Name: מוסטזיס פצע ניקוב והכנת דגימות לניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים רחב שטח מונטאז (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 41 s
Description: למד את שיטת פצע הניקוב לחקר היצירה ההמוסטטית של קרישי דם גדולים בעכברים. השיטה משלבת מיקרוסקופ אלקטרונים רחב שטח מונטאז' לניתוח מבני מפורט של הטרומבוס.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>פצע ניקוב המוסטזיס ומיקרוסקופ אלקטרונים מונטאז'

<ol><li>Rhee, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venous+puncture+and+wound+hemostasis+results+in+a+vaulted+thrombus+structured+by+locally+nucleated+platelet+aggregates%5BTitle%5D)+AND+%22Comm+Biol%22%5BJournal%5D)">Venous puncture and wound hemostasis results in a vaulted thrombus structured by locally nucleated platelet aggregates.</a> Comm Biol. 4 (1), 1090(2021).</li>
<li>Pokrovskaya, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tethered+platelet+capture+provides+a+mechanism+for+restricting+circulating+platelet+activation+in+the+wound+site%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Pract+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Tethered platelet capture provides a mechanism for restricting circulating platelet activation in the wound site.</a> Res Pract Thromb Haemost. 7 (2), 100058(2023).</li>
<li>Yadav, S., Storrie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+basis+of+platelet+secretion%3A+emerging+structure%2Ffunction+relationships%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">The cellular basis of platelet secretion: emerging structure/function relationships.</a> Platelets. 28 (2), 108-118 (2017).</li>
<li>Joshi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+and+sample+collection+for+3D+electron+microscopy+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced arterial thrombosis and sample collection for 3D electron microscopy analysis.</a> J Vis Exp. (193), e64985(2023).</li>
<li>Guerrero, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+von+Willebrand+factor%2Fglycoprotein+Ib-IX+axis+with+a+platelet-type+von+Willebrand+disease+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Visualizing the von Willebrand factor/glycoprotein Ib-IX axis with a platelet-type von Willebrand disease mutation.</a> Blood. 114 (27), 5541-5546 (2009).</li>
<li>Kato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+glycoprotein+VI+to+stable+platelet+adhesion+and+thrombus+formation+illustrated+by+targeted+gene+deletion%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The contribution of glycoprotein VI to stable platelet adhesion and thrombus formation illustrated by targeted gene deletion.</a> Blood. 102 (5), 1701-1707 (2003).</li>
<li>Tomaiuolo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interrelationships+between+structure+and+function+during+the+hemostatic+response+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+NatlAcad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Interrelationships between structure and function during the hemostatic response to injury.</a> Proc NatlAcad Sci U S A. 116 (6), 2243-2252 (2019).</li>
<li>Cocchiaro, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoplasmic+lipid+droplets+are+translocated+into+the+lumen+of+the+Chlamydia+trachomatis+parasitophorous+vacuole%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Cytoplasmic lipid droplets are translocated into the lumen of the Chlamydia trachomatis parasitophorous vacuole.</a> Proc Natl Acad Sci. 105 (27), 9379-9384 (2008).</li>
<li>Pokrovskaya, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlamydia+trachomatis+hijacks+intra+-+Golgi+COG+complex+-+dependent+vesicle+trafficking+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Chlamydia trachomatis hijacks intra - Golgi COG complex - dependent vesicle trafficking pathway.</a> Cell Microbiol. 14 (5), 656-668 (2012).</li>
<li>Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+electron+microscope+tomography+using+robust+prediction+of+specimen+movements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Str+Biol%22%5BJournal%5D)">Automated electron microscope tomography using robust prediction of specimen movements.</a> J Str Biol. 152 (1), 36-51 (2005).</li>
<li>Kremer, J. R., Mastronarde, D. N., McIntosh, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+visualization+of+three-dimensional+image+data+using+IMOD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Str+Biol%22%5BJournal%5D)">Computer visualization of three-dimensional image data using IMOD.</a> J Str Biol. 116 (1), 71-76 (1996).</li>
