Name: גישה מקיפה לניתוח מרכיבי התא של קרישי דם מוחיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-21T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: למד שיטה חדשנית לניתוח מרכיבי תאים בקרישי דם מוחיים באמצעות פירוק פיברין וצביעת תאים. השיטה משחררת תאים שלמים לניתוח כמותי ואיכותי ומסייעת בשיפור אבחון וטיפול בטרומבוזה מוחית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה מומן על ידי לשכת המדע והטכנולוגיה של העיר שיאמן (3502Z20227197), ולשכת המדע והטכנולוגיה של מחוז פוג'יאן (מס '2019J01070, מס '2021Y0027).

המחקר בוצע בהתאם להנחיות המוסדיות של ועדת האתיקה הרפואית של אוניברסיטת Huaqiao. קרישי הדם המוחיים הוסרו בניתוח ונאספו בבית החולים הראשון Quanzhou, המסונף לאוניברסיטה הרפואית פוג'יאן, בהסכמה מדעת של החולים.
1. טיפול מקדים לקריש דם
<ol><li>מניחים את הקרישים על צלחת נקייה, מוסיפים 5 מ"ל מלח פיזיולוגי עם טוויטר, מנערים את התבשיל בעדינות ומסירים את המלח עם פיפטה. הערה: יש לחזור על השטיפה שלוש פעמים.</li>
	<li>חותכים את הקרישים לחתיכות קטנות יותר (קטנות מ 5 מ"מ x 5 מ"מ x 5 מ"מ) עם מספריים. מוסיפים 5 מ"ל מלח פיזיולוגי, מנערים את המנה בעדינות ומסירים את המלח עם פיפטה. הערה: יש לחזור על השטיפה שלוש פעמים. יש לוודא שלא נפלטות חתיכות קריש דם במהלך השטיפה.</li>
	<li>מעבירים את הקרישים לצלחת U נקייה אחרת. הערה: ניתן להשהות את הפרוטוקול כאן (לאחסן את הצלחת ב 2-8 ° C) ולהפעיל מחדש מאוחר יותר.</li>
</ol>2. טרומבוליזה
<ol><li>הכן את פתרון העבודה sFE על ידי התאמת ריכוז sFE ל 2000 U/mL עם מלוחים פיזיולוגיים. הערה: ה-sFE הוכן בהתאם לפרוטוקולים המבוססים היטב של מעבדת טאנג15.</li>
	<li>הוסף 300 μL של תמיסת עבודה sFE לקרישי הדם שטופלו מראש.</li>
	<li>בצע את סבב ההשפלה הראשון.<ol><li>לדגור על תערובת של sFE וקרישי דם ב 37 ° C במשך 0.5 שעות. הערה: הכתם שטופל במי מלח פיזיולוגיים הוגדר כבקרה שלילית. אין לסובב את הדגימה על השייקר.</li>
