Name: השראת שבץ איסכמי חריף בעכברים באמצעות טכניקת חסימת העורק האמצעי הדיסטלי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-15T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: חקור מודל שבץ איסכמי חריף בעכברים C57BL/6J באמצעות חסימת העורק האמצעי הדיסטלי. שיטה זו מאפשרת הערכה של התנהגות נוירולוגית ושינויים היסטופתולוגיים לאחר השבץ.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מענקים מהקרן למדעי הטבע של מחוז חוביי (2022CFC057).

פרוטוקול הניסוי אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת ג'יאנגהאן ונערך בהתאם להנחיות אתיות של חיות ניסוי שהונפקו על ידי המרכז לבקרת מחלות של סין. עכברי C57BL/6J זכרים בוגרים, בני 10 שבועות, משוקללים 24-26 גרם, שימשו בפרוטוקול זה. כל העכברים שוכנו בסביבה מבוקרת של 12 שעות במחזור אור/חושך עם מזון ומים עד ליביטום.
1. הכנה טרום ניתוחית
הערה: המכשירים והציוד העיקריים הדרושים לפרוטוקול זה מוצגים באיור 1.
<ol><li>לפני ההליך, לעקר את כלי הניתוח על ידי autoclaving.</li>
	<li>מתן meloxicam תת עורית במינון של 5 מ"ג / ק"ג עבור שיכוך כאבים 60 דקות לפני הניתוח.</li>
	<li>מרדימים את העכבר עם 5% isoflurane בתא אינדוקציה.</li>
	<li>נגבו את לוח ניתוח החימום באתנול 75% והפעילו את מתג החימום כשהטמפרטורה מוגדרת ל-37°C. לאחר מכן, מקם את העכבר במצב צדדי שמאלי על הלוח, כאשר הראש ממוקם הרחק מהמנתח והזנב פונה לכיוון המנתח.</li>
	<li>חבר מסכה לפני העכבר המספקת אספקה קבועה של 2% איזופלורן ו-0.3 ליטר/דקה חמצן להרדמה תחזוקתית. החל את משחת העין על הקרנית כדי להגן עליהם מפני ייבוש במהלך ההליך.</li>
	<li>לגלח את הפרווה מהמסלול השמאלי לתעלת האוזן השמאלית עם מכונת גילוח. השתמש קרמים depilatory כדי להסיר את הפרווה שנותרה לעיקור.</li>
	<li>הכינו את אזור הניתוח על ידי מריחת חומר חיטוי פובידון-יוד ואתנול 75% שלוש פעמים.</li>
</ol>2. דגם MCAO דיסטלי
<ol><li>בדוק אם העכבר מורדם עמוקות על ידי הערכת הרפלקסים של צביטת הבוהן.</li>
	<li>בצע חתך אנכי בין המסלול השמאלי לתעלת האוזן השמאלית באמצעות להב אזמל סטרילי.</li>
	<li>משכו את הרקמה הרכה של העור עם retractors וחשפו את השריר הרקתי.</li>
	<li>השתמש microforceps ישר כדי להפריד את המקטעים apical ו dorsal של השריר הרקתי מן הגולגולת.</li>
	<li>זהו את הביפורקציה של ה-MCA, אשר לובשת צורה "Y" מתחת לעצם הרקתית עם הטיה לכיוון בסיס הגולגולת (איור 2A). הערה: אם הביפורקציה של MCA אינה נראית לעין (עקב וריאציה אנטומית נורמלית), ודא את כלי השיט הרוסטרלי ביותר.</li>
	<li>השתמש מקדח גולגולת חשמלי כדי לדלל את הגולגולת כדי ליצור חלון עצם (4 מ"מ קוטר) עד דורה מאטר, עם מרקם שקוף, הופך גלוי. הערה: יש להוסיף לסירוגין טיפות של מי מלח רגילים לגולגולת כדי למנוע התחממות יתר במהלך תהליך זה.</li>
	<li>הסר את הדורה מאטר מעל העורק עם מלקחיים מיקרו מעוקלים כדי לחשוף את ענף MCA.</li>
	<li>כוונו את העורק ל-7W. קרשו את העורק באמצעות מלקחיים חשמליים בקרישה באתרים של פרוקסימלי ודיסטלי לביפורקציה של MCA (איור 2A). כאשר הביפורקציה אינה נראית לעין עקב שונות אנטומית, יש לבצע את הקרישה על ענף MCA שזוהה במדויק (כאמור לעיל) בשני מקומות נפרדים במרחק של כ-1 מ"מ זה מזה13.</li>
	<li>עקוב אחר זרימת הדם של ענף קליפת המוח השמאלי MCA באמצעות מד זרימת דם בלייזר. הערה: עכברים המציגים ירידה בזרימת הדם של פחות מ -40% מהערך הבסיסי לאחר אלקטרוקואגולציה לא נכללו במחקר.</li>
	<li>תפרו את השריר והעור בנפרד באמצעות 5-0 תפרים של חומצה פוליגליקולית. החל דיקלופנק נתרן ג'ל משחה mupirocin על חתך העור באמצעות צמר גפן סטרילי.</li>
