Name: מעקב אחר האבולוציה המכנית של רקמה במהלך סגירת הצינור העצבי של עובר אפרוח (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: למדו כיצד לעקוב אחרי האבולוציה המכנית של רקמת הצלקת העצבית באמבريونי עוף חי באמצעות מיקרוסקופיית ברילואן. שיטה זו מאפשרת הדמיה לא פולשנית של תכונות מכניות של רקמות בזמן אמת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי המכון הלאומי לבריאות הילד והתפתחות האדם ע"ש יוניס קנדי שרייבר, המכונים הלאומיים לבריאות (K25HD097288, R21HD112663).

הפרוטוקול אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת וויין סטייט.
1. הכנה ניסיונית
<ol><li>השתמש בתמיסת אתנול 70% כדי לנקות ולעקר את המספריים והפינצטה. כמו כן, להכין פיפטות חד פעמיות מזרק.</li>
	<li>הכינו מדיום שטיפה על ידי הוספת 3.595 גרם של NaCl ל 495 מ"ל של מים נטולי יונים. לאחר מכן, להוסיף 5 מ"ל של פניצילין-סטרפטומיצין (5 U / mL) למדיום. ממלאים צלחת פטרי בקוטר 100 מ"מ במדיום הכביסה ומחממים אותה ל-37°C.</li>
	<li>הכינו מנות תרבות לפי איור 1, שממחיש את התצורה הכוללת.<ol><li>מכינים פיסת נייר פילטר, חותכים אותה לצורה מלבנית של כ-17 מ"מ ×-20 מ"מ, ומסירים את ארבע הפינות. צרו מרכז חלול בנייר הסינון, בגודל של כ-7 מ"מ ×-10 מ"מ לאבטחת העובר (איור 1, משמאל). הערה: אוסף העוברים מתואר בשלב 2.</li>
		<li>חבר טבעת זמינה מסחרית (Φ = 1 אינץ ', ראה טבלת חומרים) עם שכבת סרט גמישה (כלומר, סרט פרפין), כדי להבטיח שלסרט הגמיש יש גם מרכז חלול. טבעת זו עם הסרט תשמש להחזקת נייר הסינון עם העובר.</li>
		<li>לבסוף, הניחו את הטבעת המוכנה בתוך צלחת פטרי בקוטר 35 מ"מ (איור 1, מימין). הערה: נייר הסינון נועד לאבטח ולהחזיק את העובר שחולץ על ידי הנחת נייר הסינון על הממברנה והשארת העובר באזור החלול המרכזי (שיפורט בשלב 2). ארבע הפינות נחתכו כך שיתאימו לגודל הטבעת החיצונית (אין צורך אם היא כבר מותאמת). צלחת תרבית בעלת תחתית זכוכית בקוטר 35 מ"מ משמשת להתפשטות טובה יותר של קרן לייזר. למנה יש באר פנימית (Φ = 23 מ"מ), אותה ניתן למלא באלבומן לתרבות אקס אובו . קוטר הטבעת חייב להיות גדול יותר מקוטר הבאר הפנימית כדי שניתן יהיה לכסות את הבאר על-ידי הסרט הגמיש שעל הטבעת (איור 1, כניסה). גודל נייר הסינון אינו מוגבל וניתן לשנותו בהתאם לגודל הטבעת שנבחרה וצלחת התרבית. לחלופין, ניתן לצפות מראש את תחתית המנה בשכבת אגרוז (עובי: ~1 מ"מ). על ידי הסרת אגרוז ממרכז השכבה באמצעות להב, ניתן ליצור באר בעלת צורה דומה למרכז החלול של הסרט הגמיש לטעינת אלבומן. נקודה קריטית אחת היא שארבעת הצדדים של נייר הסינון החלול צריכים להיות ברוחב מספיק (> 5 מ"מ) כדי להבטיח את החיבור של העובר.</li>
	</ol></li>
</ol>2. מיצוי ותרבית אקס אובו של עובר התרנגולת
הערה: שלב זה שונה מדוחות40,41 שפורסמו בעבר.
<ol><li>לאחר טרום תרבית, שלפו את הביצה מהאינקובטור והניחו אותה על צירה הארוך על מגש קרטון הביצים. נקו את קליפת הביצה עם 70% אתנול, הקפידו לכסות את כל פני השטח ולאחר מכן אפשרו לה לנוח במשך 15 דקות.</li>
	<li>מחזיקים את הביצה על צירה הקצר ומפצחים אותה בתחתית. פתחו את הביצה מעל צלחת פטרי נקייה בקוטר 100 מ"מ כדי לחלץ את תכולתה, כפי שמודגם באיור 2. הקפידו לא לסובב את הביצה בזמן שאתם מחזיקים ומפצחים אותה.</li>
	<li>בעזרת פיפטה, מעבירים ואוספים כ-10 מ"ל מהאלבומן הדק (כלומר, האלבומןהנוזלי 42) לתוך צינור של 15 מ"ל לשימוש בתרבית אקס-אובו . מלאו את הבאר המרכזית של צלחת התרבית בחלבון הדק שנאסף (כ-0.9 מ"ל), כפי שמוצג באיור 3. תהליך המילוי צריך להיות איטי, הימנעות היווצרות של כל בועות בתוך הבאר. ודא כי צלחת התרבות עם אלבומן הוא מחומם ל 37 °C (77 °F). הערה: מאכל זה ישמש לגידול העובר לשעבר. כלי תרבית חדשים מלאים במדיום שטיפה ישמשו במהלך הדמיה ברילואין (ראה שלב 3).</li>
	<li>בעזרת נייר טישו, הסירו בעדינות את האלבומן העבה (כלומר, האלבומן הצמיגי) המחובר לעובר על-ידי הפרדה זהירה של האלבומן מקרום הוויטליין, כפי שמודגם באיור 4. הימנע ממגע ישיר עם קרום ויטלין.</li>
	<li>לאחר הסרת כל האלבומן העבה, מדביקים בזהירות את נייר הסינון לקרום הוויטליין. ודא שציר הגוף של העובר מיושר עם הציר הארוך של המלבן המרכזי על נייר הסינון. השתמש במספריים כדי לחתוך את הקרום המקיף את נייר הסינון.</li>
