Name: מודל חולף של חסימת עורק מוחי אמצעי חולף (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-11T14:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 32 s
Description: למד את פרוטוקול חסימת עורק מוחי אמצעי חולף בעכברים לחקר איסכמיה מוחית. השיטה משלבת הדמיית MRI והערכות התנהגותיות להערכת נזק איסכמי ויעילות טיפולים נוירופרוטקטיביים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחקר נתמך על ידי מענק PID2020-113202RB-I00 במימון Ministerio de Ciencia e Innovación (MCIN)/Agencia Estatal de Investigación (AEI), Gobierno de España/10.13039/501100011033 ו-"European Regional Development Fund (ERDF). דרך לעשות את אירופה". NCC ו- MAR קיבלו מלגות קדם-דוקטורט (PRE2021-099481 ו- PRE2018-085737, בהתאמה) שמומנו על ידי MCIN/AEI / 10.13039/501100011033 ועל ידי "הקרן החברתית האירופית (ESF) משקיעה בעתיד שלך". אנו מודים לפרנסיסקה רואיז-חאן וללאונרדו מארקס-קיסינוסקי על תמיכתם הטכנית. אנו מכירים בתמיכת מתקן הדמיית MRI של Institut d'Investigacions Biomèdiques August Pi i Sunyer (IDIBAPS). תוכנית Centres de Recerca de Catalunya (CERCA) של Generalitat de Catalunya תומכת ב- IDIBAPS.