		<li>מערבבים את הדגימה בעדינות. מעבירים את החלק הנוזלי לצינור נקי אחר עם פיפטה נקייה. הערה: הקרישים הנותרים שימשו לסבב נוסף של התפרקות.</li>
		<li>צנטריפוגה את החלק הנוזלי ב 200 × גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C.</li>
		<li>מעבירים את הסופרנאטנט לצינור נקי אחר עם פיפטה כדי לקבל את תמיסת ה-sFE המשוחזרת.</li>
		<li>מערבבים את משקעים התא עם 50 μL של מלוחים פיזיולוגיים בעדינות. הערה: תערובת התאים אוחסנה 2-8 °C לשימוש מאוחר יותר.</li>
	</ol></li>
	<li>בצע השפלה לאחר מכן.<ol><li>יש לפרק את הקרישים הנותרים (שלב 2.3.2) עם תמיסת sFE המשוחזרת (שלב 2.3.4) ב-37°C למשך 0.5 שעות. הערה: שאר השלבים היו זהים לסבב ההשפלה הראשון. תהליך הפירוק הסתיים עד שכל הקרישים התפרקו.</li>
	</ol></li>
	<li>ביצוע איסוף תאים.<ol><li>הכינו את דגימת תאי הדם על ידי איסוף תערובת התאים של כל סבב התפרקות.</li>
	</ol></li>
</ol>3. הכתמים של רייט
<ol><li>בצע מריחת תאים.<ol><li>התאם תאים לצפיפות של 1 x 106 תאים/מ"ל.</li>
		<li>הוסף 5 μL של התאים לשקופית זכוכית מצופה פולי-L ליזין, ולאחר מכן מרח אותם באמצעות החלקת הכיסוי.</li>
		<li>יש לאדות את הנוזל בטמפרטורת החדר.</li>
	</ol></li>
	<li>בצעו את הצביעה.<ol><li>הוסיפו 200 μL של הצבע של רייט (ראו טבלת חומרים) למריחת התא בעדינות, והוסיפו 600 μL של צבע B של רייט כדי לערבב באופן שווה.  יש להכתים למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>שטפו את הצבע בעדינות במים נקיים. הערה: ניתן לאחסן את כתם התאים המוכתמים בטמפרטורת החדר לשימוש מאוחר יותר.</li>
	</ol></li>
	<li>בצע הדמיה מיקרוסקופית.<ol><li>בחנו את התאים המוכתמים באמצעות מיקרוסקופ אור (ראו טבלת חומרים).</li>
	</ol></li>
</ol>4. בדיקת דם שגרתית
<ol><li>התאם תאים לצפיפות של 1 x 106 תאים/מ"ל.</li>
	<li>לנתח את מרכיבי התא כגון טסיות דם, אריתרוציטים, תאי דם לבנים, לימפוציטים, נויטרופילים, מונוציטים, אאוזינופילים, בזופילים וגרנולוציטים לא בשלים באמצעות מנתח אוטוהמטולוגיה בהתאם להוראות היצרן (ראה טבלת חומרים).</li>
</ol>

