Name: הערכה מיקרוביולוגית מהירה באתר למחלות זיהומיות ריאתיות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-01T13:40:00.000+00:00
Duration: 3 min 22 s
Description: למדו את שיטת M-ROSE להערכה מיקרוביולוגית מהירה באתר למחלות זיהומיות ריאתיות. פרוטוקול זה משלב הכנת שקפים, צביעה ופיענוח תוצאות בזמן אמת לשיפור קבלת החלטות קליניות ומניעת שימוש מיותר באנטיביוטיקה רחבת טווח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מעריכים את פרויקט התמריץ וההדרכה לביצועים של מוסד המחקר המדעי בצ'ונגצ'ינג (jxyn-2021-1-15 ו- jxyn-2021-2-6) לתמיכה כספית.

הניסוי הקליני אושר על ידי ועדת האישורים של בית החולים צ'ונגצ'ינג לרפואה סינית מסורתית (מס '2022-ky-31). המקרה הטיפוסי כלל חולה שאובחן עם דלקת ריאות פנאומוציסטיס, והתקבלה הסכמה מדעת מהמטופל.
1. דרישות ציוד וחומרים עבור ROSE
<ol><li>ציוד: עיין בקובץ טבלת החומרים עבור הציוד המשמש בפרוטוקול זה. הערה: שימוש במיקרוסקופ ציטולוגי ייעודי ובמערכת הדמיה גרפית הוא הכרחי (איור 1A).</li>
	<li>הכנת חומרים (ראה טבלת חומרים).<ol><li>הכינו שקופיות סטריליות של תרביות תאים (עם הדבקה חזקה של תאים), נייר סופג, כפפות לטקס ללא אבקה, מחטי מזרק חד פעמיות בנפח 2.5-5 מ"ל, והניחו את הסט המלא של תמיסות צביעה של Diff Quik (DQ) בצנצנות צביעת זכוכית עם מכסים אטומים לטיפול קל (איור 1).</li>
	</ol></li>
</ol>2. זרימת עבודה של M-ROSE
<ol><li>הכנת שקופיות ציטולוגיות הערה: קיימות דרכים רבות להכנת שקופיות, ולהלן מספר שיטות הכנה נפוצות.<ol><li>גלגול שקופיות הערה: ודא אובדן מינימלי של דגימת רקמה במהלך תהליך זה.<ol><li>חלצו חלקיקי רקמה באמצעות מחט מזרק חד-פעמית עם קיבולת של 2.5-5 מ"ל (איור 2A).</li>
			<li>פורסים שטח עגול, בקוטר של כ-1 ס"מ ובעובי בינוני, מהשליש הפנימי לחיצוני של הקצה המוכתם (הקצה בעל חיבור תאים חזק) על שקופית הציטולוגיה הסטרילית.</li>
		</ol></li>
		<li>מברשת שקופיות הערה: שיטה זו ישימה לדגימות המתקבלות באמצעות מברשות תאים קונבנציונליות, מברשות תאים מונעות זיהום או מברשות תאים עדינות במיוחד, כמו גם דגימות נוזליות למחצה כגון כיח ונוזלי גוף צמיגים.<ol><li>האריכו את ראש המברשת והניחו אותו על השליש הדיסטלי של מגלשת הזכוכית הציטולוגית הסטרילית (למגלשה תכונות היצמדות תאים חזקות) לקבלת שטח מלבני של כ-2X1 ס"מ בעובי בינוני.</li>
		</ol></li>
		<li>ריסוס שקופיות<ol><li>מקם את מחט הניקוב בשליש מהקצה המוכתם של שקופית ציטולוגיה סטרילית עם היצמדות תאים חזקה.</li>
			<li>הפעילו לחץ אוויר על קצה המחט החודרת והכניסו אותו מהצד הפנימי כלפי חוץ, ויצרו אזור עגול בעובי בינוני בקוטר של כ-1 ס"מ.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>צביעת שקופית ציטולוגית הערה: ארגון הבריאות העולמי (WHO) ממליץ על צביעה מהירה של שקופית ציטולוגית ROSE באמצעות צבע5 של Diff. ניתן לעשות שימוש חוזר בצבע Diff אך לא לחזור עליו פעמים רבות. אם יש משקעים, יש לסנן אותם לאחר השימוש. צביעה עמוקה מדי יכולה להיות דה-צבעית כראוי על ידי מתנול או אלכוהול, רצוי לא צבוע יותר. אם הצביעה עמוקה מדי או רדודה מדי, יש להתאים את זמן הצביעה או את ריכוז נוזל העבודה; לערך ה- pH יש השפעה מסוימת על הצביעה, והמגלשה צריכה להיות נקייה וללא זיהום חומצה ואלקלי. גם תמיסת Diff A וגם תמיסת Diff B נדיפים ויש לאטום ולאחסן אותן לאחר השימוש.<ol><li>השקיעו את השקופית בתמיסת Diff A למשך 10-30 שניות (איור 2B), ואז שטפו אותה באמבט הצבע PBS כדי להסיר תמיסת Diff A עודפת ונערו בעדינות את כל החיץ שנותר (איור 2C).</li>
		<li>לאחר מכן, טבלו את השקופית בתמיסת Diff B למשך 20-40 שניות (איור 2E).</li>
		<li>לבסוף, נקו את השקופית במיכל צביעת המים (איור 2F), נגבו את שאריות הנוזל של המגלשה עם נייר סופג (איור 2D), וסיימו לצבוע. הערה: M-ROSE מאפשר הדמיה ישירה של מיקרואורגניזמים פתוגניים ומקל על הערכת איכות הדגימות הנשימתיות, ומאפשר הבחנה בין זיהום ללא זיהום וכן זיהום וזיהום, שיש לו משמעות מנחה להערכת חומרת הזיהום והפרוגנוזה. פרק הדיון יכסה היבט זה מכיוון שהוא אינו כרוך בהליכים ניסיוניים כלשהם.</li>
	</ol></li>
</ol>

