הקמת מודל עכברי ניסיוני של אנדומטריומה כדי לחקור את אי הפוריות הקשורה אליה

היקף המחקר שלנו מתמקד בהבנת המנגנונים העומדים בבסיס אי פוריות הקשורה לאנדומטריומה. אנו שואפים לטפל בפער הידע על ידי פיתוח מודל עכברי המדמה אנדומטריומה וחקירת השפעתה על הפוריות. בתחום חקר האנדומטריוזיס, ההתפתחויות האחרונות כוללות התקדמות בהבנת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס אנדומטריוזיס, זיהוי סמנים חדשים לאבחון וטיפול, ופיתוח מודלים חדשניים לחקר תת-סוגים ספציפיים כמו אנדומטריומה. התפתחויות אלו תורמות לשיפור הידע והאסטרטגיות הטיפוליות הפוטנציאליות לאנדומטריוזיס. האתגרים הניסויים הנוכחיים בחקר האנדומטריומה כוללים היעדר מודל אמין של בעלי חיים, הבנה מוגבלת של פתוגנזה והשפעת הפוריות, והצורך במחקרי הישנות ובדיקות אבחון. מודל עכברי האנדומטריומה ושילוב הממצאים מתמודדים עם אתגרים אלה ומקדמים את התחום.

הפרוטוקול שלנו מציע יתרונות מובהקים בהשוואה לטכניקות אחרות. הוא מתמקד במיוחד בחיקוי אנדומטריומה בעוד שלא הוקמו תת-סוגים אחרים בשיטה זו. עם אחוזי הצלחה גבוהים, הוא מאפשר שינויים גנטיים ומשכפל מאפייני רבייה הדומים לבני אדם, מה שהופך אותו לכלי רב ערך לחקר אי פוריות הקשורה לאנדומטריומה. הממצאים שלנו סללו את הדרך לעידן חדש של מחקר אנדומטריוזיס. על ידי מילוי פער ארוך שנים, המודל שלנו מבטיח תובנות טרנספורמטיביות, המחוללות מהפכה בהבנה, בטיפול ובמניעה פוטנציאלית של רירית הרחם. על ידי שילוב ממצאים ממחקרי הישנות ואבחון, המחקר שלנו משפר את ההקשר הרחב יותר של מחקר אנדומטריוזיס וטיפול בחולים.

[קריין] לאחר איסוף מצעים המכילים פרומונים זכריים, הכניסו אותם לכלוב העכברים הנקבה למשך 48 שעות. שופכים 10 מיליליטר PBS לצלחת פטרי וטובלים בה קצה אחד של צמר גפן לספיגת הנוזל. הוציאו בעדינות עכבר אחד מהכלוב שלו והניחו אותו על המכסה. הכניסו בעדינות את צמר הגפן הרטוב לנרתיק וסובבו את הספוגית בעדינות ב-45 מעלות לציר הארוך של גוף החיה. לאחר איסוף התאים מדפנות הנרתיק, משוך בזהירות את הספוגית. גלגל בעדינות את קצה הספוגית על שקופית זכוכית נקייה ומסומנת מראש כדי להעביר את התאים שנאספו. בדוק את השקופית תחת מיקרוסקופ לנוכחות תאי אפיתל קורניים המציינים את שלב הייחום. כדי להתחיל, יש לחטא את אזור הבטן של העכברה בשלב הייחום שהומת על ידי התורם עם 70% אתנול. השתמש במספריים כירורגיים סטריליים כדי לבצע חתך של סנטימטר אחד לאורך קו האמצע של הצפק, ולחשוף את שכבת השריר. לאחר מכן, השתמש במספריים אחרים כדי לחתוך את שכבת השריר ולחשוף את חלל האגן. סגור את קצות המלקחיים והרם בעדינות את המעיים באמצעות החלק המרכזי הבוטה. לאחר איתור הרחם, יש לנתח באופן סטרילי את כל קרן הרחם, תוך הקפדה על הסרת שתי קרני הרחם. מניחים את הרקמות שנכרתו בצלחת פטרי המכילה PBS ומסירים את רקמות השומן העודפות. בעזרת אזמל סטרילי, נתחו את הרקמות בדקדקנות לחתיכות קוביות של מילימטר אחד. הוסף מעת לעת PBS כדי לשמור על לחות הרקמות. הנח את העכבר המושתל המורדם במצב שכיבה על לוח כירורגי סטרילי. זהה את אתר הניתוח על ידי מניפולציה עדינה של הרגליים האחוריות כדי להרגיש בליטה גרמית מתחת לעור. יש לחטא את אזור הניתוח בעזרת ספוגית אתנול של 70%, ולאחר מכן עם בטאדין. באתר הנבחר, בצע חתך רוחבי מדויק בין שלושה לחמישה מילימטרים. ייצב את השחלה בעזרת מלקחיים ידניים לא דומיננטיים והזריק 100 מיקרוליטר PBS לבורסה השחלתית תוך התבוננות בהפרדה קלה. צרו חריץ קטן בבורסה, ובעזרת מיקרו מלקחיים, השתלו את שברי רקמת הרחם הקוביות בגודל מילימטר אחד. לאחר הניתוח יש לתפור את שכבות השריר בתפרים נספגים ועור עם תפרים שאינם נספגים. לאחר ארבעה שבועות, הוציאו את העכבר המושתל מכלוב הדיור. בצע חתך בקו האמצע בעכבר המקבל שהומת וחשוף את חלל הבטן לבדיקת איברים. בדוק היטב את חלל הבטן לאיתור נגעים אנדומטריוטיים זרים. לאחר מכן, חלץ את השחלות עם נגעים גלויים לצילום. תקן את השחלות עם נגעים בפורמלין ניטרלי של 10%. לאחר חיתוך והרכבה של חלקי הרקמה על מגלשה, הנח את תמיסת הקסילן של השקופית כדי להסיר את הפרפין. הרטיבו את חלקי הרקמה על ידי הנחת השקופית בסדרה של ירידה בריכוזי האתנול. טפל בקטעי רקמות עם חומצה תקופתית של 1% למשך חמש עד 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, שטפו היטב את השקופית במים מזוקקים כדי להסיר שאריות חומצה תקופתית. כעת, הכתים קטעי רקמות עם תמיסת משמרת למשך 15 דקות. שטפו את השקופית במי ברז חמים כדי להסיר עודפי כתמים ולאחר מכן במים מזוקקים. צבעו את חלקי הרקמה עם המטוקסילין של מאייר למשך שתיים-שלוש דקות. שטפו את המגלשה במי ברז זורמים לפני מריחת ריאגנט כחול למשך 30 שניות. לאחר שטיפת המגלשה במים מזוקקים, יש לייבש את החלקים בהגדלת ריכוזי האתנול. טבלו את המקטעים בקסילן כדי להפוך אותם לשקופים. מרחו אמצעי הרכבה על החלקים והניחו בעדינות החלקת כיסוי תוך הימנעות מבועות אוויר. לאחר הייבוש, בדוק את השקופית במיקרוסקופ קל לנוכחות בלוטות רירית הרחם, סטרומה וציסטות דימומיות המאשרות אנדומטריוזיס בשחלה. בהשוואה לקבוצת הביקורת הדמה, גידול ציסטי של רירית הרחם החוץ רחמית נראה בקשר למורפולוגיה השחלתית ארבעה שבועות לאחר ההשתלה בקבוצת רירית הרחם. בדיקה היסטופתולוגית נוספת אישרה את ההשתלה המוצלחת של רקמת רירית הרחם החוץ רחמית בקבוצת רירית הרחם.