Name: מודלים תלת מימדיים של תרביות תאים לחקר מחסום האפיתל בדלקת ושט אאוזינופילית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-10T14:20:00.000+00:00
Duration: 3 min 23 s
Description: חקור את השפעת ציטוקינים על מחסום האפיתל בוושט באמצעות תרביות אורגנואידים תלת-ממדיים וממשק אוויר-נוזל. שיטה זו מאפשרת לזהות מוליכים חיסוניים ולפתח אסטרטגיות טיפוליות לדלקת ושט אאוזינופילית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מענק SNSF 310030_219210 ל- J.H.N. תמך בפרסום כתב יד זה ללא הגבלות. איור 1 נוצר בעזרת BioRender.com.

הנהלים אושרו על ידי ועדת האתיקה של צפון מערב ומרכז שווייץ (EKNZ; מזהה פרויקט 2019-00273). כל החולים נתנו הסכמה מדעת בכתב לשימוש ניסיוני בביופסיות לפני הבדיקה האנדוסקופית. הריאגנטים והציוד ששימשו במחקר מפורטים בטבלת החומרים.
1. בידוד תאים לאורגנואידים של הוושט שמקורם במטופל
הערה: רשימה של המרכיבים הבינוניים לגידול אורגנואידים של הוושט האנושי מובאת בטבלה 1.
<ol><li>להשיג את הביופסיות. הערה: במחקר הנוכחי, שתי ביופסיות ממקטע אחד של הוושט מתקבלות במהלך esophagogastroduodenoscopy עם מלקחיים ביופסיה באמצעות גסטרוסקופ עם ערוץ עבודה 2.8 מ"מ.</li>
	<li>להעביר את הביופסיות למדיום ללא סרום קרטינוציטים זמין מסחרית (KSFM; Ca2 + 0.09 mM, 1 ng/mL EGF, 50 מיקרוגרם/מ"ל BPE). הערה: ניתן לאחסן ביופסיות על קרח למשך מספר שעות עד לשימוש.</li>
	<li>החלף את מדיום KSFM ב- 1 מ"ל של Dispase I (10 U / mL) ודגור על הביופסיות במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>צנטריפוגה את הביופסיות בטמפרטורת החדר ב 300 x גרם במשך 2 דקות.</li>
	<li>יש לשאוף את הדיספאז באמצעות פיפטה של 1000 μL מבלי לגעת בביופסיות ובגלולת פסולת התא.</li>
	<li>שטפו את הביופסיות במי מלח חוצצי פוספט (DPBS) במינון 1 מ"ל של Dulbecco.</li>
	<li>צנטריפוגה את הביופסיות בטמפרטורת החדר ב 300 x גרם במשך 2 דקות.</li>
	<li>שאפו את הסופרנאטנט באמצעות פיפטה של 1000 מיקרוליטר.</li>
	<li>לדגור על הביופסיות עם 500 μL של טריפסין-EDTA (0.05%) ב 37 ° C במשך 10 דקות תוך רעד ב 800 סל"ד.</li>
	<li>בצע הפרעה מכנית על ידי צנרת חוזרת ונשנית למעלה ולמטה עד לקבלת מתלה חד-תאי.</li>
	<li>סנן את התאים דרך מסננת תאים בגודל 70 מיקרומטר באמצעות ראש בוכנה גומי של מזרק שחפת.</li>
	<li>לשטוף את המסננת עם 2-4 מ"ל של מעכב טריפסין סויה (250 מיקרוגרם / מ"ל).</li>
	<li>סנן את התאים דרך מסננת תאים בגודל 35 מיקרומטר עם מכסה הצמדה על צינור פוליסטירן בעל תחתית עגולה של 5 מ"ל.</li>
	<li>העבר את התמיסה התאית הבודדת לצינור חרוטי של 15 מ"ל.</li>
	<li>צנטריפוגה ב 300 x גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C.</li>
	<li>שאפו את הסופרנאטנט באמצעות פיפטה של 1000 מיקרוליטר.</li>
	<li>להשעות את התאים ב 100 μL של מדיום KSFM.</li>
	<li>מערבבים 10 μL של כחול טריפאן עם 10 μL של השעיית תאים.</li>
	<li>ספור את התאים באמצעות מונה תאים אוטומטי.</li>
</ol>2. תרבית אורגנואידים שמקורה במטופל
<ol><li>הוסף 1-2 מ"ל של KSFM לתרחיף התא לאחר הספירה.</li>
	<li>צנטריפוגה ב 300 x גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C.</li>
	<li>שאפו את הסופרנאטנט עם פיפטה של 1000 מיקרוליטר מבלי להפריע לכדורית התא.</li>
	<li>יש להשהות מחדש את גלולת התא במטריצת הידרוג'ל של תמצית קרום מרתף (BME) (40 מיקרוליטר BME לכל 20,000 תאים). הערה: לאחר הוספת ה-BME, יש לשמור את התאים על קרח כדי למנוע התמצקות מוקדמת של ה-BME.</li>
	<li>חותכים קצה פיפטה של 200 μL כדי לשאוף את תערובת התרחיף הצמיגי של תאי BME.</li>
	<li>טופס טיפות 40 μL בלוח תרבית תאי תרחיף שחומם מראש (37 מעלות צלזיוס).</li>
	<li>לדגור על הצלחת ללא מדיום במשך 20-30 דקות ב 37 ° C כדי להבטיח התמצקות של טיפות BME.</li>
	<li>הוסיפו מדיום KSFM-C שחומם מראש בתוספת 10 מיקרומטר של Y27632 (מעכב סלעים) ליומיים הראשונים של התרבית.</li>
	<li>החלף את המדיום בתווך KSFM-C חדש (ללא Y27632 ו +/- ציטוקין מעניין) כל יומיים.</li>
	<li>שאפו את המדיום וגרדו טיפות עם קצה הפיפט תוך הוספה רציפה של 1 מ"ל של דיספז II (1.5 U/mL) לבאר.</li>
	<li>מעבירים את תערובת BME-dispase לתוך צינור צנטריפוגה של 15 מ"ל ודגרים עליה במשך 20 דקות ב-37°C באמבט מים רועד כדי לעכל את ה-BME.</li>
	<li>צנטריפוגה ב 250 x גרם במשך 3 דקות ב 4 ° C ולשאוף את Dispase II.</li>
	<li>המשך על פי הפרוטוקול של קריאת הריבית (למשל, בידוד RNA, בידוד חלבונים, או קיבוע עם 4% PFA עבור היסטולוגיה).</li>
</ol>3. בידוד תאים עבור תרביות ממשק אוויר-נוזל (ALI) שמקורן במטופל
<ol><li>להשיג את הביופסיות. במהלך esophagogastroduodenoscopy באמצעות גסטרוסקופ עם ערוץ עבודה 2.8 מ"מ, שתי ביופסיות נלקחות מקטע אחד הוושט עם מלקחיים ביופסיה.</li>
	<li>הניחו את הביופסיות בתווך ללא סרום קרטינוציטים זמין מסחרית (KSFM; Ca2+ 0.09 mM, 1 ng/mL EGF, 50 μg/mL BPE) ולאחסן על קרח במשך מספר שעות עד לשימוש.</li>
	<li>החלף KSFM עם 1 מ"ל של Dispase (10 U / mL). לאחר מכן, יש לדגור על הביופסיות למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>צנטריפוגה את הביופסיות בטמפרטורת החדר ב 300 x גרם במשך 2 דקות.</li>
	<li>הסר את הדיספאז באמצעות פיפטה של 1000 μL מבלי לגעת בביופסיות ובגלולת פסולת התא.</li>
