Name: בידוד תאי סטרומה מאיברים המטופויטיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-26T14:45:00.000+00:00
Duration: 5 min 27 s
Description: חקור בידוד תאי סטרומה מעצם, מח עצם וטימוס בעכברים ובבני אדם לחקר המטופויאזה. פרוטוקולים אלה מותאמים לניתוח מולטי-אומיקס בודד-תאי לזיהוי אוכלוסיות תאים מגוונות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

נתמכנו בסיוע טכני מקצועי על ידי מתקן HSCI-CRM Flow Cytometry בבית החולים הכללי של מסצ'וסטס ומתקן Bauer Core באוניברסיטת הרווארד. T.K ו-K.G נתמכו על ידי מועצת המחקר השבדית ו-C.M. על ידי קרן המחקר הגרמנית. אנו מודים לסרגיי Isaev ול- I-Hsiu Lee על הסיוע בניתוח נתוני ריצוף RNA של תא יחיד.

מיטוב בידוד תאי סטרומה מבלוטת התימוס וממח העצם

<ol><li>Baryawno, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+taxonomy+of+the+bone+marrow+stroma+in+homeostasis+and+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A cellular taxonomy of the bone marrow stroma in homeostasis and leukemia.</a> Cell. 177 (7), 1915-1932 (2019).</li>
<li>Severe, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-induced+changes+in+bone+marrow+stromal+cell+populations+revealed+through+single-cell+protein+expression+mapping%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Stress-induced changes in bone marrow stromal cell populations revealed through single-cell protein expression mapping.</a> Cell Stem Cell. 25 (4), 570-583 (2019).</li>
<li>Han, J., Zuniga-Pflucker, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+2020+view+of+thymus+stromal+cells+in+t+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A 2020 view of thymus stromal cells in t cell development.</a> J Immunol. 206 (2), 249-256 (2021).</li>
<li>Park, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+atlas+of+human+thymic+development+defines+t+cell+repertoire+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A cell atlas of human thymic development defines t cell repertoire formation.</a> Science. 367 (6480), (2020).</li>
<li>Denisenko, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+assessment+of+tissue+dissociation+and+storage+biases+in+single-cell+and+single-nucleus+rna-seq+workflows%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Systematic assessment of tissue dissociation and storage biases in single-cell and single-nucleus rna-seq workflows.</a> Genome Biol. 21 (1), 130(2020).</li>
<li>Lischetti, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+thresholding+and+tissue+dissociation+optimization+for+cite-seq+identifies+differential+surface+protein+abundance+in+metastatic+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Dynamic thresholding and tissue dissociation optimization for cite-seq identifies differential surface protein abundance in metastatic melanoma.</a> Commun Biol. 6 (1), 830(2023).</li>
<li>Ding, L., Saunders, T. L., Enikolopov, G., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+and+perivascular+cells+maintain+haematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Endothelial and perivascular cells maintain haematopoietic stem cells.</a> Nature. 481 (7382), 457-462 (2012).</li>
<li>Mendez-Ferrer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+and+haematopoietic+stem+cells+form+a+unique+bone+marrow+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal and haematopoietic stem cells form a unique bone marrow niche.</a> Nature. 466 (7308), 829-834 (2010).</li>
<li>Raaijmakers, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((progenitor+dysfunction+induces+myelodysplasia+and+secondary+leukaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">progenitor dysfunction induces myelodysplasia and secondary leukaemia.</a> Nature. 464 (7290), 852-857 (2010).</li>
<li>Himburg, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+bone+marrow+sources+of+pleiotrophin+control+hematopoietic+stem+cell+maintenance+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Distinct bone marrow sources of pleiotrophin control hematopoietic stem cell maintenance and regeneration.</a> Cell Stem Cell. 23 (3), 370-381 (2018).</li>
<li>Zhou, B. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((marrow+adipocytes+promote+the+regeneration+of+stem+cells+and+haematopoiesis+by+secreting+scf%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">marrow adipocytes promote the regeneration of stem cells and haematopoiesis by secreting scf.</a> Nat Cell Biol. 19 (8), 891-903 (2017).</li>
<li>Steinmann, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+human+thymus+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Pathol%22%5BJournal%5D)">Changes in the human thymus during aging.</a> Curr Top Pathol. 75, 43-88 (1986).</li>
<li>Steinmann, G. G., Klaus, B., Muller-Hermelink, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+involution+of+the+ageing+human+thymic+epithelium+is+independent+of+puberty.+A+morphometric+study%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The involution of the ageing human thymic epithelium is independent of puberty. A morphometric study.</a> Scand J Immunol. 22 (5), 563-575 (1985).</li>
<li>Ambrosi, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+accumulation+in+the+bone+marrow+during+obesity+and+aging+impairs+stem+cell-based+hematopoietic+and+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Adipocyte accumulation in the bone marrow during obesity and aging impairs stem cell-based hematopoietic and bone regeneration.</a> Cell Stem Cell. 20 (6), 771-784 (2017).</li>
<li>Ho, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodeling+of+bone+marrow+hematopoietic+stem+cell+niches+promotes+myeloid+cell+expansion+during+premature+or+physiological+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Remodeling of bone marrow hematopoietic stem cell niches promotes myeloid cell expansion during premature or physiological aging.</a> Cell Stem Cell. 25 (3), 407-418 (2019).</li>
<li>Kusumbe, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+modulation+of+vascular+niches+for+haematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Age-dependent modulation of vascular niches for haematopoietic stem cells.</a> Nature. 532 (7599), 380-384 (2016).</li>
<li>Seach, N., Wong, K., Hammett, M., Boyd, R. L., Chidgey, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purified+enzymes+improve+isolation+and+characterization+of+the+adult+thymic+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Purified enzymes improve isolation and characterization of the adult thymic epithelium.</a> J Immunol Methods. 385 (1-2), 23-34 (2012).</li>
<li>Stoeckle, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+myeloid+dendritic+cells+and+epithelial+cells+from+human+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of myeloid dendritic cells and epithelial cells from human thymus.</a> J Vis Exp. (79), e50951(2013).</li>
<li>Gustafsson, K., Scadden, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+thymus+stromal+cells+from+human+and+murine+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of thymus stromal cells from human and murine tissue.</a> Methods Mol Biol. 2567, 191-201 (2023).</li>
<li>Centers for disease control prevenetion (cdc) infection control. , Available from: 
 <a target="_blank" href="Https://Www.Cdc.Gov/Infectioncontrol/Basics/Standard-Precautions.Html">Https://Www.Cdc.Gov/Infectioncontrol/Basics/Standard-Precautions.Html</a> (2023).</li>
<li>Amend, S. R., Valkenburg, K. C., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+hind+limb+long+bone+dissection+and+bone+marrow+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine hind limb long bone dissection and bone marrow isolation.</a> J Vis Exp. (110), e53936(2016).</li>
<li>Zhu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+isolation+and+culture+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+compact+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse compact bone.</a> Nat Protoc. 5 (3), 550-560 (2010).</li>
<li>Calvi, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblastic+cells+regulate+the+haematopoietic+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Osteoblastic cells regulate the haematopoietic stem cell niche.</a> Nature. 425 (6960), 841-846 (2003).</li>
<li>Kode, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukaemogenesis+induced+by+an+activating+beta-catenin+mutation+in+osteoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Leukaemogenesis induced by an activating beta-catenin mutation in osteoblasts.</a> Nature. 506 (7487), 240-244 (2014).</li>
<li>Agarwal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+niche-specific+expression+of+cxcl12+controls+quiescence+of+treatment-resistant+leukemia+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal niche-specific expression of cxcl12 controls quiescence of treatment-resistant leukemia stem cells.</a> Cell Stem Cell. 24 (5), 769-784 (2019).</li>
<li>Duarte, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+endosteal+vascular+niche+remodeling+rescues+hematopoietic+stem+cell+loss+in+aml%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Inhibition of endosteal vascular niche remodeling rescues hematopoietic stem cell loss in aml.</a> Cell Stem Cell. 22 (1), 64-77 (2018).</li>
<li>O'flanagan, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociation+of+solid+tumor+tissues+with+cold+active+protease+for+single-cell+rna-seq+minimizes+conserved+collagenase-associated+stress+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Dissociation of solid tumor tissues with cold active protease for single-cell rna-seq minimizes conserved collagenase-associated stress responses.</a> Genome Biol. 20 (1), 210(2019).</li>
<li>Stoeckius, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+hashing+with+barcoded+antibodies+enables+multiplexing+and+doublet+detection+for+single+cell+genomics%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell hashing with barcoded antibodies enables multiplexing and doublet detection for single cell genomics.</a> Genome Biol. 19 (1), 224(2018).</li>
</ol>