<li>Chan, N. C., Eikelboom, J. W., Weitz, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolving+treatments+for+arterial+and+venous+thrombosis%3A+role+of+the+direct+oral+anticoagulants%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Evolving treatments for arterial and venous thrombosis: role of the direct oral anticoagulants.</a> Circ Res. 118 (9), 1409-1424 (2016).</li>
<li>Kiernan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde%2C+formalin%2C+paraformaldehyde%2C+and+glutaraldehyde%3A+what+they+are+and+what+they+do%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+Today%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde, formalin, paraformaldehyde, and glutaraldehyde: what they are and what they do.</a> Microscopy Today. 8 (1), 8-13 (2000).</li>
<li>Storrie, B., Attardi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+mitochondrial+genome+in+HeLa+cells%3A+XV.+Effect+of+inhibition+of+mitochondrial+protein+synthesis+on+mitochondrial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J+CellBiol%22%5BJournal%5D)">Expression of the mitochondrial genome in HeLa cells: XV. Effect of inhibition of mitochondrial protein synthesis on mitochondrial formation.</a> J CellBiol. 56, 819-831 (1973).</li>
<li>Liu, S., Pokrovskaya, I. D., Storrie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+-+pressure+freezing+followed+by+freeze+substitution%3A+an+optimal+electron+microscope+technique+to+study+Golgi+apparatus+organization+and+membrane+trafficking%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">High - pressure freezing followed by freeze substitution: an optimal electron microscope technique to study Golgi apparatus organization and membrane trafficking.</a> Meth Mol Biol. 2557, 211-223 (2023).</li>
<li>Klarhofer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+blood+flow+velocity+measurements+in+the+human+finger%5BTitle%5D)+AND+%22Mag+Res+Med%22%5BJournal%5D)">High-resolution blood flow velocity measurements in the human finger.</a> Mag Res Med. 45 (4), 716-719 (2001).</li>
<li>Chaudry, R., Miao, J. H., Rehman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology%2C+cardiovascular%5BTitle%5D)+AND+%22StatPearls%22%5BJournal%5D)">Physiology, cardiovascular.</a> StatPearls. , Treasure Island, FL, USA. (2022).</li>
<li>Pokrovskaya, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SNARE+-+dependent+membrane+fusion+initiates+a-granule+matrix+decondensation+in+mouse+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">SNARE - dependent membrane fusion initiates a-granule matrix decondensation in mouse platelets.</a> Blood Adv. 2 (21), 2947-2958 (2018).</li>
<li>Pokrovskaya, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+ultrastructural+analysis+of+a-granule%2C+dense+granule%2C+mitochondria%2C+and+canalicular+system+arrangement+in+resting+human+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Pract+Thrombosis+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">3D ultrastructural analysis of a-granule, dense granule, mitochondria, and canalicular system arrangement in resting human platelets.</a> Res Pract Thrombosis Haemostasis. 4 (1), 72-85 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.9% תמיסת מלח רגילה</td><td>Medline</td><td>BHL2F7123HH</td><td></td></tr><tr><td>27G x 3/4 EXELint סט ורידים בקרקפת</td><td>Medline</td><td>NDA26709</td><td></td></tr><tr><td>30G x 1/2 EXELint מחטים היפודרמיות</td><td>Medline</td><td>NDA264372</td><td></td></tr><tr><td>33G x 1/2 EXELint מחטים היפודרמיות מיוחדות</td><td>Medline</td><td>NDA26393</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות חרוטיים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>06-443-20</td><td></td></tr><tr><td>רפידות הכנה לאלכוהול (70% אלכוהול איזופרופיל</td>)<td>Medline</td><td>MDS090670Z</td><td></td></tr><tr><td>רדיד אלומיניום</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>צלחת חימום בעלי חיים</td><td>Physitemp מכשירים</td><td>HP-1M</td><td></td></tr><tr><td>Araldite GY 502</td><td>אלקטרונים מיקרוסקופיה מדעי</td><td>10900</td><td></td></tr><tr><td>Axiocam 305 צבע R2 מיקרוסקופיה מצלמה</td><td>קרל זייס מיקרוסקופיה</td><td>426560-9031-000</td><td></td></tr><tr><td>BD מזרקי Luer-Lok, 20 מ"ל</td><td>Medline</td><td>B-D303310Z</td><td></td></tr><tr><td>סידן כלוריד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>C79-500</td><td></td></tr><tr><td>צלחות תרבית תאים 35 מ"מ x 10 מ"מ</td><td>קורנינג בע"</td>מ<td></td><td></td></tr><tr><td>430165 כותנה קצה