	<li>לשטוף את הביופסיות עם 1 מ"ל של DPBS.</li>
	<li>בטמפרטורת החדר, סובבו את הביופסיות ב 300 x גרם במשך 2 דקות.</li>
	<li>שאפו את הסופרנאטנט עם פיפטה של 1000 מיקרוליטר.</li>
	<li>יש לדגור על הביופסיות ב-500 מיקרוליטר של טריפסין-EDTA (0.05%) ב-37°C למשך 10 דקות ולערבב ברציפות ב-800 סל"ד במהלך הדגירה.</li>
	<li>יש לשבש את הביופסיות באופן מכני באמצעות פיפטינג חוזר ונשנה מעלה ומטה עד לקבלת תרחיף חד-תאי.</li>
	<li>מעבירים את התאים המנותקים דרך מסננת תאים של 70 מיקרומטר עם ראש בוכנה גומי ממזרק שחפת ואוספים את התאים בצינור חרוטי של 50 מ"ל.</li>
	<li>שטפו את המסננת עם 2-4 מ"ל של מעכב טריפסין סויה (250 מיקרוגרם / מ"ל) כדי להסיר את התאים הנותרים מהמסננת.</li>
	<li>סנן את התאים עם מכסה הצמדה של מסננת תאים בגודל 35 מיקרומטר לתוך צינור פוליסטירן תחתון עגול של 5 מ"ל.</li>
	<li>העברת תאים לתוך צינור חרוטי 15 מ"ל.</li>
	<li>צנטריפוגה ב-300 x גרם ב-4°C למשך 5 דקות.</li>
	<li>מוציאים את הסופרנאטנט עם פיפטה של 1,000 מיקרוליטר.</li>
	<li>השהה מחדש את גלולת התא ב 4 מ"ל של KSFM בינוני (Ca2 + 0.09 mM), כולל 10 מיקרומטר Y27632.</li>
	<li>מעבירים את התאים לצלוחית תרבית תאי T25.</li>
	<li>כדי להרחיב את הקרטינוציטים הראשוניים, תרבית את התאים עד 60%-80% מפגש במשך כשבוע אחד. הערה: מעבר (P)0 יוצר קונגלומרטים של תאים דמויי איון ואינו חד-שכבתי. קרטינוציטים ראשוניים יוצרים חד-שכבות מ-P1 ואילך.</li>
	<li>מעבר במפגש של 60%-80% וזרע מחדש P1 בצלוחיות תרבית תאים 2-3 T25 או 1-2 T75.</li>
	<li>מעבר P1 שוב כאשר קרטינוציטים יוצרים שכבה אחת עם מפגש של 60%-80%.</li>
</ol>4. תרבית ממשק אוויר-נוזל (ALI) הנגזר מהמטופל
<ol><li>זרעו קרטינוציטים ראשוניים P2 על תוספות טרנסוול לתרבית ALI. הערה: זרעו 400,000 תאים ב-12 תוספות באר (200,000 קרטינוציטים ל-0.6 ס"מ2) ב-500 מיקרוליטר של KSFM (Ca2+ 0.09 mM, 1 ng/mL EGF, 50 מיקרוגרם/מ"ל BPE).<ol><li>זרעו 150,000 תאים ב-24 תוספות באר (155,000 קרטינוציטים ל-0.5 ס"מ2) ב-100 מיקרוליטר של KSFM (Ca2+ 0.09 mM, 1 ng/mL EGF, 50 מיקרוגרם/מ"ל BPE).</li>
		<li>לחלופין, יש להקפיא בתווך KSFM (Ca2+ 0.09 mM + 10% DMSO) בטמפרטורה של -80°C למשך 24 שעות ולאחר מכן להעביר את התאים הקפואים לחנקן נוזלי לשימוש מאוחר יותר. הערה: בעת שימוש בבקבוקונים קפואים, יש לעבור פעם נוספת לאחר ההפשרה לפני השימוש בתאים לתרבית ALI.</li>
	</ol></li>
	<li>מוסיפים מדיום לבאר התחתונה מתחת לתוספת של צלחת תרבית הטרנסוול. הערה: עבור 12 לוחות באר: 1.5 מ"ל של KSFM (Ca2 + 0.09 mM, 1 ng / mL EGF, 50 מיקרוגרם / מ"ל BPE). עבור 24 צלחות באר: 600 μL של KSFM (Ca2 + 0.09 mM, 1 ng / mL EGF, 50 μg / mL BPE).</li>
	<li>החלף את KSFM עם סידן בינוני עד גבוה (Ca2+ 1.8 mM, 1 ng/mL EGF, 50 μg/mL BPE) לאחר יומיים.</li>
	<li>החליפו את מדיום KSFM עתיר הסידן כל יומיים עד ליום 7.</li>
	<li>בצעו רכבת אווירית ביום השביעי על ידי שאיפת התווך מהחדר העליון והחלפת התווך בתא התחתון בסידן KSFM גבוה (Ca2+ 1.8 mM, 1 ng/mL EGF, 50 μg/mL BPE) המכיל 10 ng/mL KGF (=FGF7), 75 מיקרוגרם/מ"ל חומצה אסקורבית (AA).<ol><li>אופציונלי: להוסיף ציטוקין מעניין בריכוז הרצוי למדיום.</li>
	</ol></li>
	<li>החליפו את המדיום כל יומיים עד היום ה-14.</li>
</ol>5. מדידת התנגדות חשמלית טרנסאפיתל (TEER)
<ol><li>לעקר את האלקטרודה של מד TEER על ידי טבילתו בבאר של צלחת 24 באר עם 5% hypochlorite נתרן במשך 10-15 דקות.</li>
	<li>שטפו את 5% נתרן היפוכלוריט על ידי טבילת האלקטרודה לתוך 4 בארות עוקבות עם ddHסטרילי 2O ולתת לאלקטרודה להתייבש באוויר.</li>
	<li>הגדר את החסר על ידי הצבת אלקטרודה אחת בבאר ואת האלקטרודה השנייה לתוך הכנס transwell, למלא אותו עם PBS, ולמדוד את TEER. הערה: נפחים מומלצים למדידות TEER: עבור 12 פלטות באר (1900 μL בבאר ו- 900 μL בעלון). עבור 24 צלחת באר (750-1000 μL בבאר ו 250 μL בהכנסה).</li>
	<li>החלף את המדיום של תרביות ALI ב- PBS סטרילי בטמפרטורת החדר. הערה: הסר את המדיום מהבאר התחתונה, ובשלב שני, מתוספת הטרנסוול. באופן דומה, הוסף PBS תחילה לאינסרט ולאחר מכן לבאר התחתונה כדי למנוע ניתוק של תרבית ALI מקרום הטרנסוול.</li>
	<li>מקמו את אלקטרודות מד TEER בבארות הניסוי עם תרביות ALI ובצעו את מדידת TEER1. הערה: בצע מדידות TEER כל יומיים לפני שינוי המדיום.</li>
</ol>6. שטף מקרומולקולרי
<ol><li>דללו את תמיסת המלאי FITC-Dextran (3-5 kDa) לריכוז תקין של 1 מ"ג/מ"ל. הערה: הגן תמיד על FITC-Dextran מפני חשיפה לאור.</li>
	<li>הכן שורת דילול עם ריכוז FITC יורד (1000 מיקרוגרם/מ"ל עד 0.25 מיקרוגרם/מ"ל) כתקן לקריאה.</li>
	<li>הוסף 500 μL של תמיסת FITC-dextran (1 מ"ג / מ"ל) לתא העליון של transwell ו 1.5 מ"ל בינוני (+/- ציטוקין של עניין) לתוך התא התחתון ומניחים את הצלחת באינקובטור.</li>
	<li>אסוף 120 מיקרוליטר של מדיום מהתא התחתון בנקודות הזמן המתאימות (לדוגמה, 0 דקות, 15 דקות, 30 דקות, 60 דקות, 90 דקות, 120 דקות, 150 דקות ו-180 דקות).</li>
	<li>פיפטה משכפלת (50 מיקרוליטר/באר) של כל נקודת זמן ללוח תחתון שטוח שחור שקוף בן 96 בארות.</li>
	<li>הרגש את FITC-dextran ב- 490 ננומטר וקרא את הפליטה באורך גל של 520 ננומטר באמצעות קורא לוחות.</li>
	<li>חישוב כמות השטף המקרומולקולרי על פי התקן.</li>
</ol>