עבודת בעלי חיים נעשתה בעקבות החוקים הקטלאניים והספרדיים (Real Decreto 53/2013) והדירקטיבות האירופיות, באישור הוועדה האתית (Comité Ètic d'Experimentació Animal, CEEA) של אוניברסיטת ברצלונה, וגופי הרגולציה המקומיים של Generalitat de Catalunya. מחקרים מדווחים בהתאם להנחיות ARRIVE . הליך זה מיועד לביצוע בעכברים בוגרים, החל מגיל 8 שבועות, ללא הגבלת גיל. דוגמאות להליך כירורגי שפותח בעכברי C57BL/6 בגילאי 10-12 שבועות מובאות כאן. יש לקחת בחשבון הבדלים אנטומיים בהתאם לזן העכבר.
1. הכנת בעלי חיים
<ol><li>לפני תחילת ההליך הכירורגי, לאסוף ולעקר את כל החומרים והכלים הדרושים. ערכו את שולחן הניתוחים עם כל החומרים הכירורגיים הדרושים (המפורטים בטבלת החומרים).</li>
	<li>מרדימים את בעל החיים באמצעות שאיפת איזופלורן בתערובת של חמצן ותחמוצת החנקן (30%/70%).</li>
	<li>מתן buprenorphine (ראה טבלה של חומרים) תת עורית במינון של 0.05 מ"ג / ק"ג BW כדי לספק שיכוך כאבים ולהקל על כל כאב ואי נוחות. הערה: שיכוך כאבים הוא חובה, אך פרוטוקולים שונים מתקבלים. סימני כאב ואי נוחות חייבים להיות נשלטים גם בימים הראשונים לאחר MCAo (ראה שלב 4). החל פתרונות מתקנים בעת הצורך.</li>
	<li>הכניסו את בעל החיים לקופסת אינדוקציה להרדמה (ראו טבלת חומרים) עם איזופלורן 5% עד שהוא מגיע למצב של הרדמה עמוקה (אובדן רפלקס בניקור כפות ורפלקס עיני).</li>
	<li>מקם את העכבר על שולחן הניתוחים ולהפחית את רמת isoflurane ל 1.5%, מועבר על ידי מסכת פנים. יש למרוח משחה וטרינרית כדי למנוע יובש בעיניים במהלך ההליך.</li>
	<li>שמור על טמפרטורת הגוף ב 37 ± 0.5 ° C נשלט על ידי בדיקה רקטלית המחוברת כרית חימום (ראה טבלה של חומרים).</li>
	<li>לגלח את החלק הגחוני של הצוואר ואת הראש (calvaria) עם סכין גילוח חשמלי. יש להסיר בזהירות שאריות פרווה ולחטא את אזורי העור שלוש פעמים בתנועות מעגליות עם חומר חיטוי על בסיס יוד ו-70% אלכוהול. .</li>
</ol>2. הערכת זרימת דם מוחית (CBF) באמצעות מד זרימה דופלר בלייזר (LDF)
<ol><li>עם מספריים, לעשות חתך על העור של הראש, לכיוון התפר sagittal, מן האוזניים לאזור בין העיניים.</li>
	<li>למשוך את העור ולהסיר את periosteum בצד ימין של הגולגולת.</li>
	<li>מצאו את הקואורדינטות (2.5 מ"מ רוחביות מברגמה) וחברו את מחזיק הדופלר (ראו טבלת חומרים) באמצעות ציאנואקרילט. לאחר שהדבק התייבש, חברו את בדיקת דופלר ובדקו את קריאת האות הנכונה.</li>
</ol>3. חסימת עורק מוחי אמצעי חולף (tMCAo)
<ol><li>הפוך את העכבר למצב שכיבה, וקבע אותו לשולחן הניתוחים עם סרט רפואי.</li>
	<li>בצע חתך קו אמצע בצוואר. משוך לרוחב את העור ואת בלוטות הרוק באמצעות retractors (ראה טבלה של חומרים) כדי לחשוף את אזור התרדמה.</li>
	<li>זהו את האנטומיה של כלי הדם של עורק התרדמה המשותף (CCA), האגודה למלחמה בסרטן וה-ECA, כמו גם את העורקים השונים הנגזרים מהם (מקסילרי ולשוני, בלוטת התריס העליונה, העורפית והפטריגופלטין) (איור 1A).</li>
	<li>נתקו את העורקים הראשיים מרקמת החיבור הסמוכה כדי שניתן יהיה לטפל בהם. הערה: היזהר במיוחד לא לפגוע בעצבים, במיוחד בעצב התועה, הפועל במקביל ל- CCA.</li>
	<li>יש לעטוף תפר משי 6-0 (ראו טבלת חומרים) סביב ה-ECA בהתפצלות המקסילרית/לשונית. אבטח היטב קשר כדי להפריע לצמיתות את זרימת הדם.</li>
	<li>מעבירים תפר שני סביב אותו עורק, בין הקשר הראשון לביפורקציה של CCA, ושומרים על קשר זה רופף.</li>
	<li>מניחים חוט שלישי סביב CCA וקושרים קשר מחליק שניתן להתיר בקלות. הערה: זה יכול להתבצע גם עם קליפס כלי דם, אבל החוט מאפשר יותר תנועה וגמישות. בשלב זה ניתן לראות ירידה ראשונה ב- CBF באות LDF.</li>