	<li>בעזרת פינצטה, משכו בעדינות את נייר הסינון המבודד מהחלמון לכיוון אלכסוני. הפוך את נייר הסינון כדי למקם את העובר עם הצד הגבי שלו כלפי מטה (לתצורת מיקרוסקופ הפוך). טבלו בזהירות את כל נייר הסינון מצד אחד של הציר הארוך לתוך צלחת פטרי 100 מ"מ עם מדיום הכביסה בצורה אלכסונית.</li>
	<li>שטפו את שאריות החלמון על ידי ריסוס עדין של אמצעי הכביסה במקביל לנייר הסינון באמצעות פיפטה נקייה. יש להימנע מריסוס ישיר של אמצעי השטיפה על הממברנה.</li>
	<li>לאחר ניקוי כל החלמון, הסר בזהירות את נייר הסינון ממדיום הכביסה והשתמש בנייר טישו כדי לספוג את עודפי המדיום מהקצוות. לאחר מכן, הניחו את נייר הסינון עם העובר על צלחת התרבית, וודאו שהצד הגבי של העובר פונה כלפי מטה, כפי שמודגם באיור 5. כדי לשמור על לחות, הניחו נייר טישו לח בצלחת.</li>
	<li>העבירו את מנת התרבות לחממה על הבמה לתרבות אקס אובו .</li>
</ol>3. מדידת ברילואין של העובר
<ol><li>הכינו סט נוסף של כלי תרבות ומלאו אותם במדיום שטיפה. יש לוודא שמדיום הכביסה מחומם ל-37°C.</li>
	<li>כאשר העובר מגיע לשלב ההתפתחותי הרצוי, מעבירים את נייר הסינון עם העובר לצלחת התרבית המלאה במדיום שטיפה. הכניסו את מנת התרבית לחממה על הבמה של מיקרוסקופ ברילואין (ראו טבלת חומרים).<ol><li>לפני ביצוע מדידת Brillouin, שמור תמונת שדה בהיר של העובר כולו לעיון. התצורה המפורטת של מיקרוסקופ ברילואין תוארה בעבר30 והיא מסוכמת בסעיף התוצאות (איור 6).</li>
	</ol></li>
	<li>מדוד את אות ברילואין של מים ומתנול, אשר ישמש בשלב 4 לתהליך הכיול.</li>
	<li>התאם את עוצמת הלייזר של האירוע ואת זמן החשיפה של המצלמה למכשיר מצמיד מטען מכפיל אלקטרונים (EMCCD, ראה טבלת חומרים) כדי להשיג לפחות 10,000 ספירות של אות ברילואן. השתמש בתמונת השדה הבהיר כקו מנחה, הגדר את טווח הסריקה ואת גודל המדרגה. לרכוש תמונה Brillouin של האזור של עניין על ידי סריקת העובר באמצעות שלב תרגום דו ממדי. הערה: ניתן לקבוע את טווח הסריקה האופקי בהתבסס על תמונת השדה הבהיר, וניתן לקבוע את טווח הסריקה האנכי (כלומר, העומק) בהתבסס על עוצמת האות המתקבלת מסריקה מהירה וגסה. כדי למנוע נזק לאור לעובר, הגבל את עוצמת האירוע ל- 25 mW והגדר את זמן החשיפה של מצלמת EMCCD ל- 50ms. בחר גודל צעד של 2 מיקרומטר בכיוון האופקי ו- 1 מיקרומטר בכיוון האנכי כדי לאזן את איכות ההדמיה ואת זמן הרכישה.</li>
	<li>לאחר השלמת הסריקה, הסר בזהירות את נייר הסינון עם העובר והשתמש בנייר טישו כדי לספוג את כל אמצעי הכביסה העודפים. לאחר מכן, החזירו את נייר הפילטר לצלחת התרבית המלאה באלבומן דק לטיפוח רציף באינקובטור שעל הבמה.</li>
	<li>חזור על שלבים 3.2-3.5 במרווחי זמן קבועים (לדוגמה, 1.5 שעות) כדי לצלם תמונות ברילואין בהילוך מהיר עם התפתחות העובר.</li>
	<li>שחזר את תמונת Brillouin הדו-ממדית לאחר שלב 4.</li>
</ol>4. שחזור תמונה ברילואין
<ol><li>כייל את ספקטרומטר ברילואין באמצעות אותות ברילואין של מים ומתנול כדי לחשב את הטווח הספקטרלי החופשי (FSR) ואת יחס ההמרה בין פיקסל לתדר (PR) של הספקטרומטר30. הערכים המכוילים של FSR ו- PR ישמשו לחישוב הסטת ברילואין של העובר בכל פיקסל. הערה: איור 7A מציג ספקטרום ברילואין גולמי שנלכד על-ידי מצלמת EMCCD. על-ידי סיכום אנכי של הספקטרום ולאחר מכן ביצוע התאמה לורנציאנית, ניתן לקבל את מרחק השיא Δd של שתי הנקודות (איור 7B). על ידי קבלת מרחק השיא של מים Δdמים ומתנול Δdמתנול, FSR ו- PR ניתן לחשב על בסיס משוואות30: PR = 2· (ωמתנול-ω מים)/(Δd מים- Δdמתנול), ו-FSR = 2·ωמים + PR·Δdמים, עם הסטת ברילואין ידועה של מים ωמים = 6.01 GHz ומתנול ωמתנול = 4.49 GHz ב-660 ננומטר.</li>
	<li>קבל את מרחק השיא של אות Brillouin בכל פיקסל של הדגימה. חשב את הסטת ברילואין בהתבסס על FSR ו- PR מכוילים:ω sample = 0.5 (FSR - PR x Δdsample)30, כאשרω sample הוא הזזה Brillouin של הדגימה,ומדגם Δd הוא מרחק השיא של אות Brillouin.</li>
	<li>בנה מחדש את תמונת Brillouin הדו-ממדית בהתבסס על הזזות Brillouin של כל הפיקסלים. הערה: כדי לבצע אנליזה מקומית, ניתן לבחור אזור עניין (למשל, הלוח העצבי) מתמונת ברילואין שנרכשה ולכמת את תכונותיה המכניות. גישה נפוצה היא לחשב את השינוי הממוצע Brillouin של האזור שנבחר.</li>
</ol>