	<li>הנח את העכבר בתא שחזור. עקוב אחר כל העכברים עד שהם ערים לחלוטין. לספק meloxicam (5 מ"ג / ק"ג, SC) עבור שיכוך כאבים כל 24 שעות עד 72 שעות.</li>
</ol>3. מבצע דאם
<ol><li>לשחזר את אותו הליך כמו אלה שהוזכרו לעיל, למעט תהליך של קרישת עורק.</li>
</ol>4. מבחנים התנהגותיים
הערה: לפני dMCAO, העכברים עברו אימון התנהגותי פעמיים ביום במשך 3 ימים. ביוםהשלישי לאחר dMCAO, העבירו את העכברים לחדר הבדיקות ההתנהגותיות להסתגלות סביבתית של שעתיים לפני הבדיקה.
<ol><li>מבחן חוזק אחיזה14 הערה: מד חוזק האחיזה כולל מד מאמץ דחיפה-משיכה ומוט אופקי ממתכת.<ol><li>אחזו בבסיס זנב העכבר. הורידו בהדרגה את העכבר לכיוון מוט האחיזה המתכתי עד שהוא אוחז במוט האופקי עם שתי הכפות הקדמיות (איור 2B).</li>
		<li>משוך את העכבר לאחור במהירות קבועה של כ-2 ס"מ לשנייה ושמור על גופו אופקי.</li>
		<li>רשום את כוח השיא בגרמים (g) כאשר העכבר משחרר את כפותיו הקדמיות מהמוט.</li>
	</ol></li>
	<li>מבחן קוטב15<ol><li>הניחו את העכבר על ראש מוט עץ אנכי (50 ס"מ גובה, 1 ס"מ קוטר) כשראשו פונה כלפי מעלה, ואפשרו לו לטפס במורד המוט (איור 2B).</li>
		<li>רשום את הזמן שלוקח לעכבר להסתובב (סיבוב T) ואת הזמן הכולל לטפס במורד המוט (T-total) עם זמן חיתוך של 60 שניות.</li>
	</ol></li>
	<li>בדיקת הסרת סרט הדבקה16<ol><li>החזיקו את העכבר וחברו טלאי של סרט הדבקה (2 × 2 מ"מ) לכפה הקדמית הימנית של העכבר (איור 2B).</li>
		<li>החזירו את העכבר לכלוב הגידול ואפשרו לו לנוע בחופשיות.</li>
		<li>רשום את הזמן שלקח לעכבר להסיר דבק עם מגבלה של 60 שניות.</li>
	</ol></li>
	<li>בדיקת צילינדר17<ol><li>הניחו את העכבר בתוך גליל זכוכית פתוח ושקוף (קוטר: 14 ס"מ; גובה: 20 ס"מ) ותיעדו את התנהגות הגישוש הספונטנית שלו בעמידה במשך 3 דקות באמצעות מצלמה (איור 2B). הערה: במהלך הליך הניסוי, שתי מראות הוצבו לצד הצילינדר כדי להבטיח רישום אופטימלי של תנועות הגפיים הקדמיות.</li>
		<li>נגב את הגליל עם אתנול 75% כדי למנוע שאריות של רמזי ריח לפני בדיקת העכבר הבא.</li>
		<li>הפחת את מהירות ההפעלה של הווידאו ל -1/5 מהמהירות בפועל, וספור את מספר נגיעות הקיר עם הכף הקדמית השמאלית (L) או הימנית (R) או שימוש בו זמנית בשתי הכפות הקדמיות (B). חשב את שיעור השימוש של הכף הקדמית הימנית כ- (L-R)/(L + R + B) × 100%.</li>
	</ol></li>
</ol>5. זילוח והכנת מדגם
<ol><li>המתת חסד העכבר על ידי מנת יתר של הזרקת הצפק של pentobarbital (300 מ"ג / ק"ג). מקם את העכבר בשכיבה ולשתק את הגפיים.</li>
	<li>בצע חתך קו אמצע על העור, החל מחלל אמצע הבטן ונמשך לכיוון אזור החזה העליון.</li>
	<li>פתח את החזה באמצעות מספריים כירורגיים וקפל את הקסיפואיד כלפי מעלה באמצעות המוסטט. בזהירות להסיר את הריאה ואת הסרעפת כדי לחשוף את הלב.</li>
	<li>הכנס את קצה מחט הזלוף לחדר השמאלי ונקב את אטריום ימין עם מספריים. לערבב את הלב עם 20 מ"ל של מלוחים נורמליים דרך החדר השמאלי.</li>
	<li>ערפו את ראשו של העכבר וחתכו את הקרקפת לאורך קו האמצע שבין העיניים. חותכים את העצם לאורך שני הצדדים, החל מבסיס הגולגולת ונפתחים לארובת העין.</li>
	<li>הרימו את הקלבריום ונתקו בעדינות את המוח מבסיס הגולגולת באמצעות מלקחיים. הערה: מוחות של מחצית מהעכברים היו נתונים לצביעה של 2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride (TTC), בעוד שמוחות מהחצי השני עברו בדיקה היסטולוגית.</li>
	<li>השרו את המוח בתמיסת פרפורמלדהיד 4% למשך הלילה לצורך ניתוח היסטולוגי המשך.</li>
</ol>6. זיהוי נפח אוטם
<ol><li>הכניסו את המוח לתא הקפאה בטמפרטורה של -20°C במקרר למשך 20 דקות.</li>
	<li>מקמו את המוח לתוך מטריצת המוח בקוטר 1 מ"מ וחתכו את המוח למקטעים כליליים בעובי של 2 מ"מ באמצעות להבי מיקרוטום.</li>
