Name: מדידת לחץ רשתית אנדופלסמית ותגובת חלבון פתוחה בתאי T נגועים ב- HIV-1 וניתוח תפקידה בשכפול HIV-1 (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 12 s
Description: חקור את תגובת החלבון הפתוחה בתאי T נגועים ב-HIV-1 ואת השפעת לחץ הרשתית האנדופלסמית על שכפול הווירוס. מחקר זה מספק פרוטוקולים מקיפים להבנת אופטימיזציית UPR לשכפול יעיל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>חקר מתח ER והפעלת UPR במהלך זיהום HIV-1 בתאי T

<ol><li>Levy, J. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLevy%2C+JA+%22HIV+and+the+Pathogenesis+of+AIDS.+3rd%22">HIV and the Pathogenesis of AIDS. 3rd</a>. , ASM Press. (2007).</li>
<li>Hebert, D. N., Molinari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+and+out+of+the+ER%3A+Protein+folding%2C+quality+control%2C+degradation%2C+and+related+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">In and out of the ER: Protein folding, quality control, degradation, and related human diseases.</a> Physiol Rev. 87 (4), 1377-1408 (2007).</li>
<li>Mori, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unfolded+protein+response%3A+The+dawn+of+a+new+field%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Jpn+Acad+Ser+B+Phys+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">The unfolded protein response: The dawn of a new field.</a> Proc Jpn Acad Ser B Phys Biol Sci. 91 (9), 469-480 (2015).</li>
<li>Balch, W. E., Morimoto, R. I., Dillin, A., Kelly, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adapting+proteostasis+for+disease+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Adapting proteostasis for disease intervention.</a> Science. 319 (5865), 916-919 (2008).</li>
<li>Kaufman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orchestrating+the+unfolded+protein+response+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Orchestrating the unfolded protein response in health and disease.</a> J Clin Invest. 110 (10), 1389-1398 (2002).</li>
<li>Ron, D., Walter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signal+integration+in+the+endoplasmic+reticulum+unfolded+protein+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Signal integration in the endoplasmic reticulum unfolded protein response.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 8 (7), 519-529 (2007).</li>
<li>Marciniak, S. J., Garcia-Bonilla, L., Hu, J., Harding, H. P., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation-dependent+substrate+recruitment+by+the+eukaryotic+translation+initiation+factor+2+kinase+PERK%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Activation-dependent substrate recruitment by the eukaryotic translation initiation factor 2 kinase PERK.</a> J Cell Biol. 172 (2), 201-209 (2006).</li>
<li>Harding, H. P., Zhang, Y., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+translation+and+folding+are+coupled+by+an+endoplasmic-reticulum-resident+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Protein translation and folding are coupled by an endoplasmic-reticulum-resident kinase.</a> Nature. 397 (6716), 271-274 (1999).</li>
<li>Vattem, K. M., Wek, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reinitiation+involving+upstream+ORFs+regulates+ATF4+mRNA+translation+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Reinitiation involving upstream ORFs regulates ATF4 mRNA translation in mammalian cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (31), 11269-11274 (2004).</li>
<li>Harding, H. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+integrated+stress+response+regulates+amino+acid+metabolism+and+resistance+to+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">An integrated stress response regulates amino acid metabolism and resistance to oxidative stress.</a> Mol Cell. 11 (3), 619-633 (2003).</li>
<li>Novoa, I., Zeng, H., Harding, H. P., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feedback+inhibition+of+the+unfolded+protein+response+by+GADD34-mediated+dephosphorylation+of+eIF2%CE%B1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Feedback inhibition of the unfolded protein response by GADD34-mediated dephosphorylation of eIF2α.</a> J Cell Biol. 153 (5), 1011-1021 (2001).</li>
<li>Haze, K., Yoshida, H., Yanagi, H., Yura, T., Mori, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+transcription+factor+ATF6+is+synthesized+as+a+transmembrane+protein+and+activated+by+proteolysis+in+response+to+endoplasmic+reticulum+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Mammalian transcription factor ATF6 is synthesized as a transmembrane protein and activated by proteolysis in response to endoplasmic reticulum stress.</a> Mol Biol Cell. 10 (11), 3787-3799 (1999).</li>
<li>Ye, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ER+stress+induces+cleavage+of+membrane-bound+ATF6+by+the+same+proteases+that+process+SREBPs%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">ER stress induces cleavage of membrane-bound ATF6 by the same proteases that process SREBPs.</a> Mol Cell. 6 (6), 1355-1364 (2000).</li>