שיפור הטיפול בזיהומים ריאתיים באמצעות M-ROSE

<ol><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+value+of+endoscopic+ultrasound-guided+fine+needle+aspiration+with+rapid+on-site+evaluation+performed+by+endoscopists+in+solid+pancreatic+lesions%3A+A+prospective%2C+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Diagnostic value of endoscopic ultrasound-guided fine needle aspiration with rapid on-site evaluation performed by endoscopists in solid pancreatic lesions: A prospective, randomized controlled trial.</a> J Gastroenterol Hepatol. 37 (10), 1975-1982 (2022).</li>
<li>Bruno, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+cost+effectiveness+of+rapid+on+site+examination+%28ROSE%29+in+management+of+patients+with+mediastinal+lymphadenopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Efficacy and cost effectiveness of rapid on site examination (ROSE) in management of patients with mediastinal lymphadenopathies.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 17 (11), 1517-1522 (2013).</li>
<li>Li, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiology+rapid+on-site+evaluation%3A+a+better+method+for+Mucoid+Pseudomonas+Aeruginosa+diagnosis+in+bronchiectasic+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Microbiology rapid on-site evaluation: a better method for Mucoid Pseudomonas Aeruginosa diagnosis in bronchiectasic patients.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 26 (5), 1738-1742 (2022).</li>
<li>Tao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+microbiological+rapid+on-site+evaluation+in+respiratory+intensive+care+units%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Application of microbiological rapid on-site evaluation in respiratory intensive care units: a retrospective study.</a> Ann Transl Med. 10 (1), 7(2022).</li>
<li>Yan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+value+of+microbiology+rapid+on-site+evaluation+of+sepsis+caused+by+pulmonary+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">The value of microbiology rapid on-site evaluation of sepsis caused by pulmonary infection.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 27 (12), 5862-5868 (2023).</li>
<li>Muri, R., Trippel, M., Borner, U., Weidner, S., Trepp, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+rapid+on-site+evaluation+on+the+quality+and+diagnostic+value+of+thyroid+nodule+fine-needle+aspirations%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">The impact of rapid on-site evaluation on the quality and diagnostic value of thyroid nodule fine-needle aspirations.</a> Thyroid. 32 (6), 667-674 (2022).</li>
<li>Wang, Z., Shi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+rapid+on-site+evaluation+in+contemporary+pediatric+interventional+respiratory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Practical+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Application of rapid on-site evaluation in contemporary pediatric interventional respiratory diseases.</a> Chinese Journal of Practical Pediatrics. 12, 470-475 (2019).</li>
<li>Shah, P. L., Herth, F. J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Respiration%22%5BJournal%5D)">Progress in interventional pulmonology.</a> Respiration. 95 (5), 287-288 (2018).</li>
<li>Hsia, D., Musani, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology.</a> Med Clin North Am. 95 (6), 1095-1114 (2011).</li>
<li>Moore, A. J., Mercer, R. M., Musani, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Advances in interventional pulmonology.</a> Clin Chest Med. 39 (1), 271-280 (2018).</li>
<li>Majid, A., Fernandez-Bussy, S., Folch, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology+and+solitary+pulmonary+nodule%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Bronconeumol%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology and solitary pulmonary nodule.</a> Arch Bronconeumol. 54 (10), 497-498 (2018).</li>
<li>Ali, M. S., Sorathia, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palliative+care+and+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Palliative care and interventional pulmonology.</a> Clin Chest Med. 39 (1), 57-64 (2018).</li>
<li>Czarnecka, K., Yasufuku, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology%3A+focus+on+pulmonary+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology: focus on pulmonary diagnostics.</a> Respirology. 18 (1), 47-60 (2013).</li>
<li>Schacht, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endobronchial+ultrasound-guided+transbronchial+needle+aspiration%3A+performance+of+biomedical+scientists+on+rapid+on-site+evaluation+and+preliminary+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytopathology%22%5BJournal%5D)">Endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration: performance of biomedical scientists on rapid on-site evaluation and preliminary diagnosis.</a> Cytopathology. 27 (5), 344-350 (2016).</li>
<li>Pearson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+on-site+evaluation+of+fine-needle+aspiration+by+non-cytopathologists%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+diagnostic+accuracy+studies+for+adequacy+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Rapid on-site evaluation of fine-needle aspiration by non-cytopathologists: A systematic review and meta-analysis of diagnostic accuracy studies for adequacy assessment.</a> Acta Cytol. 62 (4), 244-252 (2018).</li>
<li>Arimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryobiopsy+with+endobronchial+ultrasonography+using+a+guide+sheath+for+peripheral+pulmonary+lesions+and+DNA+analysis+by+next+generation+sequencing+and+rapid+on-site+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Investig%22%5BJournal%5D)">Cryobiopsy with endobronchial ultrasonography using a guide sheath for peripheral pulmonary lesions and DNA analysis by next generation sequencing and rapid on-site evaluation.</a> Respir Investig. 57 (2), 150-156 (2019).</li>
<li>Gianella, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+rapid+on-site+cytologic+evaluation+during+endobronchial+ultrasound-guided+transbronchial+needle+aspiration+in+malignant+and+nonmalignant+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Utility of rapid on-site cytologic evaluation during endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration in malignant and nonmalignant disease.</a> Acta Cytol. 62 (5-6), 380-385 (2018).</li>
<li>Natella, V., Cozzolino, I., Sosa Fernandez, L. V., Vigliar, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+nodes+fine+needle+cytology+in+the+diagnosis+of+infectious+diseases%3A+clinical+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Infez+Med%22%5BJournal%5D)">Lymph nodes fine needle cytology in the diagnosis of infectious diseases: clinical settings.</a> Infez Med. 20, 12-15 (2012).</li>
<li>Baughman, R. P., Spencer, R. E., Kleykamp, B. O., Rashkin, M. C., Douthit, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventilator+associated+pneumonia%3A+quality+of+nonbronchoscopic+bronchoalveolar+lavage+sample+affects+diagnostic+yield%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Ventilator associated pneumonia: quality of nonbronchoscopic bronchoalveolar lavage sample affects diagnostic yield.</a> Eur Respir J. 16 (6), 1152-1157 (2000).</li>
<li>Petrone, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+cytotechnician+training+influence+the+accuracy+of+EUS-guided+fine-needle+aspiration+of+pancreatic+masses%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Does cytotechnician training influence the accuracy of EUS-guided fine-needle aspiration of pancreatic masses.</a> Dig Liver Dis. 44 (4), 311-314 (2012).</li>
</ol>