	<li>העבירו את חלקי המוח לצלחת תרבית של 24 בארות והוסיפו 2% TTC כדי לכסות את רקמת המוח. שים את צלחת תרבית 24 בארות בתנור טמפרטורה קבועה במשך 30 דקות עם הטמפרטורה להגדיר על 37 ° C.</li>
	<li>הרימו בזהירות את חלקי המוח וקיבעו אותם בתמיסת פרפורמלדהיד 4% למשך 15 דקות.</li>
	<li>בצע סריקה אופטית של חלקי מוח אלה ברזולוציה של 1200 x 1200 dpi על ידי סורק.</li>
	<li>מדוד את נפח אוטם המוח על ידי סיכום אזור האוטם של כל קטע (שטח של ההמיספרה הימנית פחות אזור לא נפגע של ההמיספרה השמאלית) באמצעות תוכנת תמונה J (https://imagej.net/software/imagej/index)18. חשב את אחוז נפח האוטם כנפח/נפח אוטם של ההמיספרה הימנית × 100%.</li>
</ol>7. ניתוח צביעה היסטופתולוגי ואימונופלואורסצנטי
<ol><li>קח את דגימות המוח מתמיסת paraformaldehyde ולשטוף אותם עם מים זורמים במשך 1 שעות.</li>
	<li>העבירו את דגימות המוח למכונת אוטומציה-רקמות-מייבשות. הפעל את התוכנית המוגדרת מראש להתייבשות, ויטריפיקציה וטבילת שעווה. הטמיעו את דגימות המוח המיובשות בפרפין וחתכו אותן למקטעים בעובי 5 מיקרומטר על ידי מיקרוטום.</li>
	<li>צביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E)<ol><li>מחלקים את החלקים עם קסילן 3 פעמים למשך 8 דקות כל אחד.</li>
		<li>הרטיבו את החלקים על ידי טבילה רצופה באתנול הדרגתי (100%, 95%, 90%, 80%, 70%) ומים מזוקקים למשך 5 דקות בכל פעם.</li>
		<li>מכתימים את החלקים בתמיסת המטוקסילין למשך 5 דקות.</li>
		<li>שטפו את החלקים במים מזוקקים כדי לשטוף את שאריות המטוקסילין, ולאחר מכן טבלו אותם באלכוהול חומצה הידרוכלורית 5% להבחנה של 5 שניות. שטפו את החלקים במים מזוקקים במשך 2 דקות.</li>
		<li>הכתימו את המקטעים בתמיסת אאוזין למשך 30 שניות ושטפו את עודפי נוזל הכתמים במים מזוקקים.</li>
		<li>לטבול את החלקים ב-90% אתנול, 95% אתנול, 100% אתנול וקסילן (2 פעמים) ברציפות במשך 5 דקות בכל פעם. הר את החלקים עם אמצעי הרכבה בלסם ניטרלי.</li>
	</ol></li>
	<li>צביעה אימונופלואורסצנטית<ol><li>טווקס את החלקים עם קסילן 3 פעמים במשך 8 דקות בכל פעם.</li>
		<li>יש לייבש מחדש את המקטעים על ידי טבילה רצופה באתנול הדרגתי (100%, 95%, 90%, 80%, 70%) ומים מזוקקים למשך 5 דקות בכל פעם.</li>
		<li>מחממים את תמיסת שליפת האנטיגן ציטראט לרתיחה במיקרוגל. לטבול את החלקים בתמיסת אחזור האנטיגן. חממו מחדש את מאגר אחזור האנטיגן בהספק נמוך (20 ואט) למשך 20 דקות.</li>
		<li>כבו את המיקרוגל ותנו למאגר שליפת האנטיגן להתקרר לטמפרטורת החדר (RT).</li>
		<li>שטפו את המקטעים שלוש פעמים במי מלח חוצצים פוספט 0.1 מ"מ (PBS) במשך 5 דקות בכל פעם.</li>
		<li>דגרו על החלקים עם תמיסה חוסמת (אלבומין בסרום בקר 5%) ב- RT למשך שעה אחת כדי לחסום את הקישור הלא ספציפי של אימונוגלובולין.</li>
		<li>לדגור על החלקים עם נוגדן ארנב נגד NeuN (1: 300), נוגדן ארנב נגד Iba-1 (1: 500) ונוגדן עכבר נגד GFAP (1: 500) ב 4 מעלות צלזיוס במשך הלילה.</li>
		<li>שטפו את המקטעים שלוש פעמים עם PBS של 0.1 mM במשך 5 דקות בכל פעם.</li>
		<li>דגרו על המקטעים עם IgG מצומד נגד ארנב עז Alexa 594 (1:500) או IgG מצומד נגד עכבר Alexa 488 (1:500) למשך שעה אחת ב-RT.</li>
		<li>שטפו את החלקים עם PBS של 0.1 mM והרכיבו אותם עם אמצעי הרכבה נגד דהייה המכיל 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI).</li>
		<li>צלם תמונות של שלושה שדות מיקרוסקופיים (300 מיקרומטר × 300 מיקרומטר) בתוך הפנומברה האיסכמית באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי ב 594 ננומטר ו 488 ננומטר, בהתאמה.</li>
		<li>באמצעות תוכנת ImageJ (https://imagej.net/software/imagej/index), להעריך את צפיפות התאים המוכתמים באופן חיובי על ידי ממוצע ספירות בפנומברה איסכמית19.</li>
	</ol></li>
</ol>

