Name: מודל מהדק הילארי ריאתי שמאלי של פגיעה באיסכמיה ריאתית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-12T13:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: למד את פרוטוקול מהדק ההילום הריאתי השמאלי לחקר פגיעת איסכמיה-ריאתית בעכברים. שיטה זו מאפשרת לבודד את השפעות הפגיעה ולחקור את תפקידם של תאי B ונייטרופילים בתהליך.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו לא קיבלה מענק ספציפי מגוף מימון כלשהו במגזר הציבורי, המסחרי או ללא כוונת רווח.

מודל עכברי לחקר איסכמיה ריאתית-פגיעה ברפרפוזיה

<ol><li>Bharat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+link+between+primary+graft+dysfunction+and+chronic+lung+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Thorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Immunological link between primary graft dysfunction and chronic lung allograft rejection.</a> Ann Thorac Surg. 86 (1), 189-195 (2008).</li>
<li>Daud, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+immediate+primary+lung+allograft+dysfunction+on+bronchiolitis+obliterans+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Impact of immediate primary lung allograft dysfunction on bronchiolitis obliterans syndrome.</a> Am J Respir Crit Care Med. 175 (5), 507-513 (2007).</li>
<li>Halazun, K. J., Al-Mukhtar, A., Aldouri, A., Willis, S., Ahmad, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Warm+ischemia+in+transplantation%3A+search+for+a+consensus+definition%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Warm ischemia in transplantation: search for a consensus definition.</a> Transplant Proc. 39 (5), 1329-1331 (2007).</li>
<li>Warnecke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Warm+or+cold+ischemia+in+animal+models+of+lung+ischemia-reperfusion+injury%3A+is+there+a+difference+%5BTitle%5D)+AND+%22Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Warm or cold ischemia in animal models of lung ischemia-reperfusion injury: is there a difference .</a> Thorac Cardiovasc Surg. 52 (3), 174-179 (2004).</li>
<li>Hasenauer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cold+or+warm+ischemia+and+ex-vivo+lung+perfusion+on+the+release+of+damage+associated+molecular+patterns+and+inflammatory+cytokines+in+experimental+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Effects of cold or warm ischemia and ex-vivo lung perfusion on the release of damage associated molecular patterns and inflammatory cytokines in experimental lung transplantation.</a> J Heart Lung Transplant. 40 (9), 905-916 (2021).</li>
<li>Iskender, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+warm+versus+cold+ischemic+donor+lung+preservation+on+the+underlying+mechanisms+of+injuries+during+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Effects of warm versus cold ischemic donor lung preservation on the underlying mechanisms of injuries during ischemia and reperfusion.</a> Transplantation. 102 (5), 760-768 (2018).</li>
<li>Santos, P., Teixeira, P. J. Z., Moraes Neto, D. M., Cypel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donation+after+circulatory+death+and+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bras+Pneumol%22%5BJournal%5D)">Donation after circulatory death and lung transplantation.</a> J Bras Pneumol. 48 (2), e20210369(2022).</li>
<li>Moskowitzova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transplantation+enhances+murine+lung+viability+and+recovery+after+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transplantation enhances murine lung viability and recovery after ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 318 (1), L78-L88 (2020).</li>
<li>Nakata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+blockage+of+S100A8%2FA9+ameliorates+ischemia-reperfusion+injury+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Bioengineering+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Functional blockage of S100A8/A9 ameliorates ischemia-reperfusion injury in the lung.</a> Bioengineering (Basel). 9 (11), 673(2022).</li>
<li>Nakata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+anti-HMGB1+monoclonal+antibody+on+lung+ischemia+reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Protective effects of anti-HMGB1 monoclonal antibody on lung ischemia reperfusion injury in mice.</a> Biochem Biophys Res Commun. 573, 164-170 (2021).</li>
<li>Wang, Q., Li, Y., Wu, C., Wang, T., Wu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-1+inhibition+exacerbates+ischemia-reperfusion-induced+lung+injury+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-1 inhibition exacerbates ischemia-reperfusion-induced lung injury in mouse.</a> Am J Med Sci. 365 (1), 84-92 (2023).</li>
<li>Gielis, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+lung+ischemia+and+reperfusion+injury%3A+tricks+of+the+trade%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A murine model of lung ischemia and reperfusion injury: tricks of the trade.</a> J Surg Res. 194 (2), 659-666 (2015).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitogen-activated+protein+kinases+regulate+HO-1+gene+transcription+after+ischemia-reperfusion+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mitogen-activated protein kinases regulate HO-1 gene transcription after ischemia-reperfusion lung injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 283 (4), L815-L829 (2002).</li>
<li>Sharma, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+A2A+receptor+activation+on+CD4%2B+T+lymphocytes+and+neutrophils+attenuates+lung+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Adenosine A2A receptor activation on CD4+ T lymphocytes and neutrophils attenuates lung ischemia-reperfusion injury.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 139 (2), 474-482 (2010).</li>
<li>Yang, Z., Sharma, A. K., Linden, J., Kron, I. L., Laubach, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+T+lymphocytes+mediate+acute+pulmonary+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">CD4+ T lymphocytes mediate acute pulmonary ischemia-reperfusion injury.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 137 (3), discussion 702 695-702 (2009).</li>
<li>Sayah, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+are+pathogenic+in+primary+graft+dysfunction+after+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps are pathogenic in primary graft dysfunction after lung transplantation.</a> Am J Respir Crit Care Med. 191 (4), 455-463 (2015).</li>
<li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am J Transplant. 6 (7), 1672-1679 (2007).</li>
<li>Hsiao, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> J Clin Invest. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li>
<li>Sharma, A. K., Mulloy, D. P., Le, L. T., Laubach, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NADPH+oxidase+mediates+synergistic+effects+of+IL-17+and+TNF-alpha+on+CXCL1+expression+by+epithelial+cells+after+lung+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">NADPH oxidase mediates synergistic effects of IL-17 and TNF-alpha on CXCL1 expression by epithelial cells after lung ischemia-reperfusion.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 306 (1), L69-L79 (2014).</li>
<li>Zanotti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+critical+role+of+Toll-like+receptor+4+in+lung+ischemia-reperfusion+injury+and+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Novel critical role of Toll-like receptor 4 in lung ischemia-reperfusion injury and edema.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 297 (297), L52-L63 (2009).</li>
<li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals%22">Guide for the care and use of laboratory animals</a>. , The National Academies Press. Washington, DC. (2011).</li>
<li>Saito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pirfenidone+alleviates+lung+ischemia-reperfusion+injury+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Pirfenidone alleviates lung ischemia-reperfusion injury in a rat model.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 158 (1), 289-296 (2019).</li>
<li>Tanaka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+Imatinib+on+ischemia%2Freperfusion+injury+in+rat+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Thorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Protective effects of Imatinib on ischemia/reperfusion injury in rat lung.</a> Ann Thorac Surg. 102 (5), 1717-1724 (2016).</li>
<li>Kreisel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+two-photon+imaging+reveals+monocyte-dependent+neutrophil+extravasation+during+pulmonary+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">In vivo two-photon imaging reveals monocyte-dependent neutrophil extravasation during pulmonary inflammation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (42), 18073-18078 (2010).</li>
<li>Koletsis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+cooling+in+a+lung+hilar+clamping+model+of+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">In situ cooling in a lung hilar clamping model of ischemia-reperfusion injury.</a> Exp Biol Med (Maywood). 231 (8), 1410-1420 (2006).</li>
<li>Hermsen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+landscape+of+rat+strain+and+substrain+variation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Genomic landscape of rat strain and substrain variation.</a> BMC Genomics. 16 (1), 357(2015).</li>
<li>Beck, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genealogies+of+mouse+inbred+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Genealogies of mouse inbred strains.</a> Nat Genet. 24 (1), 23-25 (2000).</li>
<li>Liao, W. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+orotracheal+intubation+and+ventilated+lung+ischemia+reperfusion+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A mouse model of orotracheal intubation and ventilated lung ischemia reperfusion surgery.</a> J Vis Exp. (187), 64383(2022).</li>
<li>Murata, T., Nakazawa, H., Mori, I., Ohta, Y., Yamabayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reperfusion+after+a+two-hour+period+of+pulmonary+artery+occlusion+causes+pulmonary+necrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">Reperfusion after a two-hour period of pulmonary artery occlusion causes pulmonary necrosis.</a> Am Rev Respir Dis. 146 (4), 1048-1053 (1992).</li>
<li>Ukita, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large+animal+model+for+pulmonary+hypertension+and+right+ventricular+failure%3A+Left+pulmonary+artery+ligation+and+progressive+main+pulmonary+artery+banding+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A large animal model for pulmonary hypertension and right ventricular failure: Left pulmonary artery ligation and progressive main pulmonary artery banding in sheep.</a> J Vis Exp. (173), 62694(2021).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+right+ventricular+failure+by+pulmonary+artery+constriction+and+evaluation+of+right+ventricular+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Induction of right ventricular failure by pulmonary artery constriction and evaluation of right ventricular function in mice.</a> J Vis Exp. (147), 59431(2019).</li>
<li>Welbourn, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+ischaemia+reperfusion+injury%3A+central+role+of+the+neutrophil%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of ischaemia reperfusion injury: central role of the neutrophil.</a> Br J Surg. 78 (6), 651-655 (1991).</li>
</ol>