המחברים אינם מדווחים על ניגודי עניינים.

פולמונולוגיה התערבותית היא ענף חשוב של מחלות נשימה מודרניות; בפרט, זה כבר בשימוש נרחב באבחון של מחלות ריאה 8,9. בשנים האחרונות, פולמונולוגיה התערבותית אבחנתית משגשגת בשל שכיחות מוגברת של גידולים ממאירים ריאתיים, יותר זיהומים פתוגניים עמידים לתרופות המתרחשים בדרכי הנשימה התחתונות, ובקשות לאבחון של מחלות נשימה מבלבלות וקריטיות 10,11,12. יעילות האבחון ההתערבותי תלויה בגורמים כמו גודל והמיקום האנטומי של אזורי מוקד, שיעורי סיבוכים ומספר אתרי ביופסיה, ומחלות רקע, קידום השימוש הקליני בטכנולוגיות ובמתקנים מתקדמים רבים13. ROSE זכתה לתשומת לב יוצאת דופן והתפתחה במהירות כ"טכניקת ליווי בזמן אמת" לאבחון בפולמונולוגיה התערבותית.
ROSE מיועד להערכה מהירה, אבחון ראשוני ותעדוף שביעות רצון הדגימה במהלך הליכים כגון ניקוב, ביופסיה והברשה. הוא מספק משוב כדי להנחות את ההתקדמות הטכנולוגית הבאה 14,15,16,17. M-ROSE, ענף של ROSE, מתמקד בעיקר בהערכת הרקע המיקרוביאלי ולא בהערכת ממאירות תאי רקמה5. שיטת M-ROSE היא טכניקת הערכה מהירה ולא כלי אבחון, ולכן אין להפריז ביעילותה האבחנתית. היישום הקליני שלה כולל בעיקר את ההיבטים הבאים: זיהוי חזותי של מיקרואורגניזמים פתוגניים מסוימים, הבחנה בין זיהום לזיהום, ואפליה בין זיהום ללא זיהום7.
לאחר צביעה מהירה, גרעין התא של הרקמה הציג גוון ארגמני-אדום, בעוד הציטופלסמה הציגה צבע כחלחל-סגול. חיידקים ופטריות נראו כחולים, וכתוצאה מכך נוצר ניגוד מובהק בין תאי רקמה לפתוגנים7. M-ROSE יכול להדגים רמה מסוימת של יכולת בזיהוי חיידקים ופטריות. באופן ספציפי, הוא מציג שיעור חיובי גבוה עבור Aspergillus, cryptococcus, Pneumocystis jiroveci, ופטריות אחרות 3,18. עם זאת, יש לו מגבלות כשמדובר בזיהוי פתוגנים עם נפח וקוטר קטן או סוכני פתוגניים תאיים. חשוב להדגיש כי האבחנה של כל מחלה צריכה להתבסס על הערכה מקיפה הכוללת את מצבו הבסיסי של המטופל, ביטויים קליניים, בדיקות הדמיה וגורמים אחרים ולא להסתמך רק על זיהוי מיקרוסקופי של מיקרואורגניזמים פתוגניים.
M-ROSE מציעה גם יתרונות בזיהוי זיהום וזיהום, כגון הערכת האיכות של דגימות נוזל שטיפה בנאדיות. במחלקות בהן התנאים מאפשרים זאת, ניתן לבצע הערכה של נוזל שטיפה באמצעות צנטריפוגה וצביעה. דגימות מוסמכות של נוזל שטיפת מכתשית מראות כי שיעור תאי הקשקש בין כל התאים (למעט תאי דם אדומים) תחת מיקרוסקופ בעוצמה נמוכה הוא פחות מ-1%, תאי אפיתל טוריים פחות מ-5%, ותאי דם אדומים נמוכים מ-10% (לא כולל גורמים הקשורים לטראומה או דימום)19. הבדיקה המיקרוסקופית של הרקע הציטולוגי תקל עלינו לבצע הערכות בזמן.