חסימה של עורק אמצעי דיסטלי לפיתוח מודל עכבר שבץ איסכמי

<ol><li>Patel, P., Yavagal, D., Khandelwal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperacute+management+of+ischemic+strokes%3A+JACC+Focus+Seminar%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Hyperacute management of ischemic strokes: JACC Focus Seminar.</a> J Am Coll Cardiol. 75 (15), 1844-1856 (2020).</li>
<li>GBD 2016 Stroke Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+burden+of+stroke%2C+1990-2016%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+study+2016%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national burden of stroke, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease study 2016.</a> Lancet Neurol. 18 (5), 439-458 (2019).</li>
<li>Joo, H., Wang, G., George, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+literature+review+of+cost-effectiveness+of+intravenous+recombinant+tissue+plasminogen+activator+for+treating+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke+Vasc+Neurol%22%5BJournal%5D)">A literature review of cost-effectiveness of intravenous recombinant tissue plasminogen activator for treating acute ischemic stroke.</a> Stroke Vasc Neurol. 2 (2), 73-83 (2017).</li>
<li>Jones, A. T., O'Connell, N. K., David, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+functional+stroke+mimic+patients%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurol%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of functional stroke mimic patients: a systematic review and meta-analysis.</a> Eur J Neurol. 27 (1), 18-26 (2020).</li>
<li>Tamura, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat%3A+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Focal cerebral ischaemia in the rat: Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 1 (1), 53-60 (1981).</li>
<li>Kuraoka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+experimental+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+artery+induces+high+reproducibility+of+brain+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Direct experimental occlusion of the distal middle cerebral artery induces high reproducibility of brain ischemia in mice.</a> Exp Anim. 58 (1), 19-29 (2009).</li>
<li>Orset, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+in+situ+thromboembolic+stroke+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion.</a> Stroke. 38 (10), 2771-2778 (2007).</li>
<li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Des+Devel+Ther%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).</li>
<li>Candelario-Jalil, E., Paul, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+aging+and+comorbidities+on+ischemic+stroke+outcomes+in+preclinical+animal+models%3A+A+translational+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Impact of aging and comorbidities on ischemic stroke outcomes in preclinical animal models: A translational perspective.</a> J Exp Neurol. 335, 113494(2021).</li>
<li>Zuo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuation+of+secondary+damage+and+A%CE%B2+deposits+in+the+ipsilateral+thalamus+of+dMCAO+rats+through+reduction+of+cathepsin+B+by+bis%28propyl%29-cognitin%2C+a+multifunctional+dimer%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Attenuation of secondary damage and Aβ deposits in the ipsilateral thalamus of dMCAO rats through reduction of cathepsin B by bis(propyl)-cognitin, a multifunctional dimer.</a> Neuropharmacology. 162, 107786(2020).</li>
<li>Shabani, Z., Farhoudi, M., Rahbarghazi, R., Karimipour, M., Mehrad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular%2C+histological%2C+and+behavioral+pathological+alterations+associated+with+the+mouse+model+of+photothrombotic+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chem+Neuroanat%22%5BJournal%5D)">Cellular, histological, and behavioral pathological alterations associated with the mouse model of photothrombotic ischemic stroke.</a> J Chem Neuroanat. 130, 102261(2023).</li>
<li>Caleo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rehabilitation+and+plasticity+following+stroke%3A+Insights+from+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Rehabilitation and plasticity following stroke: Insights from rodent models.</a> Neuroscience. 311, 180-194 (2015).</li>
<li>Llovera, G., Roth, S., Plesnila, N., Veltkamp, R., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+stroke+in+mice%3A+permanent+coagulation+of+the+distal+middle+cerebral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Modeling stroke in mice: permanent coagulation of the distal middle cerebral artery.</a> J Vis Exp. (89), e51729(2014).</li>
<li>Lavayen, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotection+by+the+cannabidiol+aminoquinone+VCE-004.8+in+experimental+ischemic+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Int%22%5BJournal%5D)">Neuroprotection by the cannabidiol aminoquinone VCE-004.8 in experimental ischemic stroke in mice.</a> Neurochem Int. 165, 105508(2023).</li>
<li>Hu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+B+knockout+confers+significant+brain+protection+in+the+mouse+model+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cathepsin B knockout confers significant brain protection in the mouse model of stroke.</a> J Exp Neurol. 368, 114499(2023).</li>
<li>Yu, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optochemogenetic+stimulation+of+transplanted+iPS-NPCs+enhances+neuronal+repair+and+functional+recovery+after+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Optochemogenetic stimulation of transplanted iPS-NPCs enhances neuronal repair and functional recovery after ischemic stroke.</a> J Neurosci. 39 (33), 6571-6594 (2019).</li>
<li>Lin, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opening+a+new+time+window+for+treatment+of+stroke+by+targeting+HDAC2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Opening a new time window for treatment of stroke by targeting HDAC2.</a> J Neurosci. 37 (28), 6712-6728 (2017).</li>
<li>Shi, X. F., Ai, H., Lu, W., Cai, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SAT%3A+Free+software+for+the+semi-automated+analysis+of+rodent+brain+sections+with+2%2C3%2C5-triphenyltetrazolium+chloride+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">SAT: Free software for the semi-automated analysis of rodent brain sections with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride staining.</a> Front Neurosci. 13, 102(2019).</li>
<li>Jensen, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+histological+staining+and+fluorescence+using+ImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of histological staining and fluorescence using ImageJ.</a> Anat Rec. 296 (3), 378-381 (2013).</li>
<li>Donahue, J., Wintermark, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+CT+and+acute+stroke+imaging%3A+foundations%2C+applications%2C+and+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroradiol%22%5BJournal%5D)">Perfusion CT and acute stroke imaging: foundations, applications, and literature review.</a> J Neuroradiol. 42 (1), 21-29 (2015).</li>
<li>Sun, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+L-3-n-butylphthalide+pretreatment+attenuates+ischemic+brain+injury+in+mice+with+permanent+distal+middle+cerebral+artery+occlusion+through+the+Nrf2+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Heliyon%22%5BJournal%5D)">Long-term L-3-n-butylphthalide pretreatment attenuates ischemic brain injury in mice with permanent distal middle cerebral artery occlusion through the Nrf2 pathway.</a> Heliyon. 8 (7), e09909(2022).</li>
<li>Balkaya, M. G., Trueman, R. C., Boltze, J., Corbett, D., Jolkkonen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+outcome+measures+to+improve+experimental+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral outcome measures to improve experimental stroke research.</a> Behav Brain Res. 352, 161-171 (2018).</li>
<li>Hao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+mechanism+of+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+with+treatment+of+stepharine+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Phytomedicine%22%5BJournal%5D)">Inflammatory mechanism of cerebral ischemia-reperfusion injury with treatment of stepharine in rats.</a> Phytomedicine. 79, 153353(2020).</li>
<li>Pietrogrande, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+oxygen+post+conditioning+prevents+thalamic+secondary+neuronal+loss+caused+by+excitotoxicity+after+cortical+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Low oxygen post conditioning prevents thalamic secondary neuronal loss caused by excitotoxicity after cortical stroke.</a> Sci Rep. 9 (1), 4841(2019).</li>
<li>Shi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+subtype-dependent+synapse+elimination+by+reactive+gliosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Stroke subtype-dependent synapse elimination by reactive gliosis in mice.</a> Nat Commun. 12 (1), 6943(2021).</li>
<li>Chen, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aryl+hydrocarbon+receptor+modulates+stroke-induced+astrogliosis+and+neurogenesis+in+the+adult+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22JNeuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aryl hydrocarbon receptor modulates stroke-induced astrogliosis and neurogenesis in the adult mouse brain.</a> JNeuroinflammation. 16 (1), 187(2019).</li>
</ol>