המחברים אינם מדווחים על גילויים רלוונטיים.

אנו מתארים טכניקת מהדק הילארי הכוללת יישום של slipknot על הילום שמאל אשר חוסם את עורק הריאה וורידים ואת הסימפונות כדי לגרום איסכמיה חמה ואחריו reperfusion. לאחר הידוק הילארי, ניתן לקצור את הריאה השמאלית למגוון טכניקות ניסיוניות כגון היסטולוגיה, ציטומטריית זרימה, ריצוף בתפזורת או בתא בודד, ותגובת שרשרת כמותית של פולימראז. בנוסף, הדם והטחול עשויים לשמש לחקר השפעות מערכתיות, בעוד הריאה הימנית הלא איסכמית עשויה לשמש כבקרה פנימית. בפרוטוקול זה, אנו גם מתארים שיטות מפורטות להשגת מדידות ABG ו / או קביעת אקסטרווסציה של תאים.
טכניקת הידוק הילאר מורין היא קריטית לחקר IRI ריאות ולתחום הרחב יותר של השתלת ריאות. לדוגמה, באמצעות מודל מהדק הילארי זה, הקבוצה שלנו מצאה כי מונוציטים קלאסיים שמקורם בטחול CCR2+ מתווכים אקסטרווזיה נויטרופילים לתוך הריאה לאחר IRI18. קבוצה אחרת הראתה כי תאי אפיתל מכתשית מסוג II מייצרים CXCL1 (כימואטרקנט נויטרופילים) באופן תלוי NADPH oxidase-IL-17-TNFα באמצעות מהדק הילארימודל 19. TLR4 נמצא כממלא תפקיד בהתפתחות בצקת במודל מורין של הידוק הילאר20.
בעוד שהשתלת ריאות אורתוטופית מורין ישימה יותר מבחינה קלינית ויכולה לדמות איסכמיה חמה וקרה, היא גם מציגה טראומה כירורגית מאנסטומוזות כלי דם וסימפונות וגירויים אלוגניים מחוסר התאמה בין תורם לנתרם. לפיכך, היתרון העיקרי של טכניקת מהדק hilar הוא היכולת שלה לבודד את ההשפעות של IRI ריאות מגורמים אחרים אלה. בנוסף, עבור מיקרוכירורג עכבר חסר ניסיון, הליך הידוק hilar הוא פחות תובעני מבחינה טכנית וניתן לשלוט בו מהר יותר בהשוואה להשתלת ריאות. מגבלה אחת של מודל המהדק ההילארי היא שקשה להשיג איסכמיה קרה. איסכמיה קרה באתרה בוצעה בחזירים עם זילוח סומק מקדים דרך עורק הריאה השמאלי25, אולם זה הרבה יותר מאתגר בעכבר בשל גודלו הקטן יותר והצורך לשמור על נורמותרמיה במהלך הניתוח. עם זאת, המחקר של איסכמיה חמה מבודדת חשוב מכיוון שהיא בדרך כלל מזיקה יותר לתפקוד איברים מאשר איסכמיה קרה 4,5,6. יתר על כן, מרכזי השתלות מאמצים יותר ויותר השתלות ריאה DCD, אשר מלוות בזמנים איסכמיים חמים הרבה יותר מאשר השתלות ריאה DBD מסורתיות7. לפיכך, מחקר מפורט של האירועים במהלך איסכמיה חמה ואת תקופת reperfusion שלאחר מכן הוא קריטי והוא יכול להתבצע עם מודל זה מהדק hilar.
וריאציות רבות של טכניקת מהדק hilar נוצרו במהלך שני העשורים האחרונים. אלה כוללים את השימוש במהדק כלי דם א-טראומטי 8,9,10,11,12,13, חוסם עורקים רומל 14,15, ועניבה עם החלקה סביב הילום16. אנו מתארים את ההסתגלות שלנו לטכניקת הסליפנוט בעכברים. היתרון העיקרי שיש לטכניקה זו על פני טכניקות הידוק הילאריות אחרות הוא שהיא מאפשרת סגירה של החזה במהלך תקופת האיסכמיה, מה שממזער הפסדי נוזלים בלתי הגיוניים במיוחד בפרוטוקולים עם תקופות ארוכות יותר של איסכמיה. לא ניתן להשיג זאת כאשר מהדק או חוסם עורקים מונח על הילום.
לגבי ברירה של בעלי חיים, בחרנו לפתח את המודל הזה בעכברים בניגוד למודלים של חולדות או חיות גדולות, כמו חזיר. הנימוק הוא כפול - למעבדה שלנו ניסיון רב במיקרוכירורגיה של עכברים עם השתלת ריאות אורתוטופיתבעכבר 17. שנית, בעוד עכברים הם קטנים יותר ומאתגרים יותר מבחינה טכנית לנתח מאשר חולדות, ישנם כיום יותר זני עכברים טרנסגניים זמינים מסחרית מאשר זני חולדות26,27. עכברים גם מתרבים מהר יותר, מה שמאפשר התפתחות מהירה יותר של זנים חדשים, וזה שימושי במיוחד כאשר חוקרים מנגנונים חיסוניים של IRI. מסיבות אלה, בחרנו לפתח טכניקה זו בעכברים.
למיטב ידיעתנו, זהו המאמר הראשון מבוסס וידאו המשתמש בטכניקה של מהדק הילאר ריאתי שמאלי בעכבר עם slipknot. סאיטו ועמיתיו פרסמו מאמר מבוסס וידאו המדגים מהדק הילארי בחולדה באמצעות מהדק כלי דם22. בעכבר, Liao et al פרסמו מודל IRI ריאתי עם הידוק עורק ריאתי (PA) עם slipknot, אולם הריאה נשארת מאווררת במודל זה כמו סימפונות אינו נכלל מהדק28. טכניקת ההידוק של הרשות הפלסטינית שימשה כמודל לחקר תסחיף ריאתי29, יתר לחץ דם ריאתי ו/או אי ספיקת חדר ימין30,31. מכיוון שתחום המחקר הוא IRI ריאתי בהשתלה, בחרנו להדק את כל ההילום כולל הסימפונות כדי למזער את הברוטראומה בנוסף לפגיעה האיסכמית.
יש לציין כי נבחרה 30 דקות של איסכמיה חמה ואחריה שעה אחת של רפרפוזיה מכיוון שאנו מתעניינים בדינמיקה של תאים חודרי ריאות בתקופה המוקדמת מאוד שלאחר IRI. לדוגמה, מחקרים דיווחו על upregulation של גנים cytoprotective, כגון heme oxygenase 1, לאחר רק 30 דקות של איסכמיה ואחריה 2 שעות של reperfusion13. בעבר חשבו שניטרופילים הם סוג התא המרכזי שמסתנן לריאה אחרי IRI32, אולם הראינו שמונוציטים מקדימים נויטרופילים בהגעתם לריאה18,24. לאחרונה, מצאנו כי תאי B מקדימים אפילו מונוציטים ונכנסים לריאה תוך שעה אחת מהרפרפוזיה (נתונים שלא פורסמו). בעת התאמת טכניקה זו, ניתן להתאים את משכי הזמן של איסכמיה חמה ורפרפוזיה בהתאם לשאלת המחקר וההשערה. תקופות ארוכות יותר של איסכמיה חמה אפשריות ללא חשש לאובדן נוזלים וחום מוגזם מכיוון שניתן לסגור את החזה בתקופה זו.