שיטה מבוססת אנזים פיברינוליטי לחקר מרכיבי תאי פקקת מוחית

<ol><li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Edoxaban+versus+dual+antiplatelet+therapy+for+leaflet+thrombosis+and+cerebral+thromboembolism+after+TAVR%3A+The+ADAPT-TAVR+Randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial.</a> Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).</li>
<li>Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+venous+sinus+thrombosis+incidence+is+higher+than+previously+thought%3A+a+retrospective+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral venous sinus thrombosis incidence is higher than previously thought: a retrospective population-based study.</a> Stroke. 47 (9), 2180-2182 (2016).</li>
<li>Sacco, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+updated+definition+of+stroke+for+the+21st+century%3A+a+statement+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association%2FAmerican+Stroke+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">An updated definition of stroke for the 21st century: a statement for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44 (7), 2064-2089 (2013).</li>
<li>Thalin, C., Hisada, Y., Lundstrom, S., Mackman, N., Wallen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps%3A+villains+and+targets+in+arterial%2C+venous%2C+and+cancer-associated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis+Thrombosis+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps: villains and targets in arterial, venous, and cancer-associated thrombosis.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 39 (9), 1724-1738 (2019).</li>
<li>Mocsai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+novel+functions+of+neutrophils+in+immunity%2C+inflammation%2C+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation, and beyond.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (7), 1283-1299 (2013).</li>
<li>Dhanesha, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKM2+promotes+neutrophil+activation+and+cerebral+thromboinflammation%3A+therapeutic+implications+for+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">PKM2 promotes neutrophil activation and cerebral thromboinflammation: therapeutic implications for ischemic stroke.</a> Blood. 139 (8), 1234-1245 (2022).</li>
<li>Ducroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombus+neutrophil+extracellular+traps+content+impair+tpa-induced+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Thrombus neutrophil extracellular traps content impair tpa-induced thrombolysis in acute ischemic stroke.</a> Stroke. 49 (3), 754-757 (2018).</li>
<li>Solomon, C., Ranucci, M., Hochleitner, G., Schochl, H., Schlimp, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+methodology+for+calculating+platelet+contribution+to+clot+strength+%28platelet+component%29+in+thromboelastometry+and+thrombelastography%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+Analgesia%22%5BJournal%5D)">Assessing the methodology for calculating platelet contribution to clot strength (platelet component) in thromboelastometry and thrombelastography.</a> Anesthesia and Analgesia. 121 (4), 868-878 (2015).</li>
<li>Daraei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+fiber+diameter+and+porosity+measurements+of+plasma+clots+in+scanning+electron+microscopy+images%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Automated fiber diameter and porosity measurements of plasma clots in scanning electron microscopy images.</a> Biomolecules. 11 (10), 1536(2021).</li>
<li>Abbasi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+thrombus+composition+in+thrombectomy+stroke+patients+with+longer+time+to+recanalization%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Diverse thrombus composition in thrombectomy stroke patients with longer time to recanalization.</a> Thrombosis Research. 209, 99-104 (2022).</li>
<li>C W Francis, a, Marder, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concepts+of+clot+lysis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Concepts of clot lysis.</a> Annual Review of Medicine. 37 (1), 187-204 (1986).</li>
<li>Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en (2019).</li>
<li>Fotso Fotso, A., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Diagnosis+of+tick-borne+african+relapsing+fevers%3A+latest+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Laboratory Diagnosis of tick-borne african relapsing fevers: latest developments.</a> Front Public Health. 3, 254(2015).</li>
<li>Liou, G. Y., Byrd, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+bioliquid+markers+for+pancreatic+cancer%3A+What+we+have+vs.+what+we+need%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Diagnostic bioliquid markers for pancreatic cancer: What we have vs. what we need.</a> Cancers (Basel). 15 (9), 2446(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> Journal of Visualized Experiments. 196, e65631(2023).</li>
<li>Ge, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+antithrombotic+protease+from+marine+worm+Sipunculus+Nudus%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">A Novel antithrombotic protease from marine worm Sipunculus Nudus.</a> International Journal Of Molecular Sciences. 19 (10), 3023(2018).</li>
<li>Talukder, M. A., Menyuk, C. R., Kostov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinguishing+between+whole+cells+and+cell+debris+using+surface+plasmon+coupled+emission%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Distinguishing between whole cells and cell debris using surface plasmon coupled emission.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1977-1991 (2018).</li>
<li>Shapiro, D. J., Hicks, L. A., Pavia, A. T., Hersh, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+prescribing+for+adults+in+ambulatory++care+in+the+USA%2C+2007-09%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Antibiotic prescribing for adults in ambulatory care in the USA, 2007-09.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (1), 234-240 (2014).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

sFE הוא סוכן פיברינוליטי שיכול לפרק את הפיברין באופן ישיר ויעיל12,16. כאן, נעשה שימוש ב-sFE כדי לפרק את הפיברין הצולב-מקושר של קרישי הדם במוח, לשחרר את התאים הסגורים בתוך קרישי הדם, ולנתח את מרכיבי התאים של הקרישים באופן איכותי וכמותי. נתוני המיקרוסקופ ובדיקת הדם השגרתית הצביעו על כך שהתאים הסגורים שוחררו מקרישי הדם. יתר על כן, סוגי התאים והמבנים של התאים ששוחררו לא הושפעו באופן משמעותי לאחר טיפול sFE. כך נוצרה לראשונה שיטה ייחודית, פשוטה ויעילה לניתוח מרכיבי התא...