למחברים אין אינטרסים מנוגדים לחשוף.

בפרוטוקול הנוכחי של מודל dMCAO electrocoagulation craniotomy, ההליכים הכירורגיים מבוצעים עם פולשניות מינימלית, שבה רק חלק מהשריר הטמפורליס מופרד כדי למתן את ההשפעות השליליות על תפקוד המסטיקציה. כל העכברים התאוששו היטב לאחר ההליך, ללא מקרים נצפים של קשיי האכלה. ניתן להבחין בקלות ב-MCA בעצם הרקתית של העכבר, ובכך לאפשר זיהוי מדויק של מיקומי קרניוטומיה מתאימים. נגעים איסכמיים אלה הנגרמים על ידי מודל dMCAO היו ממוקמים בחלק הצדדי של קליפת המוח, בהתאם לדיווחים קודמים שתוארו על ידי Llovera G et al.13. יתר...

שבץ מוחי הוא מחלה מוחית חריפה נפוצה המאופיינת בשכיחות גבוהה של נכות ותמותה1. מתוך כלל מקרי השבץ, כמעט 80% שייכים לשבץ איסכמי2. עד כה, פקקת תוך ורידית נותרה אחת ממספר מצומצם של גישות פרודוקטיביות לטיפול בשבץ איסכמי חריף. עם זאת, האפקטיביות של טיפול thrombolytic מוגבל על ידי חלון הזמן האפקטיבי הצר ואת התרחשות של טרנספורמציה hemorrhagic3. בשלב השיקום ארוך הטווח לאחר שבץ איסכמי, מספר לא מבוטל של חולים צפויים לחוות הפרעות נוירולוגיות עמידות4. חקירה נוספת נדרשת בדחיפות כדי לפענח את המנגנונים הפתופיזיולוגיים הבסיסיים של שבץ איסכמי, כמו גם להקל על פיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשות הממוקדות שבץ איסכמי. הקמתו של מודל מהימן וניתן לשכפול של שבץ איסכמי היא חיונית למחקר בסיסי, כמו גם למחקר תרגומי מאוחר יותר בתחום השבץ האיסכמי.
בשנת 1981, Tamura et al. פיתחו מודל איסכמיה מוחית מוקדית על ידי שימוש באלקטרוקואגולציה טרנס-גולגולתית באתר הפרוקסימלי של עורק המוח האמצעי (MCA)5. מאז, חוקרים רבים השתמשו במתודולוגיות שונות כגון קשירה, דחיסה או חיתוך כדי לגרום לחסימת MCA דיסטלית (dMCAO) לקביעת מודלים חולפים או קבועים של שבץ איסכמי 6,7,8. בהשוואה למודל חוט הלהט, מודל dMCAO מציג יתרונות בולטים כגון גודל אוטם קטן יותר ושיעור הישרדות גבוה יותר, מה שהופך אותו מתאים יותר לחקר התאוששות תפקודית ארוכת טווח לאחר שבץ איסכמי9. בנוסף, מודל dMCAO מדגים שיעור הישרדות גבוה יותר במכרסמים מזדקנים בהשוואה למודל חוט הלהט, מה שהופך אותו לכלי יתרון לחקר שבץ איסכמי במודלים של קשישים ובעלי חיים נלווים10. מודל שבץ פוטוטרומבוטי (PT) הוכח כבעל מאפיינים של פחות פולשניות כירורגית ושיעור תמותה נמוך משמעותית. עם זאת, מודל PT מציג רמה גבוהה יותר של נמק תאי ובצקת רקמות בהשוואה למודל dMCAO, מה שמוביל להיעדר מחזור בטחונות11. יתר על כן, ראוי לציין כי הנגעים האיסכמיים שנצפו במודל PT נובעים בעיקר מחסימת כלי דם, השונה באופן מהותי מהאיסכמיה המוחית הנגרמת על ידי תסחיף כלי דם גדולים במודל dMCAO12.
במאמר זה, אנו מציגים את המתודולוגיה להשראת מודל dMCAO מורין על ידי קרישת MCA דיסטלי באמצעות קרניוטומיה של חלון עצם קטן. בנוסף, ערכנו בדיקות היסטולוגיות והערכות התנהגותיות כדי לאפיין באופן מקיף את תוצאות העלבונות והשבץ האיסכמי במודל ניסויי זה. אנו שואפים להכיר לחוקרים מודל זה ולהקל על חקירות נוספות של המנגנונים הפתולוגיים של שבץ איסכמי.