ניטור אורכי של מכניקת הלוחות העצביים בהתפתחות עוברי אפרוחים

<ol><li>Greene, N. D. E., Copp, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+tube+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neural tube defects.</a> Annual Review of Neuroscience. 37 (1), 221-242 (2014).</li>
<li>Suzuki, M., Morita, H., Ueno, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+cell+shape+changes+that+contribute+to+vertebrate+neural+tube+closure%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of cell shape changes that contribute to vertebrate neural tube closure.</a> Development, Growth & Differentiation. 54 (3), 266-276 (2012).</li>
<li>Nikolopoulou, E., Galea, G. L., Rolo, A., Greene, N. D. E., Copp, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+tube+closure%3A+Cellular%2C+molecular+and+biomechanical+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Neural tube closure: Cellular, molecular and biomechanical mechanisms.</a> Development. 144 (4), 552-566 (2017).</li>
<li>Juriloff, D. M., Harris, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+neural+tube+closure+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Mouse models for neural tube closure defects.</a> Human Molecular Genetics. 9 (6), 993-1000 (2000).</li>
<li>Copp, A. J., Greene, N. D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+and+development+of+neural+tube+defects%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%3A+A+Journal+of+the+Pathological+Society+of+Great+Britain+and+Ireland%22%5BJournal%5D)">Genetics and development of neural tube defects.</a> The Journal of Pathology: A Journal of the Pathological Society of Great Britain and Ireland. 220 (2), 217-230 (2010).</li>
<li>Wang, M., De Marco, P., Capra, V., Kibar, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+the+role+of+the+non-canonical+wnt%2Fplanar+cell+polarity+pathway+in+neural+tube+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Update on the role of the non-canonical wnt/planar cell polarity pathway in neural tube defects.</a> Cells. 8 (10), 1198(2019).</li>
<li>Galea, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanical+coupling+facilitates+spinal+neural+tube+closure+in+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Biomechanical coupling facilitates spinal neural tube closure in mouse embryos.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 114 (26), E5177-E5186 (2017).</li>
<li>Moon, L. D., Xiong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+of+neural+tube+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cell+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Mechanics of neural tube morphogenesis.</a> Seminars in Cell & Developmental Biology. 130, 56-69 (2022).</li>
<li>Christodoulou, N., Skourides, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+spatiotemporal+contribution+of+morphogenetic+events+and+mechanical+tissue+coupling+during+xenopus+neural+tube+closure%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct spatiotemporal contribution of morphogenetic events and mechanical tissue coupling during xenopus neural tube closure.</a> Development. 149 (13), (2022).</li>
<li>De Goederen, V., Vetter, R., Mcdole, K., Iber, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hinge+point+emergence+in+mammalian+spinal+neurulation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Hinge point emergence in mammalian spinal neurulation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 119 (20), 2117075119(2022).</li>
<li>Christodoulou, N., Skourides, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somitic+mesoderm+morphogenesis+is+necessary+for+neural+tube+closure+during+xenopus+development%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Somitic mesoderm morphogenesis is necessary for neural tube closure during xenopus development.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 10, 1091629(2023).</li>
<li>Nikolopoulou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+neural+tube+closure+depends+on+regulation+of+surface+ectoderm+identity+and+biomechanics+by+grhl2%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Spinal neural tube closure depends on regulation of surface ectoderm identity and biomechanics by grhl2.</a> Nature Communications. 10 (1), 2487(2019).</li>
<li>Nychyk, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vangl2-environment+interaction+causes+severe+neural+tube+defects%2C+without+abnormal+neuroepithelial+convergent+extension%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Vangl2-environment interaction causes severe neural tube defects, without abnormal neuroepithelial convergent extension.</a> Disease Models & Mechanisms. 15 (1), 049194(2022).</li>
<li>Li, B., Brusman, L., Dahlka, J., Niswander, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tmem132a+ensures+mouse+caudal+neural+tube+closure+and+regulates+integrin-based+mesodermal+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Tmem132a ensures mouse caudal neural tube closure and regulates integrin-based mesodermal migration.</a> Development. 149 (17), (2022).</li>
<li>Zulueta-Coarasa, T., Fernandez-Gonzalez, R. Laser ablation to investigate cell and tissue mechanics in vivo. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZulueta-Coarasa%2C+T+%22Integrative+Mechanobiology%3A+Micro-and+Nano+Techniques+in+Cell+Mechanobiology%22">Integrative Mechanobiology: Micro-and Nano Techniques in Cell Mechanobiology</a>. , Cambridge University Press. 128-147 (2015).</li>