	<li>הניחו אטב כלי דם (ראו טבלת חומרים) המפריע לזרימת הדם מהאגודה למלחמה בסרטן.</li>
	<li>בצע חתך קטן ב- ECA, קרוב לאזור בו נמצא הקשר ההדוק.</li>
	<li>הכנס את המונופילמנט עד שהציפוי העבה נכנס לחלוטין ללומן העורקי.</li>
	<li>הדקו את הקשר השני כדי להחזיק את המונופילמנט בתוך העורק ומנעו מהלחץ שהדם מפעיל לדחוף אותו החוצה (איור 1B).</li>
	<li>הסר את אטב כלי הדם מהאגודה למלחמה בסרטן.</li>
	<li>חתכו את ה-ECA מתחת לקשר הראשון וסובבו את הגדם כדי לכוון אותו לכיוון ה-ICA (איור 1C).</li>
	<li>מקדמים את המונופילמנט דרך האגודה למלחמה בסרטן עד לנקודה שבה ה-MCA מסתעף. הערה: החסימה משתקפת בירידה פתאומית בזרימת הדם בקריאת LDF. אנו רואים חסימה מוצלחת כאשר הירידה ב- CBF גדולה מ -70% מהערך הבסיסי. אם מערכות מדידה CBF אינן זמינות, ניתן לציין את נקודת החסימה על ידי ההתנגדות להתקדמות, אשר בעכברים בוגרים היא בדרך כלל כ -11 מ"מ מההתפצלות של CCA.<ol><li>אם ההרדמה נמשכת במהלך תקופת החסימה, לפקח על העכבר ולשמור אותו תחת השגחה מתמדת במשך 45 דקות.</li>
		<li>במקרה שהעכבר מתעורר במהלך תקופת החסימה, תפרו את עור הצוואר במספר תפרים. מבלי לנתק את בדיקת LDF, הניחו את העכבר בקופסה מבוקרת טמפרטורה, המאפשרת התאוששות מהרדמה. הערה: זה נפוץ עבור העכבר להפגין התנהגות סיבובית ספונטנית במהלך תקופה זו, המעיד על חסימה מוצלחת.</li>
		<li>לאחר 40 דקות, יש להרדים את העכבר שוב לאחר אותם הליכי הרדמה וחיטוי כפי שמצוין בנקודות 1.4, 1.5 ו-1.7. הניחו אותו בחזרה על שולחן הניתוחים, והוציאו את התפרים מהצוואר.</li>
	</ol></li>
	<li>לאחר 45 דקות של חסימה, שחררו את הקשר המחזיק את המונופילמנט במקומו. משוך לאט ובעדינות על חוט הלהט ובדוק שמתרחשת התחדשות רקמות.</li>
	<li>משוך את חוט הלהט והדק את הקשר כדי למנוע איבוד דם.</li>
	<li>להתיר את קשר CCA. יש לוודא שאין נזק לדופן העורק.</li>
	<li>הסר את המחזירים ומקם מחדש את השרירים, הבלוטות והעור. תפרו את העור (6-0) ומרחו חומר חיטוי.</li>
	<li>נתקו את גשושית דופלר, ונתקו את המחזיק. לתפור ולחטא את העור של הראש.</li>
	<li>במהלך תקופת ההחלמה מהרדמה, השאירו את העכבר בכלוב המסופק עם תנור חימום כדי לשמור על הטמפרטורה. שמור אותו תחת השגחה מתמדת עד שהוא מתאושש לחלוטין מהרדמה. לאחר ההתאוששות, ניתן להחזיר את העכבר לכלוב שלו. הערה: דיור עם העשרה חברתית מומלץ מאוד. עם זאת, לעולם אל תערבבו עכברים המופעלים עם עכברים שאינם מופעלים באותו כלוב ללא כל הפרדה פיזית על מנת למנוע תוקפנות.</li>
</ol>4. טיפול לאחר הניתוח
<ol><li>מעת לעת לפקח על בעלי החיים בהתאם לנהלים ולתקנות שנקבעו על פי התקנות המקומיות. לספק טיפול משכך כאבים בלוח הזמנים המתאים כדי למזער את הכאב לאחר הניתוח. הערה: במחקר הנוכחי, אותו משכך כאבים יושם כמו בתחילת ההתערבות (Buprenorphine 0.05mg / kg BW) ב 6 שעות ו 24 שעות לאחר הניתוח.</li>
	<li>לבצע המתת חסד כאשר פרמטרי הפיקוח מצביעים על כך, בהתאם לפרוטוקולים המאושרים על ידי המוסד.</li>
	<li>מדי יום לפקח על המשקל של בעלי החיים. לספק מזון רך לבעלי החיים בימים הראשונים לאחר הניתוח. בנוסף, לחות אותם על ידי הזרקה תת עורית של מלוחים (200 μL) מיד לאחר הניתוח מעת לעת לאחר מכן אם הוא ציין כי העכבר אינו hydrate בכוחות עצמו. סדרו את המזון והמים בצורה שתהיה נגישה לבעל החיים.</li>
	<li>לאחר השלמת מחקר in vivo , הרדימו את העכברים, הרדימו אותם והוציאו את רקמת המוח לניתוח היסטופתולוגי נוסף (במידת הצורך).</li>
</ol>