<table><tbody><tr><td>2,3,5-Triphenyltetrazolium כלוריד (TTC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108380</td><td>צבע לצביעה TTC</td></tr><tr><td>צלחת תרבית 24 בארות</td><td>קורנינג (ארה"ב)CLS3527</td><td></td> <td>כלי לצביעה TTC</td></tr><tr><td>4% פרפורמלדהיד</td><td>ווהאן Servicebio Technology Co., Ltd.</td><td>G1101</td><td>קיבוע רקמות</td></tr><tr><td>5% אלבומין סרום בקר</td><td>ווהאן BOSTER Bio Co., Ltd.</td><td>AR004</td><td>חסימת אנטיגן לא ספציפית</td></tr><tr><td>5-0 תפר חומצה פוליגליקולית</td><td>Jinhuan Medical Co., Ltd</td><td>KCR531</td><td>חומר לניתוח</td></tr><tr><td>מכונת הרדמה</td><td>Midmark Corporation</td><td>VMR</td><td>בעלי חיים מורדמים</td></tr><tr><td>Antifade הרכבה בינוני</td><td>Beyotime Biotech</td><td>P0131</td><td>חותם לצביעה IF</td></tr><tr><td>אוטומציה-ייבוש רקמות&nbsp; מכונת </td><td>Leica Biosystems (גרמניה)</td><td>TP1020</td> קרם הסרת <td>רקמות ייבוש</td></tr><tr><td></td><td>Veet (צרפת)</td><td>20220328</td><td>חומר לניתוח</td></tr><tr><td>Diclofenac&nbsp; נתרן&nbsp; ג'ל</td><td>ווהאן מא יינגלונג פרמצבטיקה &nbsp;Co., Ltd.</td><td>H10950214</td><td>משככי כאבים לבעלי חיים</td></tr><tr><td>קצה מקדחה (0.8 מ"מ)</td><td>Rwd Life Science Co., Ltd.</td><td></td><td>ציוד לניתוח</td></tr><tr><td>תמיסת צביעה Eosin</td><td>Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.</td><td>G1001</td><td>צבע ל-H& E מכתים</td></tr><tr><td>משחת עיניים</td><td>גואנגג'ואו פרמצבטיקה ושות', בע"מ</td><td>H44023098</td><td>חומר לניתוח</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי</td><td>אולימפוס (יפן)</td> <td>BX51</td><td>רכישת תמונה</td></tr><tr><td>GFAP עכבר נוגדן חד שבטי</td><td>Cell Signaling Technology Inc. (דנברס, מסצ'וסטס, ארה"ב)</td><td>3670</td><td>נוגדן ראשוני ל-IF מכתים</td></tr><tr><td>עז אנטי עכבר Alexa 488-מצומד IgG</td><td>Cell Signaling Technology Inc. (דנברס, מסצ'וסטס, ארה"ב)</td><td>4408</td><td>נוגדן שני ל-IF מכתים</td></tr><tr><td>עיזים נגד ארנב Alexa 594-מצומד IgG</td><td>Cell Signaling Technology Inc. (דנברס, MA, ארה"ב)</td><td>8889</td><td>נוגדן שני לצביעת IF</td></tr><tr><td>מד חוזק אחיזה</td><td>שנחאי Xinruan Information Technology Co., Ltd.</td><td>XR501</td><td>ציוד לבדיקה התנהגותית</td></tr><tr><td>Hematoxylin תמיסת צביעה</td><td>Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.</td><td>G1004</td><td>צבע ל-H& E מכתים</td></tr><tr><td>Iba1 ארנב נוגדן חד שבטי</td><td>Abcam</td><td>ab178846</td><td>נוגדן ראשוני לצביעת IF</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Rwd Life Science Co., Ltd.</td><td>R510-22-10</td><td>בעלי חיים מורדמים</td></tr><tr><td>מד זרימת דם דופלר לייזר</td><td>Moor Instruments (בריטניה)</td> <td>moorVMS</td><td>ניטור זרימת דם</td></tr><tr><td>מלוקסיקם</td><td>Boehringer-Ingelheim</td><td>J20160020</td><td>משככי כאבים לבעלי חיים</td></tr><tr><td>Microdrill</td><td>Rwd Life Science Co., Ltd.</td><td>78001</td><td>ציוד לניתוח</td></tr><tr><td>סט מכשירים מיקרוכירורגיים</td><td>Rwd Life Science Co., Ltd.</td><td>SP0009-R</td><td>ציוד לניתוח</td></tr><tr><td>מיקרוטום</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק (ארה"ב)</td><td>HM325</td><td>ייצור חתך רקמות</td></tr><tr><td>להב מיקרוטום</td><td>Leica Biosystems (גרמניה)</td><td>819</td><td>ייצור חתך רקמות</td></tr><tr><td>מחולל אלקטרו-קואגולציה מונופולרי</td><td>Spring Scenery Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>CZ0001</td><td>ציוד לניתוח</td></tr><tr><td>משחת Mupirocin</td><td>טיאנג'ין סמית קליין & מעבדות צרפתיות בע"מ</td><td>H10930064</td><td>נוגדן חד שבטי לבעלי חיים</td></tr><tr><td>NeuN Rabbit נוגדן חד שבטי</td><td>Cell Signaling Technology Inc. (דנברס, מסצ'וסטס, ארה"ב)</td><td>24307</td><td>נוגדן ראשוני לצביעה IF</td></tr><tr><td>בלסם ניטרלי</td><td>אבסין Bioscience</td><td>abs9177</td><td>חותם ל-H& E מכתים</td></tr><tr><td>מרכז הטמעת פרפין</td><td>Thermo Fisher Scientific (ארה"ב)</td> <td>EC 350</td><td>לייצר בלוקים של פרפין</td></tr><tr><td>Pentobarbital נתרן</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3761</td><td>בעלי חיים מורדמים</td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח</td><td>שנחאי Beyotime Biotech Co., Ltd</td><td>C0221A</td><td>שטיפה למדור רקמות</td></tr><tr><td>מכונת גילוח</td><td>שנזן Codos מכשירי חשמל ושות', בע"מ</td><td>CP-9200</td><td>ציוד לניתוח</td></tr><tr><td>פתרון נתרן ציטראט</td><td>שנחאי Beyotime Biotech Co., Ltd.</td><td>P0083</td><td>אחזור אנטיגן לצביעה של IF</td></tr></tbody></table>