יתר על כן, M-ROSE יכול לסייע בהבחנה בין נגעים נגועים ולא נגועים5. בנגעים נגועים, יש לעתים קרובות חדירה של נויטרופילים, מקרופאגים, ולימפוציטים על ידי תאים דלקתיים, עם תצפית מדי פעם של phagocytosis נויטרופילים. לעומת זאת, נגעים שאינם נגועים בדרך כלל חסרים חדירת תאים דלקתיים.
הפרוטוקול המוצג כאן מדגים את תהליך הפעולה של M-ROSE; באמצעות פרשנות הרקע המיקרוביולוגי, ניתן לבצע את האבחנה הראשונית או לצמצם את האבחנה המבדלת. כפי שעולה מהממצאים שלנו, האבחנה של PCP דורשת ראיות מאושרות של Pneumocystis jiroveci, אשר לא צריך להתבסס על ביטויים קליניים והדמיה, אפילו בחולים סימפטומטיים בסיכון גבוה. זיהוי מיקרוסקופי של צורות אסקוס וטרופיות הוא הראיה האינטואיטיבית ביותר. יעילות האבחון נקבעת במידה רבה על ידי שיטת הצביעה של הדגימה. מבחינה היסטורית, כתמים קונבנציונליים כגון Wright's-Giemsa, כסף הקסאמין וכחול טולוידין זמינים עבור PCP אך הם גוזלים זמן רב ובעלי רגישות נמוכה יותר. במקרה זה, האבחנה המיידית של PCP אושרה ביום הראשון להעברת המטופל לטיפול נמרץ עם שימוש ברוז. Diff-quick הראה את יתרונו בזיהוי פנאומוציסטיס המאופיין במבנה ברור, ניגודיות חדה וזיהוי קל של ascus (איור 5A).
ביישום הרפואה האתנית, ROSE מחזיקה גם ערך משמעותי. לדוגמה, במחלות סופורטיביות, רופאים יכולים לזהות מגוון רחב של תאים דלקתיים הנשלטים בעיקר על ידי נויטרופילים בתוך הרקע המיקרוביולוגי5. כתוצאה מכך, תרופות עם תכונות ניקוי חום וניקוי רעלים ניתן לבחור כטיפולים פוטנציאליים עבור תנאים אלה, כגון יערה, שן הארי, פטריניה, בין היתר.
מאז ROSE היא תוכנית נוספת כי לא צריך להיות נבחר פולמונולוגיה התערבותית, ביצוע ROSE חייב להגדיל את עלויות העבודה והכלכלה. זה שנוי במחלוקת כי ROSE צריך לשמש על בסיס קבוע. במונחים של היתרונות של כלכלה, זמן ועלויות עבודה הם מה שאנחנו מודאגים לגביו. הצורך העיקרי בעבודה נוספת הוא המעריך. הערכת ROSE יכולה להתבצע על ידי ציטוטכנולוג, פתולוג או קלינאי. ציטוטכנולוגים הם כוח האדם הסביר ביותר להליך ROSE. עם זאת, בפרקטיקה הקלינית, קלינאים מחליפים את התפקיד, אך הוא עשוי לדרוש בסיס הכשרה מסוים15. מחקר קודם הראה כי תוכנית הכשרה יכולה לעזור לשפר את הדיוק של הערכת הלימות המבוצעת על ידי קלינאים, ולמנוע משתנים מבלבלים20. בנוסף, M-ROSE, כטכניקת אבחון מורפולוגית, יש גורמים סובייקטיביים בדו"ח התוצאות שלה. על הרופאים לבצע הערכה מקיפה המבוססת על מידע קליני נוסף.
אנו ממליצים לבתי חולים עם מתקנים מתאימים ואנשי מקצוע מיומנים לשקול ליישם את נוהל ROSE במחלקות הנשימה או בטיפול נמרץ שלהם, מכיוון שהוא יכול להקל על הערכה מוקדמת של מחלות קריטיות נשימתיות מאתגרות ולהנחות טיפול קליני ביעילות.