אורגנואידים של הוושט האנושי ופרוטוקולי תרבית ממשק אוויר-נוזל

למחברים אין מה לחשוף.

ההליכים הניתנים מאפשרים טיפוח של אורגנואידים שמקורם במטופל ותרביות ALI עם סיכויי הצלחה גבוהים. פרוטוקול האורגנואידים הותאם מהפרוטוקול הראשון שפורסם המדווח על יצירת אורגנואידים של הוושט האנושי26 ומפרוטוקול32 שפורסם לאחרונה. שריל ועמיתיו תיארו את מודלALI 22. אורגנואידים ומודלים של תרבית ALI מסייעים זה לזה בחקר ההשפעה של ציטוקינים ומתווכים אחרים על מחסום האפיתל של הוושט בהקשרים של מחלות ושט, כגון EoE 5,26.
אחד היתרונות של פרוטוקול האורגנואיד הוא פשטותו בתהליך התרבית ובהרכב מדיום תרבית התא. שלא כמו פרוטוקולים אחרים מבוססי ASC ו- PSC, הדורשים בעיקר תוספת של תוספים יקרים מרובים וגורמי גדילה 24,25,27,28,33, מדיום KSFM הוא זול יחסית. זה דורש רק תוספת של גורם גדילה אפיתל רקומביננטי אנושי (hEGF) ותמצית יותרת המוח בקר (BPE). KSFM הוא מדיום בסיס הממוטב לתרבית קרטינוציטים ומבטל את הצורך בשכבת הזנהפיברובלסטים 34. יש צורך לטיטר את ריכוז Ca2+ של KSFM מ 0.09 mM ל 0.6 mM באמצעות CaCl2 כדי לקבל את המדיום KSFM-C המשמש לתרבית אורגנואידים. תרביות ALI דורשות ריכוז Ca2+ גבוה יותר של 1.8 mM מאשר מודל האורגנואידים. ריכוז Ca2+ הגבוה חיוני כדי ליזום התמיינות קרטינוציטים, ולאחר מכן להקל על היווצרות תצורה טיפוסית דמוית בצל של אפיתל קשקשי רב שכבתי נוכח בתוך אורגנואידים הוושט 26,34,35 ואת ריבוד אפיתל בתרבויות ALI 22.
מניעת התמיינות מוקדמת של קרטינוציטים, אורגנואידים ותרביות ALI דורשת הימנעות מריכוזי Ca2+ גבוהים במהלך בידוד תאים. התמיינות מוקדמת מפחיתה את היווצרות המושבה ומעכבת את ההתארגנות העצמית של אורגנואידים ואת היווצרות השכבה החד-שכבתית של קרטינוציטים בלתי ממוינים כבסיס לתרבויות ALI. שימוש במדיה המכילה סרום כדי לעצור את הפעילות האנזימטית של טריפסין במהלך בידוד תאים פוגע בייצור אורגנואיד מוצלח על ידי הפעלת התמיינות מוקדמת, בדומה לשימוש בתווך מועשר Ca2+ במהלך בידוד תאים36. במקום זאת, מומלץ להשתמש במעכב טריפסין מפולי סויה או בכל מעכב טריפסין אחר ללא נסיוב כדי לעצור את התגובה האנזימטית לאחר עיכול ביופסיה עם טריפסין. למדיום התרבית מתווסף מעכב רו-קינאז (ROCK) Y27632 במהלך היומיים הראשונים של התרבית כדי לשפר את קצב היווצרות המושבה. עיכוב של ROCK יש השפעות אנטי אפופטוטיות, מונע הזדקנות קרטינוציטים, ובכך משפר את קצב היווצרות אורגנואידים37,38.
מומלץ לזרוע כ-20,000 תאים בטיפת BME של 40 מיקרוליטר כדי להבטיח תרבית אורגנואידים משגשגת ו-150,000 עד 400,000 תאים לתרבית ALI. ספירת זריעת תאים נאותה תבטיח מספיק חומר לשעתוק עוקב, פרוטאומיקה והיסטולוגיה. בעת שימוש בקווי תאים כגון קו תאי אפיתל הוושט האנושי EPC2-hTERT, ספירת תאי הזריעה יכולה להיות מופחתת בשל קצב היווצרות אורגנואיד מוגבר המוצג על ידי קותאים זה 26. תופעה זו מיוחסת ככל הנראה להומוגניות ולסינכרוניות מעולה של מחזור התא המודגמת על ידי קווי תאים בהשוואה לתאים ראשוניים שמקורם בביופסיה. קו תאי EPC2-hTERT המונצח משמר גם הוא את יכולת ההתרבות שלו, ומאפשר מעבר אינסופי של אורגנואידים.
לעומת זאת, אורגנואידים אנושיים שמקורם בביופסיות הוושט אינם יכולים להישמר לתרבית ארוכת טווח 26,28. הירידה בחלוקת תאים בני קיימא בתוך אורגנואידים מפותחים בוושט וקצב הולך ופוחת של היווצרות אורגנואידים עם כל קטע26 מצביעה על כך שאובדן יכולת ההתרבות באורגנואידים ראשוניים שמקורם בתאים נובע מההתמיינות הסופית והקרטיניזציה של תאי אב. ניסיונות קודמים לשמור על יכולת ההתרבות על ידי השלמת מדיום התרבות עם Noggin, Wnt3a או A83-01 לא צלחו 26,28,32. לפיכך, ביו-בנקאות ארוכת טווח של אורגנואידים של הוושט שמקורם במטופל נותרה אתגר שיש לטפל בו במחקרים עתידיים.