מודל של איסכמיה מוחית חולפת על ידי חסימה של עורק מוחי אמצעי

<ol><li>Siddiqi, A. Z., Wadhwa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+acute+stroke%3A+current+practices+and+future+horizons%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Revascularization+Medicine%22%5BJournal%5D)">Treatment of acute stroke: current practices and future horizons.</a> Cardiovascular Revascularization Medicine. 49, 56-65 (2023).</li>
<li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+cerebral+ischemia+in+the+rat%3A+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Focal cerebral ischemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 1, 53-60 (1981).</li>
<li>Koizumi, J., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.+A+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Japanese Journal of Stroke. 8, 1-8 (1986).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, R., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia%3A+Models%2C+methods%2C+and+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia: Models, methods, and outcomes.</a> Neuropharmacology. 55, 257-270 (2008).</li>
<li>Seto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+ischemic+stroke+in+awake+freely+moving+mice+reveals+that+isoflurane+anesthesia+can+mask+the+benefits+of+a+neuroprotection+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroenergetics%22%5BJournal%5D)">Induction of ischemic stroke in awake freely moving mice reveals that isoflurane anesthesia can mask the benefits of a neuroprotection therapy.</a> Frontiers in Neuroenergetics. 6, 1(2014).</li>
<li>Díaz-Marugan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poststroke+lung+infection+by+opportunistic+commensal+bacteria+is+not+mediated+by+their+expansion+in+the+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Poststroke lung infection by opportunistic commensal bacteria is not mediated by their expansion in the gut microbiota.</a> Stroke. 54 (7), 1875-1887 (2023).</li>
<li>Xie, L., Kang, H., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+transient+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+awake+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Sciences%22%5BJournal%5D)">A novel model of transient occlusion of the middle cerebral artery in awake mice.</a> Journal of Natural Sciences. 2 (2), e176(2016).</li>
<li>Arbaizar-Rovirosa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aged+lipid-laden+microglia+display+impaired+responses+to+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Aged lipid-laden microglia display impaired responses to stroke.</a> EMBO Molecular Medicine. 15 (2), e17175(2023).</li>
<li>Orsini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+mannose-binding+lectin+confers+long-lasting+protection+with+a+surprisingly+wide+therapeutic+window+in+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Targeting mannose-binding lectin confers long-lasting protection with a surprisingly wide therapeutic window in cerebral ischemia.</a> Circulation. 126 (12), 1484-1494 (2012).</li>
<li>Majid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+vulnerability+to+permanent+focal+cerebral+ischemia+among+3+common+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Differences in vulnerability to permanent focal cerebral ischemia among 3 common mouse strains.</a> Stroke. 31, 2707-2714 (2000).</li>
<li>Rogers, D. C., Campbell, C. A., Stretton, J. L., Mackay, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+between+motor+impairment+and+infarct+volume+after+permanent+and+transient+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Correlation between motor impairment and infarct volume after permanent and transient middle cerebral artery occlusion in the rat.</a> Stroke. 28, 2060-2065 (1997).</li>
<li>Hedna, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validity+of+Laser+Doppler+flowmetry+in+predicting+outcome+in+murine+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+and+Interventional+Neurology%22%5BJournal%5D)">Validity of Laser Doppler flowmetry in predicting outcome in murine intraluminal middle cerebral artery occlusion stroke.</a> Journal of Vascular and Interventional Neurology. 8 (3), 74-82 (2015).</li>
<li>Yin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+speckle+contrast+imaging+for+blood+flow+monitoring+in+predicting+outcomes+after+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Laser speckle contrast imaging for blood flow monitoring in predicting outcomes after cerebral ischemia-reperfusion injury in mice.</a> BMC Neuroscience. 23, 80(2022).</li>
<li>Thakkar, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+relevance+of+elevated+blood+pressure+after+ischemic+stroke+in+the+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Therapeutic relevance of elevated blood pressure after ischemic stroke in the hypertensive rats.</a> Hypertension. 75 (3), 740-747 (2020).</li>
<li>Yu, X., Feng, Y., Liu, R., Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermia+protects+mice+against+ischemic+stroke+by+modulating+macrophage+polarization+through+upregulation+of+interferon+regulatory+factor-4%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Inflammation+Research%22%5BJournal%5D)">Hypothermia protects mice against ischemic stroke by modulating macrophage polarization through upregulation of interferon regulatory factor-4.</a> Journal of Inflammation Research. 14, 1271-1281 (2021).</li>
<li>Denorme, F., Portier, I., Kosaka, Y., Campbell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperglycemia+exacerbates+ischemic+stroke+outcome+independent+of+platelet+glucose+uptake%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">Hyperglycemia exacerbates ischemic stroke outcome independent of platelet glucose uptake.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 19, 536-546 (2021).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין ניגודי עניינים.