<li>Tirasophon, W., Welihinda, A. A., Kaufman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stress+response+pathway+from+the+endoplasmic+reticulum+to+the+nucleus+requires+a+novel+bifunctional+protein+kinase%2Fendoribonuclease+%28Ire1p%29+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A stress response pathway from the endoplasmic reticulum to the nucleus requires a novel bifunctional protein kinase/endoribonuclease (Ire1p) in mammalian cells.</a> Genes Dev. 12 (12), 1812-1824 (1998).</li>
<li>Yoshida, H., Matsui, T., Yamamoto, A., Okada, T., Mori, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((XBP1+mRNA+is+induced+by+ATF6+and+spliced+by+IRE1+in+response+to+ER+stress+to+produce+a+highly+active+transcription+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">XBP1 mRNA is induced by ATF6 and spliced by IRE1 in response to ER stress to produce a highly active transcription factor.</a> Cell. 107 (7), 881-891 (2001).</li>
<li>Calfon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IRE1+couples+endoplasmic+reticulum+load+to+secretory+capacity+by+processing+the+XBP-1+mRNA%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">IRE1 couples endoplasmic reticulum load to secretory capacity by processing the XBP-1 mRNA.</a> Nature. 415 (6867), 92-96 (2002).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATF6%CE%B1+optimizes+long-term+endoplasmic+reticulum+function+to+protect+cells+from+chronic+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">ATF6α optimizes long-term endoplasmic reticulum function to protect cells from chronic stress.</a> Dev Cell. 13 (3), 351-364 (2007).</li>
<li>Shoulders, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-independent+activation+of+XBP1s+and%2For+ATF6+reveals+three+functionally+diverse+ER+proteostasis+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Stress-independent activation of XBP1s and/or ATF6 reveals three functionally diverse ER proteostasis environments.</a> Cell Rep. 3 (4), 1279-1292 (2013).</li>
<li>Oslowski, C. M., Urano, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+ER+stress+and+the+unfolded+protein+response+using+mammalian+tissue+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Measuring ER stress and the unfolded protein response using mammalian tissue culture system.</a> Methods Enzymol. 490, 71-92 (2011).</li>
<li>Gupta, S., Samali, A., Fitzgerald, U., Deegan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+monitoring+endoplasmic+reticulum+stress+and+the+unfolded+protein+response%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Methods for monitoring endoplasmic reticulum stress and the unfolded protein response.</a> Int J Cell Biol. 2010, 830307(2010).</li>
<li>Wang, M., Kaufman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+misfolding+in+the+endoplasmic+reticulum+as+a+conduit+to+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Protein misfolding in the endoplasmic reticulum as a conduit to human disease.</a> Nature. 529 (7586), 326-335 (2016).</li>
<li>Beriault, D. R., Werstuck, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantification+of+endoplasmic+reticulum+stress+in+living+cells+using+the+fluorescent+compound%2C+Thioflavin+T%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Detection and quantification of endoplasmic reticulum stress in living cells using the fluorescent compound, Thioflavin T.</a> Biochim Biophys Acta. 1833 (10), 2293-2301 (2013).</li>
<li>Tripathi, A., Iyer, K., Mitra, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-1+replication+requires+optimal+activation+of+the+unfolded+protein+response%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">HIV-1 replication requires optimal activation of the unfolded protein response.</a> FEBS Lett. 597 (23), 2908-2930 (2023).</li>
<li>Platt, E. J., Wehrly, K., Kuhmann, S. E., Chesebro, B., Kabat, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+CCR5+and+CD4+cell+surface+concentrations+on+infections+by+macrophagetropic+isolates+of+human+immunodeficiency+virus+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Effects of CCR5 and CD4 cell surface concentrations on infections by macrophagetropic isolates of human immunodeficiency virus type 1.</a> J Virol. 72 (4), 2855(1998).</li>
<li>Gervaix, A., West, D., Leoni, L. M., Richman, D. D., Wong-Staal, F., Corbeil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+reporter+cell+line+to+monitor+HIV+infection+and+drug+susceptibility+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A new reporter cell line to monitor HIV infection and drug susceptibility in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 94 (9), 4653-4658 (1997).</li>
<li>Augustine, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclin+F%2FFBXO1+interacts+with+HIV-1+viral+infectivity+factor+%28Vif%29+and+restricts+progeny+virion+infectivity+by+ubiquitination+and+proteasomal+degradation+of+vif+protein+through+SCFcyclin+F+E3+ligase+machinery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Cyclin F/FBXO1 interacts with HIV-1 viral infectivity factor (Vif) and restricts progeny virion infectivity by ubiquitination and proteasomal degradation of vif protein through SCFcyclin F E3 ligase machinery.</a> J Biol Chem. 292 (13), 5349-5363 (2017).</li>