מספר סיבוכים יכולים להתרחש באופן פריאופרטיבי, כאשר התוצאה המשותפת הסופית היא מוות פריאופרטיבי. ראינו כי שכיחות מוות של בעלי חיים במהלך הניתוח יורדת עם חזרות על הטכניקה על ידי המנתח. אנו מעריכים כי מנתחים דורשים לפחות חודשיים של תרגול ו / או לפחות 20 מקרים כדי להגיע לרמה מיומנות. בשלב זה, אנו מעריכים כי התמותה תוך ניתוחית מתרחשת בכ-1 מכל 50 מקרים. מוות בעכבר המורדם מבשר לעתים קרובות על ידי נשימות אגונליות הכוללות התכווצויות חזקות של הסרעפת ושרירי דופן החזה. עם תחילת הנשימות המייסרות הללו, המוות יתרחש תוך 3-5 דקות אם לא תינקט התערבות. ישנן מספר סיבות שיכולות לזרז מוות תוך ניתוחי, שרבות מהן ניתנות לזיהוי ולמניעה. נדגיש להלן את השלבים הקריטיים של ניתוח זה וטכניקות לפתרון בעיות כדי להשיג תוצאה מוצלחת.
אינטובציה השלב הקריטי הראשון הוא אינטובציה זהירה ואבטחת נתיב האוויר כדי למנוע אקסטובציה בשוגג. בניתוח הישרדות חשוב במיוחד לוודא שמיתרי הקול לא נפגעים במהלך האינטובציה הראשונית, שכן העכבר לא יוכל לנשום לאחר אקסטובציה. התקדמות ה-ETT מעבר למיתרים צריכה להיעשות בהדמיה ישירה דרך המיקרוסקופ. אם ההתנגדות נתקלת במהלך אינטובציה, אין לקדם את ה-ETT בצורה עיוורת. תוך שמירה על הלוע פתוח עם מהדק יתוש, יש להקפיד לא לחדור את רירית הפה כמו הדם יהיה מוסתר לראות את דרכי הנשימה. מספר ניסיונות האינטובציה צריך להיות מוגבל לפחות מחמישה.
אקסטובציה בשוגג אם בשלב כלשהו במהלך ההליך, הריאות אינן נראות מתנפחות כראוי, ייתכן כי ETT נעקר. ביטוי נוסף של אקסטובציה מקרית שנעלם מעיניהם במשך תקופה ממושכת הוא העכבר מפתח לפתע נשימה מייסרת. לאחר אינטובציה ראשונית, יש להקפיד על הצמדת ה-ETT היטב לאף באמצעות סרט משי, ולהגביל את התאמת צוואר העכבר ופלג גופו העליון. אם הריאה השמאלית והימנית אינן מתנפחות, ייתכן שה-ETT יצא מקנה הנשימה. ניתן לעשות ניסיונות לדחוף את ה-ETT בחזרה פנימה, אולם ייתכן שיהיה צורך להכניס את העכבר מחדש לצינורית באופן מהיר כדי למנוע מוות בטרם עת של החיה. אם רק ריאה אחת מתנפחת כאשר שתיהן צפויות, ה-ETT עשוי להיות עמוק מדי ויש למשוך אותו בזהירות לאחור ולאבטח אותו מחדש.
גיוס ריאות ניוד ריאה שמאלית צריך להיעשות באמצעות אפליקטורים כותנה עם לחץ עדין על פרנכימה הריאה, כמו פגיעה דחיסה עלולה לפגוע alveoli ולהפחית את הציות של הריאה. אין לתפוס את הריאות במלקחיים או מלחציים מכיוון שזה יפגע בפרנכימת הריאות.
יישום של מהדק hilar מהדק hilar שמאל צריך להיות ממוקם תחת הדמיה ישירה, נזהר לא להניח את הקשר למטה מרכזי מדי (כדי לא לתפוס את אטריום שמאל) או היקפי מדי (כדי לא לתפוס כל parenchyma ריאות). תפיסת האטריום השמאלי עם מהדק הילאר צפויה לזרז פרפור פרוזדורים ומוות לאחר מכן. ניתן לשפר את ההדמיה של ההילום על ידי הבטחת נסיגת צלעות נאותה כדי להרחיב את שדה הראייה. לאחר קשירת החלקה, כדאי לוודא שהמהדק חוסם לחלוטין על ידי ביצוע תמרון גיוס - על ידי חסימה ידנית של צינור הזרימה המחבר את ה- ETT למכונת ההנשמה ולוודא כי הריאה השמאלית אינה מתרחבת בלחץ חיובי. חסימת כלי דם היא בהנחה עם אישור של חסימת הסימפונות, בהתחשב בקריסה מוגברת של עורק הריאה וורידים לעומת הסמפונות הסחוסיים. בנוסף, אין לקשור את המהדק ההילארי בכוח מופרז מכיוון שהוא ירסק את החלקים הסחוסיים של הסימפונות הראשיים השמאליים וימנע התרחבות של הריאה השמאלית לאחר שחרור המהדק ההילארי. לאחר שחרור המהדק ההילארי, חשוב לבדוק כי הריאה עדיין מסוגלת להיות מאווררת על ידי ביצוע תמרון גיוס נוסף.
סגירת חזה בעת סגירת החזה, יש להפגיש את הצלעותה-4 וה-5 כאשר הריאה נמצאת בקצה המקסימלי. זה ימזער את כמות האוויר שנותרה בחלל הפלאורלי, מה שיגרום לדלקת ריאות ברגע שהצלעות סגורות. שכבות השרירים והעור צריכים להיות סגורים בצורה אטומה כדי למנוע התפתחות של מתח pneumothorax.
השגת ABGs לבסוף, בעת קבלת ABGs, חשוב תחילה להדק את הילום ימין כך שמדידת ABG תשקף רק את תפקוד הריאה השמאלית22,23. ללא מהדק הילרי ימני, הריאה הימנית המאווררת בדרך כלל תפצה יותר על הריאה השמאלית האיסכמית הפגועה ומדידות ABG ייראו תקינות.
לסיכום, טכניקת ההידוק ההילארי שתיארנו לעיל היא כלי רב ערך לחקר השתלת ריאות, וחשוב מכך יכולה לבודד את המחקר של IRI חם ללא הכנסת אלוגניות, טראומה הקשורה לאנסטומוזיס כירורגי או אחסון איסכמי קר. יש לציין כי טכניקה מתוארת זו של הידוק הילאר נלמדת בקלות וניתנת לאימוץ נרחב ויכולה להוביל לתוצאות אמינות וניתנות לשחזור.