D.T.S. היא דירקטורית ובעלת מניות ב-Agios Therapeutics וב-Editas Medicines; מייסד, דירקטור, בעל מניות וחבר מועצה מדעית מייעצת עבור Magenta Therapeutics ו- LifeVault Bio, בעל מניות ומייסד של Fate Therapeutics ו- Garuda Therapeutics, ודירקטור, מייסד ובעל מניות ב- Clear Creek Bio, יועץ ל- FOG Pharma, Inzen Therapeutics ו- VCanBio, ומקבל מימון מחקר ממומן מ- Sumitomo Dianippon. D.T.S ו-K.G הם ממציאי US20220143099A1 פטנטים.

תאי סטרומה באיברים המטופויטיים הם קריטיים לייצור דם תקין והפרעות סטרומה המטופויטיות עלולות לגרום לליקויים חמורים בתחזוקה ההמטופויטית ובתגובה ללחץ 9,23,24. תובנה של תאי סטרומה hematopoietic חיונית להבנת מחלות המטולוגיות 7,9,10,24 וליכולת לפתח טיפולים להילחם בהם25,26. עם זאת, הפרדה חוזרת של סטרומה המטופויטית מפרנכימה היא אתגר, במיוחד עם הופעתה של מולטיומיקה חד-תאית הדורשת הכנת דגימה באיכות גבוהה תוך מקסום התפוקה והמגוון של תאי סטרומה. הפרוטוקולים המתוארים כאן עברו אופטימיזציה כך שיהיו תואמים לרוב יישומי המולטיומיקה במורד הזרם תוך עמידה באתגרים של בידוד תאי סטרומה המטופויטיים 1,2,19.
הנושא הראשון שיש לשקול לבידוד תאי סטרומה המטופויטיים הוא תנאי דיסוציאציה. דיסוציאציה אופטימלית היא קריטית לשחרור תאי סטרומה מהרקמה כדי לשקף הטרוגניות מלאה של תא הסטרומה 1,2. בחירת תמהיל הדיסוציאציה הנכון תלויה בהיקף הניסוי ובפרוטוקולים במורד הזרם. אנו ממליצים להכין תערובות דיסוציאציה טריות ככל האפשר ולשמור אותן על קרח עד לשימוש. רכיבים מסוימים קשים להמסה כגון dispase ועשויים לדרוש זמן רב יותר לערבוב פיפטים. מערבולות אינן מומלצות מכיוון שהדבר עלול לשבש את הקונפורמציה הטבעית של אנזימי העיכול, ובסופו של דבר להוביל להשבתם. חשוב לציין, EDTA יעכב פעילות אנזימטית ויש להימנע ממנו במהלך שלבי עיכול פעיל, אך ניתן להשתמש בו כדי לעצור את התגובה אם לא ניתן להסיר את האנזים המכיל חיץ באופן מיידי. בנוסף לתערובת האנזימים עצמה, שתי נקודות קריטיות לדיסוציאציה יעילה של רקמות: (1) ריסוק וחיתוך יסודיים כדי להגדיל את שטח הפנים, ו-(2) זמן דגירה מספיק עם אנזימי העיכול. רקמה תימית אנושית, למשל, קשה יותר לניתוק באופן משמעותי מרקמת מורין ולכן זמני העיכול חייבים להיות ארוכים יותר. אם לא מתבצעת התאמה עבור רקמה אנושית, יבול הסטרומה ומגוון התאים יפחתו (איור 2A). אנזימי דיסוציאציה דורשים טמפרטורה אופטימלית של 37 מעלות צלזיוס אשר בהכרח משפיעה על ביטוי גנים27. למרות שדיסוציאציה קרה או טמפרטורה נמוכה יותר רצויה לשימור מצבי התא, כיום אין שילובים מסחריים של אנזימי דיסוציאציה פעילים קרים המתאימים לעצם ולמח עצם. עבור כל רקמה הדורשת עיכול, ההטרוגניות והתרומה באחוזים הנרכשת מסוגי תאים שונים ישתנו תמיד עם זמן העיכול, הרכב קוקטייל האנזים ועיבודו. במורד הזרם של שלבים ראשוניים אלה, ההטרוגניות והייצוג יוגבלו עוד יותר על ידי שלבי סינון כגון גדלי חרירים במהלך מיון ולכידה של סוגי תאים מאתגרים (למשל, אדיפוציטים מסטרומה) וקוטרי תעלות התקנים פלואידים. לכן, כאשר אנו משווים מערכי נתונים, עלינו לזכור כי הבדלים אלה בפרוטוקולים יכולים להשפיע על ייצוג של תת-אוכלוסיות. המסקנה ההגיונית היא שעלינו לעמוד על המשמר בשמירה על שלבי עיבוד שווים בעת מדידת ההשפעה של הפרעות במערכות סטרומה.
בעוד שעלות הריצוף הייתה והולכת ופוחתת, טכנולוגיות של תא בודד מוגבלות לעתים קרובות על ידי מספר התאים שניתן לנתח. כדי למטב את הקיבולת של כל ערכת מגיב, נעשה שימוש בדלדול מגנטי של תאים המטופויטיים במידת האפשר. זה מאפשר הימנעות ממספר גבוה של תאים מזהמים שהם הרבה יותר רבים מאשר סטרומה הן במח עצם והן בשברי דגימה תימית. עם זאת, אם חומר המוצא מוגבל, כמו במקרה של רקמה תימית לאחר השתלה, אובדן מוגבר ולא ספציפי של תאים שאסטרטגיות דלדול מגנטי תמיד גורמות, עלול להפוך את זה לבלתי רצוי. בנוסף, במהלך הכנה ועיכול של הרקמות, ריסוק, חיתוך ושחרור אנזימטי של רכיבי מטריצה תאית מייצרת כמות גדולה של פסולת. סוג זה של מזהם, אם נשאר במדגם לניתוח, יכול לגרום לבעיות סתימה בעיבוד במורד הזרם, לגרום לבארות שליליות למיון אינדקס תא בודד ולנפח מאוד את אחוזי שער האב בניתוח. צביעת קלצאין שימשה לשער חיובי לתאים/תאים חיים. Calcein מגיע בצבעים שונים מה שהופך אותו לסתגלן מאוד למטריצת הצביעה שלך. בעת עבודה עם קלצין יש להיזהר שלא לחשוף את הצבע למחזורי הקפאה-הפשרה חוזרים ונשנים (כלומר, תמיד להכין טרי ולשמור בטמפרטורת החדר לאחר המסה).
היכולת לרבב דגימות המבוססות על נוגדנים המקודדים עם אוליגוס DNA28 מאפשרת שימוש מוגבר בתגובות ריצוף של תא בודד בפלטפורמות כגון 10x Genomics. נוגדני התיוג המיועדים לריבוב דגימות מגיעים עם מטרות שונות למולקולות פני התא או לקרום הגרעין וספציפיות הן לעכבר והן לאדם. בעוד שמערכת התיוג התאית שימשה בהצלחה עבור רקמות רבות, ניסויים המשלבים תערובות אנזימי עיכול עם שימוש מאוחר יותר בהאשטאגים יכולים להוביל להתאוששות מופחתת באופן דרסטי. ניסינו לכלול שלבי שטיפה נוספים לאחר הדיסוציאציה והוספנו EDTA כדי לעכב את פעילות אנזימי העיכול. עם זאת, גם עם צעדים אלה, צפו לזיהוי האשטאג נמוך יותר מאשר תאים המטופויטיים. נמצא כי בפרוטוקולי עיכול אנזימטיים, שיעורי לכידת ההאשטאגים היו בין 30%-70%. זה קורה למרות העובדה כי אותו שיבוט נוגדנים עם מצומד פלואורוכרום שכותרתו >90% של תאי סטרומה באותה אוכלוסייה. כל תכנון ניסיוני המשלב עיכול אנזימטי של רקמות עם האשטאג צריך להיות פיילוט ולנקוט זהירות כדי להבטיח עיכוב אנזימטי.