מחלת כלי דם במוח היא אחת משלוש מחלות עיקריות שיכולות לאיים על בריאות האדם, ביניהן מחלת כלי דם איסכמית במוח מהווה יותר מ -80%. פקקת מוחית ופקקת ורידים מוחיים הן מחלות כלי הדם האיסכמיות המודאגות ביותר כיום, הנגרמות בעיקר על ידי קרישי דם מוחיים 1,2. אם הטיפול לא נעשה כראוי, יהיו לו שיעורי נכות ותמותה גבוהים ושיעור הישנות גבוה לאחר השחרור3.
לאחרונה, מספר גדל והולך של מחקרים הראו כי מרכיבי התאים של קרישי דם מוחיים נמצאים בקורלציה הדוקה עם האבחון, הטיפול והפרוגנוזה של פקקת מוחית 4,5,6. לכן, זמינות הנתונים על הרכב פקקת, במיוחד מרכיבי התא, חשובה לאבחון קליני וטיפול. למרבה הצער, השיטות הקיימות כיום אינן יכולות לנתח באופן מקיף את מרכיב קריש הדם באופן כמותי ואיכותי. לדוגמה, צביעה באתרו המבוססת על Martius Scarlett Blue יכולה לחקור רק את תאי הדם האדומים/לבנים של פרוסות מסוימות של קריש הדם7. צביעה באתרו המבוססת על אימונוהיסטוכימיה (IHC) יכולה לחקור רק רכיבי דם מוגבלים של פרוסות מסוימות של הקרישבאמצעות נוגדנים 8. השיטות המיקרוסקופיות מבוססות התמונה עוסקות רק במבנה הספציפי של קריש9. יתר על כן, כל השיטות האלה הן מייגעות וגוזלות זמן10. עד כה, לא דווחו ההליכים ללימוד כמותי ואיכותי של מרכיבי תאי תרומבי מוחיים. ידוע כי הפיברין הצולב עוטף בחוזקה את תאי הדם בקרישי הדם11. כתוצאה מכך, הפירוק הספציפי של הפיברין הצולב, ושחרור התאים השלמים, הוא קריטי לניתוח מדויק של מרכיבי התא.
עבודות קודמות בודדו אנזים פיברינוליטי מ-Sipunculus nudus (sFE), שיכול לפרק את הפיברין באופן ספציפי ומהיר12. כאן הוצעה שיטה לניתוח מרכיבי התא של תרומבי המוח בהתבסס על הפעילות הייחודית של sFE. פרוטוקול זה השתמש ב- sFE כדי לפרק את הפיברין של קרישי דם תחילה ולאחר מכן ניתח את מרכיבי התא על ידי צביעת רייט ובדיקת דם שגרתית13,14. על פי שיטה זו, ניתן ללמוד כמותית ואיכותית את מרכיבי התא של תרומבי מוחי. פרוטוקול פשוט ויעיל זה עשוי להיות מיושם עבור ניתוח רכיבי התא של קרישי דם אחרים.

<table><tbody><tr><td>לוחית תגובת אגלוטינציה</td><td>ROTEST</td><td>RTB-4003</td><td></td></tr><tr><td>מנתח המטולוגיה אוטומטי</td><td>SYSMEX</td><td>XNB2</td><td></td></tr><tr><td>מעקר קיטור בלחץ אנכי אוטומטי&nbsp;</td>צינור צנטריפוגה <td>SANYO</td><td>MLS-3750</td><td></td></tr><tr><td>(1.5 מ"ל)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>ספסל נקי</td><td>AIRTECH</td><td>BLB-1600</td><td></td></tr><tr><td>חממת טמפרטורה קבועה</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבות (100 מ"מ)</td><td>תנור</td><td></td> חימום וייבוש מסדרת NEST 704001 <td></td></tr><tr><td>DHG&nbsp;</td><td>SENXIN</td><td>DGG-9140AD</td><td></td></tr><tr><td>איזון אנליטי אלקטרוני</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>קרום מסנן (0.22 ומיקרו; m)</td> <td>Millex GP</td><td>SLGP033NK</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה מיקרו בקירור&nbsp;</td>שקופיות מיקרוסקופ <td>Cence</td><td>H1650-W</td><td></td></tr><tr><td></td><td>CITOGLAS</td><td>01-30253-50</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q התייחסות</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח רגילה</td><td>CISEN</td><td>H37022337</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אופטי</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE E100</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>מלח חוצץ פוספט</td> קצה פיפטה <td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td></td></tr><tr><td>(1 מ"ל</td>) <td>Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>קצה פיפטה (200 ומיקרו; L)</td> <td>Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>פיפטור (1 מ"ל)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>Pipettor (200 ומיקרו; L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>אזמל</td><td>MARTOR</td><td>23111</td><td></td></tr><tr><td>מתנד מערבולת בגודל קטן</td><td>Kylin-Bell</td><td>VORTEX KB3</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>היסטית</td><td>HKQS-180</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת צביעת רייט</td><td>Beyotime</td><td>C0135-500 מ"ל</td><td></td></tr></tbody></table>