הופעתה של תרבית אורגנואידים הביאה אפשרויות ניסוי חדשות שאפשרו מאוד את הגילוי של מתווכי דלקת מרכזיים וגורמים סביבתיים האחראים לשינויים אפיתל ב- EoE 5,39,40,41,42. עם זאת, חשוב לציין כי לאורגנואידים של הוושט שמקורם ב- ASC ו- PSC יש מגבלות מכיוון שהם אינם מחזירים באופן מושלם את כל תאי הוושט. אורגנואידים שמקורם ב-ASC משחזרים את תא האפיתל 24,26,27,33, בעוד שאורגנואידים שמקורם ב-PSC משחזרים את תאי האפיתל, האנדותל והמזנכימלי 28,43,44. עם זאת, כל המודלים האורגנואידים הנוכחיים חסרים את המיקרו-סביבה האימונולוגית. במחקר שנערך לאחרונה, אורגנואידים של הוושט האנושי ותרביות ALI עוררו באמצעות ציטוקינים ממשפחת הציטוקינים IL-20 כדי לפענח היבט חדש של תפקוד לקוי של מחסום האפיתל ב-EoE5. השילוב של שני מודלי התרבות התלת-ממדיים העריך מדדים עקיפים וישירים של שלמות מחסום אפיתל. פרסומים נוספים ככל הנראה ישתמשו באורגנואידים של הוושט בשילוב עם תרביות ALI כדי להבהיר את ההשפעות של ציטוקינים מוגדרים על האפיתל. בעוד שגישה זו מפחיתה את המורכבות של הדיבור הנגדי בין מערכת החיסון לבין האפיתל כדי לחשוף את תפקודם של מתווכים ספציפיים על האפיתל, היא מזניחה גורמים רבים אחרים שעשויים להיות מעורבים. שילוב של טכנולוגיית אורגנואיד ואיבר על שבב עשוי לספק פתרון למגבלה זו. טכנולוגיית איבר-על-שבב המבוססת על מיקרופלואידיקה יכולה לשכפל את המיקרו-סביבה הלומינלית והבזולטרלית של איברים צינוריים, ולאפשר זרימה פנימה וזרימה של תאי חיסון ורכיבים אחרים במחזור הדם ובלומינל. זה מאפשר לחקור את יחסי הגומלין בין האפיתל לבין תאי החיסון בהומאוסטזיס ובמחלות45,46. הטיפוח המוצלח של אורגנואידים צינוריות כליה מקוטבים פיזיולוגית המציגים מחסום אפיתל שלם והעברת יון טרנסאפיתל פונקציונלית על פלטפורמת איבר על שבב47 תומך בשימוש המורחב בטכנולוגיית אורגנואיד על שבב שמקורה במטופל. יתר על כן, התקדמות נוספת של שימוש בטכנולוגיית אורגנואיד-על-שבב מודגמת באמצעות גידול מורחב של אורגנואידים שמקורם בתאים ראשוניים על ידי יישום זרימה לומינלית דרך התעלות המיקרופלואידיות בצד האפי של אורגנואידים צינוריים כדי למנוע שפיכת תאי אפיתל46. התקדמות כזו מדגישה את הפוטנציאל של טכנולוגיה זו להשתכפל בסביבות vivo במבחנה.
היכולת לגדל אורגנואידים תלת-ממדיים הדומים לכל דבר, החל מתא האפיתל וכלה במיני-איבר כמעט שלם עם רוב סוגי התאים דוחפת ליישומים קליניים אפשריים 5,26,46. בעוד התקדמות ניכרת נעשתה בשנים האחרונות, יש להתגבר על מכשולים נוספים לפני שניתן יהיה להשתמש באורגנואידים בפרקטיקה הקלינית. מכשול משמעותי ליישום קליני של אורגנואידים הוא נוכחותם של חלבונים מן החי בתווך התרבית ובמוצרי ECM הפיגומים. בעוד מדיה נטולת חלבון מן החי עבור תרבית קרטינוציטים כבר זמינה וגרסאות KSFM נטולות BPE הופיעו לאחרונה, ייצור חלופות ECM ללא חלבון מן החי עם תכונות ותוצאות תרבית דומות למוצרי ECM מסורתיים נראה מאתגר יותר. לאחרונה דווח על חלופה מסונתזת כימית מלאה ומבטיחה48. עם זאת, נכון לעכשיו, אין מוצר ECM נגיש מסחרית ללא בעלי חיים.
אורגנואידים של הוושט ותרבויות ALI הם כלים חיוניים לחקר EoE. תרבית האורגנואידים ותרביות ALI עם הפרוטוקולים המפורטים כאן שימשה בסיס לגילויים חדשים בנוגע למעורבות תא האפיתל בדלקת ושט אאוזינופילית 5,26,39,41,42,49,50. היישום הפשוט של פרוטוקולים אלה וההתקדמות המתמדת של טכנולוגיות תרביות תאים תלת-ממדיות מאפשרים קירוב ניסיוני לסביבה in vivo, וכתוצאה מכך יכולת תרגום משופרת של תגליות ואולי הפחתה הדרגתית של ניסויים בבעלי חיים.