<li>Shihan, M. H., Novo, S. G., Le Marchand, S. J., Wang, Y., Duncan, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+quantitating+confocal+fluorescent+images%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Rep%22%5BJournal%5D)">A simple method for quantitating confocal fluorescent images.</a> Biochem Biophys Rep. 25, 100916(2021).</li>
<li>Treiman, M., Caspersen, C., Christensen, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tool+coming+of+age%3A+Thapsigargin+as+an+inhibitor+of+sarco-endoplasmic+reticulum+Ca2%2B-ATPases%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">A tool coming of age: Thapsigargin as an inhibitor of sarco-endoplasmic reticulum Ca2+-ATPases.</a> Trends Pharmacol Sci. 19 (4), 131-135 (1998).</li>
<li>Moffat, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lentiviral+RNAi+library+for+human+and+mouse+genes+applied+to+an+arrayed+viral+high-content+screen%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A lentiviral RNAi library for human and mouse genes applied to an arrayed viral high-content screen.</a> Cell. 124 (6), 1283-1298 (2006).</li>
<li>Sodroski, J., Rosen, C., Goh, W. C., Haseltine, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Transcriptional+activator+protein+encoded+by+the+x-lor+region+of+the+human+T-cell+leukemia+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A Transcriptional activator protein encoded by the x-lor region of the human T-cell leukemia virus.</a> Science. 228 (4706), 1430-1434 (1985).</li>
<li>Rosen, C. A., Sodroski, J. G., Kettman, R., Haseltine, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+enhancer+sequences+in+type+II+human+T-cell+leukemia+virus+and+bovine+leukemia+virus+long+terminal+repeats+by+virus-associated+trans-acting+regulatory+factors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Activation of enhancer sequences in type II human T-cell leukemia virus and bovine leukemia virus long terminal repeats by virus-associated trans-acting regulatory factors.</a> J Virol. 57 (3), 738-744 (1986).</li>
<li>Dandekar, D. H., Kumar, M., Ladha, J. S., Ganesh, K. N., Mitra, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+method+for+normalization+of+transfection+efficiency+using+enhanced+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A quantitative method for normalization of transfection efficiency using enhanced green fluorescent protein.</a> Anal Biochem. 342 (2), 341-344 (2005).</li>
<li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blot%3A+Technique%2C+theory%2C+and+trouble+shooting%5BTitle%5D)+AND+%22N+Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Western blot: Technique, theory, and trouble shooting.</a> N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).</li>
<li>Ghosh, R., Gilda, J. E., Gomes, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+necessity+of+and+strategies+for+improving+confidence+in+the+accuracy+of+western+blots%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Proteomics%22%5BJournal%5D)">The necessity of and strategies for improving confidence in the accuracy of western blots.</a> Expert Rev Proteomics. 11 (5), 549-560 (2014).</li>
<li>Peña, J., Harris, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+virus+modulates+the+unfolded+protein+response+in+a+time-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Dengue virus modulates the unfolded protein response in a time-dependent manner.</a> J Biol Chem. 286 (16), 14226-14236 (2011).</li>
<li>Soboleski, M. R., Oaks, J., Halford, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Green+fluorescent+protein+is+a+quantitative+reporter+of+gene+expression+in+individual+eukaryotic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Green fluorescent protein is a quantitative reporter of gene expression in individual eukaryotic cells.</a> FASEB J. 19 (3), 440-442 (2005).</li>
<li>Martinez, Z. S., Castro, E., Seong, C. S., Cerón, M. R., Echegoyen, L., Llano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fullerene+derivatives+strongly+inhibit+HIV-1+replication+by+affecting+virus+maturation+without+impairing+protease+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Fullerene derivatives strongly inhibit HIV-1 replication by affecting virus maturation without impairing protease activity.</a> Antimicrob Agents Chemother. 60 (10), 5731-5741 (2016).</li>
<li>Askari, S., Javadpour, P., Rashidi, F. S., Dargahi, L., Kashfi, K., Ghasemi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+molecular+effects+of+Thapsigargin-induced+brain+ER-+stress%3A+Encompassing+inflammation%2C+MAPK%2C+and+insulin+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Life%22%5BJournal%5D)">Behavioral and molecular effects of Thapsigargin-induced brain ER- stress: Encompassing inflammation, MAPK, and insulin signaling pathway.</a> Life. 12 (9), 1374(2022).</li>
