Name: שיטות חלופיות לאיתור ייצור אניון סופראוקסיד בטסיות הדם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-29T14:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: חקור שיטות חלופיות לאיתור אניון סופראוקסיד בטסיות דם באמצעות DHE ו-CMH. טכניקות אלו מאפשרות זיהוי מדויק של מיני חמצן בתהליכי הפעלת טסיות ובמחלות תרומבוטיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>איתור אניון סופראוקסיד בטסיות באמצעות הדמיית פלואורסצנטיות ו-EPR

<table><tbody><tr><td>1-הידרוקסי-3-מתוקסיקרבוניל-2,2,5,5-טטרמתילפירולידין (CMH)</td> <td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-02.1-50mg</td><td>Reagent for EPR (spin probe)</td></tr><tr><td>BD FACSAria III</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>NA</td><td>זרימה ציטומטר</td></tr><tr><td>בקר סרום אלבומין</td><td>Merck / Sigma</td><td>A7030</td><td>עבור &mu;-ציפוי שקופיות</td></tr><tr><td>Bruker E-scan M (Noxyscan)</td> <td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>&nbsp; NOX-E.11-BES&nbsp;</td><td>ספקטרומטר EPR</td></tr><tr><td>קטלאז&ndash; פוליאתילן גליקול (PEG-Cat.)</td><td>Merck/Sigma</td><td>C4963</td><td>נבלות מי חמצן (בקרת ספציפיות)</td></tr><tr><td>ChronoLog דגם 490+4</td><td>Labmedics/Chronolog</td><td>NA</td><td>Aggregometer</td></tr><tr><td>CM רדיקלי</td><td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-20.1-100mg&nbsp;</td><td>מגיב ל- EPR (בקרת כיול)</td></tr><tr><td>דפרוקסאמין&nbsp;</td><td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-09.1-100mg&nbsp;</td><td>מגיב ל- EPR</td></tr><tr><td>דיאתילדיתיוקרבמט (DETC)&nbsp;</td><td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-10.1-1g&nbsp;</td><td>מגיב ל- EPR</td></tr><tr><td>Dihydroethidium</td><td>Thermo Fisher Scientifics</td><td>D11347</td><td>בדיקת אניון סופראוקסיד</td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד</td><td>Merck/Sigma</td><td>34869</td><td>להכנת תמיסת מלאי&nbsp;</td></tr><tr><td>צלחות שעווה איטום EPR</td><td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-A.3-VPM</td><td>מתכלה למים בדרגת EPR</td></tr><tr><td>EPR</td><td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-07.7.1-0.5L&nbsp;</td><td>מגיב ל- EPR</td></tr><tr><td>פיברינוגן מפלזמה אנושית</td><td>Merck/Sigma</td><td>F4883</td><td>לציפוי &mu;-slide</td></tr><tr><td>FITC אנטי אנושי CD41 נוגדן</td><td>BioLegend</td><td>303704</td><td>צביעה ספציפית לטסיות דם לזרימה ציטומטריה</td></tr><tr><td>קובטות זכוכית&nbsp;</td><td>Labmedics/Chronolog</td><td>P/N 312</td><td>מתכלה לדגירה באגרגומטר</td></tr><tr><td>הורם קולגן</td><td>Labmedics/Chronolog</td><td>P/N 385</td><td>לגירוי טסיות</td></tr><tr><td>דם ImageJ&nbsp;</td><td>המכונים הלאומיים לבריאות (NIH)</td><td>NA</td><td>ImageJ 1.53t (וויין רסבנד)</td></tr><tr><td>אינדומתצין</td><td>Merck/Sigma</td><td>I7378</td><td>לבידוד טסיות</td></tr><tr><td>מיקרופיפטות DURAN 50&micro; l</td><td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-G.6.1-50&micro; L</td><td>מתכלה עבור EPR</td></tr><tr><td>פולי-L-ליזין הידרוכלוריד</td><td>Merck/Sigma</td><td>P2658</td><td>לציפוי &mu;-slide</td></tr><tr><td>פרוסטגלנדין E1 (PGE1)</td><td>Merck/Sigma</td><td>P5515</td><td>לבידוד</td></tr><tr><td>טסיות דם נתרן ציטראט (תמיסה 4% w/v)</td><td>Merck/Sigma</td><td>S5770</td><td>לבידוד טסיות</td></tr><tr><td>מוטות ערבוב (מצופה טפלון)</td><td>Labmedics/Chronolog</td><td>P/N 313</td><td>מתכלה לדגירה באגרגומטר Superoxide</td></tr><tr><td>dismutase&ndash&ndash; פוליאתילן גליקול (PEG-SOD)</td> <td>Merck/Sigma</td><td>S9549</td><td>סופראוקסיד אניון נבלות (בקרת ספציפיות)</td></tr><tr><td>תרומבין מפלזמה אנושית</td><td>Merck/Sigma</td><td>T6884</td><td>לגירוי טסיות דם וציפוי &mu;-slide</td></tr><tr><td>VAS2870</td><td>Enzo Life Science</td><td>BML-EI395</td><td>מעכב NOX</td></tr><tr><td>Zeiss 510 LSM מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>Zeiss</td><td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטות חלופיות לאיתור ייצור אניון סופראוקסיד בטסיות הדם 

Alternative Methods for the Detection of Superoxide Anion Generation in Platelets

עבור זיהוי ציטומטריית זרימה של פלואורסצנטיות DHE, אנו מראים תוצאות מייצגות עבור טסיות דם במנוחה (איור 3A) או מגורות עם תרומבין של 0.1 יחידה/מ"ל (איור 3B). תפוקת O2•- כומתה כעוצמת פלואורסצנטיות ממוצעת של טסיות (MFI), כפי שמוצג עבור גירוי עם תרומבין של 0.1 יחידה/מ"ל (איור 3C) או פפטיד הקשור לקולגן (CRP) של 3 מיקרוגרם/מ"ל (איור 3D). נצפתה עלייה של פי שניים / שלושה בצביעת DHE כתוצאה מגירוי טסיות. כדי לוודא ש-O2•- נמדד, אנו מציעים להשתמש ב-O2•- scavenger pegylated-superoxide dismutase (PEG-SOD, 100 יחידות/מ"ל), ואילו כדי לזהות את המקור של O2•- השתמשנו במעכב NOX VAS2870 (10 מיקרומטר). הן עבור קולגן והן עבור טרומבין, PEG-SOD ו-VAS2870 ביטלו את העלייה בפלואורסצנטיות DHE הנגרמת על ידי הפעלת טסיות, ואישרו כי המדידה ספציפית עבור O2•- וכי מקורותיהם בתנאים אלה הם אנזימי NOX.
לצורך זיהוי פלואורסצנטי של DHE, אנו מציגים נתונים מניסויים שהעריכו את הייצור של O2•- ברגע ההיצמדות לקולגן או פיברינוגן (וב-10 הדקות הבאות) (איור 4A) או מניסויים שמטרתם להעריך את דור O2•- מטסיות שקודם לכן הודבקו ל-PLL לאחר גירוי עם טרומבין (איור 4B). כצפוי, היצמדות ל-PLL אינה גורמת לייצור חזק של O2•-. ככל הנראה משום שצורה זו של היצמדות תלויה באינטראקציה אלקטרוסטטית ללא התחלת תגובת איתות45, מה שהופך גישה זו למתאימה למדידת פלט O2•- בתגובה לתוספת של אגוניסטים מסיסים. כדי לוודא שפרוטוקול זה מאפשר זיהוי של O2•-, ניתן להשתמש בנבלות או במעכבים סלקטיביים. הראינו במחקרים קודמים כי N-אצטיל-ציסטאין (NAC) יכול לסלק O2•- ולבטל פלואורסצנטיות טסיות בניסויים אלה46. כאן אנו מראים שמעכב NOX סלקטיבי VAS2870 מפחית באופן יעיל ומיידי פלואורסצנטיות בטסיות דם שנצמדות לקולגן או לפיברינוגן (איור 4A) או מגיבות לתרומבין (איור 4B). זה מצביע על כך ש-NOXs הם המקור של O2•- בתנאי ניסוי אלה. סרטים מייצגים עבור פלואורסצנטיות DHE (עירור 405 ננומטר) בתגובה להידבקות לקולגן או פיברינוגן או גירוי על ידי טרומבין של טסיות הנצמדות ל- PLL כלולים כקובץ משלים 1, קובץ משלים 2 וקובץ משלים 3, בהתאמה. יש לציין כי PEG-SOD, אשר שימש בהצלחה במערכי ניסוי אחרים כ-O2•- נבלות, אינו יעיל בניסוי מסוג זה. אין לנו הסבר ברור לכך כרגע. אנו יכולים לשער כי PEG-SOD מגיע לתאים שבהם O2•- גורם לפלואורסצנטיות מוגברת בבדיקות מבוססות הדימות עם יעילות ירודה או קינטיקה איטית. ייתכן שיידרשו חקירות ממוקדות נוספות כדי להבהיר נקודה זו.