אצל מבוגר בריא, ייצור דה נובו של תאי דם מתרחש במח העצם ובבלוטת התימוס. תאי סטרומה באתרים אלה חיוניים לתחזוקת המטופויזה, אך סטרומה מהווה פחות מ-1% מהרקמה 1,2,3,4. השגת מבודדים טהורים של המטופויזה התומכת בסטרומה מהווה אפוא אתגר משמעותי, במיוחד עבור מולטיומיקה של תא בודד הדורשת עיבוד מהיר כדי לקבל דגימות באיכות גבוהה. רכיבים של קוקטיילים שונים לעיכול עלולים להפריע לשלבים מסוימים בניתוח מולטיומיקס 5,6. הפרוטוקולים המוצגים כאן מפרטים את בידודם של מגוון רחב של תאי סטרומה ממח עצם ומרקמות תימיות.
הפרעות של מרכיבי סטרומה הן במח העצם והן בבלוטת התימוס גורמות להפרעה עמוקה בהתפתחות תאי הדם ויכולות לגרום לממאירויות 7,8,9. המטופויזה התומכת בסטרומה נפגעת בעקבות התניה ציטוטוקסית והשתלת מח עצם, וכתוצאה מכך מופחתת הפרשת ציטוקינים וגורמי גדילה המקיימים תאי גזע ותאי אב המטופויטיים (HSPCs)2,10,11. יתר על כן, הזדקנות משפיעה על מח העצם ותאי סטרומה של בלוטת התימוס, מה שככל הנראה תורם לפנוטיפים המטופויטיים מזדקנים. בלוטת התימוס היא האיבר הראשון שעבר אינבולוציה נרחבת הקשורה לגיל. רקמות שומן ופיברוטיקה מתחילות להחליף סטרומה תומכת תאי T כבר בתחילת ההתבגרות המינית12,13. במוח העצם, תכולת האדיפוציט עולה עם הגיל ונישות כלי הדם והאנדוסטל משופצות באופן משמעותי 14,15,16.
כדי לאפשר מחקר של סטרומה תומכת בהמטופויזיס במצבי עקה מרובים ובמקרה של בלוטת התימוס של רקמת האדם ושל רקמת מורין, ביצענו אופטימיזציה של פרוטוקולי עיכול 1,2,8,17,18 שפורסמו בעבר. פרוטוקולים אלה מבטיחים בידוד יעיל וניתן לשחזור של תאים, והם תואמים לריצוף RNA חד-תאי (scRNAseq) ולסוגים אחרים של מולטיומיקה.