הטכניקה של הערכה מהירה באתר (ROSE) היא שיטה יעילה ביותר המיושמת בתחום הליכי מחלות ריאה. הוא מאפשר דגימה בזמן אמת והתערבות אבחנתית, ומאפשר ניתוח ציטולוגי מיידי1. גישה חדשנית זו כוללת הטבעה של חלק מדגימת הרקמה על שקופית תוך שמירה על שלמותה. אחד היתרונות העיקריים של ROSE טמון ביכולתו להקל על פרשנות מהירה של מידע קליני באמצעות טכניקות מיקרוסקופיה מיוחדות. זה כולל ניתוח של מורפולוגיה של התא, סיווג, כימות, קביעת יחסים מרכיבים, הערכת סידור, ניתוח מתאם, הערכת רקע, וזיהוי של אובייקטים זרים. על ידי שילוב כל הנתונים הללו עם המידע הקליני של המטופל, ROSE ממלא תפקיד מרכזי בהערכת הלימות הדגימה ובהנחיית הליכים וטכניקות התערבותיות בזמן אמת2.
כחברת בת של טכנולוגיית ROSE, טכנולוגיית M-ROSE מתמקדת בעיקר ברכישת הרקע המיקרוביולוגי של נגעי מטרה במקום להבחין בין תאים שפירים לממאירים 3,4. מצד אחד, M-ROSE מאפשר זיהוי מיקרוסקופי של פתוגנים כגון אספרגילוס, קריפטוקוקוס, פנאומוציסטיס וקנדידה5. מצד שני, יש לו השלכות מנחות משמעותיות בהערכת איכות הדגימות הנשימתיות, הבחנה בין מחלות זיהומיות ללא זיהומיות, הבחנה בין זיהום לזיהום, כמו גם הערכת חומרת זיהום ופרוגנוזה 6,7. לדוגמה, בתוך דגימה נשימתית, דו-קיום של חיידקים בעלי מורפולוגיה זהה לצד חדירת תאי דלקת מצביע על זיהום; לעומת זאת, נוכחותם של חיידקים רבים בעלי מגוון מורפולוגי המלווים בתאי אפיתל מצביעה על זיהום. היכולת לנתח באופן מקיף מידע קליני ולחזות תוצאות הופכת את M-ROSE לכלי רב ערך בהליכים של מחלות ריאה.
לסיכום, ROSE משמש כנשא ציטולוגי חיוני המשפר משמעותית את היעילות והדיוק של אבחון מחלות ריאה. יכולותיו הרב-גוניות תורמות לשיפור תוצאות המטופלים בכך שהן מבטיחות התערבות בזמן ומקלות על אבחון מדויק באמצעות טכניקות דגימה והתערבות אבחונית בזמן אמת. עם זאת, חשוב לציין כי התקדמות זו מסתמכת על השגת דגימות מוסמכות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול M-ROSE סטנדרטי הכולל הכנת שקופיות, טכניקות צביעה והנחיות פרשנות. פרוטוקול זה משמש כנקודת התייחסות רבת ערך עבור קלינאים כדי לקבוע תוכניות הערכה וטיפול מדויקות תוך הקלה על קבלת החלטות לגבי טיפול עוקב בדגימות מטרה.

