עכבר יילודים בידוד מח עצם והכנת מקרופאגים שמקורם במח עצם
May 24th, 2024
פרוטוקול זה מתאר שיטה לא אנזימטית ופשוטה לבידוד תאי מח עצם של עכבר יילודים בני 7-9 ימים ויצירת מקרופאגים ממוינים באמצעות סופרנאטנט של תאי L929 כמקור לגורם מגרה מושבת גרנולוציטים (M-CSF). המקרופאגים שמקורם במח עצם נותחו עוד יותר עבור אנטיגנים פני השטח F4/80, CD206, CD11b וכשירות תפקודית.
מטרת מחקר זה היא להבין חלק מהמגבלות בתגובה החיסונית המוקדמת לזיהום חיידקי. כדי להשיג זאת, עלינו לפתח ולהשתמש במודלים מחקריים ספציפיים ליילודים. בידוד מח עצם מגור בן יום שבע הוא מאתגר ולא מבוסס היטב.
מקרופאגים שמקורם במח עצם בילודים רגישים ונוטים ללחץ בהשוואה ל- BMDM אחרים. הטכניקה המשמשת בפרוטוקול זה היא פשוטה וניתנת לשחזור. שיטה זו מנחה את המשתמשים בבידוד מח עצם מעכברי יילודים בני שבעה עד תשעה ימים ללא שימוש באנזימים כלשהם.
מחקר זה מספק אסטרטגיה סטנדרטית ליצירת מקרופאגים שמקורם במח עצם מעכברים ילודים, שניתן להשתמש בהם כדי לענות על שאלות על אימונולוגיה של יילודים. שיטה זו הניתנת לשחזור מספקת מודל ספציפי לגיל לקידום מחקר חיסוני בילודים בתחומי התמחות רבים.
סקירה כללית
פרוטוקול זה מתאר שיטה לא אנזימטית לבידוד תאי מח העצם של עכברים ניאו-נטיים וייצור מקרופאגים מובחנים. המחקר מתמקד באתגרים של עבודה עם עכברים ניאו-נטיים בני 7-9 ימים וברגישות המקרופאגים המופקים ממח העצם שלהם.
רכיבי מחקר עיקריים
תחום המדע
- מדעי המוח
- אימונולוגיה
- ביולוגיה תאית
רקע
- הבנת תגובות החיסון המוקדמות לזיהומים חיידקיים.
- אתגרים בבידוד מח העצם מעכברים ניאו-נטיים.
- מקרופאגים המופקים ממח העצם של ניאו-נטים רגישים ונתונים ללחץ.
- הצורך בטכניקות שניתן לשחזרן במחקר ניאו-נטלי.
מטרת המחקר
- פיתוח שיטה אמינה לבידוד מח העצם מעכברים ניאו-נטיים.
- ייצור מקרופאגים תפקודיים למחקרים על תגובות חיסון.
- שיפור ההבנה של תגובות חיסון ניאו-נטליות.
שיטות ששימשו
- בידוד מח העצם מעכברים ניאו-נטיים בני 7-9 ימים.
- שיטה לא אנזימטית לבידוד תאים.
- שימוש בסופרנטנט של תאי L929 כמקור ל-M-CSF.
- ניתוח אנטיגנים על-משטחים ויכולת תפקודית של מקרופאגים.
תוצאות עיקריות
- בידוד מוצלח של מקרופאגים המופקים ממח העצם של ניאו-נטים.
- אפיון מקרופאגים באמצעות אנטיגנים על-משטח F4/80, CD206 ו-CD11b.
- הוכחת יכולת תפקודית במקרופאגים שהופקו.
- אימות השיטה כפשוטה וניתנת לשחזור.
מסקנות
- הפרוטוקול מספק שיטה אמינה לחקר תגובות חיסון ניאו-נטליות.
- ניתן להשתמש במקרופאגים המבודדים למחקר אימונולוגי נוסף.
- טכניקה זו עשויה לסייע בקידום מחקרים על בריאות ניאו-נטלית.
שאלות נפוצות
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:10
Non‐Enzymatic Method for Isolating Neonatal Mouse Bone Marrow Cells
2:42
Differentiation of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Supernatant of L929 Cells
4:37
Assessing Phagocytic Function of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Fluorescent Bacterial Uptake Assay
