Name: הערכה גליקולית-איכותית מהירה של חלבונים רקומביננטיים באמצעות מערכת אוטומטית לחלוטין (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: למדו ניתוח גליקולי איכותי מהיר של חלבונים רקומביננטיים באמצעות מערכת אוטומטית לחלוטין. שיטה זו מפחיתה משמעותית את כוח האדם הנדרש ומאפשרת זיהוי ביומרקרים ספציפיים למחלה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>פרופיל גליקן אוטומטי מבוסס לקטין באמצעות מערך חרוזים בקצה יחיד (BIST)

<ol><li>Butler, M., Reichl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+cell+expression+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Biochem+Eng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal cell expression systems.</a> Adv Biochem Eng Biotechnol. 175, 1-36 (2021).</li>
<li>Silva, M. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+One+-+Lectin+biosensors+in+cancer+glycan+biomarker+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Chapter One - Lectin biosensors in cancer glycan biomarker detection.</a> Adv Clin Chem. 93, 1-61 (2019).</li>
<li>Hiono, T., Nagai-Okatani, C., Kuno, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4.07+-+Application+of+glycan-related+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Glycoscience+%28Second+Edition%29%22%5BJournal%5D)">4.07 - Application of glycan-related microarrays.</a> Comprehensive Glycoscience (Second Edition). , 134-148 (2021).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lectin+bead+array+in+a+single+tip+facilitates+fully+automatic+glycoprotein+profiling%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Lectin bead array in a single tip facilitates fully automatic glycoprotein profiling).</a> Anal Chem. 91 (17), 11162-11169 (2019).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GlycoBIST%3A+A+System+for+automatic+glycan+profiling+of+a+target+protein+using+milli-bead+array+in+a+tip%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">GlycoBIST: A System for automatic glycan profiling of a target protein using milli-bead array in a tip.</a> Curr Protoc Protein Sci. 99 (1), e103(2020).</li>
<li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blot%3A+Technique%2C+theory%2C+and+trouble+shooting%5BTitle%5D)+AND+%22N+Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Western blot: Technique, theory, and trouble shooting.</a> N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).</li>
<li>Bojar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+useful+guide+to+lectin+binding%3A+machine-learning+directed+annotation+of+57+unique+lectin+specificities%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">A useful guide to lectin binding: machine-learning directed annotation of 57 unique lectin specificities.</a> ACS Chem Biol. 17 (11), 2993-3012 (2022).</li>
<li>Nagai-Okatani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2.0%3A+An+integrated+visualization+for+lectin+microarray-based+mouse+tissue+glycome+mapping+data+with+lectin+histochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">2.0: An integrated visualization for lectin microarray-based mouse tissue glycome mapping data with lectin histochemistry.</a> J Proteome Res. 20 (4), 2069-2075 (2021).</li>
<li>Geisler, C., Jarvis, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+glycoanalysis+with+Maackia+amurensis+lectins+requires+a+clear+understanding+of+their+binding+specificities%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Effective glycoanalysis with Maackia amurensis lectins requires a clear understanding of their binding specificities.</a> Glycobiology. 21 (8), 988-993 (2011).</li>
<li>Noro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N+-glycan+structures+of+Wisteria+floribunda+agglutinin-positive+Mac2+binding+protein+in+the+serum+of+patients+with+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">N -glycan structures of Wisteria floribunda agglutinin-positive Mac2 binding protein in the serum of patients with liver fibrosis.</a> Glycobiology. 31 (10), 1268-1278 (2021).</li>
<li>Rawitch, A. B., Pollock, H. G., Yang, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thyroglobulin+glycosylation%3A+Location+and+nature+of+the+N-Linked+oligosaccharide+units+in+bovine+thyroglobulin%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Thyroglobulin glycosylation: Location and nature of the N-Linked oligosaccharide units in bovine thyroglobulin.</a> Arch Biochem Biophys. 300 (1), 271-279 (1993).</li>
<li>Dang, K., Zhang, W., Jiang, S., Lin, X., Qian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+lectin+microarrays+for+biomarker+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+Open%22%5BJournal%5D)">Application of lectin microarrays for biomarker discovery.</a> Chemistry Open. 9 (3), 285-300 (2020).</li>