<table><tbody><tr><td>מיקרוסקופ ציטולוגי</td><td>Olympus Corporation</td><td>CX43</td><td></td></tr><tr><td>Diff Quik (DQ) פתרונות צביעה</td><td>Besso Biotechnology Co. Ltd</td><td>G1541</td><td></td></tr><tr><td>חד פעמי 2.5-5 מ"ל מחטי מזרק</td><td>שאנדונג ג'ו פרמצבטיקה 20183150304</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כפפות לטקס ללא אבקה</td><td>Henan Yadu Industrial Co., LTD</td><td>20182140728</td><td></td></tr><tr><td>תא סטרילי מגלשות תרבות</td><td>ג'ינאן Preret תעשייה ומסחר ושות', בע"מ</td><td>7101</td><td></td></tr></tbody></table>

הערכה מיקרוביולוגית מהירה באתר למחלות זיהומיות ריאתיות

Microbiological Rapid On-Site Evaluation for Pulmonary Infectious Diseases

ההתחלה המהירה של טיפול אמפירי אנטי זיהומי היא קריטית בחולים המציגים זיהום ריאתי בלתי מוסבר. למרות שרכישת הדמיה היא פשוטה יחסית בפרקטיקה הקלינית, חוסר הספציפיות שלה מחייב לעתים קרובות בדיקות נוספות הגוזלות זמן רב כגון תרבית כיח, תרבית נוזל שטיפה ברונכואלבאולרי או ריצוף גנטי כדי לזהות את האטיולוגיה הבסיסית של המחלה במדויק. יתר על כן, היעילות המוגבלת של טיפול אמפירי אנטי זיהומי עלולה לתרום לשימוש לרעה באנטיביוטיקה. ההתקדמות האחרונה בפענוח רקע מיקרוביאלי בשקופיות הערכה מהירה באתר (ROSE) אפשרה לרופאים להשיג דגימות במהירות באמצעות ברונכוסקופיה (למשל, שטיפת נאדיות, צחצוח רירית, מהדק רקמות), מה שמקל על צביעה לצד המיטה ופרשנות המספקת מידע רקע מיקרוביאלי חיוני. כתוצאה מכך, זה מבסס בסיס לפיתוח טיפול ממוקד נגד זיהום ותוכניות טיפול תרופתי אישיות. עם הבנה טובה יותר של אילו פתוגנים גורמים לזיהומים בזמן אמת, רופאים יכולים להימנע מאנטיביוטיקה רחבת טווח מיותרת התורמת לעמידות לאנטיביוטיקה. הקמת תהליך עבודה מהיר וסטנדרטי של M-ROSE במחלקות לרפואה נשימתית או ביחידות לטיפול נמרץ תסייע רבות לרופאים לגבש אסטרטגיות טיפול מדויקות לחולים, דבר שיש לו השלכות קליניות משמעותיות.

במקרה טיפוסי, גבר בן 63 הגיע לבית החולים עם שיעול, חום וכאבים בחזה. החולה אובחן בעבר עם תסמונת נפרוטית, המאופיינת בפרוטאינוריה ובבצקת, וקיבל טיפול בפרדניזון וטקרולימוס במשך זמן רב. ממצאי המעבדה הראשוניים הדגימו ספירת תאי דם לבנים של 10.49 x 109/L, ספירת נויטרופילים של 8.87 x 109/L, חלבון מגיב C בדם מלא וריכוזים (1-3)-β-D-גלוקן של 155.81 מ"ג/ליטר ו-249.7 pg/mL. סריקת טומוגרפיה ממוחשבת בחזה (CT) הראתה אופסיפיקציה של זכוכית קרקע במיקום מפוזר, דו-צדדי ומרכזי (איור 3A). טיפול אנטי זיהומי ראשוני עם cefoperazone tazobactam לא היה יעיל, הסימפטומים שלו הוחמרו על ידי עייפות לבבית, קוצר נשימה, קוצר נשימה, קוצר נשימה לאחר פעילות גופנית; הדמיית CT חוזרת לא הראתה שיפור משמעותי (איור 3B). לאחר מכן הועבר החולה ליחידה לטיפול נמרץ לצורך הנשמה מכנית ועבר ברונכוסקופיה. הדגימה הממוקדת נעשתה בהנחיית ניווט וירטואלי, ונאספו שלוש דגימות ביופסיה של מלקחיים (איור 4). ROSE היה זמין להערכה מיקרוסקופית מיידית של הרקמה, והאבחנה של Pneumocystis jiroveci אושרה (איור 5A). החולה קיבל מיד טיפול אנטי פטרייתי עם sulfamethoxazole (1.92 גרם, q6h); כתמים מאוחרים יותר (איור 5B-E) אישרו את האבחנה הזו. עם זאת, הדמיות CT חוזרות עדיין לא הראו שיפור משמעותי (איור 3C). המטופל קיבל carbofungin (היום הראשון של 70 מ"ג ואחריו 50 מ"ג ביום), methylprednisolone (80 מ"ג ביום), ו immunoglobulin (10 גרם ביום) עבור זיהום פטרייתי. הסימפטומים הוקל במהירות, והמטופל המשיך בטיפול המשך.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig01.jpg"> איור 1: ציוד וחומרים. (A) מיקרוסקופ ציטולוגי ומערכת הדמיה גרפית. (B) תמיסת צביעה Diff Quik (DQ) A. (C) תמיסת צביעה Diff Quik (DQ) B. (D) כפפות לטקס ללא אבקה. (E) שקופיות של תרבית תאים סטרילית. (F) מחטי מזרק חד פעמיות בנפח 2.5-5 מ"ל. (ז) נייר סופג. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig02.jpg"> איור 2: זרימת עבודה של M-ROSE. (A) הדפסת השקופית. (B) השקיעו את המגלשה בתמיסת Diff A למשך 10-30 שניות. (C) שטפו את המגלשה באמבט הצבע PBS כדי להסיר עודפי תמיסת Diff A. (D) כתם ונגב את שאריות הנוזל מהשקופית בנייר סופג. (E) טבלו את המגלשה בתמיסת Diff B למשך 20-40 שניות. (F) נקו את המגלשה במיכל צביעת המים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig03.jpg"> איור 3: צילומי CT חזה. (A) בעת הקבלה. (ב) ביום ההעברה לטיפול נמרץ. (C) לאחר הטיפול של sulfamethoxazole <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig04.jpg"> איור 4: לוקליזציה של המקטע הבסיסי האחורי של האונה התחתונה של הריאה הימנית על-ידי VBN. (A) סימפונות ראשיים ימניים. (B) סימפונות אמצעיים ימניים. (C) מקטע בזאלי אחורי של סימפונות באונה התחתונה של הריאה הימנית. (D) מפה תלת-ממדית של VBN. (E) מפה קורונלית של CT חזה. (F) מפה צירית של CT חזה. (G) מפת קשת של CT חזה <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig05.jpg"> איור 5: תמונות המתעדות הופעת פנאומוציסטיס בשיטות צביעה שונות. (א) ורד 100 x 10; חץ לבן: ציסטות המכילות אסקוספורים. (B) המטוקסילין ואוזין (H-E), 60 x 10. (C) כחול אלקיאני, 60 x 10. (D) GIEMSA, 40 x 10. (E) כסף בחן, 20X10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