<li>Wiebe, C., Brodland, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tensile+properties+of+embryonic+epithelia+measured+using+a+novel+instrument%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Tensile properties of embryonic epithelia measured using a novel instrument.</a> Journal of Biomechanics. 38 (10), 2087-2094 (2005).</li>
<li>Luu, O., David, R., Ninomiya, H., Winklbauer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+mechanical+properties+of+xenopus+embryonic+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Large-scale mechanical properties of xenopus embryonic epithelium.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (10), 4000-4005 (2011).</li>
<li>Maître, J. L., Niwayama, R., Turlier, H., Nédélec, F., Hiiragi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsatile+cell-autonomous+contractility+drives+compaction+in+the+mouse+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Pulsatile cell-autonomous contractility drives compaction in the mouse embryo.</a> Nature Cell Biology. 17 (7), 849-855 (2015).</li>
<li>Krieg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tensile+forces+govern+germ-layer+organization+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Tensile forces govern germ-layer organization in zebrafish.</a> Nature Cell Biology. 10 (4), 429-436 (2008).</li>
<li>Zamir, E. A., Srinivasan, V., Perucchio, R., Taber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+asymmetry+in+the+embryonic+chick+heart+during+looping%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Mechanical asymmetry in the embryonic chick heart during looping.</a> Annals of Biomedical Engineering. 31, 1327-1336 (2003).</li>
<li>Bambardekar, K., Clément, R., Blanc, O., Chardès, C., Lenne, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+laser+manipulation+reveals+the+mechanics+of+cell+contacts+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Direct laser manipulation reveals the mechanics of cell contacts in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (5), 1416-1421 (2015).</li>
<li>Savin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+growth+and+form+of+the+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">On the growth and form of the gut.</a> Nature. 476 (7358), 57-62 (2011).</li>
<li>Almonacid, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+diffusion+positions+the+nucleus+in+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Active diffusion positions the nucleus in mouse oocytes.</a> Nature Cell Biology. 17 (4), 470-479 (2015).</li>
<li>Campàs, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+cell-generated+mechanical+forces+within+living+embryonic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantifying cell-generated mechanical forces within living embryonic tissues.</a> Nature Methods. 11 (2), 183-189 (2014).</li>
<li>Campàs, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+toolbox+to+explore+the+mechanics+of+living+embryonic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cell+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">A toolbox to explore the mechanics of living embryonic tissues.</a> Seminars in Cell & Developmental Biology. 55, 119-130 (2016).</li>
<li>Christian, Z. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+3D+biomechanical+mapping+of+embryos+with+reverberant+optical+coherence+elastography+%28Rev-OCE%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+SPIE%22%5BJournal%5D)">High-resolution 3D biomechanical mapping of embryos with reverberant optical coherence elastography (Rev-OCE).</a> Proceedings of SPIE. , 123670(2023).</li>
<li>Scarcelli, G., Yun, S. H. J. N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confocal+brillouin+microscopy+for+three-dimensional+mechanical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Photonics%22%5BJournal%5D)">Confocal brillouin microscopy for three-dimensional mechanical imaging.</a> Nature Photonics. 1 (1), 39-43 (2008).</li>
<li>Scarcelli, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noncontact+three-dimensional+mapping+of+intracellular+hydromechanical+properties+by+brillouin+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Noncontact three-dimensional mapping of intracellular hydromechanical properties by brillouin microscopy.</a> Nature Methods. 12 (12), 1132-1134 (2015).</li>
<li>Prevedel, R., Diz-Muñoz, A., Ruocco, G., Antonacci, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brillouin+microscopy%3A+An+emerging+tool+for+mechanobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Brillouin microscopy: An emerging tool for mechanobiology.</a> Nature Methods. 16 (10), 969-977 (2019).</li>
<li>Zhang, J., Scarcelli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+mechanical+properties+of+biological+materials+via+an+add-on+brillouin+module+to+confocal+microscopes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Mapping mechanical properties of biological materials via an add-on brillouin module to confocal microscopes.</a> Nature Protocols. 16 (2), 1251-1275 (2021).</li>
<li>Boyd, R. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoyd%2C+RW+%22Nonlinear+optics%22">Nonlinear optics</a>. , Academic press. (2020).</li>
<li>Scarcelli, G., Kim, P., Yun, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+measurement+of+age-related+stiffening+in+the+crystalline+lens+by+brillouin+optical+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">In vivo measurement of age-related stiffening in the crystalline lens by brillouin optical microscopy.</a> Biophysical Journal. 101 (6), 1539-1545 (2011).</li>