דלקת בוושט פוגעת בשלמות מחסום האפיתל 1,2,3,4,5, כפי שנצפה בדלקת ושט אאוזינופילית (EoE), מחלה דלקתית כרונית הנשלטת על ידי Th2 בוושט6. EoE תואר לראשונה בשנות ה-90של המאה ה-20 7,8 והוא מושרה בעיקר על ידי אנטיגנים של מזון 9,10,11,12,13. הסימפטומים השכיחים ביותר של EoE באוכלוסייה הבוגרת הם דיספגיה ופגיעה במזון14. אצל ילדים, EoE מתבטא בדרך כלל בכישלון לשגשג, סירוב מזון, הקאות וכאבי בטן15. מחקרי אסוציאציה רחבת גנום (GWAS) זיהו גנים בסיכון EoE המעורבים בשלמות מחסום האפיתל, והעבירו את האפיתל למוקד מחקר EoE 16,17,18. תעתיק EoE גילה עוד כי תהליך התמיינות לקוי והיפרפלזיה תגובתית של אזור הבסיס גורמים לתפקוד המחסום הנפגע של אפיתל הוושט 3,5,19,20,21,22. ההבנה המוקדמת של EoE כמחלה בתיווך Th26 הובילה לגילוי IL-13 כמתווך נהיגה על ידי הפרעה לשלמות האפיתל 3,4,21,23. מערכות ניסיוניות המאפשרות דיסקציה של השפעות בתיווך ציטוקינים על שלמות האפיתל מפגיעה במחסום הפנימי באמצעות נטייה גנטית מספקות את האפשרות לחקור את יחסי הגומלין המורכבים בין תאי מערכת החיסון לבין האפיתל ב-EoE. אורגנואידים של הוושט האנושי ותרביות ממשק אוויר-נוזל (ALI) הוצעו ככלים רבי ערך לניתוח התוצאות של גירוי ציטוקינים על שלמות האפיתל5.
הפרוטוקול הראשון ליצירת אורגנואידים של ושט שמקורם בתאי גזע בוגרים ספציפיים לרקמה (ASC) נקבע חמש שנים לאחר הדוחות הראשונים שפורסמו של אורגנואידי מעיים בשנת 2009 באמצעות LGR5+ ASCs במעי המשחזרים את תא האפיתל של המעי הדק24. DeWard et al. היו חלוצים ביצירת אורגנואידים מתאי אפיתל של הוושט25. בשנת 2018, Kasagi et al. יצרו אורגנואידים אנושיים של הוושט מקו תאי אפיתל קשקשי של הוושט האנושי EPC2-hTERT ותאים ראשוניים שמקורם במטופל26. באותה שנה, Zhang et al. יצרו בהצלחה אורגנואידים של תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSC) שמקורם בוושט. הם תיארו את המשמעות של עיכוב TGFβ וחלבון מורפוגנטי עצם (BMP) להתפתחות תאי אב של הוושט (EPC) ואת התפקיד המכריע של איתות Notch בהתמיינות של אפיתל קשקשי מרובד26,27. טריזנו ועמיתיו השלימו ממצאים אלה על ידי זיהוי Sox2 כמעכב Wnt המכוון את הגורל ההתפתחותי לקראת התמיינות הוושט28. השכלולים הבאים של פרוטוקולים, הרכב בינוני ותנאי תרבית הגדילו את קצב היווצרות האורגנואידים והפכו את תת-התרבות והשחזור של אורגנואידים לאחר שימור בהקפאה לאפשריים 26,29,30,31,32. למרות שאורגנואידים אלה הם כלים רבי עוצמה לחקר ארכיטקטורת רקמות וביטוי של גני מטרה פוטנציאליים לאחר גירוי עם ציטוקינים, אורגנואידים של הוושט לא יציעו את האפשרות למדוד עמידות טרנסאפיתל (TEER) או שטף מקרומולקולות כאמצעים ישירים לשלמות המחסום. כפי שתואר קודם לכן על ידי שריל ועמיתיו22, תרביות ALI המדגימות התמיינות אפיתל4 מאפשרות הערכות ישירות של שלמות האפיתל. שילוב אורגנואידים שמקורם במטופל ותרביות ALI הוא כלי רב עוצמה לחקר ארכיטקטורת רקמות ותקינות מחסום אפיתל ב- EoE.
להלן נהלים עם הוראות לבידוד תאים ברי קיימא מביופסיות הוושט והקמת תרביות אורגנואידים ותרביות ALI של הוושט שניתן להשתמש בהם כדי לחקור את ההשפעות של ציטוקינים על שלמות המחסום.