אפליקטורים</td><td>Medline</td><td>MDS202055H</td><td></td></tr><tr><td>DMP-30 מפעיל</td><td>אלקטרונים מיקרוסקופיה מדעית</td><td>13600</td><td></td></tr><tr><td>Dodecenyl Succinic Anhydride / DDSA</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>13700</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים חבישה, 5 אינץ', מעוקל, משונן, צר קצה</td><td>Integra Miltex</td><td>6-100</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים, 5 אינץ', סטנדרטי, משונן</td><td>אינטגרה Miltex</td><td>6-6</td><td></td></tr><tr><td>EMBED 812 שרף</td><td>אלקטרונים מיקרוסקופיה מדעית</td><td>14900</td><td></td></tr><tr><td>אתיל אלכוהול, נטול מים 200 הוכחה</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>15055</td><td></td></tr><tr><td>פישרברנד 4 כיווני צינור מתלה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>03-448-17</td><td></td></tr><tr><td>פישרברנד טיימר דיגיטלי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-649-17</td><td></td></tr><tr><td>משאבת עירוי מזרק יחיד של פישרברנד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>7801001</td><td></td></tr><tr><td>ספוגי גזה 2 אינץ' x 2 אינץ'- 4 שכבות</td><td>Medline</td><td>NON26224H</td><td></td></tr><tr><td>גלוטראלדהיד (תמיסה 10%)</td> <td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>הרדמה נוזלית איזופלורן, 100 מ"ל</td><td>Medline</td><td>66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-פיין בסגנון תכשיטן מלקחיים, סגנון 5F</td><td>אינטגרה Miltex</td><td>17-305</td><td>צריך 2 זוגות.</td></tr><tr><td>צינורות משאבה L/S, סיליקון, L/S 15; 25 רגל</td><td>VWR</td><td>MFLX96410-15</td><td></td></tr><tr><td>L-חומצה אספרטית</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP374-100</td><td></td></tr><tr><td>עופרת חנקתית</td><td>Fisher Scientific</td><td>L-62</td><td></td></tr><tr><td>מלכיט ירוק 4</td><td>אלקטרונים מיקרוסקופיה Sciences</td><td>18100</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Easy-Load II ראש משאבה</td><td>VWR</td><td>MFLX77200-62</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S כונן דיגיטלי במהירות משתנה</td><td>VWR</td><td>MFLX07528-10</td><td></td></tr><tr><td>MSC Xcelite 5 אינץ' חותכי חוטים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>50-191-9855</td><td></td></tr><tr><td>אוסמיום טטרוקסיד 4% תמיסה מימית</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>19150</td><td></td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד (16% תמיסה)</td> <td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>בקר</td> <td>טמפרטורה PhysitempPhysitemp Instruments</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן פרוציאניד</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P-8131</td><td></td></tr><tr><td>תחמוצת פרופילן, ACS מגיב</td><td>אלקטרונים מיקרוסקופיה</td><td>מדעית 20401</td><td></td></tr><tr><td>כוסות זכוכית פיירקס</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-555-25B</td><td></td></tr><tr><td>בדיקת טמפרטורת פי הטבעת לעכברים</td><td>Physitemp Instruments</td><td>RET-3</td><td></td></tr><tr><td>סקוטש קסם קלטת בלתי נראית, 3/4 אינץ' x 1000 אינץ'</td> <td>3M חברה</td><td>305289</td><td></td></tr><tr><td>מאגר נתרן קקודילאט 0.2M, pH 7.4</td><td>אלקטרונים מיקרוסקופיה מדעית</td><td>11623</td><td></td></tr><tr><td>SomnoFlo Low Flow Electronic Vaporizer</td><td>קנט סיינטיפיק</td><td>SF-01</td><td></td></tr><tr><td>SomnoFlo ערכת התחלה לעכברים</td><td>קנט מדעי</td><td>SF-MSEKIT</td><td></td></tr><tr><td>נירוסטה Minutien Pins</td><td>מדע משובח כלים</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ steREO Discovery.V12</td><td>מיקרוסקופיה קרל זייס</td><td>495015-9880-010</td><td></td></tr><tr><td>סילגארד 184 סיליקון אלסטומר</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>SYLG184</td><td>מחצלת סיליקון</td></tr><tr><td>חומצה טאנית</td><td>מיקרוסקופיה אלקטרונית מדעי</td><td>21700</td><td></td></tr><tr><td>תיוקרבוהידרזיד (TCH)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>88535</td><td></td></tr><tr><td>אורניל אצטט</td><td>אלקטרונים מיקרוסקופיה מדעית</td><td>22400</td><td></td></tr><tr><td>Vannas אביב מיקרו מספריים</td><td>Fine Science</td><td>Tools 15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Von Graefe מלקחיים להלבשת עיניים, 2.75 אינץ', מעוקל,</td><td>אינטגרה משוננת Miltex</td><td>18-818</td><td>צריך 2 זוגות.</td></tr><tr><td>Wagner מספריים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14068-12</td><td></td></tr><tr><td>Wahl MiniFigura גוזם בעלי חיים</td><td>Braintree Scientific</td><td>CLP-9868</td><td></td></tr><tr><td>Zen Lite תוכנה</td><td>קארל זייס מיקרוסקופיה</td><td>410135-1001-000</td><td></td></tr></tbody></table>