גישה מקיפה לניתוח מרכיבי התא של קרישי דם מוחיים

A Comprehensive Approach to Analyze the Cell Components of Cerebral Blood Clots

פקקת מוחית, קריש דם בעורק מוחי או בווריד, הוא הסוג הנפוץ ביותר של אוטם מוחי. חקר מרכיבי התאים של קרישי דם מוחיים חשוב לאבחון, טיפול ופרוגנוזה. עם זאת, הגישות הנוכחיות לחקר מרכיבי התא של קרישי הדם מבוססות בעיקר על צביעה באתרה , שאינה מתאימה למחקר מקיף של מרכיבי התא מכיוון שהתאים עטופים היטב בקרישי הדם. מחקרים קודמים בודדו בהצלחה אנזים פיברינוליטי (sFE) מ-Sipunculus nudus, שיכול לפרק את הפיברין הצולב, באופן ישיר, ולשחרר את מרכיבי התא. מחקר זה ביסס שיטה מקיפה המבוססת על sFE לחקר מרכיבי התא של פקקת מוחית. פרוטוקול זה כולל המסת קרישי דם, שחרור תאים, צביעת תאים ובדיקת דם שגרתית. על פי שיטה זו, ניתן היה לחקור את מרכיבי התא באופן כמותי ואיכותי. התוצאות המייצגות של ניסויים בשיטה זו מוצגות.

בשלב הראשוני של תהליך ההשפלה, נמצא כי קרישי הדם היו בעלי מבנה קומפקטי אדום, ותמיסת העבודה הייתה חסרת צבע. לאחר הדגירה במשך 30 דקות, תמיסת העבודה הפכה לאדומה בהירה, מה שמצביע על כך שתאי הדם המוצלבים שוחררו לתמיסת העבודה. רוב הקרישים הומסו בעת הארכת זמן הדגירה ל-5 שעות, ותמיסת העבודה הפכה לאדומה בהירה. להיפך, לא היה שינוי משמעותי בקבוצת המלח הפיזיולוגית (NC) אפילו לאחר דגירה של 10 שעות (איור 1). תוצאות אלה הראו כי תאי הדם הסגורים בקרישי הדם שוחררו בהצלחה על ידי פרוטוקול זה.
<p class="jove_...

מחקר זה מתאר שיטה מהירה ויעילה לניתוח מרכיבי התא של קרישי דם מוחיים באמצעות המסת קרישי דם, צביעת תאים ובדיקת דם שגרתית.

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of ...