יישמנו את המדידה של O2•- על ידי EPR בטסיות במחקרים שונים שפורסמו בעבר 1,13,47,48,49,50. שלב מכריע בטכניקה זו הוא הכנת עקומת כיול באמצעות CM● זמין מסחרית (כלומר, תוצר התגובה בין גשושית הספין CMH ו- O2•- והמינים המהדהדים שנמדדו על ידי EPR). התגובה של CMH ו-O2•- מוצגת באיור 5A, ודוגמאות מייצגות של אות EPR המושרה על-ידי ריכוזים שונים של CM● מוצגות באיור 5B. הנתונים מריכוזי CM● שונים שימשו לבניית עקומת כיול המתארת את המתאם הליניארי בין כמות CMH מחומצנת לבין עוצמת אות EPR בדגימות (איור 5C). המשוואה שלהלן מתארת את המתאם בין ריכוז CM● לבין עוצמת אות EPR והיא נקודת המוצא לחישוב עקומת הכיול עבור הניסויים במחקר זה (משוואה 1):
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/66647/66647eq01v2.jpg" style="margin: auto;">
מכיוון שגם ריכוזי CM● וגם עוצמת ה- EPR המתאימה להם התקבלו בניסוי, ניתן לחשב את השיפוע ואת יירוט ציר Y של עקומת הכיול. בדוגמה המוצגת באיור 5C, שיפוע = 1,002,169 ויירוט = 596,383. לכן, ניתן לכתוב מחדש את המשוואה עבור עקומת הכיול כך:
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/66647/66647eq02.jpg" style="margin: auto;">
על ידי סידור מחדש של המשוואה לעיל, ניתן לחשב ריכוז CM● עבור דגימות שונות בהתבסס על ערכי עוצמת EPR שלהן (משוואה 2):
<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/66647/66647eq03v2.jpg" style="margin: auto;">
לאחר שריכוז CM● בדגימות ידוע, ניתן לחשב את קצב הייצור שלו לטסיות וליחידת זמן בעזרת המשוואה הבאה (משוואה 3):
<img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/66647/66647eq04v2.jpg" style="margin: auto;">
באמצעות משוואה 2, ניתן לכתוב מחדש את משוואה 3 כ- (משוואה 4):
<img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/66647/66647eq05v2.jpg" style="margin: auto;">
אשר בדוגמה המוצגת באיור 5C ניתן לכתוב מחדש כך:
<img alt="Equation 6" src="/files/ftp_upload/66647/66647eq06v2.jpg" style="margin: auto;">
קצב חמצון CMH יתבטא כאטומולים של CM● הנוצרים לכל טסיות לדקה. ניתן להשתמש בערך זה כדי להשוות את קצב יצירת O2•- בין ניסויים לתורמים, דבר שאינו אפשרי עם גשושיות פלואורסצנטיות כמו DHE (או DCFDA). גשושיות פלואורסצנטיות מאפשרות בדרך כלל רק להעריך את ההשפעה של תנאים שונים על יצירת O2•- כשינויים בעוצמת הפלואורסצנטיות באותו ניסוי. באשר לכל הטכניקות המתוארות במאמר זה, הספציפיות של הזיהוי אושרה עם נבלות ROS (למשל, PEG-SOD, NAC) או מעכבים סלקטיביים של אנזימים המייצרים אניון סופראוקסיד (למשל, VAS2870 לעכב NOXs). כאן אנו מציגים נתונים עבור גירוי טסיות (איור 6) באמצעות תרומבין (איור 6A,C,E) או קולגן (איור 6B,D,F). עבור שני האגוניסטים, נעשה שימוש ב-PEG-SOD כדי לאשר ש-O2•- מזוהה, בעוד שחוסר ההשפעה של pegylated-catalase (PEG-Cat.) מצביע על כך שמי חמצן אינם מזוהים על-ידי שיטה זו (איור 6C,D, בהתאמה). VAS2870 מבטל את אותות ה-EPR המושרים על-ידי תרומבין (איור 6E) וקולגן (איור 6F), מה שמרמז על כך ש-NOXs הם המקור העיקרי לטסיות O2•- בתגובה לשני האגוניסטים האלה.