<li>Scarcelli, G., Pineda, R., Yun, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brillouin+optical+microscopy+for+corneal+biomechanics%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Brillouin optical microscopy for corneal biomechanics.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (1), 185-190 (2012).</li>
<li>Antonacci, G., Braakman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanics+of+subcellular+structures+by+non-invasive+brillouin+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Biomechanics of subcellular structures by non-invasive brillouin microscopy.</a> Scientific Reports. 6 (1), 37217(2016).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+biomechanics+during+cranial+neural+tube+closure+measured+by+brillouin+microscopy+and+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research%22%5BJournal%5D)">Tissue biomechanics during cranial neural tube closure measured by brillouin microscopy and optical coherence tomography.</a> Birth Defects Research. 111 (14), 991-998 (2019).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+mechanics+within+intact+cells+is+regulated+by+cytoskeletal+network+and+internal+nanostructures%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Nuclear mechanics within intact cells is regulated by cytoskeletal network and internal nanostructures.</a> Small. 16 (18), 1907688(2020).</li>
<li>Elsayad, K., Polakova, S., Gregan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+mechanical+properties+in+biology+using+brillouin+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Probing mechanical properties in biology using brillouin microscopy.</a> Trends in Cell Biology. 29 (8), 608-611 (2019).</li>
<li>Poon, C., Chou, J., Cortie, M., Kabakova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brillouin+imaging+for+studies+of+micromechanics+in+biology+and+biomedicine%3A+From+current+state-of-the-art+to+future+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physics%3A+Photonics%22%5BJournal%5D)">Brillouin imaging for studies of micromechanics in biology and biomedicine: From current state-of-the-art to future clinical translation.</a> Journal of Physics: Photonics. 3 (1), 012002(2020).</li>
<li>Handler, C., Scarcelli, G., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-lapse+mechanical+imaging+of+neural+tube+closure+in+live+embryo+using+brillouin+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Time-lapse mechanical imaging of neural tube closure in live embryo using brillouin microscopy.</a> Scientific Reports. 13 (1), 263(2023).</li>
<li>Chapman, S. C., Collignon, J., Schoenwolf, G. C., Lumsden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+method+for+chick+whole-embryo+culture+using+a+filter+paper+carrier%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics%3A+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Improved method for chick whole-embryo culture using a filter paper carrier.</a> Developmental dynamics: an official publication of the American Association of Anatomists. 220 (3), 284-289 (2001).</li>
<li>Schmitz, M., Nelemans, B. K. A., Smit, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+submerged+filter+paper+sandwich+for+long-term+ex+ovo+time-lapse+imaging+of+early+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A submerged filter paper sandwich for long-term ex ovo time-lapse imaging of early chick embryos.</a> Journal of Visualized Experiments. (118), e54636(2016).</li>
<li>Nys, Y., Guyot, N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNys%2C+Y+%22Improving+the+safety+and+quality+of+eggs+and+egg+products%2C+vol+1%3A+Egg+chemistry%2C+production+and+consumption%22">Improving the safety and quality of eggs and egg products, vol 1: Egg chemistry, production and consumption</a>. Nys, Y., Bain, M., VanImmerseel, F. , 83-132 (2011).</li>
<li>Berghaus, K. V., Yun, S. H., Scarcelli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+speed+sub-ghz+spectrometer+for+brillouin+scattering+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">High speed sub-ghz spectrometer for brillouin scattering analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (106), e53468(2015).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li>
<li>Schlüßler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+mapping+of+spinal+cord+growth+and+repair+in+living+zebrafish+larvae+by+brillouin+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Mechanical mapping of spinal cord growth and repair in living zebrafish larvae by brillouin imaging.</a> Biophysical Journal. 115 (5), 911-923 (2018).</li>
<li>Williams, R. M., Sauka-Spengler, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+ovo+electroporation+of+early+chicken+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Ex ovo electroporation of early chicken embryos.</a> STAR Protocols. 2 (2), 100424(2021).</li>
<li>Chapman, S. C., Collignon, J., Schoenwolf, G. C., Lumsden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+method+for+chick+whole-embryo+culture+using+a+filter+paper+carrier%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Improved method for chick whole-embryo culture using a filter paper carrier.</a> Developmental Dynamics. 220 (3), 284-289 (2001).</li>
<li>Edrei, E., Scarcelli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+optics+in+spectroscopy+and+densely+labeled-fluorescence+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Adaptive optics in spectroscopy and densely labeled-fluorescence applications.</a> Optics Express. 26 (26), 33865-33877 (2018).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין להם ניגוד עניינים.