<a href="https://app.jove.com/t/6603">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/66232">10.3791/66232</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/66232">Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury</a>. The Protocol and Representative Results&#160;sections were&#160;updated.

Erratum: Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

IRI במהלך השתלת איברים הוא גורם סיכון עיקרי לתפקוד לקוי ראשוני של השתל ולאפיזודות מאוחרות יותר של דחיית השתל 1,2. במהלך ההשתלה, זמן איסכמיה חמה מוגדר כפרק הזמן שבין הידוק צולב אבי העורקים של התורם להתחלת זילוח קר ומהסרת איברים מקרח להשתלת איברים. זמן אחסון קר מוגדר כפרק הזמן מתחילת הזלוף הקר ועד להוצאת האיבר מקרח3. איסכמיה חמה מזיקה יותר לתפקוד איברים מאוחר יותר מאשר איסכמיה קרה 4,5,6, והמנגנונים הבסיסיים שלה מצדיקים מחקר נוסף במודלים פרה-קליניים. בנוסף, השתלת איברים מתרומה לאחר מוות לבבי (DCD) קשורה לזמנים איסכמיים חמים ארוכים יותר מאשר תרומה מסורתית לאחר מוות מוחי (DBD)7. בעוד שהשימוש בתורמי DCD יכול להרחיב את מאגר התורמים ולהגדיל את ניצול הריאות, נדרשים מחקרים פרה-קליניים נוספים להערכת ההשפעות של איסכמיה חמה על תפקוד הריאות לאחר ההשתלה. להלן נתאר מודל של IRI חם בעכברים דרך מהדק הילאר ריאתי שמאלי.
מספר מודלים בבעלי חיים של הידוק הילאר ריאות פותחו והותאמו במהלך השנים האחרונות ועשויים לכלול שימוש במהדק מיקרו-וסקולרי א-טראומטי 8,9,10,11,12,13, חוסם עורקים רומל 14,15 או קשירת תפרים16 כמו מהדק hilar. עיקר המהדק ההילארי הוא שהוא חייב להיות הפיך ולגרום נזק מינימלי או ללא נזק למבנים ההילאריים, כך שניתן יהיה להשיג זילוף. כאן, אנו מתארים את טכניקת המהדק ההילארי שלנו בעכברים הכוללת קשירת תפר הפיכה של הילום ריאתי שמאלי עם חלקלק. שיטה זו חוסמת את זרימת עורקי הריאה, את הזרימה הוורידית ואת זרימת האוויר פנימה והחוצה מהסימפונות הראשיים. היתרון העיקרי של החלקה על מהדק כלי דם, קליפס או חוסם עורקים הוא שניתן לסגור את החזה בתקופות ממושכות של איסכמיה, ובכך למזער איבוד נוזלים וחום בלתי נתפס בעכבר. אנו מספקים פרוטוקול להשגת מדידות אמינות של גז דם עורקי (ABG) ולמדידת אקסטרווציה של תאים לאחר הידוק הילארי.
טכניקת הידוק הילארי זו תופסת מקום חשוב במחקר הרחב יותר של השתלת ריאות. בהשוואה למודלים של בעלי חיים קטנים של השתלת ריאות אורתוטופית, טכניקת ההידוק ההילארי יכולה לבודד את ההשפעות של IRI ללא תוספת של טראומה אנסטומוטית כירורגית או אלוגניות17. בנוסף, ניתן לשלוט בקלות ובמהירות רבה יותר בטכניקת ההידוק הילאר מאשר השתלת ריאות עכבר. למעשה, באמצעות טכניקות מהדק hilar, מספר מנגנונים חשובים בפתוגנזה של IRI זוהו בעשור האחרון, כגון TLR4, NADPH oxidase, וקולטן אדנוזין A2A 14,18,19,20. בפרוטוקול הבא, אנו מציגים שיטה אמינה, ניתנת ללימוד וניתנת לשחזור של הידוק hilar ככלי לחקר IRI ריאות.