הליך tMCAo intraluminal הוא המודל הנפוץ ביותר של איסכמיה מוחית מוקדית עם רפרפוזיה במחקר בסיסי. כיום, עכברים הם המודל המועדף על בעלי חיים בשל זמינותם של זנים מהונדסים גנטית. עם זאת, חיוני להכיר בכך שעכברים מהונדסים גנטית והרקע הגנטי שלהם יכולים להשפיע על כלי הדם במוח. נוכחות של זרימת בטחונות ואנסטומוזות בין טריטוריות עורקים שונות יכולה להשפיע באופן משמעותי על התוצאות של הליכים ניסיוניים11.
בעת ביצוע הליך זה, יש לקחת בחשבון נקודות מכריעות מסוימות. פציעות יכולות להתרחש מחו...

שבץ מוחי הוא מחלה הרסנית המשפיעה על כ -15 מיליון אנשים ברחבי העולם מדי שנה, על פי ארגון הבריאות העולמי. כשליש מהחולים נכנעים למצב, ושליש נוסף חווים נכות לצמיתות. שבץ מוחי הוא פתולוגיה מורכבת המערבת סוגי תאים שונים, כגון תאי חיסון עצביים והיקפיים, כלי דם ותגובות מערכתיות1. הרשת המורכבת של תגובות המופעלות על ידי שבץ ברמת המערכות אינה ניתנת כיום לשכפול באמצעות מודלים במבחנה . לפיכך, מודלים ניסיוניים של בעלי חיים חיוניים כדי להתעמק במנגנוני המחלה ולפתח ולבחון טיפולים חדשים. נכון לעכשיו, פרפוזיה מוקדמת של רקמות היא ההתערבות המאושרת היחידה, או באמצעות פקקת עם מפעיל פלסמינוגן מסוג רקמה (tPA) או טרומבקטומיה אנדווסקולרית1.
חסימות של עורק המוח האמצעי (MCA) שכיחות בחולי שבץ. כתוצאה מכך, מודלים של מכרסמים של חסימת MCA חולפת (tMCAo) פותחו בתחילה בחולדות 2,3,4. כיום, עכברים מהונדסים גנטית הם בעלי החיים הנפוצים ביותר במודלים ניסיוניים של שבץ. במחקר זה אנו מתארים מודל זעיר פולשני של tMCAo תוך לומינלי בעכברים. הגישה מתבצעת דרך עורק התרדמה בגובה הצוואר, ללא כריתת גולגולת.
משך תקופת החסימה הוא גורם קריטי הקובע את היקף הנגע האיסכמי. אפילו חסימות קצרות של 10 דקות יכולות לגרום למוות עצבי סלקטיבי ללא אוטם נראה לעין, בעוד שחסימות ארוכות יותר, הנמשכות בדרך כלל 30 עד 60 דקות, גורמות למידה מסוימת של אוטם מוחי. שלא כמו הענפים הפרוקסימליים והדיסטליים של ה-MCA המספקים את קליפת המוח ויש להם בטחונות, העורקים הלנטיקולו-סטריאטליים המספקים דם לסטריאטום חסרים בטחונות5. כתוצאה מכך, יש ירידה גדולה יותר בזרימת הדם בסטריאטום מאשר בקליפת המוח לאחר tMCAo. לפיכך, חסימות של 30 דקות או פחות משפיעות בדרך כלל על הסטריאטום אך לא על קליפת המוח, בעוד שחסימות ארוכות יותר, מ-45 דקות ואילך, יוצרות לעתים קרובות נגע איסכמי בכל טריטוריית MCA, כולל הסטריאטום וקליפת המוח הגבית-צדית.
כדי להבטיח את רווחתם של העכברים, אנו מנהלים משככי כאבים לפני ההליך ומשתמשים בהרדמה במהלך הניתוח. עם זאת, הרדמה יכולה להציג שינויים מלאכותיים בפיזיולוגיה של העכבר ולהשפיע על כמה מדדי תוצאה6. ההתערבות הכירורגית, כאשר היא מבוצעת על ידי צוות מנוסה, נמשכת בדרך כלל כ -15 דקות להשראת MCAo. לאחר מכן, הזמן הכולל תחת הרדמה תלוי בתקופת החסימה. בניסויים בהם יש חשיבות מכרעת למזעור ההרדמה, שלב חלופי בהליך כרוך בהפסקת ההרדמה במהלך תקופת החסימה והגבלתה רק לשלבים הכירורגיים להחדרה והוצאה של חוט הלהט המסתיר את ה-MCA. גישה זו מפחיתה את משך ההרדמה וממזערת את ההשפעות המלאכותיות האפשריות שלה על מודל הניסוי 7,8. לכן, השיטה של גרימת איסכמיה מוקדית חולפת מוצגת על ידי חסימה intraluminal של MCA עם שתי גרסאות: עם העכבר מורדם במהלך כל תקופת חסימה או עם העכבר ער בתקופה זו. בכל מקרה, יש לבצע ניתוח דמה במקביל להתערבות המתבצעת בעכברים האיסכמיים. בנוסף, נתונים על הערכת תוצאות מסופקים כפי שנמדדו על ידי מבחנים התנהגותיים ו- MRI בנקודות זמן שונות לאחר רפרפוזיה. לבסוף, נדונים הגורמים העיקריים שיש לקחת בחשבון בעת יישום הליך הניסוי.