ההתפתחות המוקדמת של העובר יכולה להיות מושפעת בקלות מהפרעות חיצוניות. לכן, נדרשת זהירות מרבית במהלך שאיבת הדגימה והעברתה. בעיה פוטנציאלית אחת היא ניתוק העובר מנייר הפילטר, מה שעלול להוביל להתכווצות קרום הוויטלין ולגרום לממצא מוטה של הצלחת העצבית בדימות ברילואין. יתר על כן, התכווצות זו עלולה לעצור את התפתחות העובר. יש לשים לב למספר צעדים קריטיים למניעת ניתוק. ראשית, בשלב 2.4, חיוני להבטיח הסרה יסודית של אלבומן מפני השטח של הממברנה. כל אלבומן שנותר יכול לעכב את ההדבקה התקינה של הממברנה לנייר הסינון46,47</s...

מומים בתעלה העצבית (NTDs) הם מומים מולדים חמורים של מערכת העצבים המרכזית הנגרמים על ידי כשלים בסגירת הצינור העצבי (NTC) במהלך ההתפתחות העוברית1. האטיולוגיה של NTDs מורכבת. מחקרים הראו כי NTC כרוך ברצף של תהליכים מורפוגנטיים, כולל הרחבה מתכנסת, כיפוף של הלוח העצבי (למשל, התכווצות אפית), העלאת הקפל העצבי, ולבסוף היצמדות של הקפל העצבי. תהליכים אלה מוסדרים על ידי מנגנונים מולקולריים וגנטיים מרובים 2,3, וכל תקלה בתהליכים אלה עלולה לגרום NTDs 4,5,6. ככל שהראיות המצטברות מצביעות על כך שרמזים מכניים ממלאים תפקידים מכריעים גם במהלך NTC 3,7,8,9,10,11, ונמצאו קשרים בין גנים ורמזים מכניים 12,13,14, זה הופך להיות הכרחי לחקור את הביומכניקה של הרקמה במהלך הנוירולציה.
מספר טכניקות פותחו למדידת התכונות המכניות של רקמות עובריות, כולל אבלציה בלייזר (LA)15, דיסקציה והרפיה של רקמות (TDR)16,17, שאיפת מיקרופיפטה (MA)18, ננו-הזחה19 מבוססת מיקרוסקופ כוח אטומי (AFM), מיקרו-כניסות (MI) ומיקרו-צלחות (MP)20, מיקרו-ריאולוגיה (MR) עם פינצטה אופטית/מגנטית 21,22,23וחיישנים מבוססי טיפות24., שיטות קיימות יכולות למדוד תכונות מכניות ברזולוציות מרחביות החל מקשקשים תת-תאיים ועד קשקשים רקמתיים. עם זאת, רוב השיטות הללו הן פולשניות מכיוון שהן דורשות מגע עם הדגימה (למשל, MA, AFM, MI ו- MP), הזרקת חומר חיצוני (למשל, MR וחיישנים מבוססי טיפות), או דיסקציה של רקמות (למשל, LA ו- TDR). כתוצאה מכך, זה מאתגר עבור שיטות קיימות כדי לפקח על האבולוציה המכנית של רקמת צלחת עצבית באתרו25. לאחרונה, אלסטוגרפיה של קוהרנטיות אופטית מהדהדת הראתה הבטחה למיפוי מכני ללא מגע ברזולוציה מרחבית גבוהה26.
מיקרוסקופ ברילואין קונפוקלי הוא שיטה אופטית מתפתחת המאפשרת כימות ללא מגע של ביומכניקה של רקמות ברזולוציה תת-תאית 27,28,29,30. מיקרוסקופ ברילואין מבוסס על עקרון פיזור האור הספונטני, שהוא האינטראקציה בין אור הלייזר המאורע לבין הגל האקוסטי הנגרם על ידי תנודות תרמיות בתוך החומר. כתוצאה מכך, האור המפוזר חווה שינוי תדר, המכונה הסטת ברילואין ωR, בעקבות משוואה31:
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/66117/66117eq01.jpg" style="margin: auto;"> (1)
כאן, <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/66117/66117eq02.jpg" style="margin: auto;"> הוא מקדם השבירה של החומר, λ הוא אורך הגל של אור האירוע, M הוא המודולוס האורכי, ρ הוא צפיפות המסה, ו-θ היא הזווית בין אור האירוע לאור המפוזר. עבור אותו סוג של חומרים ביולוגיים, היחס בין מקדם השבירה לצפיפות <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/66117/66117eq03.jpg" style="margin: auto;"> הוא קבוע בקירוב 28,32,33,34,35,36. לפיכך, ניתן להשתמש ישירות בשינוי ברילואין כדי להעריך שינויים מכניים יחסיים בתהליכים פיזיולוגיים. ההיתכנות של מיקרוסקופ ברילואין אומתה בדגימות ביולוגיות שונות 29,37,38. לאחרונה הודגמה הדמיה מכנית בהילוך מהיר של עובר אפרוח חי על ידי שילוב של מיקרוסקופ ברילואין עם מערכת דגירה על הבמה39. פרוטוקול זה מספק תיאורים מפורטים של הכנת דגימה, יישום ניסוי ועיבוד וניתוח נתונים לאחר מכן. אנו מקווים שמאמץ זה יאפשר אימוץ נרחב של טכנולוגיית ברילואין ללא מגע לחקר רגולציה ביומכנית בהתפתחות עוברים ומומים מולדים.

<table><tbody><tr><td>צלחת פטרי 100 מ"מ&nbsp;</td><td>פישרברנד</td><td>FB0875713</td><td></td></tr><tr><td>במה ממונעת דו-ממדית&nbsp;</td><td>Pre Scientific</td><td>H117E2</td><td></td></tr><tr><td>35 מ"מ צלחת פטרי</td><td>World Precision Instruments</td><td>FD35-100</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ ברילואין עם חממה על הבמה</td><td>N/A</td><td>N/</td><td>A זוהי מערכת מיקרוסקופ Brillouin שנבנתה בהתאמה אישית המבוססת על Ref. 30</td></tr><tr><td>ביצי עוף</td> אוניברסיטת <td>קונטיקט</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>CMOS מצלמת Thorlabs</td><td></td><td>CS2100M-USB</td><td></td></tr><tr><td>מצלמת EMCCD</td><td>אנדור</td><td>iXon</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>Decon Laboratories, Inc.</td><td>#2701</td><td></td></tr><tr><td>נייר סינון</td><td>Whatman</td><td>1004-070</td><td></td></tr><tr><td>חממה לתרבות ביצית</td><td>GQF Manufacturing Company Inc.&nbsp;</td><td>GQF 1502&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>טבעת</td><td>Thorlabs</td><td>SM1RR</td><td></td></tr><tr><td>גוף מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>IX73</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>חממה על הבמה</td><td>Oko labs</td><td>OKO-H301-PRIOR-H117</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות</td><td>פישרברנד</td><td>13-711-6M</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>מכשירי ארטמן</td><td>N / A</td><td>3 יחידות מספריים מיקרו 5</td></tr><tr><td>מזרק</td><td>BD</td><td>305482</td><td></td></tr><tr><td>נייר טישו</td><td>Kimwipes</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>צינור</td><td>קורנינג</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>מכשירי DR מכשירים</td><td>N/A</td><td>סט מלקחיים מיקרו-דיסקציה&nbsp;</td></tr></tbody></table>