השראת שבץ איסכמי חריף בעכברים באמצעות טכניקת חסימת העורק האמצעי הדיסטלי

Induction of Acute Ischemic Stroke in Mice Using the Distal Middle Artery Occlusion Technique

שבץ איסכמי נותר הגורם העיקרי לתמותה ולפגיעה תפקודית בקרב האוכלוסיות הבוגרות בעולם. רק מיעוט מחולי שבץ איסכמי זכאים לקבל טרומבוליזה תוך וסקולרית או טיפול תרומבקטומיה מכנית בחלון הזמן האופטימלי. בקרב אותם מחלימים משבץ מוחי, כשני שלישים סובלים מהפרעות נוירולוגיות לאורך תקופה ממושכת. ביסוס מודל שבץ איסכמי ניסיוני יציב וניתן לחזרה הוא משמעותי ביותר להמשך חקירת המנגנונים הפתופיזיולוגיים ופיתוח אסטרטגיות טיפוליות יעילות לשבץ איסכמי. עורק המוח האמצעי (MCA) מייצג את המיקום הדומיננטי של שבץ איסכמי בבני אדם, כאשר חסימת MCA משמשת כמודל הנפוץ של איסכמיה מוחית מוקדית. בפרוטוקול זה, אנו מתארים את המתודולוגיה של הקמת מודל חסימת MCA דיסטלי (dMCAO) באמצעות אלקטרוקואגולציה טרנס-גולגולתית בעכברי C57BL/6. מכיוון שאתר החסימה ממוקם בענף קליפת המוח של MCA, מודל זה מייצר נגע אוטם בינוני המוגבל לקליפת המוח. אפיון נוירולוגי התנהגותי והיסטופתולוגי הדגים תפקוד מוטורי נראה לעין, ניוון נוירונים והפעלה בולטת של מיקרוגליה ואסטרוציטים במודל זה. לפיכך, מודל עכבר dMCAO זה מספק כלי רב ערך לחקר איסכמיה וערך של פופולריזציה.

המכשירים העיקריים שמשמשים לביצוע dMCAO הם סט המכשירים המיקרו-כירורגיים, מכשיר האידוי איזופלורן ומחולל הקרישה המיקרו-כירורגי המונופולרי שמוצג באיור 1. ההליך הניסויי של המחקר הזה מומחש באיור 2. בקצרה, נעשה שימוש בקרניוטומיה קטנה של חלון עצם כדי לחשוף את ה- MCA הדיסטלי, אשר לאחר מכן נקרש כדי לגרום לאיסכמיה מוחית מוקדית קבועה בעכברי C57BL/6. יתר על כן, העלבונות האיסכמיים ותוצאות השבץ הוערכו באמצעות צביעת TTC, בדיקות היסטולוגיות והערכות התנהגותיות לאחר 3 ימים לאחר dM...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל חסימת עורק מוחי אמצעי דיסטלי (dMCAO) באמצעות אלקטרוקואגולציה טרנס-גולגולתית בעכברי C57BL/6J ומעריכים את ההתנהגות הנוירולוגית והתכונות ההיסטופתולוגיות שלאחר מכן.

Ischemic stroke remains the predominant cause of mortality and functional impairment among the adult populations globally. Only a minority of ischemic ...

במחקר הנוכחי, אנו שואפים לספק פרוטוקול מקיף ומפורט לביסוס מודל חסימת עורק מוחי אמצעי בעכברי C57BL/6J באמצעות אלקטרוקואגולציה טרנס-גולגולתית, והערכנו את ההתנהגות הנוירולוגית והמאפיינים ההיסטופתולוגיים הבאים. עורק המוח האמצעי או MCA מוכר כאתר העיקרי של שבץ איסכמי בבני אדם. שיטות החסימה של MCA, כולל טכניקה, החדרה פוטוכימית וחסימה שימשו באופן נרחב כדי לגרום לאיסכמיה מוחית מוקדית במכרסמים.בהשוואה למודלים אחרים של שבץ איסכמיה, למודל זה יש יתרון של פחות פולשניות כירורגית, גודל אוטם קטן יותר ושיעור הישרדות גבוה יותר, מה שהופך אותו מתאים יותר לחקירת ההתאוששות התפקודית ארוכת הטווח לאחר שבץ איסכמי. בסך הכל, הגישה הנוכחית מייצרת למעשה מודל שבץ איסכמי ניסיוני אמין המציג שרידות גבוהה וחזרתיות מצוינת. כתוצאה מכך, מתודולוגיה זו משמשת כלי רב ערך הן למחקר יסוד והן למחקר תרגומי בתחום השבץ.בעתיד, נשתמש בפרדיגמות התנהגות כגון זיהוי עצמים חדשניים ומבוך מים כדי לחקור את השינויים הדינמיים ביכולות למידה וזיכרון ארוכות טווח בקרב עכברים דיסטליים המוסתרים על ידי MCA. זה יאפשר לנו לוודא את הכדאיות של השימוש בהם כמודל חייתי למחקרים על ליקויי קוגניציה לאחר שבץ.