<table><tbody><tr><td>0.25% Trypsin-EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25200-072</td><td></td></tr><tr><td>7AAD (7-aminoactinomycin D)</td><td>BD Biosciences</td><td>559925</td><td></td></tr><tr><td>קוקטייל שושלת אנטי-אנושית 3-FITC</td><td>BD Biosciences</td><td>643510</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין</td><td>Millipore Sigma</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl/6 עכברים</td><td>ג'קסון</td><td>664</td><td>זכרים או נקבות, 8-12 </td></tr><tr><td>Calcein&nbsp</td> בן שבועות;<td>פישר סיינטיפיק</td><td>65-0853-78</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז IV</td><td>Millipore Sigma</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>מסנני תאים סטריליים קורנינג, לבן, גודל רשת: 70 ומיקרו; מ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I Solution</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>90083</td><td>&nbsp; 2500 U / mL</td></tr><tr><td>Easysep עכבר סטרפטווידין RapidSpheres ערכת בידוד</td><td>StemCell Technologies</td><td>19860</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Gibco</td><td>A31605-01</td><td>מוסמך One Shot</td></tr><tr><td>Human Fc Block</td><td>BD Biosciences</td><td>564220</td><td></td></tr><tr><td>Liberase TM&nbsp;</td><td>Millipore Sigma</td><td>5401127001</td><td>מחקר כיתה</td></tr><tr><td>בינוני 199</td><td>Gibco</td><td>12350</td><td></td></tr><tr><td>עכבר אנטי אנושי CD235a-BV77</td><td>BD Biosciences</td><td>740785</td><td></td></tr><tr><td>עכבר אנטי אנושי CD31-PE/Dazzle594</td><td>Biolegend</td><td>303130</td><td></td></tr><tr><td>עכבר אנטי אנושי CD45-BV77</td><td>Biolegend</td><td>304050</td><td></td></tr><tr><td>עכבר אנטי אנושי CD4-BV605</td><td>BD Biosciences</td><td>562658</td><td></td></tr><tr><td>עכבר אנטי אנושי CD66b-FITC</td><td>BD Biosciences</td><td>555724</td><td></td></tr><tr><td>עכבר אנטי אנושי CD8-APC/Cy7</td><td>BD Biosciences</td><td>557760</td><td></td></tr><tr><td>עכבר אנטי אנושי EpCam-BV421</td><td>Biolegend</td><td>324220</td><td></td></tr><tr><td>מגן RNase מעכב</td><td>Millipore Sigma</td><td>3335402001</td><td></td></tr><tr><td>עכברוש נגד עכבר CD105-PE /dazzle594</td><td>Biolegend</td><td>120424</td><td></td></tr><tr><td>חולדה נגד עכבר CD11b-ביוטין</td><td>Biolegend</td><td>101204</td><td></td></tr><tr><td>עכברוש נגד עכבר CD140a-APC</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>17-1401-81</td><td></td></tr><tr><td>חולדה נגד עכבר CD16/CD32 (עכבר BD FC בלוק)</td><td>BD Biosciences</td><td>553142</td><td></td></tr><tr><td>חולדה נגד עכבר CD31-BUV737</td><td>BD Biosciences</td><td>612802</td><td></td></tr><tr><td>עכברוש נגד עכבר CD31-BV421</td><td>Biolegend</td><td>102424</td><td></td></tr><tr><td>חולדה נגד עכבר CD3-ביוטין</td><td>Biolegend</td><td>100244</td><td></td></tr><tr><td>חולדה נגד עכבר CD45.2-ביוטין</td><td>Biolegend</td><td>109804</td><td></td></tr><tr><td>עכברוש נגד עכבר CD45-PE/Cy7</td><td>Biolegend</td><td>103114</td><td></td></tr><tr><td>עכברוש נגד עכבר CD45-PE/Cy7</td><td>Biolegend</td><td>103114</td><td></td></tr><tr><td>עכברוש נגד עכבר CD45-PE/Cy7</td><td>Biolegend</td><td>103114</td><td></td></tr><tr><td>חולדה נגד עכבר CD45R/B220-ביוטין</td><td>Biolegend</td><td>103204</td><td></td></tr><tr><td>עכברוש נגד עכבר CD51-PE</td><td>Biolegend</td><td>104106</td><td></td></tr><tr><td>עכברוש נגד עכבר EpCam-BV711</td><td>BD Biosciences</td><td>563134</td><td></td></tr><tr><td>חולדה נגד עכבר Ly-6A/E(Sca-1)-AF700</td><td>Biolegend</td><td>108142</td><td></td></tr><tr><td>חולדה נגד עכבר Ly-6G/Ly-6C(Gr1)-ביוטין</td><td>Biolegend</td><td>108404</td><td></td></tr><tr><td>חולדה נגד עכבר Ter119-ביוטין</td><td>Biolegend</td><td>116204</td><td></td></tr><tr><td>חולדה נגד עכבר Ter119-PE</td><td>Biolegend</td><td>116208</td><td></td></tr><tr><td>עכברוש נגד עכבר Ter119-PE/Cy7</td><td>Biolegend</td><td>116222</td><td></td></tr><tr><td>Stemxyme&nbsp;</td><td>וורת'ינגטון ביוכימיקל</td><td>LS004107</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד תאי סטרומה מאיברים המטופויטיים

Stromal Cell Isolation From Hematopoietic Organs

ריצוף חד-תאי איפשר מיפוי של אוכלוסיות תאים הטרוגניות בסטרומה של איברים המטופויטיים. מתודולוגיות אלה מספקות עדשה שדרכה ניתן לחקור הטרוגניות שלא נפתרה בעבר במצב יציב, כמו גם שינויים בייצוג סוג התא הנגרמים על ידי לחצים חיצוניים או במהלך ההזדקנות. כאן, אנו מציגים פרוטוקולים הדרגתיים לבידוד אוכלוסיות תאי סטרומה באיכות גבוהה מבלוטת התימוס האנושית והמורין, כמו גם עצם מורין ומח עצם. תאים המבודדים באמצעות פרוטוקולים אלה מתאימים ליצירת מערכי נתונים מולטיומיים באיכות גבוהה של תא יחיד. ההשפעות של עיכול דגימות, דלדול שושלת המטופויטית, ניתוח/מיון FACS וכיצד גורמים אלה משפיעים על תאימות עם ריצוף תא בודד נדונים כאן. עם דוגמאות של פרופילי FACS המצביעים על דיסוציאציה מוצלחת ולא יעילה ותפוקות תאי סטרומה במורד הזרם בניתוח שלאחר ריצוף, ניתנים מצביעים מזוהים למשתמשים. התחשבות בדרישות הספציפיות של תאי סטרומה היא קריטית להשגת תוצאות איכותיות וניתנות לשחזור שיכולות לקדם את הידע בתחום.