הפרוטוקול כאן מדגים זרימת עבודה מהירה ומתוקננת של הערכה מיקרוביולוגית מהירה באתר הלקוח (M-ROSE), הכוללת שלושה שלבים: יצירת שקופיות, צביעה ופענוח. פרוטוקול זה יסייע לרופאים לקבל החלטות קליניות מהירות.

The prompt initiation of empirical anti-infective therapy is crucial in patients presenting with unexplained pulmonary infection. Although imaging ...

הכוונה שלנו היא להציג שיטת הערכה מהירה בזמן אמת, M-ROSE כדי לסייע לרופאים לגבש אסטרטגיות טיפול מדויקות לחולים עם דלקות ריאה. טכנולוגיית צביעת תאים מהירה ומערכת הדמיה מיקרוסקופית בחדות גבוהה משמשות כיום לקידום המחקר בתחום. מספר המחקרים הקליניים על M-ROSE מוגבל יחסית.האתגר הגדול ביותר הוא פענוח תוצאות M-ROSE, הדורש כוח אדם, וכוח אדם מיומן, שכן קשה לזהות חזותית פתוגנים ולהבדיל בין זיהום לזיהום. עם הבנה טובה יותר של פתוגנים הגורמים לזיהומים בזמן אמת, רופאים יכולים להימנע מאנטיביוטיקה רחבת טווח מיותרת התורמת לעמידות לאנטיביוטיקה וכטיפול בדלקות ריאה. M-ROSE הוא זמן אמת ויעיל ביותר.M-ROSE מאפשר זיהוי מיקרוסקופי של פתוגנים כגון אספרגילוס, קריפטוקוקוס, רבים וקנדידה. יש לו השלכות מנחות משמעותיות על מדידת איכות בסיסית נשימתית, הבחנה בין זיהומים למחלות לא זיהומיות, אפליה, זיהום מזיהום, כמו גם הערכת זיהום, חומרתו ופרוגנוזה.

microbiological-rapid-on-site-evaluation-for-pulmonary-infectious

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בדיקת MTB / RIF אקספרט משלב טיהור המדגם, דיבורית המבצע, ב-Board עיבוד המדגם, ו-Ultra-רגיש חמי מקונן PCR לזיהוי בו זמני...

אבחון שחפת ריאתית עם מבחן אקספרט MTB / RIF

מקור: פרינבם, ק., וסיריאפורן, א. בדיקת אלימות חיידקית מהירה מבוססת תמונה באמצעות אמבה. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים שיטה מהירה מבוססת תמונה להערכת אלימות חיידקים על ידי דגירה של אמבות עם חיידקים מחוברים למשטחים או פלנקטוניים, יישום פד אגרוז קלציין-אצטוקסיתיל (calcein-AM), ודימות פלואורסצנציה לזיהוי נזק לתאי המארח.

בדיקה מהירה מבוססת תמונה לסינון אלימות חיידקית הנגרמת על פני שטח

זיהוי מהיר ומדויק של פתוגנים באתר, במיוחד קרקע בתפו פתוגנים צמח, הוא חיוני כדי למנוע התפשטות של מחלות בתחום עיצוב והפקת inoculum. השיטה שפותחה כאן באמצעות מערכת זיהוי PCR נייד בזמן אמת מאפשר האבחון באתר בתנאי שדה.