מוסטזיס פצע ניקוב והכנת דגימות לניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים רחב שטח מונטאז'

Puncture Wound Hemostasis and Preparation of Samples for Montaged Wide-Area Electron Microscopy Analysis

כימות השפעות התרופה על זמן דימום פצע דקירה זמני דימום פצעי ניקוב מספקים מודל פיזיולוגי של סיכון תרופתי שניתן לבצע בקלות בעכברים. תוצאות שמגיעות מניסוי פצע דקירה הן ניבוי. כאן, אנו מראים עקומת דימום של מנה-תגובה dabigatran. Dabigatran, מעכב טרומבין, משמש כנוגד קרישה פומי הפועל באופן ישיר, מה שנקרא DOAC12. מודל פצע ניקוב הווריד הצווארי שימש להערכת הסיכון הגלום במינונים שונים של דביגאטראן באמצעות דימום ממושך פוטנציאלי באמצעות היווצרות פקקת מאוחרת בעכברים. מינון משתנה של 15, 50, או 150 מיקרוגרם / ק"ג של dabigatran ניתן תוך ורידי (i.v.) 20 דקות לפני ניקוב הווריד הצווארי. אנו מראים את זמן הדימום בריכוזים שונים של דביגאטראן (איור 4). ברמת המינון, נצפתה הארכה משמעותית של זמן הדימום, p &lt;0.051. זה מצביע על גורם סיכון משמעותי בשימוש בתרופה בבני אדם. באופן ניסיוני, התרופה במינונים אלה יש השפעה משמעותית על ultrastructure של פקקת יוצר.
הערכת מצב הפעלת טסיות הדם בפקקת פצע ניקוב יוצרת גישת WA-TEM מספקת גם סקירה כללית של אזור פצע במישור יחיד כאשר מסתכלים עליו בהגדלה נמוכה יותר וגם פרטים רבים בהגדלה גבוהה יותר (איור 5). הפרטים המתקבלים יכולים להיות ממוקמים ישירות בהקשר של סקירה. השתמשנו בגישה זו כדי להעריך את הגיוס של טסיות בצורת דיסקואידים לפקקת פצע ניקוב יוצרת. טסיות הדם במחזור הדם הן דיסקואידיות, ומכאן שמן, ומכילות סט שלם של גרגרי הפרשה. שאלת מפתח הייתה כיצד ניתן לגייס טסיות במחזור הדם לפקקת הגדלה מבלי להפריע לתכונות הזרימה החופשית של הטסיות הנותרות. עבודתנו מצביעה על השערת Tether and Activate שבה טסיות הדם מגויסות לפקקת בזו אחר זו, בתהליך קשירה כטסיות דיסקואידים המכילות סט שלם של אברונים2. הראיות לכך מגיעות מ- WA-TEM של טרומבי ורידים ג'וגולרי דקה לאחר הניקוב. לאחר חתך כדי להניב פרוסות פקקת מלאות מאמצע הפצע שעדיין מדמם, צילמנו 500-800 פריימים, 4,000 על 4,000 פיקסלים, גודל פיקסל 3.185 ננומטר ברשת רסטר XY מלבנית על פני הממד המלא של הפקקת בחתך רוחב באמצעות שלב אוטומטי ומיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת באמצעות תוכנת SerialEM10. לאחר מכן נתפרו מסגרות באמצעות תוכנת eTomo, חלק מחבילת תוכניות IMOD11. התוצאה היא תמונה בודדת בגודל משתנה, לדוגמה, 120,000 פיקסלים על 90,000 פיקסלים שיהיו במסך מלא בזום נמוך, 0.02, או בפירוט בזום גבוה יותר, 0.25 עד 1.0 באמצעות תוכנת 3DMOD, שוב חלק מחבילת תוכניות IMOD (איור 5). בנטו, הניתוח מונחה התוכנה מצא כי טסיות דיסקואידים הקשורים לפקקת הקשורים לפקקת בתוך חור הנקב היו מרווחים זה מזה כחרוזים על חוט. במרחק קצר בתוך הפקקת, צורת הדיסקואיד הייתה פחות ברורה, והטסיות היו קשורות יותר זו לזו. עמוק יותר בתוך הפקקת, טסיות הדם היו מעוגלות, ארוזות היטב ומגורענות חלקית. רצף של מורפולוגיה הצביע על קשירה ראשונית של טסיות הדם לפקקת באמצעות מולקולת קשירה ארוכה, ככל הנראה גורם פון וילברנד, וכי כל שלבי הפעלת טסיות נוספים הוגבלו לפנים הפקקת הנוצרת. לפיכך, גיוס טסיות הדם לפקקת יכול להתרחש מבלי להפריע לזרימת הדם בתוך הווריד הצווארי.