פרוטוקולים אלה מניבים זני תאי סטרומה הניתנים לשחזור מהתימוס וממח העצם המתאימים לאנליזה ציטומטרית של זרימה, כמו גם מולטיומיקה של תא יחיד, כגון ריצוף scRNA. רקמת מורין תימית עוברת שיפוץ משמעותי בתגובה לגורמי סטרס, כגון ההתניה הציטוטוקסית שקודמת להשתלת מח עצם או תהליך ההזדקנות הטבעי. כתוצאה מכך, התאיות התימיות מצטמצמות באופן דרסטי בשתי ההגדרות האלה (איור 1A). בעוד שבלוטת תימוס של עכבר פראי בן 8 שבועות מכילה כ-100 מיליון תאים, התאיות של עכבר בן שנתיים צפויה להיות חצי מזה, ובלוטת תימוס 4 ימים לאחר ההקרנה והשתלת מח עצם יכולה להיות נמוכה עד 5,00,000 תאים (איור 1A).
התניה ציטוטוקסית תעדיף לעבד תאים המטופויטיים, כך שתא הסטרומה יועשר באופן יחסי (איור 1B). עם זאת, התאיות הנמוכה הכוללת תהפוך את בידוד המספרים המספיקים של תאי סטרומה תימיים למאתגר. לכן, ייתכן שיהיה צורך לאגד בעלי חיים כדי להשיג מספרי תאים התואמים ליישומי מולטיומיקס במורד הזרם ולמזער את אובדן החומר במידת האפשר. כדי לבצע מולטיומיה על תאי סטרומה תימיים, מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות (FACS) של תאים חיים, בודדים, CD45-Ter119 (איור 1C) יבטיח שניתן יהיה למיין מספר מספיק של תאים מרוב תנאי העקה.
כדי לשמר את ההטרוגניות של תא הסטרומה, אנו בדרך כלל לא ממיינים על סמן סטרומה חיובי אחד אלא משערים תאים המטופויטיים. הכללת סמנים חיוביים של תאי סטרומה עדיין מומלצת לניתוח כדי להבטיח שהושגה דיסוציאציה תקינה של רקמות. אולם בידוד FACS אינו מושלם, וכפי שנקבע על-ידי scRNAseq, 30%-50% מהתאים הממוינים יהיו ממקור המטופויטי (איור 1D,E). ניתן לשפר זאת על ידי דלדול מגנטי של תאי CD45+ לפני FACS; אולם זה לא מומלץ לתנאים של תאים תימיים מופחתים (איור 1A), מאחר שאובדן החומר שמגיע עם העיבוד הנוסף שמעורב בדלדול מגנטי גורם לתפוקת סטרומה נמוכה מדי עבור יישומים במורד הזרם.
לבידוד הסטרומה התימנית האנושית, השלב הקריטי ביותר הוא העיכול האנזימטי. אם שלב הדיסוציאציה מואץ, התפוקה הכוללת של תאי סטרומה, כמו גם ייצוג תת-סוג של תאי סטרומה, יפחתו באופן חמור (איור 2A). כמו כן, מומלץ תמיד לכלול את הסמנים של אנדותל תימי ואפיתל כדי להבטיח כי עיכול רקמות היה אופטימלי, כמו פשוט gating שלילי עבור סמנים hematopoietic לא יהיה מספיק כדי לאמוד שחרור תאי סטרומה בפועל. זה מודגם באיור 2A, שבו אחוז התאים השליליים לסמנים המטופויטיים גבוה יותר בדגימה שעוכלה במשך 30 דקות בהשוואה לדגימה שהודגרה במשך 90 דקות. אולם כפי שניתן לראות בשער העוקב, היבול של תאי אנדותל ותאי אפיתל דל מאוד בפרוטוקול העיכול הקצר יותר (איור 2A).
עבור בידוד FACS של תאי סטרומה תימיים אנושיים עבור יישומים מולטיומיים, מומלץ להכתים עם קוקטייל נוגדנים של שושלת המטופויטית, כמו גם נוגדנים CD4 ו- CD8, בנוסף לסמן הפאן-המטופויטי CD45 והסמן האריתרואידי CD235a (איור 2B) כדי לשפר את העשרת תאי סטרומה. לכן, עבור ניתוח מולטיומיה אנושית של סטרומה תימית, תאים חיים, יחידים, CD45-CD235a-Lineage-CD4-CD8- צריכים להיות ממוינים FACS (איור 2B). כפי שניתן לראות עבור scRNAseq של דגימות מורין, זה עדיין גורם לזיהום של 30%-50% תאים המטופויאטיים, אבל זה עדיין נותן רזולוציה מקובלת של תא סטרומה של בלוטת התימוס האנושית (איור 2C,D).
עבור עצם וסטרומה BM, אותה אסטרטגיה שימשה עבור רקמה תימית; תאי סטרומה מבודדים על-ידי gating על תאים שליליים לסמנים המטופויטיים, וסמנים נוספים של תאי סטרומה נכללים כבקרות עיכול (איור 3). הדיסוציאציה של רקמה מסוידת כמו עצם גורמת להצטברות משמעותית של פסולת. הוספת קלצין כצבע כדאיות תאפשר הרחקה של רוב הפסולת הזו, שאחרת מנפחת באופן שגוי מספרים ממוינים ומקטינה את תדרי האוכלוסייה המגודרת (איור 3). זה מודגם בתרשימי FACS שמשווים gating על כל התאים ופשוט gating על Calcein+ (איור 3). כפי שניתן לראות עבור תאי סטרומה תימיים אנושיים, אחוז התאים ההמטופויטיים השליליים אינו קריאה אמינה ליעילות הדיסוציאציה של עצמות ורקמת BM (איור 3). בעוד שער CD45-Ter119 יכול להכיל שפע של תאים בדגימה שבה שלב העיכול נכשל, ניתוח נוסף של סמנים טיפוסיים של עצמות ותאי סטרומה BM CD31, CD140a ו- CD51 מדגים בבירור שחרור סטרומה גרוע (איור 3 ואיור 4).