<table><tbody><tr><td><חזק>תרופות</חזקות></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% תמיסת פובידון-יוד</td><td>Aplicare</td><td>NDC 52380-0126-2</td><td>לחיטוי</td></tr><tr><td>בופרנורפין 1.3 מ"ג/מ"ל</td><td>פידליס בריאות בעלי חיים</td><td>NDC 86084-100-30</td><td>לשליטה בכאב</td></tr><tr><td>קרפרופן</td><td>קרונוס פארמה</td><td>NDC 69043-027-18</td><td>לשליטה</td></tr><tr><td>בכאב הפרין 1000 יחידות/מ"ל</td><td>Sagent</td><td>NDC 25021-404-01</td><td>להשגת דם עורקי</td></tr><tr><td>איזופלורן 1%-1.5%</td> <td>סיגמא אולדריץ'</td><td>26675-46-7</td><td>להרדמה</td></tr><tr><td>קטמין הידרוכלוריד 100 מ"ג/מ"ל</td><td>Vedco</td><td>NDC 50989-996-06</td><td>להרדמה</td></tr><tr><td>משחת עיניים Puralube Vet</td><td>Medi-Vet.com</td><td>11897</td><td>למניעת ייבוש עיניים</td></tr><tr><td>קסילזין 20 מ"ג/מ"ל</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>לשליטה בכאב</td></tr> <tr><td><חזק>כלים ומכשירים</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Argent טמפ' גבוהה עדין קצה עט</td><td>McKesson</td><td>231</td><td>לקרישת כלי דם</td></tr><tr><td>מהדק יתושים מעוקל</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>13009-12</td><td>להליך כירורגי</td></tr><tr><td>מלקחיים מעוקלים עדינים</td><td>כלי מדע</td><td>עדין 11274-20</td><td>לכירורגי נוהל</td></tr><tr><td>מספריים עדינים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>15040-11</td><td>להליך כירורגי</td></tr><tr><td>הגדרת מהדק אינטובציה</td><td>Fine Science Tools</td><td>18374-44, 18144-30</td><td>להחזקת עכבר אנכית על ידי הלשון במהלך אינטובציה. ראה איור משלים 1A.&nbsp;</td></tr><tr><td>מחזירי צלעות מגנטיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-01, 18200-10</td><td>לנסיגה של בית החזה. יש לחבר מקבע מגנטי ומחזיר באמצעות צינורות מיקרו לטקס למטה.</td></tr><tr><td>סיבים אופטיים מפלסטיק בדרגה אופטית ללא מעיל, 500&mu; m</td><td>Edmund Optics</td><td>02-532</td><td>כדי ליצור את המכניס לצינור האנדוטרכאלי. ראה איור משלים 1B. באורך של 1.5 אינץ' של סיב אופטי זה צריכה להיות חתיכת סרט משי מאובטחת לקצה אחד. לאחר מכן הוא יכול לשמש כמבוא לצינור האנדוטרכאלי. קצה המציג צריך להיות מעוקל מעט.</td></tr><tr><td>Power Pro Ultra קוצץ</td><td>אוסטר</td><td>078400-020-001</td><td>כדי לקצץ מספריים לשיער</td></tr><tr><td></td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>14370-22</td><td>להליך כירורגי</td></tr><tr><td>כרית חימום לבעלי חיים קטנים</td><td>K& H Pet Products</td><td>כרית מחוממת Thermo-Peep</td><td>לשמירה על נורמותרמיה</td></tr><tr><td>מאוורר בעלי חיים קטנים</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>55-0000</td><td>לאוורור (טלוויזיה 0.35 סמ"ק, PEEP 1 ס"מ H2O, RR 100-105 / min, FiO2 100%)</td></tr> <tr><td>צינורות גומי מיקרו לטקס Spearit (1/8 בקוטר חיצוני, 1/16 בקוטר פנימי)Amazon.com</td><td></td> <td>https://www.amazon.com/Rubber-Tubing-CONTINUOUS-Select-Length/dp/B00H4MT7V0?th=1</td><td>לנסיגה של כריתת בית החזה</td></tr><tr><td>פרופיל סטטיסטי פריים טיפול קריטי מנתח גזי דם</td><td>נובה ביומדיקל</td><td>https://novabiomedical.com/prime-plus-critical-care-blood-gas-analyzer/index.php?gad=1&gclid=Cj0KCQjwmICoBhDx ARIsABXkXlInZX--R3ezBkc304nS_GVGI9Z2T3Esr33 2aM8WGPiUVhicPQZ Wj2AaAqhDEALw_wcB&nbsp; &nbsp;</td><td>לנסיגה של כריתת בית החזה</td></tr><tr><td>מהדק ישר</td><td>Fine Science Tools</td><td>13008-12</td><td>להליך כירורגי</td></tr><tr><td>מלקחיים ישרים</td><td>Fine Science Tools</td><td>91113-10</td><td>להליך כירורגי</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ כירורגי</td><td>Wild Heerbrugg</td><td>כבר לא מיוצר</td><td>עבור אינטובציה והליך כירורגי; ממליץ על החלפה במיקרוסקופים כירורגיים של Leica</td></tr> <tr><td><חזק>אספקה</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&frac12; מזרק סמ"ק עם &frac12; מחט אינץ' 29G</td><td>McKesson</td><td>942665</td><td>להזרקת קטמין/קסילזין תוך צפקית</td></tr><tr><td>&frac12; מחט אינץ' 31G על מזרק טוברקולין 1 סמ"ק</td><td>McKesson</td><td>16-SNT1C2705</td><td>לשאיבת דם עורקי מהחדר השמאלי</td></tr><tr><td>קטטר 1 אינץ' 20G IV</td><td>Terumo</td><td>SROX2025CA</td><td>לצינור אנדוטרכיאלי (ETT)</td></tr> <tr><td>משי 1 אינץ' קלטת</td><td>Durapore</td><td>3M ID 7100057168</td><td>להדביק ETT לאף ולאבטחת גפיים</td></tr><tr><td>מזרק 3/10 סמ"ק עם מחט 5/16 אינץ' 31G</td><td>McKesson</td><td>102-SN310C31516P</td><td>להזרקת נוגדנים לתוך הווריד הנבוב התחתון</td></tr><tr><td>6-0 תפר מונופילמנט על מחט P-10</td><td>McKesson</td><td>S697GX</td><td>לסגירת בית החזה, שכבת השריר והעור</td></tr><tr><td>6-0 עניבת משי</td><td>מראה התמחויות כירורגיות</td><td>SP102</td><td>ליצירת קשר למהדק הילר</td></tr><tr><td>אפליקטורים עם קצה כותנה מחודד</td><td>Solon</td><td>56225</td><td>למניפולציה של ריאות ולדיסקציה קהה</td></tr></tbody></table>