<li>Jaskulska, A., Janecka, A. E., Gach-Janczak, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thapsigargin-from+traditional+medicine+to+anticancer+drug%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Thapsigargin-from traditional medicine to anticancer drug.</a> Int J Mol Sci. 22 (1), 4(2021).</li>
<li>Shaban, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-level+inhibition+of+coronavirus+replication+by+chemical+ER+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Multi-level inhibition of coronavirus replication by chemical ER stress.</a> Nat Commun. 12 (1), 5536(2021).</li>
<li>Marciniak, S. J., Chambers, J. E., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+targeting+of+endoplasmic+reticulum+stress+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Pharmacological targeting of endoplasmic reticulum stress in disease.</a> Nat Rev Drug Discov. 21 (2), 115-140 (2022).</li>
<li>Sriburi, R., Jackowski, S., Mori, K., Brewer, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((XBP1%3A+A+link+between+the+unfolded+protein+response%2C+lipid+biosynthesis%2C+and+biogenesis+of+the+endoplasmic+reticulum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">XBP1: A link between the unfolded protein response, lipid biosynthesis, and biogenesis of the endoplasmic reticulum.</a> J Cell Biol. 167 (1), 35-41 (2004).</li>
<li>Siwecka, N., Rozpędek-Kamińska, W., Wawrzynkiewicz, A., Pytel, D., Diehl, J. A., Majsterek, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure%2C+activation+and+signaling+of+IRE1+and+its+role+in+determining+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">The structure, activation and signaling of IRE1 and its role in determining cell fate.</a> Biomedicines. 9 (2), 156(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Acrylamamide</td><td>Biorad, ארה"ב</td><td>1610107</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>G-Biosciences, ארה"ב</td><td>RC1013</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום פרסולפט</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>A3678</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן נגד ATF4</td><td>טכנולוגיית איתות תאים, ארה"ב</td><td>11815</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:1000</td></tr><tr><td>נוגדן נגד ATF6</td><td>Abcam, בריטניה</td><td>ab122897</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:1000</td></tr><tr><td>נוגדנים נגד CHOP</td><td>טכנולוגיית איתות תאים, ארה"ב</td><td>2897</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:1000</td></tr><tr><td>אנטי-eIF2 ואלפא; נוגדן</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה, ארה"ב</td><td>sc-11386</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:2000&nbsp;</td></tr><tr><td>נוגדן נגד GADD34</td><td>Abcam, בריטניה</td><td>ab236516</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:1000</td></tr><tr><td>נוגדן נגד GAPDH</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה, ארה"ב</td><td>sc-32233</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:3000&nbsp;</td></tr><tr>טכנולוגיית איתות תאים <td>נגד HSPA5</td><td>, ארה"ב</td><td>3177</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:1000</td></tr><tr><td>נוגדנים נגד IRE1</td><td>טכנולוגיית איתות תאים, ארה"ב</td><td>3294</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:2000</td></tr><tr><td>נוגדן מצומד HRP נגד עכבר&nbsp;</td><td>Biorad, ארה"ב</td><td>1706516</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול - 1:4000</td></tr><tr><td>anti-peIF2 ו-alpha; נוגדן</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>44-728G</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:1000</td></tr><tr><td>anti-PERK anti-PERK</td><td>טכנולוגיית איתות תאים, ארה"ב</td><td>5683</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:2000</td></tr><tr><td>נוגדן anti-pIRE1</td><td>Abcam, בריטניה</td><td>ab243665</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:1000</td></tr><tr><td>נוגדן נגד pPERK</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>PA5-40294</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:2000</td></tr><tr><td>נוגדן מצומד HRP נגד ארנב</td><td>Biorad, ארה"ב</td><td>1706515</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול- 1:4000</td></tr><tr><td>נוגדן נגד XBP1</td><td>Abcam, בריטניה</td><td>ab37152</td><td>זיהוי כתמים מערביים דילול-1:1000</td></tr><tr><td>צנטריפוגה במהירות גבוהה ספסל</td><td>אפנדורף, ארה"ב</td><td>5804R</td><td>רוטור- F-45-30-11</td></tr><tr><td>צנטריפוגה ספסל במהירות נמוכה</td><td>אפנדורף, ארה"ב</td><td>5702R</td><td>רוטור- A-4-38</td></tr><tr><td>ביס-אקרילאמיד</td><td>ביורד, ארה"ב</td><td>1610201</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין (BSA)</td><td>MP ביומדיקל, ארה"ב</td><td>160069</td><td></td></tr><tr><td>מגיב ברדפורד</td><td>Biorad, ארה"ב</td><td>5000006</td><td></td></tr><tr><td>ערכת טרנספקציה של יונקים CalPhos</td><td>Clontech, Takara Bio, ארה"ב</td><td>631312</td><td>מלאי וירוסים הכנה</td></tr><tr><td>CEM-GFP</td><td>NIH, AIDS מאגר, ארה"ב</td><td>3655</td><td></td></tr><tr><td>Clarity ECL מצע</td><td>Biorad, ארה"ב</td><td>1705061</td><td>מצע זיהוי כימילומינסנציה</td></tr><tr><td>בהירות מקסימום מצע ECL</td><td>Biorad, ארה"ב</td><td>1705062</td><td>מצע זיהוי