<table><tbody><tr><td>6/0 תפר&nbsp;</td><td>קשירה וסקולרית</td> <td>של אראגו</td><td></td></tr><tr><td>6/0 תפר עם מחט מעוקלת</td><td>תפרי עור</td><td>אראגו</td><td></td></tr><tr><td>9 מ"ג/מ"ל מלח</td><td>Fresenius Kabi</td><td>CN616003 EC</td><td>ללחות</td></tr><tr><td>מערכת הרדמה</td><td>SurgiVet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מחזירים קהים, 1 מ"מ רוחב</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-09</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfine</td><td>Buprex</td><td></td><td>עבור מהדק לשיכוך כאבים</td></tr><tr><td>מריחת מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>S& T CAF4</td><td></td></tr><tr><td>Dumont מיני מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>M3S 11200-10</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>91106-12</td><td></td></tr><tr><td>דבק</td><td>Loctite</td><td></td><td>כדי להדביק בדיקת LDF לגולגולת</td></tr><tr><td>מד חוזק אחיזה</td><td>IITC Life Science Inc.</td><td>#2200</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td>B-Braun</td><td>CN571105.8</td><td></td></tr><tr><td>LDF</td><td>Perimed Perimed</td><td>Periflux System 5000</td><td></td></tr><tr><td>LDF מחזיקי בדיקה</td><td>Perimed</td><td>PH 07-4</td><td></td></tr><tr><td>סרט</td><td></td><td></td><td></td>רפואי</tr><tr><td>מגנט MRI</td><td>Bruker BioSpin, Ettlingen, גרמניה</td><td></td><td>BioSpec 70/30 סורק בעלי חיים אופקי&nbsp;</td></tr><tr><td>מחזיק מחט עם חותך תפרים</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-14</td><td></td></tr><tr><td>נימה ניילון</td><td>Doccol</td><td>701912PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>כלוב התאוששות עם כרית</td><td></td><td></td><td></td>חימום</tr><tr><td>מספריים Sirgical</td><td>Science</td><td>Tools 91401-12</td><td></td></tr><tr><td>ערכת צריבה לכלי קטן</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-00</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ ו אור קר</td><td>Leica</td><td>M60</td><td></td></tr><tr><td>תפר מלקחיים קשירת</td><td>Fine Science Tools</td><td>18025-10</td><td></td></tr><tr><td>תרמוסטט, בדיקה רקטלית ומשטח עכבר</td><td>Letica Science Instruments</td><td>LE 13206</td><td></td></tr><tr><td>Vannas מספריים קפיציים (4 מ"מ קצה חיתוך)</td> <td>Fine Science Tools</td><td>15019-10</td><td></td></tr><tr><td>מהדקי כלי כלי</td><td>דם Fine Science</td><td>Tools 00396-01</td><td></td></tr></tbody></table>