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66479/66479fig01.jpg"> איור 1: התארגנות כירורגית לביצוע ניסוי פקקת פצע ניקוב עורק הירך/עורק הירך. ציוד כירורגי (A) ומכשירים (B) מסודרים בקפידה ליעילות התנועה מכיוון שהתזמון הוא קריטי במהלך הניסוי. (C) לאחר קיבוע הזלוף, החלק של הכלי המכיל את פקקת פצע הניקוב מוצמד לשטיחון סיליקון בצלחת תרבית של 35 מ"מ תוך כדי צפייה תחת מיקרוסקופ האור. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66479/66479fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66479/66479fig02.jpg"> איור 2: מעבר מכלי דם לדגימות פלסטיק משובצות שיחולקו עבור WA-TEM או SBF-SEM. (A) מוצג עורק הירך עם פצע ניקוב והיווצרות פקקת חוץ-וסקולרית מצטברת (עיגול וחץ). (B) פקקת (עיגול וחץ) מוטמעת בפלסטיק עבור חתך עבור WA-TEM עם מיקרוטום עבור הדמיה דו-ממדית עוקבת. (C) פקקת (עיגול וחץ) מוטמעת בפלסטיק, גזורה כדי לתת מקל קצר, פחות מ-1 מ"מ, לחיבור סיכה בתוך תא הדמיה SBF-SEM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66479/66479fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66479/66479fig03.jpg"> איור 3: פצע ניקוב להיווצרות פקקת: סכמה של זרימה מכינה מפצע ניקוב (A) לפרוסת תמונה של פקקת ורידים ג'וגולרית (B) שלאחר הניקוב. דופן כלי הדם מסומנת בכחול על פרוסת התמונה, הנקודות השחורות הקטנות ליד דופן כלי הדם הן תאי דם אדומים, וצברי טסיות הפקקת מופיעים כאזורים אפורים כהים. נתון זה שונהמ-1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66479/66479fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66479/66479fig04.jpg"> איור 4: דוגמה לנתונים, בצורה גרפית, שנוצרו בניסוי פצע ניקוב ורידים ג'וגולרי. מוצגת עקומת דימום של תגובת מינון דביגאטרנית. נתון זה שונהמ-1. זמן הדימום פירושו בריכוזים שונים של dabigatran מוצגים יחד עם פסי שגיאה המציינים פלוס או מינוס סטיית תקן. ניתוח סטטיסטי באמצעות מבחן t של התלמיד הצביע על ערך p של &lt;0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66479/66479fig04large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66479/66479fig05.jpg"> איור 5: תמונות WA-TEM של פרוסה שנתפרה יחד ליצירת מונטאז'. (A) מסגרות בודדות ברזולוציה גבוהה נאספות ולאחר מכן נתפרות יחד לצורך מיקום תכונות בהקשר רחב יותר. (B) על-ידי התקרבות ניתן להוציא פרטים חשובים בהקשר (פולי: לויקוציטים פולימורפו-גרעיניים, אנדו: אנדותל, ו-col: סיבי קולגן). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66479/66479fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Hemostasis, the process of normal physiological control of vascular damage, is fundamental to human life. We all suffer minor cuts and puncture wounds ...

puncture-wound-hemostasis-preparation-samples-for-montaged-wide-area

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מתארים פרוטוקול עבור זלוף transcardiac של הסרת, עכברים חתך של המוח, כמו גם מכתים אימונו, הטבעה שרף, Ultrathin חתך של חלקים במוח. עם השלמת הליכים אלה, החומר immunostained מוכן בדיקה עם מיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים.