כימילומינסנציה</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי</td><td>אולימפוס, יפן</td><td>דגם: FV3000</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה ציטוספין</td><td>Thermo Fisher Scientific, ארה"ב</td><td>ASHA78300003</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>11995073</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>dNTPs</td><td>Promega, ארה"ב</td><td>U1515</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>R0861</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>12635</td><td></td></tr><tr><td>EtBr</td><td>Invitrogen, ארה</td><td>"ב 15585011</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>G418</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>11811023</td><td></td></tr><tr><td>גלוטראלדהיד 25%</td> <td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>G6257</td><td>בדיקת זיהום</td></tr><tr><td>גליצין</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק, ארה"ב</td><td>Q24755</td><td></td></tr><tr><td>HEK-293T</td><td>NCCS, הודו</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HIV-1 שיבוט מולקולרי זיהומי pNL4-3</td><td>NIH, מאגר איידס, ארה"ב</td><td>114</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ הפוך</td><td>ניקון, יפן</td><td>דגם: Eclipse Ti2</td><td></td></tr><tr><td>iTaq אוניברסלי SYBR Green Supermix</td><td>Biorad, ארה"ב</td><td>1715124</td><td></td></tr><tr><td>Jurkat J6</td><td>NCCS, הודו</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום כלוריד</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>M8266</td><td>זיהום מבחן</td></tr><tr><td>MMLV-RT&nbsp;</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>28025013</td><td></td></tr><tr><td>מגיב MTT</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>M5655</td><td>בדיקת כדאיות תאים</td></tr><tr><td>N,N-dimethyl formamide</td><td>Fluka Chemika</td><td>40255</td><td>בדיקת זיהום</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Thermo Fisher Scientific, ארה"ב</td><td>Q27605</td><td></td></tr><tr><td>NaF</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>201154</td><td></td></tr><tr><td>NP40</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>85124</td><td></td></tr><tr><td>ערכת לכידת אנטיגן P24 ELISA</td><td>ABL, ארה"ב</td><td>5421</td><td></td></tr><tr><td>PageRuler סולם חלבון צבוע מראש</td><td>מדע בדיוני ביולוגי, הודו</td><td>PGPMT078</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>pEGFP-N1</td><td>Clontech, ארה"ב</td><td>632515</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>151140122</td><td></td></tr><tr><td>מעכב פוספטאז</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>4906837001</td><td></td></tr><tr><td>Phusion תערובת מאסטר PCR בנאמנות גבוהה עם מאגר GC</td><td>NEB, ארה"ב</td><td>M05532</td><td></td></tr><tr><td>pLKO.1-TRC</td><td>Addgene, ארה"ב</td><td>10878</td><td>וקטור שיבוט לנטיוויראלי</td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Addgene, ארה"ב</td><td>12259</td><td>וקטור מעטפת VSV-G</td></tr><tr><td>PMSF</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>P7626</td><td></td></tr><tr><td>פוליאתילנימין (PEI)&nbsp;</td><td>Polysciences, Inc., ארה"ב</td><td>23966</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן פריציאניד</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"</td>ב <td>244023</td><td>בדיקת זיהום</td></tr><tr><td>אשלגן פרוציאניד</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>P3289</td><td>בדיקת</td></tr><tr><td>זיהום מעכב פרוטאז</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב&nbsp;</td><td></td><td></td>5056489001</tr><tr><td>psPAX2</td><td>Addgene, ארה"ב</td><td>12260</td><td>אריזת Lentiviral פלסמיד</td></tr><tr><td>Puromycin</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>P8833</td><td>מבחר תאים יציבים</td></tr><tr><td>PVDF ממברנה</td><td>Biorad, ארה"ב</td><td>1620177</td><td></td></tr><tr><td>פריימרים אקראיים</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>48190011</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>22400105</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>L3771</td><td></td></tr><tr><td>Steady-Glo substrate</td><td>Promega, ארה"ב</td><td>E2510</td><td>בדיקת לוציפראז</td></tr><tr><td>T4 DNA ligase</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>15224017</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>17919</td><td></td></tr><tr><td>Thapsigargin</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>T9033</td><td></td></tr><tr><td>Thioflavin T</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>596200</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Thermo Fisher Scientific, ארה"ב</td><td>Q15965</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X-100</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Trizol</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>15596018</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>TZM-bl</td><td>NIH, מאגר איידס, ארה"ב</td><td>8129</td><td></td></tr><tr><td>אולטרה-צנטריפוגה</td><td>בקמן Optima L90K, ארה"ב</td><td>330049</td><td>Rotor-SW28Ti</td></tr><tr><td>UltraPure X-gal</td><td>Invitrogen, ארה"ב</td><td>15520-018</td><td>בדיקת זיהום</td></tr></tbody></table>