עבור בידוד FACS של עצם מורין ותאי סטרומה מסוג BM, שימוש באסטרטגיית gating מוצע כמו באיור 3, שבו אנו ממיינים רק CD45-Ter119-Calcein+ אבל מנטרים את תכונות הפיזור קדימה וצידית ואת ביטוי סמן תאי הסטרומה של האוכלוסייה הממוינת כדי להבטיח עיכול אופטימלי (איור 3A). השילוב של דלדול תאים מגנטיים חיוביים לשושלת המטופויטית של מח העצם לפני FACS ומיון על השערים המוצגים מביא לריצוף חד-תאי של תאים שהם &gt;90% סטרומה. דוגמה לריצת scRNA seq כזו (איור 5A,B) מדגימה את הזיהום ההמטופויטי הנמוך הזה לאחר ביאור מבוסס שעתוק של התאים שנותחו (דוגמאות לגנים של סמן המטופויטי איור 5C). זאת בניגוד מוחלט לתכשירי סטרומה תימיים שבהם דלדול התאים המגנטיים לא בוצע לפני שלב המיון עקב חומר המוצא המוגבל ברקמה התימנית שלאחר ההשתלה (איור 1F).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66231/66231fig01.jpg"> איור 1: ניתוח ריצוף RNA ציטומטרי וחד-תאי של סטרומה מורין תימית. (A) כימות מספרי תימוציט בעכברים בני 8 שבועות (בקרה), עכברים בני 8 שבועות שהוקרנו באופן קטלני והושתלו 4 ימים לפני (השתלה) ועכברים בני שנתיים (זקנים). (B) חלקות ציטומטריה של זרימה מייצגת המדגימות את ההעשרה בתת-סוגים של תאי סטרומה 4 ימים לאחר הקרנה קטלנית והשתלה. (C) אסטרטגיית גטינג ציטומטריית זרימה למיון סטרומה תימית מורין לניתוח מולטיומיקה של תא יחיד. (D) UMAP של בלוטת התימוס של מורין המציין סטרומה (כחול) ותאים המטופויטיים (אדום). (E) UMAPs המראים גנים של סמן המטופויטי מורין בדגימות תימוס. (F) כימות של תאי סטרומה מורין ותאים המטופויטיים בדגימות של בלוטת התימוס scRNAseq. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66231/66231fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66231/66231fig02.jpg"> איור 2: ניתוח ריצוף RNA ציטומטרי וחד-תאי של סטרומה תימית אנושית. (A) תרשימי FACS המציגים תוצאות מייצגות של ההשפעה של זמני עיכול שונים על שחרור אוכלוסיות תאי סטרומה תימיים אנושיים. (B) אסטרטגיית גאטומטריית זרימה למיון סטרומה תימית אנושית לצורך ניתוח מולטיומיקה של תא יחיד. (C) UMAP של בלוטת התימוס האנושית המציין סטרומה (כחול) ותאים המטופויטיים (אדום). (D) UMAPs המראים גנים של סמן המטופויטי אנושי בדגימות תימוס. (E) כימות של תאי סטרומה והמטופויטים אנושיים בדגימות scRNAseq של בלוטת התימוס. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66231/66231fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66231/66231fig03.jpg"> איור 3: סמני סטרומה של מח עצם מורין וקלצין עוזרים להעריך את יעילות הדיסוציאציה. (A) ניתוח ציטומטריית זרימה מייצגת של CD45-Ter119- תאי סטרומה של מח עצם מורין מגודרים על כל התאים ותאי Calcein+. כאשר CD31- gating עוקב מראה שיעור גבוה יותר של תאי CD140a + CD51+ בעת בחירת תאי Calcein+ . (B) ניתוח ציטומטריה של זרימה המייצג עיכול עצם כושל עם תאים חסרים CD140a + CD51+. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66231/66231fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66231/66231fig04.jpg"> איור 4: אסטרטגיית גאטינג סטרומה של מח עצם. (A) אסטרטגיית גטינג ציטומטריית זרימה למיון סטרומה של מח עצם מורין עבור מולטיומיקה של תא יחיד. (B) ניתוח ציטומטריית זרימה המייצג עיכול מח עצם כושל עם תאים חסרים CD140a + CD51+. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66231/66231fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66231/66231fig05.jpg"> איור 5: ריצוף רנ"א חד-תאי של מח עצם עם הרכב תאים סטרומליים והמטופויאטיים. (A) UMAP של עצם מורין ומח עצם המציין סטרומה (כחול) ותאים המטופויטיים (אדום). (B) כימות של תאי סטרומה ותאים המטופויטיים בדגימות עצם ומח עצם. (C) UMAP של גנים של סמן המטופויטי בדגימות מח עצם מורין. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66231/66231fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