מעקב אחר האבולוציה המכנית של רקמה במהלך סגירת הצינור העצבי של עובר אפרוח

Monitoring the Mechanical Evolution of Tissue During Neural Tube Closure of Chick Embryo

סגירת צינור עצבי (NTC) היא תהליך קריטי במהלך ההתפתחות העוברית. כישלון בתהליך זה עלול להוביל למומים בתעלה העצבית, ולגרום למומים מולדים או אפילו לתמותה. NTC כוללת סדרה של מנגנונים ברמה גנטית, מולקולרית ומכנית. בעוד רגולציה מכנית הפכה לנושא אטרקטיבי יותר ויותר בשנים האחרונות, היא נותרה במידה רבה לא נחקרת בשל היעדר טכנולוגיה מתאימה לביצוע בדיקות מכניות של רקמות עובריות תלת ממדיות באתרן. בתגובה, פיתחנו פרוטוקול לכימות התכונות המכניות של רקמה עוברית של תרנגולת באופן לא מגע ולא פולשני. זה מושג על ידי שילוב מיקרוסקופ Brillouin קונפוקלי עם מערכת דגירה על הבמה. כדי לחקור את מכניקת הרקמות, עובר טרום תרבית נאסף ומועבר לאינקובטור על הבמה לתרבית אקס אובו . במקביל, התמונות המכניות של רקמת הצלחת העצבית נרכשות על ידי מיקרוסקופ ברילואין בנקודות זמן שונות במהלך הפיתוח. פרוטוקול זה כולל תיאורים מפורטים של הכנת דגימות, יישום ניסויים במיקרוסקופ ברילואין, ונתונים לאחר עיבוד וניתוח. על ידי ביצוע פרוטוקול זה, חוקרים יכולים לחקור את האבולוציה המכנית של רקמה עוברית במהלך ההתפתחות לאורך זמן.

איור 6 מראה את הסכימה של מיקרוסקופ ברילואן. המערכת משתמשת בלייזר 660 ננומטר כמקור האור. מבודד ממוקם מיד אחרי ראש הלייזר כדי לדחות כל אור המוחזר לאחור, ומסנן צפיפות נייטרלית (ND) משמש לכוונון עוצמת הלייזר. זוג עדשות, L1 ו- L2, עם אורכי מוקד של f1 = 16 מ"מ ו- f2 = 100 מ"מ, בהתאמה, משמשות להרחבת קרן הלייזר. לוח חצי גל (HWP) ומקטב ליניארי (מקטב 1) משמשים כדי להתאים את עוצמת הקרן הזוהרת על הדגימה או על חומרי הכיול (כלומר, מים ומתנול) לאחר מפצל הקרן המקוטב (PBS). כדי למקד את הלייזר לתוך הדגימה ולא...

פרוטוקול זה פותח כדי לנטר לאורך זמן את התכונות המכניות של רקמת הצלחת העצבית במהלך נוירולציה של עובר אפרוח. הוא מבוסס על שילוב של מיקרוסקופ ברילואין ומערכת דגירה על הבמה, המאפשרת הדמיה מכנית חיה של רקמת לוחית עצבית בעוברי אפרוחים בתרבית לשעבר .

Neural tube closure (NTC) is a critical process during embryonic development. Failure in this process can lead to neural tube defects, causing congenital ...

מטרת המחקר היא לפתח כלי חדשני שיכול למדוד את מכניקת הרקמה של עובר חי. באמצעות הכלי הזה אנו רוצים להבין כיצד מכניקת הרקמה מתפתחת כאשר העובר חווה סגירת צינור נוירון. זה יכול לעזור לנו להבין את התקנות המכניות בהתפתחות עוברית.כדי למדוד קשיחות רקמות, שיטות עכשוויות כגון מיקרוסקופ כוח אטומי, ננו-זיהוי ושאיפה מיקרופיפטה צריכות ליצור קשר פיזי עם הדגימה ולהפעיל כוח כדי לעוות אותה. זה מאתגר מאוד למדידת מכניקת רקמות של עובר חי באתרו. כאן השתמשנו בטכנולוגיה אופטית בשם מיקרוסקופ ברילואן.בהשוואה לטכנולוגיות אחרות, מיקרוסקופ ברילואין משתמש רק באלומת מיקוד כדי למדוד את מכניקת הרקמות. לפיכך, זוהי שיטה ללא מגע ולא פולשנית ויש לה רזולוציה מיקרו-מרחבית כלשהי. זה מאפשר לנו ללכוד תמונה מכנית בהילוך מהיר של עובר חי באתרו.בעתיד, אנו רוצים להבין את תפקידה של מכניקת הרקמות בהתפתחות העוברית באופן יסודי. בפרט, אנו רוצים לחקור כיצד גורמים גנטיים, מסלול איתות ביוכימי ומכניקת רקמות מתואמים זה עם זה במורפוגנזה. זה יכול לספק לנו תובנה חדשה במתן מחלות לידה כגון מומים בצינור הנוירונים.

monitoring-mechanical-evolution-tissue-during-neural-tube-closure

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

אינדוקציה עצבית היא הצעד הראשון ביצירת המוח. זהו המנגנון שבאמצעותו הצומת של Hensen (מארגן), מורה רקמות סמוכות לאמץ גורל עצביים, כלומר להצמיח מערכת העצבים. וידאו זה מדגים assay לזירוז העצבית בעובר האפרוח.