מדידת לחץ רשתית אנדופלסמית ותגובת חלבון פתוחה בתאי t נגועים ב- hiv-1 וניתוח תפקידה בשכפול hiv-1

Measuring Endoplasmic Reticulum Stress and Unfolded Protein Response in HIV-1 Infected T-Cells and Analyzing its Role in HIV-1 Replication

מדידת לחץ רשתית אנדופלסמית ותגובת חלבון פתוחה בתאי T נגועים ב- HIV-1 וניתוח תפקידה בשכפול HIV-1

Viral infections can cause Endoplasmic Reticulum (ER) stress due to abnormal protein accumulation, leading to Unfolded Protein Response (UPR). Viruses ...

measuring-endoplasmic-reticulum-stress-unfolded-protein-response-hiv

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

פיתחנו וקטור lentiviral שיש לה, בנוסף LTR תאת מגיב, את אלמנט Rev-תגובה (RRE) כי ניתן לווסת את ביטוי הגן הכתב בצורה HIV-1 ו-תאת Rev-מותנה. וקטור מאפשר את זיהוי ספציפי של שכפול HIV בתאים חיים באמצעות ביטוי ה-GFP.

סימון ספציפיות של HIV-1 תאים חיוביים באמצעות וקטור Rev-מותנה lentiviral מבטא את חלבון פלואורסצנטי ירוק

מאמר זה מתאר שיטה לחזות היווצרות הסינפסה virological HIV-1 המעטפה הנגרמת על bilayers זכוכית הנתמכים מישוריים על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי סך פנימית (TIRF) השתקפות. השיטה ניתן גם לשלב עם כתמים immunofluorescence לזהות הפעלה חלוקה מחדש של מולקולות איתות המתרחשים במהלך היווצרות ה-HIV-1 המעטפה הנגרמת סינפסה virological.

הדמיה של HIV-1 מעטפה הנגרמת סינפסה Virological והאיתות על bilayers שומנים סינתטי

פיתחנו assay במבחנה כדי לחקור את התפקיד של מסלולי immunoregulatory בויסות הפרשת ציטוקינים על ידי תאי T מסוג CD4 HIV-ספציפיים.

במבחנה Assay כדי להעריך את ההשפעה של immunoregulatory מסלולים על פונקצית Effector הנייד HIV-ספציפית T מסוג CD4

בניגוד לחלקיקים HIV-1 ללא סלולריים, תאי CD4 + T נגוע הם חשו ביעילות על ידי תאים דנדריטים plasmacytoid (PDC). כתב יד זה מתאר שיטה שבה תאים היקפיים mononuclear הדם (PBMCs) או pDCs המבודד הם שיתוף תרבותיים עם HIV-1 תאי T נגועים כדי להעריך חישה מולדת על ידי pDCs כפי שהוערכו על ידי שחרורו של הסוג-אני IFN.