<li>Chen, S., Qin, R., Mahal, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sweet+systems%3A+Technologies+for+glycomic+analysis+and+their+integration+into+systems+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biochem+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Sweet systems: Technologies for glycomic analysis and their integration into systems biology.</a> Crit Rev Biochem Mol Biol. 56 (3), 301-320 (2021).</li>
<li>Dwivedi-Agnihotri, H., Srivastava, A., Shukla, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+biotinylation+of+purified+proteins+for+measuring+protein-protein+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Reversible biotinylation of purified proteins for measuring protein-protein interactions.</a> Methods Enzymol. 633, 281-294 (2020).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auto-lectin+dotcoding+by+two+octopuses%3A+Rapid+analysis+of+fluorescence-labeled+glycoproteins+by+an+8-channel+fully-automatic+bead+array+scanner+with+a+rolling-circle+detector%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Auto-lectin dotcoding by two octopuses: Rapid analysis of fluorescence-labeled glycoproteins by an 8-channel fully-automatic bead array scanner with a rolling-circle detector.</a> Anal Chem. 95 (32), 11868-11873 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.2 מ"ל 8 צינורות PCR + מכסה שטוח</td><td>FastGene</td><td>FG-0028FC/SE</td><td>לחלוקה ואחסון של ריאגנטים לתיוג ביוטין</td></tr><tr><td>2.0 מ"ל חלבון SC Micro Tube LB</td><td>SARSTEDT AG&Co. KG</td><td>72.694.600</td><td>לטעינת דגימות בתוכנת ניתוח LuBEA-VIII</td></tr><tr><td></td><td>SAS Institute Inc.</td><td>JMP 17</td><td></td></tr><tr><td>יינון אנטי סטטי. 110 וולט</td><td>Plas-Labs</td><td>800-AS/SPI</td><td>השתמש בעת הכנסת חרוזים לקצה BIST.</td></tr><tr><td>פינצטה אנטי סטטית NK2A</td><td>RUBIS&nbsp;</td><td>9-5681-01</td><td>יש להשתמש בעת הכנסת חרוזים ל-BIST Tip.</td></tr><tr><td>מכשיר מדידת תגובה אוטומטי</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>LuBEA</td><td>כל הנתונים במחקר זה התקבלו באמצעות LuBEA-VIII. בעוד ש-LuBEA ממוסחרת, LuBEA-VIII נמצאת כעת בשלב הפיתוח. ניתן למצוא את אתר האינטרנט לפרטי המוצרים של LuBEA ו-LuBEA-VIII בכתובת ה-URL הבאה (https://www.pss.co.jp/english/technology/apit/bist02.html).</td></tr><tr><td>ביוטין-(AC5)2 סולפו-אוסו</td><td>דוג'ינדו</td><td>341-06801</td><td>כמגיב ביוטינילציה</td></tr><tr><td>חרוז מרווח BIST- V-11</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td></td><td>קוטר F4938000: 1 מ"מ</td></tr><tr><td>קצה BIST ונדן</td><td>דיוק מערכת מדע ושות', בע"מ</td><td>F4930-000</td><td>מלאו את הקצה הריק הזה בחרוזים.</td></tr><tr><td>סידן כלורי</td><td>Wako</td><td>039-00475</td><td>להכנת פתרונות חיץ</td></tr><tr><td>יכול לקבל פתרון אות 2</td><td>TOYOBO</td><td>NKB-301</td><td>מגיב חוסם זה טוב לשיטה זו</td></tr><tr><td>CentriVap Benchtop רכזי ואקום</td><td>Labconco</td><td>7810010</td><td>לייבוש של מגיב ביוטינילציה. ההחלפה הניתנת על ידי חברות אחרות אפשרית.</td></tr><tr><td>מצע ECL מערבי ברור&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>1705060</td><td>למדידת הדגימות על ידי LuVEA VIII</td></tr><tr><td>מלכודת קרה CentriVap סדרת</td><td>Labconco</td><td>7460040</td><td>לייבוש מגיב ביוטינילציה. ההחלפה הניתנת על ידי חברות אחרות אפשרית.</td></tr><tr><td>גליצין</td><td>וואקו</td><td>077-00735</td><td>להכנת תמיסות חיץ</td></tr><tr><td>מנגן(II) כלוריד טטרהידרט</td><td>וואקו</td><td>139-00722</td><td>להכנת תמיסות חיץ</td></tr><tr><td>Milli-Q התייחסות</td><td>MERCK</td><td>ZIQ7000T0C</td><td>כמים דה-יונאטים לדילול ריאגנטים ומאגרים</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Wako</td><td>162-19321</td><td>להכנת תמיסות חיץ</td></tr><tr><td>פרוקסידאז סטרפטווידין</td><td>ג'קסון</td><td>016-030-084</td><td>נוגדן זה טוב לניתוח גליקוביסט. זה שימושי לאיתור הכתם המערבי, אם כי ניתן לספק תחליפים על ידי חברות אחרות.</td></tr><tr><td>חרוז בדיקה</td><td>דיוק מערכת מדע ושות', בע"מ</td><td>FP4936000</td><td>להכנת חרוזים קבועים בלקטין. ראה Shimazaki, H. et al., Current Protocols in Protein Science, 2020 בסעיף הפניה לפירוט.</td></tr><tr><td>צינורות חלבון LoBind 1.5 מ"ל</td><td>Eppendorf</td><td>0030108442</td><td>השתמש בעת הכנת הדגימות כגון ביוטינילציה.</td></tr><tr><td>סיליקה ג'ל (לייבוש)</td><td>כימיקל קאנטו</td><td>37039-02</td><td>יש להשתמש בעת אחסון קצה הגליקוביסט ומגיב ביוטינילציה מיובש.</td></tr><tr><td>גיליון להסרת חשמל סטטי M</td><td>TRUSCO NAKAYAMA</td><td>SD5050</td><td>השתמש בעת הכנסת חרוזים לקצה BIST.</td></tr><tr><td>SV Cartridge II</td><td>Daido Chemical Industry</td><td>ED041</td><td>למדידת הדגימות על ידי LuVEA VIII</td></tr><tr><td>Table Microcentrifuge-CAPSULEFUGE</td><td>TOMY</td><td>PMC-060</td><td>לסיבוב התערובת בכל תהליך</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Nacalai tesque</td><td>35501-15</td><td>להכנת תמיסות חיץ</td></tr></tbody></table>