מודל מהדק הילארי ריאתי שמאלי של פגיעה באיסכמיה ריאתית

Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

פגיעה באיסכמיה רפרפוזיה (IRI) במהלך השתלת ריאות היא גורם סיכון עיקרי לסיבוכים לאחר ההשתלה, כולל תפקוד לקוי ראשוני של השתל, דחייה חריפה וכרונית ותמותה. מאמצים לחקור את היסודות של IRI הובילו לפיתוח מודל עכבר אמין וניתן לשחזור של הידוק הילאר ריאה שמאלית. מודל זה כולל הליך כירורגי המבוצע בעכבר מורדם ואינטובציה. מבוצעת כריתת בית חזה שמאלי, ואחריה גיוס ריאות זהיר ודיסקציה של הילום הריאה השמאלי. המהדק ההילארי כרוך בקשירת תפר הפיכה של הילום הריאתי עם חלקלק, אשר עוצר את זרימת העורקים, זרימת ורידים וזרימת אוויר דרך הסימפונות הראשיים השמאליים. זילוח הוא יזם על ידי הסרה זהירה של התפר. המעבדה שלנו משתמשת 30 דקות של איסכמיה ו 1 שעה של זילוח עבור המודל הניסויי בחקירות הנוכחיות. עם זאת, פרקי זמן אלה ניתנים לשינוי בהתאם לשאלת הניסוי הספציפית. מיד לפני ההקרבה, ניתן לקבל גז דם עורקי מהחדר השמאלי לאחר פרק זמן של 4 דקות של הידוק הילאר ימני כדי להבטיח שערכי PaO2 המתקבלים מיוחסים לריאה השמאלית הפגועה בלבד. אנו מתארים גם שיטה למדידת אקסטרווסציה של תאים באמצעות ציטומטריית זרימה, הכוללת הזרקה תוך ורידית של נוגדן עם תווית פלואורוכרום ספציפי לתא(ים) שיש לחקור לפני הקרבה. לאחר מכן ניתן לקצור את הריאה השמאלית לצורך ציטומטריית זרימה, קפוא או קבוע, אימונוהיסטוכימיה משובצת פרפין ותגובת שרשרת כמותית של פולימראז. טכניקת הידוק הילארי זו מאפשרת מחקר מפורט של המנגנונים התאיים והמולקולריים העומדים בבסיס IRI. תוצאות מייצגות חושפות ירידה בחמצון הריאה השמאלית ועדות היסטולוגית לפגיעה ריאתית בעקבות הידוק הילארי. טכניקה זו ניתנת ללמידה ולשכפול בקלות על ידי אנשי צוות עם וללא ניסיון מיקרוכירורגי, מה שמוביל לתוצאות אמינות ועקביות ומשמש כמודל הניתן לאימוץ נרחב לחקר IRI ריאות.