הערכת חישה המולדת של CD4 הנגוע ב- HIV-1<sup&gt; +</sup&gt; T תאים על ידי תאים דנדריטים Plasmacytoid שימוש<em&gt; Ex vivo</em&gt; עמית תרבות מערכת.

מתוארות שיטות להערכת היעילות והרעילות של מולקולות RNA המכוונות לשלבים שלאחר האינטגרציה של מחזור השכפול של HIV-1. שיטות אלו שימושיות לסינון מולקולות חדשות ולאופטימיזציה של הפורמט של מולקולות קיימות.

הערכת היעילות והרעילות של RNAs מיקוד ייצור HIV-1 לשימוש ב ג&#39;ין או טיפול תרופתי

דוח זה מתאר מבחן חוץ גופי למדידת פעילות האינטגרציה הקשורה לנגיף הכשל החיסוני האנושי מסוג 1 (HIV-1) בתמציות הציטופלזמיות של תאים נגועים באופן חריף. השילוב של DNA HIV-1 הקשור ל-PIC ב-DNA מטרה הטרולוגי מכומת על ידי שימוש באסטרטגיית תגובת שרשרת פולימראז מקוננת בזמן אמת.

מדידה במבחנה פעילות האינטגרציה של HIV-1 Preintegration מכלולים

תיאר מתודולוגיה quantitate את הביטוי של גנים 96, 18 פני שטח חלבונים על ידי תאים בודדים לשעבר vivo, המאפשרות הזיהוי באופן שונה באה לידי ביטוי גנים, חלבונים בתאים הנגועים בנגיף ביחס תאים נגוע. אנו מיישמים את הגישה ללימוד CD4 הנגועים סיב+ T תאים מבודד קופי מקוק רזוס.

תא בודד כימות של mRNA וביטוי חלבונים השטח ב- CD4 הנגועים בנגיף+ T תאים מבודדים מן קופי מקוק רזוס

כאן אנו מציגים בגישה רצף עמוק המספקת של קביעה לא משוחדת של nascent-3' טרמיני, כמו גם פרופילים mutational של מולקולות דנ א חד גדילי. היישום העיקרי הוא אפיון nascent retroviral משלימים DNAs (cDNAs), intermediates שנוצר במהלך התהליך של retroviral שעתוק במהופך.

3'-Termini הקובע ורצפים של מולקולות Nascent חד גדילי ה-DNA הנגיפי במהלך HIV-1 הפוך שעתוק בתאים נגועים

כאן אנו מתארים Rev immunoprecipitation בנוכחות של שכפול HIV-1 עבור ספקטרומטריה המסה. ניתן להשתמש בשיטות המתוארות לזיהוי גורמי נוקלאוולאר המעורבים במחזור הזיהומיות של HIV-1, וחלים על מודלים אחרים של מחלות לאפיון מסלולים בעלי מחקר.

זיהוי של גורמי הנוקלאוולאר במהלך שכפול HIV-1 באמצעות Rev Immunoprecipitation וספקטרומטר מסה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול שבו תאים בודדים מנוטרים לאירועים חריפים וזיהום HIV-1 פרודוקטיבי במכשיר ננופלואידי. נתוני דימות מגדירים אינטראקציות של קולטן מארח וירוסים ודינמיקה של מסלולי איתות. זוהי השיטה הראשונה עבור תרבות תא יחיד אורך תפוקה גבוהה ננופלואידית והדמיה ללמוד קינטיקה איתות ואינטראקציות מולקולריות.

אפיון תא יחיד של זרם סידן וזיהום HIV-1 באמצעות פלטפורמה אופטופלוידית רב-מפרקית

חקור את תגובת החלבון הפתוחה בתאי T נגועים ב-HIV-1 ואת השפעת לחץ הרשתית האנדופלסמית על שכפול הווירוס. מחקר זה מספק פרוטוקולים מקיפים להבנת אופטימיזציית UPR לשכפול יעיל.

מדידת לחץ רשתית אנדופלסמית ותגובת חלבון פתוחה בתאי T נגועים ב- HIV-1 וניתוח תפקידה בשכפול HIV-1

גלה סרטונים נוספים