הערכה גליקולית-איכותית מהירה של חלבונים רקומביננטיים באמצעות מערכת אוטומטית לחלוטין

Rapid Glyco-Qualitative Assessment of Recombinant Proteins Using a Fully Automated System

Protein glycosylation, a critical post-translational modification, influences the stability, efficacy, and immunogenicity of recombinant proteins, ...

rapid-glyco-qualitative-assessment-recombinant-proteins-using-fully

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

במחקר זה, אנו מתארים פרוטוקול משופר עבור microarray תפוקה גבוהה מרובב נוגדנים עם שיטת הזיהוי lectin כי ניתן להשתמש פרופיל glycosylation של חלבונים מסוימים. פרוטוקול זה כולל ריאגנטים אמינים חדשים מפחית באופן משמעותי את הזמן, עלויות, ציוד מעבדה דרישות לעומת בהליך הקודם.

נוגדן microarray כימי חסומים פרופיל תפוקה גבוהה מרובב של Glycosylation חלבון מסוים בדגימות מורכבות

במחקר זה הושווה ביטוי של חלבון רקומביננטי אנושי מטרה בפלטפורמות ייצור שונות. התמקדנו בתרבויות מסורתיות מבוססות תסיסה ובצמחים, תיארנו את ההגדרה של כל מערכת והדגשנו, על בסיס התוצאות המדווחות, את המגבלות והיתרונות הגלומים בכל פלטפורמה.

ניתוח השוואתי של ביטוי חלבון רקומביננטי בBiofactories שונה: חיידקים, תאי חרקים וצמחי מערכות

אנו מציגים שיטה מודולרית אוטומטית בעלת תפוקה גבוהה לזיהוי ואפיון של אקסופוליסכרידים מיקרוביאליים בקנה מידה קטן. שיטה זו משלבת בחירה מוקדמת מהירה לניתוח הכמות הכוללת של פוליסכרידים המופרשים עם טביעת אצבע מפורטת של פחמימות כדי לאפשר סינון מהיר של זני חיידקים שבודדו לאחרונה או אוספי זנים שלמים.