מודל חולף של חסימת עורק מוחי אמצעי חולף

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Stroke

שבץ עומד כגורם עיקרי למוות או נכות כרונית ברחבי העולם. עם זאת, הטיפולים האופטימליים הקיימים מוגבלים לטיפולי רפרפוזיה בשלב החריף של שבץ איסכמי. כדי לקבל תובנות על הפיזיופתולוגיה של שבץ מוחי ולפתח גישות טיפוליות חדשניות, מודלים של מכרסמים in vivo של שבץ ממלאים תפקיד בסיסי. זמינותם של בעלי חיים מהונדסים גנטית הניעה במיוחד את השימוש בעכברים כמודלים ניסיוניים לשבץ.
בחולי שבץ, חסימה של עורק המוח האמצעי (MCA) היא תופעה שכיחה. כתוצאה מכך, המודל הניסיוני הנפוץ ביותר כולל חסימה תוך לומינלית של MCA, טכניקה זעיר פולשנית שאינה דורשת כריתת גולגולת. הליך זה כולל החדרת מונופילמנט דרך עורק התרדמה החיצוני (ECA) וקידומו דרך עורק התרדמה הפנימי (ICA) עד שהוא מגיע לנקודת ההסתעפות של MCA. לאחר חסימת עורקים של 45 דקות, המונופילמנט מוסר כדי לאפשר רפרפוזיה. לאורך כל התהליך, זרימת הדם במוח מנוטרת כדי לאשר את ההפחתה במהלך חסימה ולאחר מכן התאוששות עם זילוח. תוצאות נוירולוגיות ורקמות מוערכות באמצעות בדיקות התנהגותיות ומחקרי דימות תהודה מגנטית (MRI).

ישנן גישות שונות להערכת התוצאה של הליך tMCAo. שיטות דימות מוחי In vivo (MRI) ובדיקות התנהגותיות משמשות כאן.
עכברים מפתחים נגעים איסכמיים במוח, המשפיעים בעיקר על השטח המסופק על ידי MCA ipsilateral לחסימה, כגון הסטריאטום וקליפת המוח הגבית. קיימות מספר שיטות לקביעת היקף הנגע, כולל צביעת רקמות 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC), צביעה היסטולוגית (hematoxylin/eosin, thionine אצטט), ושיטות דימות מוחי in vivo כמו MRI. MRI נבחר כאן בשל אופיו הלא פולשני והיכולת להשתמש באותה רקמ...

פרוטוקול זה מתאר את המודל של איסכמיה מוחית מוקדית חולפת בעכברים באמצעות חסימה תוך לומינלית של עורק המוח האמצעי. בנוסף, דוגמאות להערכת תוצאות מוצגות באמצעות הדמיית תהודה מגנטית ומבחני התנהגות.

Stroke stands as a major cause of death or chronic disability globally. Nevertheless, existing optimal treatments are limited to reperfusion therapies ...

מודל חסימת עורק המוח האמצעי נמצא בשימוש נרחב כדי לדמות שבץ איסכמי בעכברים. מודל זה מאפשר לחקור התקדמות זמנית של נזק איסכמי, להעריך את היעילות של סוכני נוירופרוטקציה, ולחקור את תפקידם של גנים ומסלולים ספציפיים בפתולוגיה של שבץ במטרה סופית למצוא טיפולים פוטנציאליים חדשים. יישום טכניקות דימות מוחי כגון MRI מאפשר לבצע אבחון טוב יותר, לשפר את הערכת התוצאות ולהפחית את מספר בעלי החיים הדרושים בכל מחקר.פרוטוקול זה מציע הסבר ברור ומפורט של הטכניקה הנפוצה ביותר לגרימת חסימת עורק מוחי אמצעי חולף. יתר על כן, הוא מיישם את הטכניקה על ידי הצגת שינוי מדויק של נסיגה הרדמה במהלך זמן החסימה, הפחתת ההשפעה המזיקה של זמן הרדמה ממושך.

transient-middle-cerebral-artery-occlusion-model-of-stroke

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

פילמנטיות חסימה של עורק המוח התיכון הוא מודל משותף לחקר שבץ איסכמי בעכברים.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

אנו מדגימים את הוידאו שיטה לייצור באמצע חסימה בעורק המוח בעכברים בוגרים באמצעות monofilament intraluminal. כמו כן, אנו מראים כיצד להעריך את מידת אוטם מוחי על ידי מכתים 2,3,5-triphenyltetrazolium כלוריד (TTC).

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

סרטון זה מתאר את ההליך לפתח שבץ חולף במודל מורין באמצעות חסימה מבוססת נימה מצופה סיליקון של עורק המוח האמצעי. המודל שפותח מחקה שבץ אנושי, ובכך מסייע לחקור אסטרטגיות טיפוליות חדשניות לטיפול בשבץ.

