרופות באמצעות דרוזוהילה

שיטות נוכחיות למדידת רגישות האלכוהול בדרוזופילה נועדו לבחון קבוצות של זבובים. אנו מציגים בקלות, בעלות נמוכה, התפוקה גבוהה הערכה להערכת רגישות הרגעה אלכוהול במספר גדול של זבובים בודדים. השיטה אינה דורשת כלים מיוחדים וניתן לבצעו בכל מעבדה המשתמשת בחומרים משותפים.

שיטת תפוקה גבוהה עבור מדידת אלכוהול הרגעה זמן של הפרט דרוזופילה מלאנוגסטר

הפרוטוקול הנוכחי מעריך את הפעילות המוטורית של דרוזופילה על ידי מעקב וניתוח תנועת הזבובים בזירה בעבודת יד באמצעות תוכנת קוד פתוח פיג'י, התואמת לתוספים לפלח פיקסלים של כל פריים בהתבסס על הקלטת וידאו בחדות גבוהה כדי לחשב פרמטרים של מהירות, מרחק וכו '.

טכניקה פשוטה להערכת פעילות לוקומוטורית בדרוזופילה

פרוטוקול זה מפרט את השימוש בזחלי דרוזופילה לזיהוי תרכובות נוגדות פרכוסים ייחודיות לטיפול באפילפסיה.

פעילות התקפים הנגרמת על ידי שוק חשמלי בזחלי דרוזופילה

הפרוטוקול מציג שיטה בעלת תפוקה גבוהה וחסכונית להערכת רעילות עצבית בזבוב הפירות באמצעות כימות תפקוד לקומוטורי כחלופה למודלים מסורתיים של יונקים. מטרתו להעריך את ההשפעות הנוירוטוקסיות של תרכובות פרמצבטיות, גורמים סביבתיים או שינויים גנטיים באמצעות מודל רגיש, ניתן לשחזור וחיובי מבחינה אתית.

ניתוח התנהגותי של תפקוד לקומוטורי ב-Drosophila melanogaster כקריאה לרעילות עצבית

למד פרוטוקול סינון תרופות בתפוקה גבוהה להערכת השפעתן על שינה ב-Drosophila melanogaster. השיטה משתמשת בגילוי קרני אינפרא אדום ומציעה יכולות מהירות, הפחתת עלויות ופישוט תפעולי.

בדיקת תרופות במולקולות קטנות בתפוקה גבוהה להפרעות שינה הקשורות לגיל באמצעות Drosophila melanogaster

גלה סרטונים נוספים