זיהוי מולקולרי באתר של קרקע בתפו Phytopathogens באמצעות מערכת ה-PCR נייד בזמן אמת

מעבדה-פריסה, מהשטח תוכנן ונבנה עבור הגדרות כלליות מרחוק, משאבים. כל המאפיינים, היבטים קריטיים המודולים מעבדה משופרת לוגיסטית, ניתן להרחבה, רב תכליתיים הם בחנו. רשימת פעולות לביצוע עבור זרימת עבודה מעבדה בסיסית, פרוטוקול בדיקת אבחון נגיפית בדרכי הנשימה פיתחה, שהוצגה.

ניהול מרחוק מעבדה: וירוס נשימתי דיאגנוסטיקה

פרוטוקול זה מציג בדיקת רגישות אנטי-מיקרוביאלית מהירה (AST) תוך 2.5 שעות על ידי הדמיית פיזור ראמן מגורה בתא יחיד של חילוף החומרים של D2O. שיטה זו חלה על חיידקים בשתן או בסביבת דם שלמה, שהיא טרנספורמטיבית עבור AST פנוטיפי מהיר של תא יחיד במרפאה.

בדיקת רגישות אנטי-מיקרוביאלית מהירה על ידי הדמיה מגורה של פיזור ראמאן של שילוב דאוטריום בחיידק יחיד

הפרוטוקול מסכם את שיטות העבודה המומלצות למזעור העומס הביולוגי המיקרוביאלי בסביבת חדר נקי וכולל אסטרטגיות כגון ניטור סביבתי, ניטור תהליכים ובדיקת סטריליות מוצרים. הוא רלוונטי למתקני ייצור ובדיקה הנדרשים לעמוד בתקני פרקטיקה של רקמות טובות ובתקני שיטות ייצור טובות הנוכחיים.

אסטרטגיות בקרה וניטור מיקרוביאליות עבור סביבות חדרים נקיים וטיפולים תאיים

EUCAST פיתחה פרוטוקול בדיקת רגישות מיקרוביאלית ישירה (AST) עבור תרביות דם אוטומטיות. עם זאת, ניתן לייתר את תלותו בזיהוי מיקרוביאלי מבוסס ספקטרומטריית מסות על ידי שימוש בפרוטוקול הכנת חיסון ישיר במערכת זיהוי מיקרוביאלית אוטומטית. גישה זו יכולה לספק דוחות AST תוך 24 שעות מאיסוף הדגימות.

זיהוי מיקרוביאלי ישיר באמצעות מערכת זיהוי מיקרוביאלית אוטומטית כדי להקל על שיטת EUCAST RAST ללא ספקטרומטריית מסות

פתוגנים חיידקיים שונים עלולים לגרום לזיהומים בדרכי הנשימה ולהוביל לבעיות בריאותיות חמורות אם לא מזהים אותם במדויק ומטפלים בהם מיד. זיהוי מהיר ומדויק של פתוגנים אלה באמצעות הגברה איזותרמית בתיווך לולאה מספק ניהול ובקרה יעילים של זיהומים בדרכי הנשימה בסביבות קליניות.

זיהוי מהיר של פתוגנים חיידקיים הגורמים לזיהומים בדרכי הנשימה התחתונות באמצעות הגברה איזותרמית בתיווך לולאה בתיווך שבב מיקרופלואידי

אנו מתארים מתודולוגיה המשלבת culturing תא אוטומטי עם דימות גבוהה תוכן כדי לחזות ולכמת תהליכים תאיים רבים ומבנים, באופן תפוקה גבוהה. שיטות כאלה יכולות לסייע ביאור תפקודית נוספת של הגנום, כמו גם לזהות את הגן למחלה רשתות מטרות סמים פוטנציאליים.

הקרנת תוכן גבוהה במחלות ניווניות

חולדות כותנה נרגשות מאוד ויש להן תגובה חזקה של ברח או הילחם. מתוארת שיטת טיפול אופטימלית להפחתת הלחץ של בעלי החיים שתהפוך את חולדות הכותנה לנגישות יותר כמודל פרה-קליני.

טיפול של הכותנה העכברוש במחקרים להערכה טרום-הקלינית של וירוסי Oncolytic

למדו את שיטת M-ROSE להערכה מיקרוביולוגית מהירה באתר למחלות זיהומיות ריאתיות. פרוטוקול זה משלב הכנת שקפים, צביעה ופיענוח תוצאות בזמן אמת לשיפור קבלת החלטות קליניות ומניעת שימוש מיותר באנטיביוטיקה רחבת טווח.

הערכה מיקרוביולוגית מהירה באתר למחלות זיהומיות ריאתיות

גלה סרטונים נוספים