Assay עבור אינדוקציה עצבית בעובר צ&#39;יק

מאמר זה מתאר השתלת רקמות טכניקה שנועדה לבדוק את איתות ותכונות של דפוסים האאקטודרם משטח cephalic במהלך הפיתוח craniofacial.

הערכת נכסים איתות של Ectodermal epithelia במהלך פיתוח Craniofacial

מאמר זה מתאר תיוג פני...

מעקב אחר דפורמציות המוךפו&quot;גנטי שהולך רקמות בעובר צ&#39;יק מוקדם

שיטה המאפשרת מניפולציה תרופתי ישירה של עוברי עכברים במהלך neurulation עוקף מטבוליזם אימהית מתואר. הטכניקה ניתן להתאים ללמוד היבטים שונים של neurulation על ידי שינוי נקודת זמן סוכן תרופתי.

Tube סגירת עצבית בתרבות העובר שלם עכבר

הרקמה העוברית הדמיה בזמן אמת הוא מאתגר לאורך תקופות זמן ארוכות. כאן אנו מציגים assay לניטור שינויים הסלולר משנה הסלולר בחוט השדרה חומוס לתקופות ארוכות עם רזולוציה גבוהה במרחב ובזמן. טכניקה זו יכולה להיות מותאם לאזורים אחרים של מערכת העצבים בעובר המתפתח.

ברזולוציה גבוהה הדמיה חיה של התנהגות התא ב Neuroepithelium פיתוח

Mesenchyme הגולגולת עובר תנועות morphogenic דרמטיות שעשויים מספקת כוח מניע לגובה של הקפלים...

Assay Explant להערכת התנהגות ניידת של mesenchyme הגולגולת

סרטון זה מדגים טכניקה לבידוד קפלים עצביים גולגולתיים מאזור המוח התיכון של עוברי אפרוחים. הוא מציג תהליך דיסקציה מפורט של הקפלים העצביים, מיקומם וחיבורם על כיסויים מצופים פיברונקטין ואחריו תצפית על נדידת תאי הפסגה העצבית מהקפלים העצביים.

בידוד קפלים עצביים גולגולתיים מעובר אפרוח לצורך תרבית תאי קרסט עצבית

צפייה וגישה לעובר התרנגולת במהלך ההתפתחות יכולה להיות מאתגרת. פיתחנו שיטת ex ovo שהיא פשוטה, חסכונית וניתן להשתמש בה בקלות בכיתה או במסגרת מחקר. שיטה זו מספקת גישה לעובר בשלבים מאוחרים של התפתחות עוברית (HH 40).

מותאם באופן מיטבי Ex-אובו Culturing של Chick עוברים לשלבים מתקדמים של פיתוח

כאן אנו מדווחים על תיוג כפול של תאי ציצה עצביים וכלי דם באמצעות השתלת צינור עצביGFP אפרוחים בשילוב עם הזרקת DiI תוך וסקולרית. טכניקה ניסיונית זו מאפשרת לנו לדמיין וללמוד בו זמנית את ההתפתחות של מערכת העצבים (האנטרית) הנגזרת מ- NCC ומערכת כלי הדם, במהלך אורגנוגנזה.

תיוג כפול של תאי ציצה עצבית וכלי דם בתוך עוברי עוף באמצעות שתל צינור עצביGFP אפרוח והזרקת צבע DiI Carbocyanine

כאן, אנו מציגים פרוטוקול היכרות עם ערכת ניסויים לשעבר-ovo חדשים וגישות מודלים פיזיים ללמוד את המכניקה של מורפוגנזה במהלך המוקדמות פיתול המוח העוברי צ'יק.

בודק את התפקידים של הכוחות הפיזיקליים במערכת מורפוגנזה עובריים מוקדם של הבחורה

פרוטוקול רב-תכליתי זה מתאר את הבידוד של תאי פסגה עצבית קדם-מיגרטיבית (NCCs) באמצעות כריתה של קפלים עצביים גולגולתיים מעוברי אפרוחים. עם הציפוי והדגירה, NCCs נודדים מגיחים מתוך קצוות עצביים, מה שמאפשר הערכה של מורפולוגיה של תאים ונדידה בסביבה דו-ממדית פשוטה.

הכנה וניתוח מורפולוגי של תרביות תאי צמרת עצביים גולגולתיים של אפרוחים

למדו כיצד לעקוב אחרי האבולוציה המכנית של רקמת הצלקת העצבית באמבريونי עוף חי באמצעות מיקרוסקופיית ברילואן. שיטה זו מאפשרת הדמיה לא פולשנית של תכונות מכניות של רקמות בזמן אמת.

מעקב אחר האבולוציה המכנית של רקמה במהלך סגירת הצינור העצבי של עובר אפרוח

גלה סרטונים נוספים