<table><tbody><tr><td>1250 ומיקרו; L Griptip - מסנן</td><td>Integra</td><td>4445</td><td></td></tr><tr><td>300 ומיקרו; L Griptip - מסנן</td><td>אינטגרה</td><td>4435</td><td></td></tr><tr><td>70 ומיקרו; מסננת תאים</td><td>M Sarstedt</td><td>83.3945.070</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אסקורבית</td><td>Sigma-Aldrich (Merck)</td> <td>A4544</td><td></td></tr><tr><td>תמצית יותרת המוח בקר</td><td>Gibco (Thermo Fischer Scientific)</td><td>3700015</td><td></td></tr><tr><td>סידן כלורי</td><td>סיגמא-אולדריץ' (Merck)</td><td>21115</td><td></td></tr><tr><td>תרבית תאים Multiwell Plates CELLSTAR לתרביות תרחיף</td><td>Greiner Bio-One</td><td>7.657 185</td><td></td></tr><tr><td>תמצית קרום הבסיס של Cultrex (BME), סוג 2, Pathclear</td><td>R& D Systems (Bio-Techne)</td><td>3532-010-02</td><td></td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד (DMSO), >99,5% בדרגת BioScience</td><td>Carl Roth</td><td>A994</td><td></td></tr><tr><td>Dispase I</td><td>Corning</td><td>354235</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Sigma-Aldrich (Merck)</td><td>D4693</td><td></td></tr><tr><td>Dulbeccos פוספט חוצץ מלח&nbsp; (DPBS)</td><td>Sigma-Aldrich (Merck)</td> <td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>EVE מונה תאים אוטומטי</td><td>NanoEntek</td><td>EVE-MC</td><td></td></tr><tr><td>EVE שקופית ספירת תאים</td><td>NanoEntek</td><td>EVS-050</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 5 מ"ל מבחנה פוליסטירן תחתון עגול, עם מסננת תאים מכסה הצמד</td><td>פלקון</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>פלואורסצין איזותיוציאנט (FITC)-דקסטרן</td><td>סיגמא-אולדריץ' (Merck)</td> <td>FD4</td><td>ממוצע מול wt 3000-5000</td></tr><tr><td>הראוס - מגה-פוגה&nbsp; 40R&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>75004518</td><td></td></tr><tr><td>גורם גדילה אפידרמלי רקומביננטי אנושי</td><td>Gibco (Thermo Fischer Scientific)</td><td>3700015</td><td></td></tr><tr><td>Keratinocyte-SFM</td><td>Gibco (Thermo Fischer Scientific)</td><td>17005042</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Gibco (Thermo Fischer Scientific)</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>חלבון KGF/FGF-7 רקומביננטי אנושי</td><td>R& D Systems (Bio-Techne)</td><td>251-KG-010/CF</td><td></td></tr><tr><td>צינור מכסה בורג, 15 מ"ל</td><td>Sarstedt</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>ערוץ יחיד EVOLVE 100-1000 ומיקרו; L&nbsp;</td><td>Integra</td><td>3018</td><td></td></tr><tr><td>ערוץ יחיד EVOLVE 20-200 ומיקרו; L&nbsp;</td><td>מזרק Integra</td><td>3016</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל</td><td></td><td>1134950</td><td></td></tr><tr><td>ThermoMixer C</td><td>מעכב Eppendorf</td><td>5382000015</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין מבית Glycine max (פולי סויה)</td><td>Sigma-Aldrich (Merck)</td><td>T9128</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>SAFC Biosciences (Merck)</td><td>59418C</td><td></td></tr><tr><td>Y27632 דיהידרוכלוריד</td><td>טוקריס (ביו-טקנה)</td><td>1254</td><td></td></tr></tbody></table>

מודלים תלת מימדיים של תרביות תאים לחקר מחסום האפיתל בדלקת ושט אאוזינופילית 

Three-Dimensional Cell Culture Models to Investigate the Epithelial Barrier in Eosinophilic Esophagitis

אפיתל הקשקש של הוושט חשוף ישירות לסביבה, מול אנטיגנים זרים ברציפות, כולל אנטיגנים מזון וחיידקים. שמירה על שלמות מחסום האפיתל היא קריטית למניעת זיהומים ולמניעת דלקת הנגרמת על ידי אנטיגנים לא מזיקים שמקורם במזון. מאמר זה מספק פרוטוקולים פשוטים ליצירת אורגנואידים אנושיים בוושט ותרביות ממשק אוויר-נוזל מביופסיות של מטופלים כדי לחקור את תא האפיתל של הוושט בהקשר של הומאוסטזיס רקמות ומחלות. פרוטוקולים אלה היוו אבני דרך מדעיות משמעותיות בעשור האחרון, המתארים מבנים תלת-ממדיים דמויי איברים מתאים ראשוניים שמקורם בחולה, אורגנואידים ותרביות ממשק אוויר-נוזל. הם מציעים את האפשרות לחקור את תפקודם של ציטוקינים ספציפיים, גורמי גדילה ומסלולי איתות באפיתל הוושט במסגרת תלת ממדית תוך שמירה על התכונות הפנוטיפיות והגנטיות של התורם. אורגנואידים מספקים מידע על מיקרו-ארכיטקטורה של רקמות על ידי הערכת התעתיק והפרוטאום לאחר גירוי ציטוקינים. לעומת זאת, תרביות ממשק אוויר-נוזל מאפשרות להעריך את שלמות מחסום האפיתל באמצעות עמידות טרנסאפיתל (TEER) או מדידות שטף מקרומולקולות. שילוב של אורגנואידים אלה ותרביות ממשק אוויר-נוזל הוא כלי רב עוצמה לקידום המחקר במצבי מחסום אפיתל לקוי בוושט.