לאחר הידוק הילארי שמאלי, לחץ חלקי של חמצון בדם העורקי (PaO2) המיוחס לריאה השמאלית הוא ~100 מ"מ כספית, נמוך משמעותית בהשוואה ל~500 מ"מ כספית לאחר כריתת בית חזה דמה (איור 7A, n=6-7). יש לציין כי תראקוטומיות דמה בוצעו בעכברי B6 כאשר מדידת ABG נלקחה לאחר 4 דקות של הידוק הילארי ימני, המייצג ערכים המיוחסים לריאה השמאלית בלבד. צביעת H&amp;E של הריאה השמאלית המהודקת-הילאר הדגימה חדירה של תאי דלקת הממלאים את דרכי הנשימה ואת גודש כלי הדם באריתרוציטים, בעוד שממצאים אלה נעדרים בריאה השמאלית התמימה (איור 7B, n=2). תוצאות אלה מדגימות פגיעה מיידית ברקמות וחדירת תאים לאחר תקופה של איסכמיה ורפרפוזיה.
כפי שנדון בשלב 6, ניתן להבדיל בין נויטרופילים תוך-וסקולריים ואינטרסטיציאליים באמצעות הזרקה תוך ורידית של נוגדן אנטי-Ly6G המסומן בתווית FITC 5 דקות לפני ההקרבה, ולאחר מכן תיוג של כל הנויטרופילים עם נוגדני APC-Ly6G18,24. תרשימים מייצגים מראים כי ~75% מהנויטרופילים הם תוך-וסקולריים (APC-Ly6G+FITC-Ly6G+) ו~25% הם אינטרסטיציאליים (APC-Ly6G+FITC-Ly6G-) לאחר הידוק הילארי של הריאה השמאלית (איור 7C, n=4). תוצאות אלה מדגימות דרך אמינה להעריך אקסטרווציה של נויטרופילים וניתן להתאים אותן לסוגי תאים אחרים בהתאם לנוגדנים המשמשים (כלומר, אנטי Ly6C עבור מונוציטים, אנטי CD19 עבור תאי B). טכניקה זו שימושית לחקר דינמיקה של תאים בעקבות IRI.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig1v2.jpg"> איור 1: אינטובציה של עכבר. (A) עכבר עם חזה ובטן שמאליים מגולחים. (B) צינור אנדוטרכאלי המחובר לצינורות הנשמה. (C) לאחר אישור האינטובציה, הדביקו את הצינור באופן היקפי לאפו של העכבר. (D) עכבר מובנה עם צינורות זרימה וזרימה ממכונת ההנשמה של בעלי החיים הקטנים ואליהם. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig1v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig02.jpg"> איור 2: בית החזה השמאלי. (A) חתך בעור מעל החלל הבין-קוסטליהרביעי (ICS). (B) שכבות שריר מחולקות על פני שטח בין-קוסטלי4 . (C) ביצוע חתך קטן קצתמעל הצלע החמישית. (D) הארכת חתך קדמי ואחורי ב-ICS4 . (E) ריאה המדומה ב- ICS4 . (פ-ג) מחזירי צלעות הוצבו. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig03.jpg"> איור 3: מהדק הילארי שמאלי. (A) ריאה שמאלית מגויסת עם צמר גפן. (B) רצועה ריאתית נחותה (IPL) בתמונה. (C) כאשר ריאה שמאל הפוכה קדימה, עניבת משי ממוקמת אחורית להילום. (D) כאשר שמאל הפוך אחורית מעל עניבת משי, ניתן לראות הילום קדמי. (E) עניבת מכשיר של slipknot מעל הילום שמאלי. (ו) סליפנוט על הילום. (G) עם חסימה ידנית של היציאה, הריאה השמאלית אינה מתנפחת, מה שמעיד על מהדק הילארי מוצלח. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig04.jpg"> איור 4: שחרור מהדק הילארי שמאלי וסגירת חזה שמאלי. (A) עם שחרור החלקלק, הריאה השמאלית מנופחת מחדש. (B) סגירת צלעות עם ביס אחד קצת מעל הצלעה-4 ו-(C) ביס אחד קצת מעל הצלעה-6 . (ד-ה) החזה נסגר בתפר אחד קשור בקצה. (F) סגירת העור עם תפרים קטועים (לאחר סגירת שכבת שריר בתפר ריצה). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig05.jpg"> איור 5: לפרוטומיה, צדפה דו-צדדית ואוסף דם עורקי. (A) עכבר מותאם למצב שכיבה. (B) חתך בעור שנעשה מעל קו האמצע של הבטן. (C) לפרוטומיה המשתרעת מקסיפואיד לפאביס, עם הארכה ימינה ושמאלה לאורך הצלע הנחותה ביותר. (ד-ה) פתיחת הסרעפת לכניסה לחלל החזה, עם הארכת חתך הסרעפת ימינה ושמאלה לאורך הצלע התחתונה ביותר (קו מקווקו). (F) בית חזה צדפה דו-צדדי עם חתכים בקווי בית השחי הקדמיים (קו מקווקו) לכיוון קודקוד החזה. (G) אונה אביזרית של ריאה ימנית המשתרעת לתוך בית החזה השמאלי האחורי אל הווריד הנבוב התחתון. (H) אונת העזר התגייסה והוחזרה לחזה הימני. (I) שאיפת דם עורקי מחדר שמאל (inset: הפרש צבעים בין חדר ימין לחדר שמאל). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig06.jpg"> איור 6: הזרקה תוך ורידית לתוך הווריד הנבוב התחתון. (A) סיבוב הקרביים המדיאלי הימני כדי לחשוף את הווריד הנבוב התחתון (IVC). (ב) הזרקת תמיסה ל-IVC. (C) הפעלת לחץ על IVC להשגת המוסטאזיס. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig06large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig07.jpg"> איור 7: תוצאות מייצגות של חמצון ריאות, היסטולוגיה ואקסטרווזיה של נויטרופילים בעקבות מהדק הילארי שמאלי. (A) לחץ חלקי של חמצן בדם העורקי של עכבר C57BL/6 שעבר דמה של בית החזה לעומת מהדק הילארי. התוצאות מוצגות כממוצע ± SEM, n = 6-7. ערכי p שחושבו על ידי מבחן Mann-Whitney U . **p &lt;0.01. (B) צביעת H&amp;E של קטע ריאה מקובע פורמלין, משובץ פרפין של עכבר C57BL/6 שעבר דמה של בית החזה לעומת הידוק הילארי. סרגל קנה המידה מייצג 250 מיקרומטר. (C) נתון מייצג של התפלגות תוך-כלי דם (APC-Ly6G+FITC-Ly6G+) לעומת נויטרופילים חוץ-וסקולריים (APC-Ly6G+FITC-Ly6G-) Ly6G+ בעכבר C57BL/6 בעקבות הידוק הילארי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig07large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
תרשים משלים 1: מבוא לצינור אנדוטרכאלי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/Supplemental_Figure_1_updated.pdf" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>

הפרוטוקול מתווה שיטה ישימה, אמינה וניתנת לשחזור של הידוק הילארי ריאתי שמאלי, שניתן להשתמש בו כדי לחקור פגיעה איסכמיה-רפרפוזיה ריאתית במודלים של עכברים.

Ischemia reperfusion injury (IRI) during lung transplantation is a major risk factor for post-transplant complications, including primary graft ...