המחקר שלנו מתמקד בעיקר בפקקת מוחית. מחקרים רבים הראו כי רכיב תאי קריש דם במוח נמצא בקורלציה עם האבחון, הטיפול והפרוגנוזה של פקקת מוחית. במחקר זה ביססנו שיטה חדשנית לניתוח מרכיב תאי של קרישי דם מוחיים.אתגר זה בניתוח מרכיבי תאים של קרישי דם מוחיים הוא שחרור פיר שלם מקרישי דם. הסיבה לכך היא שקרישי הדם דלפו פריחת סיבים, תאי הדם בקרישי הדם. גישות ממוקדות להפעלת מרכיבי התא של קרישי הדם נעשות בצורה הטובה ביותר במצב C2, שאינו מתאים להתחלה מקיפה של רכיבי התא.להיפך, השיטה שלנו מאפשרת הארה כמותית ואיכותית של מרכיבי תאי המדרון המוחי. השיטה שלנו משתמשת באנזים פיברינוליטי כדי לעכב את הסיבים בקרישי הדם, ולשחרר את התאים השלמים. הנתונים המתקבלים מניתוח מרכיבי התא יקלו על לימוד מנגנוני פקקת המוח ברמה המולקולרית.הצוות שלנו ימשיך להתמקד בחקר פיברינוליזה ומערכת הקרישה.

a-comprehensive-approach-to-analyze-cell-components-cerebral-blood

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

מקור: Kim, D., et. al. הדמיה פלואורסצנטית קרובה לאינפרא אדום וטומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת להדמיה ישירה של טרומבואמבולי מוחי. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים הדמיה של פקקת מוחית בעכברים באמצעות הדמיית טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (מיקרו-CT). מודל של עכבר פקקת מוח מוזרק עם ננו-חלקיקי זהב ממוקדי פיברין הפועלים כחומר מנוגד. העכבר מונח על מצע של מכונת מיקרו-CT, והתמונות מתקבלות מזוויות מרובות. באמצעות תוכנה מתאימה, התמונות משוחזרות ומעובדות.

הדמיה של פקקת מוחית בעכבר באמצעות הדמיית טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת

אפיון תאי מיאלואידית מוח לאחר שבץ יכול להתבצע על ידי stereology בשיטת fractionator האופטית, או על ידי ניתוח התזרים cytometric של מוח לויקוציטים השעיות. שניהם טכניקות שימושיות לבצע הבחנה phenotypical מדויקת של תת תא מיאלואידית העיקרי נמצאים במוח איסכמי.

Stereological וcytometry זרימת אפיון תת-אוכלוסיות יקוציט במודלים של חולף או קבוע מוחין איסכמיה

דלקת ממלאת תפקיד מרכזי בפתוגנזה של שבץ איסכמי. עדויות הולכות וגדלות מצביעות על כך שהוא פועל כחרב פיפיות המחמירה פגיעה מוחית מוקדמת, אך גם תורמת לתיקון מאוחר יותר. פרוטוקול זה מתאר את הבידוד של תאי חיסון מהמוח האיסכמי ואת הפנוטיפ הציטומטרי הזרימה שלהם לאחר מכן.

בידוד תזרים Cytometric ניתוח של תאים חיסוניים ממוח עכבר איסכמי

פרוטוקול זה מתאר את היישום של ניאון בשילוב האינפרה-אדום הקרוב (NIRF) הדמיה וטומוגרפיה-מחושב מיקרו (microCT) המאפשר הדמיה thromboemboli מוחין. טכניקה זו מאפשרת כימות של נטל פקיק ואבולוציה. טכניקת דימות NIRF מדמיינת שכותרתו fluorescently פקיק במוח הניכר, ואילו טכניקת microCT מדמיינת פקיק בתוך חיות בעלות באמצעות-חלקיקי זהב.

משולב האינפרה-אדום הקרוב הדמיה פלורסנט וטומוגרפיה-מחושב מיקרו ישירות חזותי מוחין Thromboemboli

מטרת מאמר זה היא להציג שיטה המאפשרת שחזור תלת-ממדי של העץ כשאבדן בעכברים לאחר מיקרו שחושב טומוגרפיה והנחישות של אמצעי אחסון של מקטעי כל כלי יכול לשמש כדי לכמת vasospasm מוחין ב מודלים מאתר של דימום תת-עכבישי.