מודל שבץ חולף מבוסס החדרת נימה: הליך כירורגי לביצוע חסימת עורק מוחי אמצעי במוח מורין

אנו מתארים שיטת שחזור מאוד לחסימה הקבועה של כלי דם במוח גדולים מכרסם. טכניקה זו יכולה להיות מושלמת עם מעט מאוד נזק היקפי, איבוד דם מינימאלי, שיעור גבוה של הישרדות לטווח ארוך, ונפח אוטם עקבי בקנה אחד עם האוכלוסייה הקלינית בבני האדם.

חסימת כלי דם מוחי בלתי הפיך<em&gt; דרך</em&gt; Ligature וחיתוך רוחב זוגי

מודלים עכבריים שונים של חסימת עורק המוח אמצעית (MCAO) נמצאים בשימוש נרחב בחקר המוח ניסיוני. הנה, אנחנו מדגימים את המודל של MCAO דיסטלי הקבוע transcranial אשר מייצר אוטם קליפת המוח עקבי של גודל המתאים לנזק שהוטל על ידי הרוב המכריע של מקרי שבץ איסכמי אנושיים.

דוגמנות שבץ בעכברים: קרישה קבועה של עורקי דיסטלי התיכון מוחין

על מנת להבין את פתופיזיולוגיה של שבץ, חשוב להשתמש במודלים אמינים. מאמר זה יתאר את אחד דגמי שבץ הנפוצים ביותר בשימוש בעכברים, כינה את חסימת עורק המוח האמצעי (MCAo) המודל (המכונה גם נימת intraluminal או מודל תפר) עם reperfusion.

גישה ניתוחית עבור העורקים התיכון ספיגה מוחין ושבץ reperfusion מושרה של עכברים

שבץ יילודים הוא גורם משמעותי לפגיעה מוחית מוקדמת הדורש מודל תרגומי עם דפוסי פגיעה מוקדית עקביים ויכולת שחזור גבוהה על מנת לאפשר מחקר. מחקר זה מתאר את ההליך הכירורגי המפורט ליצירת פגיעת איסכמיה-רפרפרפוזיה מוקדית חד-צדדית שאינה דימומית במכרסמים בעלי ערך לטווח מלא.

עורקי חלוף דגם ספיג תיכון שיתוק של שבץ ילודים אצל חולדות P10

מודלים שונים של אומת עורק המוח האמצעי (MCAo) משמשים במחקר שבץ ניסיוני. כאן, מודל שבץ ניסיוני של MCAo חולף דרך העורק הראשי החיצוני (ECA) מתואר, שמטרתו לחקות שבץ אנושי, שבו פקקת המוח מוסרת עקב תמוגה קריש ספונטני או טיפול.

שבץ דוגמנות בעכברים: אומת עורק מוחי אמצעי חולף דרך העורק הראשי החיצוני

פרוטוקול זה מדגים מודל שבץ עכבר ייחודי עם אוטם בגודל בינוני ושיעור הישרדות מצוין. מודל זה מאפשר לחוקרי שבץ פרה-קליניים להאריך את משך האיסכמיה, להשתמש בעכברים מזדקנים ולהעריך תוצאות תפקודיות ארוכות טווח.

מודל שונה של חסימת עורק מוחי אמצעי טרנס-גולגולתי לחקר תוצאות שבץ מוחי בעכברים מזדקנים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל חולדה של חסימה/רפרפוזיה של עורק המוח האמצעי המשמר את המבנה האנטומי של כלי המוח מבלי לגרום נזק.

מודל חולדה של חסימה/עירוי מחדש של עורק המוח האמצעי מבלי לפגוע במבנה האנטומי של כלי המוח

פרוטוקול זה מתאר את תהליך ההכנה לרפרפוזיה של חסימת עורק המוח התיכון דרך עורק התרדמה המשותף.

הכנת מודל שונה עבור זילוח חסימת עורק מוחי אמצעי

למד את פרוטוקול חסימת עורק מוחי אמצעי חולף בעכברים לחקר איסכמיה מוחית. השיטה משלבת הדמיית MRI והערכות התנהגותיות להערכת נזק איסכמי ויעילות טיפולים נוירופרוטקטיביים.

מודל חולף של חסימת עורק מוחי אמצעי חולף

גלה סרטונים נוספים