פלטפורמה הגבוהה הקרנת מודולרי האוטומטי תפוקת Exopolysaccharide בשילוב עם ניתוח רגיש מאוד טביעות אצבע פחמימות

פרוטוקול בעל תפוקה גבוהה פותח לטיהור משולב של פרוטאומיקה וגליקומיקה וכימות LC-MS/MS בפלזמה. ניתוח Deamidation של מוטיבים של גליקוזילציה המקושרים ל-N היה ספציפי לאתרים דה-גליקוזיליים. כימות מדויק של N-גליקנים הושג על ידי צימוד הפרדת N-גליקן בסיוע מסנן לנורמליזציה של האינדיבידואליות בעת תיוג עם אסטרטגיית תגי גליקן הידרזיד.

Glycomics כמוני ואסטרטגית טיהור המשולבת פרוטאומיקה

מאמר זה מתאר מתודולוגיה להכין דגימות רקמות וכלי דם לצורך ניתוח MS המאפשרת (1) ניתוח של הרכב החלבון ECM, (2) זיהוי של אתרי glycosylation, ו (3) אפיון ההלחנה של צורות glycan. מתודולוגיה זו יכולה להיות מיושמת, עם שינויים קלים, כדי המחקר של ECM ברקמות אחרות.

Glycoproteomics של מטריקס: שיטה Intact ניתוח Glycopeptide באמצעות ספקטרומטריית מסה

עבודה זו מציגה את הפוטנציאל של טכנולוגיית מערך (PGA) glycan המודפס על הניתוח של מחזורי נוגדנים אנטי-פחמימות בבעלי חיים קטנים.

מערך Glycan המודפס: טכניקה רגישה לניתוח של הרפרטואר של מחזורי נוגדנים אנטי-פחמימות בבעלי חיים קטנים

פרוטוקול מפורט עבור הפעולה בו-זמניות של תרביות תאים מקבילים 48 בתנאים מגוונים במערכת microbioreactor מוצג. תהליך התרבות תאים, קציר וניתוח כייל נוגדנים הבאים מתוארים.

השימוש תפוקה גבוהה אוטומטית Microbioreactor מערכת לייצור של מודל IgG1 בתאים צ'ו

פרוטוקול מפורט לטיהור וניתוח מאוחר יותר של נוגדן חד שבטיים מתוך נוזל שנקטפו לתרבות התא (HCF) של microbioreactors חקנים אוטומטיים תוארה. השימוש בניתוח כדי לקבוע תכונות איכות קריטיות (CQAs) ולמקסם את נפח מדגם מוגבל כדי לחלץ מידע חיוני מוצג גם.

טיהור וניתוח של נוגדן חד שבטיים מן הסינית שחלות אוגר תאים באמצעות מערכת Microbioreactor חקן אוטומטי

אימונוגלובולין G (IgG) N-גליקן מאופיין באמצעות כרומטוגרפיה של אינטראקציה הידרופילית. בנוסף, המבנה של IgG N-גליקן מופרד בבירור. המוצג כאן הוא מבוא לשיטה ניסיונית זו, כך שניתן להשתמש בה באופן נרחב בהגדרות מחקר.

אימונוגלובולין G N-גליקן ניתוח באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית במיוחד

דפוס הגליקוזילציה של הנוגדן קובע את ביצועיו הקליניים, ולכן נמשכים המאמצים התעשייתיים והאקדמיים לשלוט בגליקוזילציה. מאחר שקמפיינים טיפוסיים של גליקו-הנדסה הם עתירי זמן ועבודה, יצירת פרוטוקול מהיר לאפיון ההשפעה של גנים של גליקוסילציה באמצעות השתקה חולפת תתברר כיעילה.

גליקו-הנדסה מהירה של נוגדנים בתאי שחלת אוגר סיניים

פרוטוקול זה מתאר את ייצור ריבנוקלאז SLFN14 הרקומביננטי האנושי ואת ניתוחו הסטוכיומטרי באמצעות פוטומטריית מסה.<br...

ייצור מהיר של SLFN14 ריבונוקלאז רקומביננטי וניתוח סטויכיומטרי באמצעות פוטומטריית מסה

למדו ניתוח גליקולי איכותי מהיר של חלבונים רקומביננטיים באמצעות מערכת אוטומטית לחלוטין. שיטה זו מפחיתה משמעותית את כוח האדם הנדרש ומאפשרת זיהוי ביומרקרים ספציפיים למחלה.

הערכה גליקולית-איכותית מהירה של חלבונים רקומביננטיים באמצעות מערכת אוטומטית לחלוטין

גלה סרטונים נוספים