מדידת שינויי pH גליקוזומליים דינמיים בטריפנוזומה ברוסי חי

מטבוליזם של גלוקוז הוא קריטי עבור Trypanosoma brucei, אך מעט ידוע על האופן שבו התאים חשים ומגיבים לשינויים ברמות הגלוקוז בסביבה. פיתחנו טפילים המבטאים ביוסנסור pH המאפשר לנו לנטר pH גליקוזומלי בטפילים חיים, אשר יסייע בהבנת התגובות הדינמיות של טפילים לתנודות חומרי מזון. אתגר לניסוי זה יהיה זמינותו של ציטומטר זרימה המצויד בקורא לוחות מיקרוטייטר, כמו גם ערכות המסננים המתאימים למדידת פלואורסצנטיות של ביו-חיישנים.

בנוסף, T.brucei הוא אורגניזם מקבוצת סיכון, ולכן הציטומטר חייב להיות ממוקם בתוך מתקן ברמת בטיחות ביולוגית שתיים. התגלה כי רמת ה- pH של גליקוזים יכולה להשפיע על גליקוליזה כמו hexokinase ו phosphofructokinase הם רגישים pH. עם זאת, בדיקות ה- pH שהיו בשימוש בעבר לא כיוונו במדויק את הגליקוזום בצורת זרם הדם.

היה צורך בכלי טוב יותר כדי לחקור את הקשר בין pH גליקוזומלי וגליקוליזה בשלב החיים של הטפיל. חיישן pHluorin2-PTS1 הוא כלי טוב יותר במיקום לגליקוזום מאשר בדיקות pH כימיות בשלב חיים זה. זה ידידותי למשתמש, מכיוון שאתה רק צריך לגרום לביטוי של חיישן ה- pH בן לילה, והתאים ייצרו וימקמו pHluorin2 לגליקוזום.

שימוש בציטומטריית זרימה למדידת pHluorin2 מגדיל את התפוקה ומשפר את המדידות הסטטיסטיות בהשוואה למיקרוסקופיה.