כאן אנו מציגים פרוטוקולים המאפשרים בידוד של תאי סטרומה מעצם מורין, מח עצם, בלוטת התימוס ורקמה תימית אנושית התואמת למולטיומיקה של תא יחיד.

Single-cell sequencing has enabled the mapping of heterogeneous cell populations in the stroma of hematopoietic organs. These methodologies provide a lens ...

התפתחות תאים הומטיים במח העצם ובבלוטת התימוס תלויה מאוד בתאי סטרומה לתמיכה. הפרעות בתפקוד תאי סטרומה המטופויטיים עלולות להוביל לייצור דם לא יעיל או אפילו ממאיר. המעבדה שלנו מתמקדת בהבנת ויסות תאי סטרומה של המטופויזיס וכיצד ניתן לתפעל אותו לקבלת יתרונות טיפוליים.הופעתו של ריצוף תא בודד הניעה שרשרת של התקדמות לאחרונה בתחומי מחקר רבים. זה גם המקרה בתחום שלנו שבו רזולוציה של תא בודד אפשרה זיהוי של אוכלוסיות תאי סטרומה הטרוגניים באיברים המטופויטיים שלא היו ידועים קודם לכן. הפרוטוקולים שלנו מותאמים להתמודד עם זה, ואנחנו מקווים שהם יאפשרו מחקר נוסף על תאי סטרומה כדי להתמודד עם שאלות קריטיות בתחום.

stromal-cell-isolation-from-hematopoietic-organs

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

בידוד והשתלות של בתאי גזע hematopoietic (HSCs)

זה פרוטוקול הפרטים גזירת להשתלה בתאי גזע hematopoietic מתאי גזע עובריים של עכבר (ESC) הזרקת הבאים שלהם לעכברים הנמען מוקרן קטלנית. בקצרה, הם ESC להבדיל גופים embryoid, אשר נגועים אז עם HoxB4 retroviral ושיתוף תרבותי עם OP9 תאים סטרומה וציטוקינים hematopoietic.