אורגנואידים של הוושט יגדלו מתאים ראשוניים שחולצו מביופסיות של מטופלים בהתאם להוראות הפרוטוקול שסופק, כפי שתועד במיקרוסקופ שדה בהיר הפוך (איור 1). ASCs אפיתל מתחילים ליצור צבירי תאים באופן התארגנות עצמית ביומיים הראשונים של התרבית לאחר זריעת התאים המבודדים בתמצית קרום המרתף, המשמש פיגום. הגודל והמספר של צבירי תאים, שניתן להבחין בהם במיקרוסקופ שדה בהיר הפוך, גדלים ברציפות בשבוע הראשון (איור 2). עם זאת, בשלב זה, אשכולות התאים חסרים את המבנה דמוי הבצל האופייני לאפיתל הקשקשי הרב-שכבתי של אורגנואיד ושט שמקורו באוטיזם. ביום ה-9 של התרבית, המבנה הרב-שכבתי דמוי הבצל והליבה הקרטיניסטית הגדלה במרכז האורגנואיד נראים (איור 2A). ניתן לקיים את תרבית האורגנואידים עד 21 יום26. עם זאת, הוכח כי האורגנואידים מגיעים להבשלה מלאה ולגודל מקסימלי בין היום ה-11 ליום ה-14. מהיום ה-11, תהליך התרבית מאופיין בעיקר בקידום קרטיניזציה והפחתת תאים פעילים מטבולית 5,26. לפיכך, הזמן האופטימלי לאחזור אורגנואידים לניסויים תלוי בשלב ההתמיינות הרצוי ונופל בין 5 ל -11 ימים.
עד 3 מעברים אפשריים לפני שהאורגנואידים מפסיקים לגדול מכיוון שליבת הקרטין הגדלה מפחיתה את מספר התאים הקיימים. ניתן לקצור את האורגנואידים לבידוד RNA או חלבון בימים הרצויים לניתוח ביטוי גנים/חלבונים או להיסטולוגיה וביו-בנק.
שלבי בידוד התאים הראשוניים עבור תרבית ALI ואורגנואידים זהים. לפני שניתן יהיה לבסס את תרבית ALI, יש להרחיב את התאים הראשוניים שזה עתה בודדו בניגוד לפרוטוקול האורגנואידים. לאחר המעבר השני, הקרטינוציטים הראשוניים נזרעים על תוספות טרנסוול ומתורבתים בתווך עם ריכוז סידן נמוך כדי לגרום להיווצרות חד-שכבתית ולמנוע התמיינות מוקדמת של הקרטינוציטים הראשוניים המבודדים. לאחר 48 שעות, כאשר monolayer confluent נוצר, ריכוז הסידן של המדיום הוא העלה ל 1.8 mM, גרימת הבחנה וריבוד של שכבת האפיתל. לאחר 7 ימים, הרכבת האווירית חושפת את הצד האפי של האפיתל הרב-שכבתי לאוויר כדי לגרום לקרטיניזציה. תרביות ALI יכולות בדרך כלל להישמר עד 14 יום (איור 2B). מדידות TEER וניסויי שטף מקרומולקולרי יעקבו אחר תפקוד האפיתל. כאן, מדידות TEER בוצעו בתרביות ALI מקרטינוציטים ראשוניים של הוושט, בתרביות ALI של קרטינוציטים ראשוניים עם שכבת הזנה פיברובלסטית NIH/3T3 בתחתית כל באר, ובתרביות קרטינוציטים ראשוניות ALI עם שכבת הזנה פיברובלסטית NIH/3T3 בכל תוספת (איור 2C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66503/66503fig01.jpg"> איור 1: תהליך הטיפוח של אורגנואידים בוושט שמקורו במטופל. תרשים הממחיש את הליך איסוף הדגימות, בידוד תאים, גידול אורגנואידים ויישומים ניסיוניים פוטנציאליים של אורגנואידים בוושט שמקורם במטופל. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66503/66503fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66503/66503fig02.jpg"> איור 2: היווצרות והתמיינות של אורגנואידים בוושט שמקורם במטופל. (A) תמונות שדה בהיר מייצגות של אורגנואידים בוושט שתורבתו מתאים ראשוניים שמקורם בביופסיה של המטופל. (B) תמונות שדה בהיר מייצגות של תרביות ALI בוושט שטופחו מתאים ראשוניים שמקורם בביופסיה ביום ה-14. פסי קנה מידה: 50μM. (C) מדידות התנגדות חשמלית טרנסאפיתליאלית (TEER) בימים שצוינו בתרביות ממשק אוויר-נוזל (ALI) מקרטינוציטים ראשוניים בוושט, ALI בתרבית מקרטינוציטים ראשוניים עם שכבת הזנה פיברובלסטית NIH/3T3 בתחתית כל באר, ו-ALI בתרבית מקרטינוציטים ראשוניים עם שכבת הזנה פיברובלסטית NIH/3T3 בכל תוספת מתחת לשכבת הקרטינוציטים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66503/66503fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="2">בינוני</td>
			<td>KSFM</td>
			<td>KSFM-C</td>
		</tr><tr><td colspan="2">בינוני בסיס</td>
			<td>קרטינוציטים-SFM</td>
			<td>קרטינוציטים-SFM</td>
		</tr><tr><td rowspan="5">תוספי</td>
			<td>פניצילין/סטרפטומיצין</td>
			<td>1%</td>
			<td>1%</td>
		</tr><tr><td>תמצית יותרת המוח של בקר (BPE)</td>
			<td>50 מיקרוגרם/מ"ל</td>
			<td>50 מיקרוגרם/מ"ל</td>
		</tr><tr><td>גורם גדילה אפידרמיס (EGF)</td>
			<td>1 נ"ג/מ"ל</td>
			<td>1 נ"ג/מ"ל</td>
		</tr><tr><td>סידן כלורי (CaCl2)</td>
			<td>0.09 מ"מ</td>
			<td>0.6 מ"מ</td>
		</tr><tr><td>Y-27632 (מעכב סלעים)</td>
			<td>-</td>
			<td>10 מיקרומטר</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 1: מדיה אורגנואידית ראשונית של הוושט שמקורה בתאים. רשימת המרכיבים הבינוניים לגידול אורגנואידים של הוושט האנושי. SFM: מדיום ללא סרום.

כאן, פרוטוקול לתרבית אורגנואידים של הוושט האנושי ותרבות ממשק אוויר-נוזל מסופק. ניתן להשתמש בתרבית ממשק אוויר-נוזל של אורגנואידים בוושט כדי לחקור את ההשפעה של ציטוקינים על מחסום אפיתל הוושט.