induction-acute-ischemic-stroke-mice-using-distal-middle-artery

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

פילמנטיות חסימה של עורק המוח התיכון הוא מודל משותף לחקר שבץ איסכמי בעכברים.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

אנו מדגימים את הוידאו שיטה לייצור באמצע חסימה בעורק המוח בעכברים בוגרים באמצעות monofilament intraluminal. כמו כן, אנו מראים כיצד להעריך את מידת אוטם מוחי על ידי מכתים 2,3,5-triphenyltetrazolium כלוריד (TTC).

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

עורק המוח האמצעי intraluminal חסימה (MCAO) מודל הוא מודל בשימוש השכיח ביותר בקרב מודלים ניסיוניים שבץ איסכמי. להלן נדגים את המודל כולו בפירוט עם מדריך של flowmetry לייזר דופלר, והתוצאות מי מטעמה.

Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים

מודל intraluminal המוח האמצעי, החסימה בעכברים מוצג במסמך זה. ההיקף אוטם מוחית מחושב על ידי ציון נוירולוגים וכתמים סגולים cresyl, מכתים חלופה לTTC, להציע את היתרון הגדול לבדיקה בסמני ריבית רבים במקביל.

מודל עכבר של MCAO intraluminal: הערכת אוטם מוחית על ידי כתמים סגולים Cresyl

מודלים עכבריים שונים של חסימת עורק המוח אמצעית (MCAO) נמצאים בשימוש נרחב בחקר המוח ניסיוני. הנה, אנחנו מדגימים את המודל של MCAO דיסטלי הקבוע transcranial אשר מייצר אוטם קליפת המוח עקבי של גודל המתאים לנזק שהוטל על ידי הרוב המכריע של מקרי שבץ איסכמי אנושיים.

דוגמנות שבץ בעכברים: קרישה קבועה של עורקי דיסטלי התיכון מוחין

על מנת להבין את פתופיזיולוגיה של שבץ, חשוב להשתמש במודלים אמינים. מאמר זה יתאר את אחד דגמי שבץ הנפוצים ביותר בשימוש בעכברים, כינה את חסימת עורק המוח האמצעי (MCAo) המודל (המכונה גם נימת intraluminal או מודל תפר) עם reperfusion.

גישה ניתוחית עבור העורקים התיכון ספיגה מוחין ושבץ reperfusion מושרה של עכברים

אנו מתארים מודל עכבר של שבץ מוחי הנגרם על ידי חסימה של עורק המוח האמצעי באמצעות תפר מצופה סיליקון. ניתן ליישם את הפרוטוקול כדי לגרום לחסימה קבועה או איסכמיה זמנית, ואחריה רפרפוזיה.

אינדוקציה של שבץ איסכמי ו איסכמיה reperfusion בעכברים באמצעות הטכניקה ויזואליזציה ספיגות עורקים התיכונים של אזור האוטם

Intraluminal סגר נימה של עורק המוח התיכון הוא הדגם הנפוצות ביותר בשימוש ב- vivo של שבץ ניסויים בחולדות. גישה כירורגית חלופיים כדי לאפשר תיקון עורק הראש נפוצות מתבצע כאן, מה שמאפשר את פגיעה reperfusion של עורק תרדמני, של פגיעה reperfusion מלא אל השטח עורק המוח התיכון.

חסימה בעורק האמצעי המאפשר פגיעה Reperfusion באמצעות תיקון עורק הראש נפוצות בעכברים

דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion הוקמה כדי לחקור הפתופיזיולוגיה של שבץ. אנו יש מאתרים ומפסיקים את עורק המוח התיכון נכון ולא נכון עורק תרדמני, להחזיר את זרימת הדם לאחר 10 או 40 דקות של איסכמיה.

שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

פרוטוקול זה מדגים מודל שבץ עכבר ייחודי עם אוטם בגודל בינוני ושיעור הישרדות מצוין. מודל זה מאפשר לחוקרי שבץ פרה-קליניים להאריך את משך האיסכמיה, להשתמש בעכברים מזדקנים ולהעריך תוצאות תפקודיות ארוכות טווח.

מודל שונה של חסימת עורק מוחי אמצעי טרנס-גולגולתי לחקר תוצאות שבץ מוחי בעכברים מזדקנים

פרוטוקול זה מתאר את המודל של איסכמיה מוחית מוקדית חולפת בעכברים באמצעות חסימה תוך לומינלית של עורק המוח האמצעי. בנוסף, דוגמאות להערכת תוצאות מוצגות באמצעות הדמיית תהודה מגנטית ומבחני התנהגות.

מודל חולף של חסימת עורק מוחי אמצעי חולף

חקור מודל שבץ איסכמי חריף בעכברים C57BL/6J באמצעות חסימת העורק האמצעי הדיסטלי. שיטה זו מאפשרת הערכה של התנהגות נוירולוגית ושינויים היסטופתולוגיים לאחר השבץ.

השראת שבץ איסכמי חריף בעכברים באמצעות טכניקת חסימת העורק האמצעי הדיסטלי

גלה סרטונים נוספים