שיטה הנפחי עבור כימות Vasospasm המוחית במודל מאתר של דימום תת-עכבישי

אנו מציגים מודל מחלת כלי דם במבחנה לחקור אינטראקציות דם שלם עם אנדותל נגזר המטופל. מערכת זו מאפשרת לחקור תכונות טרומבוגניות של תאי אנדותל ראשוניים בנסיבות שונות. השיטה מתאימה במיוחד להעריך את הטיפול situ thrombogenicity ונוגדי קרישה בשלבים שונים של קרישה.

במודל מחלה מיקרופלוידיקית במבחנה ללמוד אינטראקציות דם-אנדותל שלם ודינמיקת קריש דם בזמן אמת

פרוטוקול זה מתאר טכניקה חדשנית של מדידת שלושת הפרמטרים החשובים ביותר של פגיעה מוחית איסכמית על אותה קבוצה של דגימות מוח מכרסמים. שימוש במדגם מוח אחד בלבד הוא יתרון גדול במונחים של עלויות אתיות וכלכליות.

מדידת בצקת מוחית לאחר שבץ מוחי, אזור אוטם ופירוק מחסום דם- מוח בערכה אחת של דגימות מוח מכרסמים

פרוטוקול זה מציג שיטות לאפיון התגובה הנוירו-דלקתית וההמודינמית לפגיעה מוחית טראומטית קלה ולשילוב נתונים אלה כחלק מניתוח מערכות רב-משתניות תוך שימוש ברגרסיה חלקית של ריבועים מזעריים.

ניתוח מערכות של התגובה הנוירו-דלקתית וההמודינמית לפגיעה מוחית טראומטית

פיברין אחראי על היווצרות קריש במהלך המוסטאזיס ופקקת. אסמים סוערים וhromboelastograhy (TEG) יכול להיות מנוצל ככלים סינרגטיים המספקים הערכה משלימה של קריש דם. שתי טכניקות אלה יחד יכולות לתת תובנה נוספת כיצד תנאי קרישה משפיעים על היווצרות קריש פיברין.

מינוף טורבידיות וטרומבולסטוגרפיה לאפיון קרישי דם משלימים

מודלים מסורתיים של שבץ פוטוטרומבוטי (PTS) גורמים בעיקר לצברי טסיות צפופים בעלי עמידות גבוהה לטיפול ליטי במפעיל פלסמינוגן רקמתי (tPA). כאן מוצג מודל PTS מורין שונה על ידי הזרקה משותפת של תרומבין וצבע רגיש לאור לצורך פוטואקטיבציה. מודל PTS משופר תרומבין מייצר קרישי טסיות מעורבים:פיברין והוא רגיש מאוד לפקקת tPA.

מודל שבץ פוטוטרומבוטי מועשר בפיברין ורגיש ל-tPA

עבודה זו מתארת בדיקה מיקרופלואידית המשתמשת במאמץ גזירה כדי להפעיל יצירת קרישי דם בדם ומאפיינת את הקריק באמצעות ממדים מרובים של קריאה. הבדיקה יכולה למדוד את הנטייה הפרותרומבוטית של דגימות דם, ולכן היא שימושית באבחון מחלות, גילוי תרופות, וכן במחקרים מכניים בסיסיים הקשורים לטרומבוזיס.

מבחן פרופיל תרומבוס: פלטפורמה מבוססת מיקרופלואידיקה לאפיון מקיף של תרומבוגנזה ביומכנית

למד שיטה חדשנית לניתוח מרכיבי תאים בקרישי דם מוחיים באמצעות פירוק פיברין וצביעת תאים. השיטה משחררת תאים שלמים לניתוח כמותי ואיכותי ומסייעת בשיפור אבחון וטיפול בטרומבוזה מוחית.

גישה מקיפה לניתוח מרכיבי התא של קרישי דם מוחיים

גלה סרטונים נוספים