הדמיה של חלבונים בשפע נמוך ושינויים לאחר תרגום בעוברי דרוזופילה חיים באמצעות הזרקת נוגדנים פלואורסצנטיים

פרוטוקול זה מתאר תיוג פלואורסצנטי מותאם אישית מבוסס נוגדנים והזרקה לעוברים מוקדמים של דרוזופילה כדי לאפשר הדמיה חיה של חלבונים בשפע נמוך או שינויים לאחר תרגום שמאתגרים לזיהוי באמצעות גישות GFP/mCherry-tag מסורתיות.

אנו שואפים להבין כיצד אותות מכניים וביוכימיים מתואמים בין מורפוגנזה של בעלי חיים, כולל זיהוי ותגובה לכוחות של תאים ומולקולות. מולקולות נוספות התגלו כרגישות למכנו, המתפקדות באופן שונה תחת רמות שונות של מתח. עם זאת, ההקשר הפיזיולוגי ותפקודם של אירועים רגישים אלה לכוח עדיין אינם ידועים במידה רבה.

בשל האופי הדינמי של אירועים רגישים לכוח, התחום שלנו מסתמך במידה רבה על דימות פלואורסצנטי במהירות גבוהה והקלטה בהילוך מהיר כדי ללכוד התנהגויות מולקולריות ותאיות. חלבונים רבים המתויגים באופן פלואורסצנטי אינם בהירים מספיק כדי שניתן יהיה לצלם אותם, והם דורשים רזולוציה מרחבית-טמפורלית ללא אקונומיקה משמעותית. מצד שני, שיטות אימונופלואורסצנטיות מסורתיות יכולות ללכוד תמונה של מתקן מולקולרי ותאי רק לאחר קיבוע.

שיטה זו סוללת את הדרך למעקב דינמי אחר לוקליזציה של קולטני חלבון רבים בעלי שפע נמוך של מסלולי איתות עיקריים, כגון Notch, Wnt ומסלולי BMP. בסופו של דבר, בנוסף למפל האיתות הליניארי המסורתי, אנו יכולים לאתר והיכן מתרחשים אירועי האיתות בסקאלות התת-תאיות.