אנו מעוניינים לחקור את ההשפעות של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה על תוצאות לאחר השתלת ריאות במטרה להבין את המנגנונים התאיים והמולקולריים העומדים בבסיסם. נויטרופילים הנכנסים לריאה תורמים לפגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה, או IRI. לאחרונה גילינו שתאי B מכניסים נויטרופילים לריאה, והם ממלאים תפקיד בגיוס נויטרופילים בעקבות IRI.השתלת ריאה שמאלית בעכבר היא מאתגרת מבחינה טכנית, ודורשת הכשרה ייעודית במשרה מלאה במשך מספר חודשים כדי להשיג תוצאות עקביות. בנוסף, הוא מציג אלרגניות וטראומה אנסטומוטית כירורגית. לכן, אנו זקוקים לטכניקה נגישה יותר שיכולה לבודד את המחקר של פגיעה איסכמיה-רפרפוזיה.באמצעות מודל המהדק ההילארי שלנו, מצאנו שתאי B נכנסים לריאה מוקדם לאחר פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה, והם מגייסים מונוציטים קלאסיים בקולטן של תאי B לצורה תלוית TLR4. זה בסופו של דבר גורם לאקסטרווזיה מוגברת של נויטרופילים לתוך הריאה. הפרוטוקול שלנו כולל קשירת תפר הפיכה של הילום ריאתי שמאלי עם קשר החלקה.אופיו הגמיש והלא פולשני של התפר מאפשר סגירת חזה, דבר שימושי לחקר תקופות ארוכות יותר של איסכמיה חמה, שכן סגירת החזה ממזערת חום ואיבוד נוזלים בלתי מורגש בעכבר.

murine-left-pulmonary-hilar-clamp-model-lung-ischemia-reperfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

טראומה ניתוחית גורם לתגובה דלקתית. ציטוקינים ligands אנדוגניים ידועים לווסת את גודל האוטם בשריר הלב בעקבות איסכמיה ו reperfusion. אנו מציגים שונה סגור החזה מודל של איסכמיה reperfusion Murine באמצעות משקולות תלויות כדי למזער את ההשפעות של פתיחת בית החזה.

דגם Murine סגור החזה של איסכמיה של שריר הלב reperfusion

אנחנו מציגים את שיטה כירורגית כדי לגרום לאיסכמיה / reperfusion הניסיוני (I / R) פציעה כדי לדמות אוטם שריר הלב (MI) בעכברי מודל, המאפשר ליותר בהירות במיצוב של קשירה בעורק השמאלי הקדמי יורד (LAD) כדי להגדיל את שחזור ניסויים MI בעכברים.

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

מודל מהדק hilar כבד עכברוש ייחודי שפותח עבור הבוחנים את שפעת מולקולות תרופתיות לטיוב פגיע reperfusion-איסכמיה. מודל זה כולל cannulation ישיר של אספקת הפורטל למגזר הכבד איסכמי באמצעות סניף של וריד השער, המאפשר למסירה כבדה ישירה.

שיטה של ​​המגזרים הישירים Intra-כבדית משלוח באמצעות מודל קלאמפ עכברוש הכבד hilar

כאן אנו מתארים הליך כירורגי המראה כיצד להשיג הארכה קבועה של עורק שמאלי הקדמי כלילית בעכברים. מודל זה הוא בעל רלוונטיות גבוהה לחקור את הפתופסולוגיה של אוטם שריר הלב ואת התהליכים הביולוגיים המקביל.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

אנו מתארים בפירוט קלינית המעי הגס הרלבנטי סרטן הכבד גרורות (CRLM) הגידול מודל ההשפעה של איסכמיה של הכבד reperfusion (I/R) גידול גרורות. מודל זה יכול לעזור להבין טוב יותר את המנגנונים בבסיס קידום הניתוח המושרה של צמיחה גרורתית הכבד.

מודל מורנה של גידולים גרורות בכבד בהגדרה של איסכמיה Reperfusion פציעה

מודל איסכמיה-רפרפוזיה שריר הלב של לב חולדה משופר על ידי שימוש ב- retractor מתוצרת עצמית, צינור פוליוויניל כלוריד ושיטת קשר ייחודית. אלקטרוקרדיוגרמה, טריפנילטרזוליום כלוריד וכתמים היסטולוגיים, ותוצאות ניתוח הישרדות באחוזים הראו כי לקבוצת המודל המשופרת יש שיעורי הצלחה והישרדות גבוהים יותר מאשר לקבוצת המודל הקיימת כבר.

מודל מכרסמים משופר של איסכמיה שריר הלב ופציעת רפרפוזיה

מודל ניתוחי בעכבר ליצירת פגיעה באיסכמיה של הריאה השמאלית (IR) תוך שמירה על אוורור והימנעות מהיפוקסיה.

מודל עכברי של אינטובציה אורוטרכאלית וניתוח איסכמיה ריאה מונשמת

מוצג כאן הליך כירורגי לקשירה קבועה של העורק הכלילי השמאלי בעכברים. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה ואת התגובה הדלקתית הקשורים לאחר אוטם שריר הלב.

קשירת עורקים כליליים שמאליים: מודל מורין כירורגי של אוטם שריר הלב

מחקר זה מתאר מודל של פגיעה ריאתית חריפה בעקבות איסכמיה קרביים-רפרפוזיה במהלך הידוק צולב של אבי העורקים העל-צליאקי באמצעות לפרוטומיה בחולדות. זה מאפשר לחקור הן את ההשפעות הקליניות והביולוגיות של הידוק אבי העורקים והן את ההשפעה של איסכמיה-רפרפוזיה על איברים בסיסיים ופגיעות ריאות מרוחקות.

מודל של פגיעה ריאתית חריפה בעקבות איסכמיה קרבית-רפרפוזיה על ידי הידוק צולב של אבי העורקים סופרה-צליאק בחולדות

אנו מתארים מודלים של פגיעה בכליות הנגרמות איסכמיה reperfusion בינוניות וקשות שבו העכברים עוברים הידוק חד צדדי ואחרי כריתת כליה הנגדית בו זמנית או עיכוב, בהתאמה pedicle כליות. מודלים אלה נותנים באופן עקבי עלייה לפגיעה בתפקוד הכלייתי וסיסטיק לאחר פציעה, אך חומרת פציעה והישרדות תלויות ברקע, גיל וכירורגי ציוד עכבר.

דגם איסכמיה reperfusion של פגיעה חריפה בכליות ופגיעים ההודעה פיברוזיס בעכברים

למד את פרוטוקול מהדק ההילום הריאתי השמאלי לחקר פגיעת איסכמיה-ריאתית בעכברים. שיטה זו מאפשרת לבודד את השפעות הפגיעה ולחקור את תפקידם של תאי B ונייטרופילים בתהליך.

מודל מהדק הילארי ריאתי שמאלי של פגיעה באיסכמיה ריאתית

גלה סרטונים נוספים