גזירת בתאי גזע hematopoietic מ Murine בתאי גזע עובריים

סרט הווידאו הזה מראה כיצד מיקרו לנתח את שק החלמון ואת אבי העורקים, בלוטת המין, כלית בינים האזור מעוברים ולהשתמש cytometry זרימה למיין בתאי גזע hematopoietic.

בידוד מוקדם בתאי גזע hematopoietic מ Murine חלמון Sac ו AGM

שיטה לנתח את התפלגות אבות היווצרות הדם במח העצם ב cytometry זרימה, כמו גם ביעילות לבודד מטוהרים מאוד בתאי גזע hematopoietic (HSCs) מתואר. הליך הבידוד מבוסס בעיקרו על העשרת המגנטי של כ-Kit תאים + תא מיון לטהר HSCs ללימודי תאית ומולקולרית.

ניתוח בידוד פנוטיפי של Murine בתאי גזע hematopoietic ו-Lineage מחויבים אבות

גזע אבות היווצרות הדם תאים (HSPC) נובעים מתאי אנדותל מיוחדים (hemogenic) במהלך הפיתוח, עדיין מעט מאוד ידוע על התהליך שבו כמה תאי אנדותל לציין להפוך להרכיב דם. אנו מדגימים שיטה המבוססת זרימת cytometry המאפשרת בידוד סימולטני של תאי hemogenic האנדותל HSPC מרקמות עובריות בעכברים.

בידוד של Murine העוברי Hemogenic לתאי אנדותל

ברקמת לב אדם מטפחת אוכלוסיות תאי מבשר perivascular מולטיפוטנטיים שעשויה להיות מתאים התחדשות שריר לב. הטכניקה המתוארת כאן מאפשרת בידוד סימולטני וטיהור שתי אוכלוסיות תאי סטרומה מולטיפוטנטיים קשורות כלי דם מקומיים, כלומר CD146 + CD34 - pericytes ו CD34 + CD146 - תאי adventitial, מן שריר הלב האנושי.

בידוד של אוכלוסיות תאי perivascular מולטיפוטנטיים המבשרים מרקמות אדם לב

במאמר זה, נציג שיטות כדי לבודד, להבדיל תאי סטרומה מח עצם של תאי גזע hematopoietic עצמות ארוכות העכבר. שני פרוטוקולים שונים מוצגים מניב אוכלוסיות תאים שונים עבור הרחבת ובידול לתוך תאי העצם, adipocytes ו osteoclasts.

בידוד, תרבות, התמיינות של תאי סטרומה מח עצם ו אוסטאוקלסט אבות של עכברים

פרוטוקול זה ממחיש הליך בטוחים ויעילים כדי לשנות CD133+ hematopoietic תאי גזע. הציג נגיפי, מגנטי polyplex-הגישה המבוססת על עשוי לספק בסיס אופטימיזציה של תאי גזע טיפולית אפקטים כמו גם לגבי ניטור המוצר תא מנוהל באמצעות תהודה מגנטית.

פרוטוקול להעברת MicroRNA לתוך למבוגרים הנגזרות מח עצם Hematopoietic תאי גזע כדי לאפשר הנדסה תא בשילוב עם מיקוד מגנטי

אנו מציגים פרוטוקול שלב אחר שלב לבידוד תאי גזע המטופויטיים ארוכי טווח (LT-HSCs) ותאי HSC לטווח קצר (ST-HSCs) באמצעות מערכת הדיווח Hoxb5.

שיטת בידוד לתאי גזע המטופויטיים לטווח ארוך וקצר

כאן, הקמנו in vivo אוסטאו-אורגנואידים המופעלים על ידי פיגומי ג'לטין טעונים בחלבון מורפוגנטי-2 עצם כדי לקצור תאי גזע / אב המטופויטיים טיפוליים לשחזור של מערכת המטופויטית וחיסונית פגומה. בסך הכל, גישה זו יכולה לספק מקור תאי מבטיח לטיפולים תאיים.

In Vivo גישת אוסטאו-אורגנואיד לקצירת תאי גזע/אב המטופויטיים טיפוליים

כדי לחקור את התגובה החיסונית להפרעות מוחיות, גישה נפוצה אחת היא לנתח שינויים בתאי מערכת החיסון. כאן, שני פרוטוקולים פשוטים ויעילים ניתנים לבידוד תאי מערכת החיסון מרקמת המוח וממח עצם הגולגולת.

בידוד תאי מערכת החיסון מהמוח והגולגולת של עכבר

חקור בידוד תאי סטרומה מעצם, מח עצם וטימוס בעכברים ובבני אדם לחקר המטופויאזה. פרוטוקולים אלה מותאמים לניתוח מולטי-אומיקס בודד-תאי לזיהוי אוכלוסיות תאים מגוונות.

בידוד תאי סטרומה מאיברים המטופויטיים

גלה סרטונים נוספים