The squamous epithelium of the esophagus is directly exposed to the environment, continuously facing foreign antigens, including food antigens and ...

אנו חוקרים את הפתופיזיולוגיה של דלקת הוושט האאוזינופילית ומנסים לפענח את מפל הדלקת המשרה ומקדם את התהליך הדלקתי הכרוני של EOE. זיהוי מתווכים חיסוניים חדשים התורמים לפתוגנזה של המחלה מתרכז סביב פגיעה במחסום אפיתל ואישור נוגדנים טיפוליים כנגד מתווכי החיסון האמורים. זיהינו את תת-משפחת הציטוקינים IL-20 כמתווכים דלקתיים הפוגעים בהתמיינות אפיתל ובקרטינזציה וכתוצאה מכך לפגיעה במחסום האפיתל דרך מסלול MAP kinase.

three-dimensional-cell-culture-models-to-investigate-epithelial

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

סרטון זה מתאר טכניקה של תרבית חוץ גופית ליצירת מבנים אורגנוטיפיים של הוושט האנושי על ידי גידול משותף של פיברובלסטים ראשוניים של הוושט האנושי ותאי אפיתל קשקשיים בתוך פיגום חזירי נטול תאים. מודלים אלה של תרביות תלת-ממדיות מחקים את התפקוד והפיזיולוגיה של עמיתיהם ברקמת in vivo.

מודל תרבות רפסודה תלת ממדית של הוושט: טכניקת תרבית חוץ גופית ליצירת מודל רירית הוושט האנושית

כתב יד זה מתאר את הייצור, אפיון ושימושים פוטנציאליים של רקמת מבנה הוושט 3D מהונדס הוכנה מפיברובלסטים נורמלים עיקריים אנושיים הוושט ותאי אפיתל קשקש זורעים בתוך פיגום חזירי דה-cellularized. התוצאות מראות ההיווצרות של האפיתל מרובדת בוגר דומה לושט האדם הנורמלי.

ייצור, אפיון ופוטנציאל שימושים של הוושט רירי דגם אדם מהונדס-רקמות 3D

כתב יד זה מתאר טכניקה רכה המבוסס ליתוגרפיה להנדס מערכים אחידים של תלת ממדי (3D) רקמות אפיתל של גיאומטריה מוגדרת מוקפות תאי מטריקס. שיטה זו ניתנת למגוון רחב של סוגי תאים והקשרים ניסיוניים מאפשרת הקרנת תפוקה גבוהה של משכפל זהה.

הנדסה תלת מימדי רקמות אפיתל Embedded בתוך מטריקס

הרחבת תאי אפיתל ושט ילדים אנושיים ניצול תכנות מחדש מותנה מספקת חוקרים עם אוכלוסיית חולים ספציפיים של תאים שיכולים להיות מנוצלת עבור הנדסת בונת ושט להשתלה אוטולוגית לטיפול פגמים או פציעה ומגיש כמאגר מבחני מיון טיפוליים.

תכנות מחדש מותנה של תאי אפיתל ושט האדם Pediatric לשימוש בהנדסת רקמות וחקירת מחלות

אנו מתארים שיטות פשוטות כדי ללמוד את הרגולציה של טרנספורטר הסרוטונין במעיים (בהלבשה) פונקציה וביטוי באמצעות מודל תרבית תאים במבחנה של תאי קאקו-2 גדל ב -3 D ו מודל vivo לשעבר של מעי עכבר. שיטות אלו חלות על המחקר של מובילי אפיתל אחרים.

שיטות לחקר תפקוד החלבון התחבורה אפיתל וביטוייה המעי Native ו קאקו-2 תאים שגודלו ב -3 D

כאן, אנו מציגים פרוטוקול התרבות האנושית enteroid או monolayers colonoid שיש להם פונקציה נפגע המחסום ללמוד אינטראקציות אפיתל-microbiota מארח ברמה התאית וביוכימי.

Monolayers Colonoid האדם ללמוד אינטראקציות בין גורמי מחלה, Commensals אפיתל המעי מארח

פרוטוקול זה מתאר את השלבים העיקריים ליצירה ולאפיון אורגנואידים תלת-ממדיים אוראליים-ושטיים המייצגים נגעים נורמליים, פרה-נאופלסטיים ונגעי קרצינומה של תאי קשקש הנגרמים באמצעות קרצינוגנזה כימית.

מידול קרצינומה של תאי קשקש אוראליים-ושטיים באורגנואידים תלת-ממדיים

כאן אנו מתארים בניית מערכת מודל בסיסית תלת ממדית (3D) של קו תאי מעי ופרוטוקול הטמעת פרפין להערכה מיקרוסקופית קלה של מקבילות מעיים קבועות. צביעה של חלבונים נבחרים מאפשרת ניתוח של פרמטרים חזותיים מרובים מניסוי יחיד לשימוש פוטנציאלי במחקרי סינון תרופות פרה-קליניים.

מערכת מודל מעי תלת-ממדית בסיסית (3D) עם מרכיב חיסוני

מאמר זה מתאר את היצירה של מודל מחסום דרכי נשימה מורכב ורב-תאי המורכב מאפיתל ריאות שמקורו בתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSC), מזנכימה, תאי אנדותל ומקרופאגים בתרבית ממשק אוויר-נוזל.

תרבית משותפת של תאי אפיתל, מזנכימליים, אנדותלים ומערכת החיסון שמקורה ב-iPSC כדי להדגים את שלמות מחסום דרכי הנשימה בבריאות ומחלות ריאות

במקביל זיהום בנגיף שפעת היא אחד הגורמים המעורבים אינדוקציה של המחלה pneumococcal פולשנית במהלך...

באמצעות הדמיה Bioluminescent לחקור סינרגיזם בין Streptococcus pneumoniae ו שפעת וירוס עכברים תינוקות

חקור את השפעת ציטוקינים על מחסום האפיתל בוושט באמצעות תרביות אורגנואידים תלת-ממדיים וממשק אוויר-נוזל. שיטה זו מאפשרת לזהות מוליכים חיסוניים ולפתח אסטרטגיות טיפוליות לדלקת ושט אאוזינופילית.

מודלים תלת מימדיים של תרביות תאים לחקר מחסום האפיתל בדלקת ושט אאוזינופילית

גלה סרטונים נוספים