הכנת רקמות מוח עכבר מיקרוסקופית Immunoelectron

Cryo אלקטרונים מיקרוסקופים, או סורק (SEM) או הילוכים (TEM), נמצא בשימוש נרחב לאפיון של דגימות ביולוגיות או חומרים אחרים עם תכולת מים גבוהה 1. SEM / אלומת יונים ממוקדת (FIB) משמשת לזיהוי תכונות של עניין בדגימות ולחלץ lamella להעברה לcryo-TEM דק, אלקטרונים שקופים.

Cryo-אלקטרון מתכוון בהכנה מיקרוסקופית דגימה של אלומת יונים ממוקדת

המטרה של פרוטוקול זה היא לבנות עור תלת מימדי בעובי מלא, הדומה לעור טבעי. עם מכשיר פציעה אוטומטי שנבנה במיוחד, ניתן ליצור פצעים מדויקים וניתנים לשחזור תחת שמירה על סטריליות.

דור של עור בעובי מלא תלת ממדי Equivalent ואוטומטי פציעה

מוצגת כאן שיטה להמחשת מבנה אולטרה-מבנה של מטריצה חוץ-תאית ברקמות לב נטולות תאים.

מיקרוסקופ אלקטרוני סורק של רקמות macerated לדמיין את תאי מטריקס

מכשיר ושיטות ההכנה של אמצעי אחסון מדגם בגודל nanoliter במיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים מוצג. אין מדרגות נייר סופג נדרשים, וכך להימנע ההשלכות מזיקה שיכולה להיות חלבונים, הפחתת הדגימה אובדן ולאפשר הניתוח של תא בודד lysate עבור פרוטאומיקס חזותי באופן משמעותי.

הכנת הדוגמא ולמחקר במיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים

כאן אנו מציגים פרוטוקול לשילוב שני דוגמת עיבוד טכניקות, בלחץ גבוה מקפיא מדגם בסיוע מיקרוגל עיבוד, ואחריו שרף מינימלי הטבעה לרכישת נתונים עם מיקרוסקופ אלקטרונים סריקה קרן (שיקרתי-SEM) יון ממוקד. הוכח באמצעות העכבר העצב הטיביאלי מדגם Caenorhabditis elegans.

הכנת הדוגמא ביולוגית על ידי הקפאת בלחץ גבוה, שיפור ניגודיות בסיוע מיקרוגל, ושרף מינימלי הטמעה של אמצעי הדמיה

כאן, אנו מספקים תיאור מפורט של ההליך כדי לגרום ביופסיות צביטה מונחה קולונוסקופית בעכברים ולעקוב אחר סגירת פצע בזמן אמת. בנוסף, מסופקות שיטות להכנת רקמות לניתוחים היסטולוגיים, אימונוהיסטוכימיים ומולקולריים של מיטת הפצע.

ביצוע ביופסיות צביטה קולונוסקופיות מונחות בעכברים והערכת שינויים ברקמות הבאים

פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור פצעים דו-צדדיים בעובי מלא בעכברים וכיצד לעקוב אחר, לקצור ולהכין את הפצעים לניתוח מורפומטרי. כלול תיאור מעמיק של אופן השימוש בסעיפים היסטולוגיים טוריים כדי להגדיר, לכמת ולזהות פגמים מורפומטריים במדויק.

מודל ריפוי פצעים מרין וניתוח פצעים מורפומטריים היסטולוגיים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לניתוח אולטרה מבנה של megakaryocytes במקום באמצעות מיקרוסקופיית אלקטרונים שידור (TEM). מח עצם מורין נאספים, קבועים, מוטבעים בשרף אפוקסי וחתוכים בחלקים אולטרה-דקים. לאחר כתמי ניגודיות, מוח העצם נצפה תחת מיקרוסקופ TEM ב 120 kV.

בסיטו חקר מורין Megakaryopoiesis באמצעות מיקרוסקופיית אלקטרונים שידור

הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד להשתמש בפציעה בתיווך FeCl3 כדי לגרום לפקקת עורקים, וכיצד לאסוף ולהכין דגימות פגיעה עורקית בשלבים שונים של פקקת לצורך ניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים.

פקקת עורקים המושרה על ידי ברזל כלוריד ואיסוף דגימות לניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים תלת ממדי

למד את שיטת פצע הניקוב לחקר היצירה ההמוסטטית של קרישי דם גדולים בעכברים. השיטה משלבת מיקרוסקופ אלקטרונים רחב שטח מונטאז' לניתוח מבני מפורט של הטרומבוס.

מוסטזיס פצע ניקוב והכנת דגימות לניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים רחב שטח מונטאז'

גלה סרטונים נוספים