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66647/66647fig01.jpg"> איור 1: ניתוח ציטומטריית זרימה של מתלי טסיות. (A) הצגה אופיינית של חלקות פיזור קדימה (FSC) וצד (SSC) עבור טסיות מבודדות. (B) הצביעה החיסונית של תרחיף הטסיות עם נוגדן נגד CD41 מאשרת &gt;98% מהחלקיקים בתכשיר כטסיות דם. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66647/66647fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66647/66647fig02.jpg"> איור 2: תגובה כימית של DHE עם אניון סופראוקסיד ותכונות ROS אחרות ותכונות ספקטרליות של מוצריו. מבנה ותכונות ספקטרליות של DHE ושני תוצרי החמצון שלו 2-הידרוקסי-אתידיום (2OH-Et+), שנוצר על ידי תגובה עם אניונים סופראוקסידים, ואתידיום (Et+), שנוצר על ידי תגובה עם סוגים אחרים של ROS (למשל, רדיקל הידרוקסיל ומי חמצן). שיא העירור ב-405 ננומטר, המודגש על-ידי מלבן כחול מקווקו באיור, הוא ספציפי עבור 2OH-Et+ ולכן ניתן להשתמש בו כדי לזהות/למדוד O2•-. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66647/66647fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66647/66647fig03.jpg"> איור 3: ייצור אניון סופראוקסיד תלוי פקקת וקולגן שזוהה על-ידי DHE וציטומטריית זרימה. היסטוגרמות מייצגות לצביעת DHE של (A) במנוחה ו-(B) טסיות דם מגורות טרומבין. הסרגל מציין ערכי צביעת DHE מתחת ל-500, שהם 70.7% ו-16.1% עבור טסיות דם במנוחה וטרומבין, בהתאמה. טכניקה זו שימשה להערכת ייצור אניון סופראוקסיד ב (C) 0.1 יחידה / מ"ל תרומבין ו (D) 3 מיקרוגרם / מ"ל טסיות מגורה קולגן. PEG-SOD (100 יחידה/מ"ל) שימש כדי לאשר שאניונים סופראוקסידים נמדדים בניסוי זה, בעוד 10 מיקרומטר VAS2870 שימשו לזיהוי אנזימי NOX כמקור לאניונים סופראוקסיד. כל נקודת נתונים חושבה כעוצמת פלואורסצנטיות ממוצעת (MFI) מ-50,000 טסיות, וכל ניסוי חזר על עצמו חמש פעמים בלתי תלויות (n = 5), כאשר ממוצע ± SEM מוצג בגרפים. המובהקות הסטטיסטית הוערכה על ידי ANOVA חד-כיווני עם מבחן Tukey לאחר השוואות זוגיות (** = p &lt; 0.01, *** = p &lt; 0.001). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66647/66647fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66647/66647fig04.jpg"> איור 4: ייצור אניון סופראוקסיד תלוי קולגן, פיברינוגן ותרומבין שזוהה על-ידי הדמיית פלואורסצנטיות של DHE. (A) קינטיקה של ייצור אניון סופראוקסיד הוערכה עבור טסיות הנצמדות לקולגן או לפיברינוגן. טסיות הדם חולקו על שקופיות μ מצופות דקה אחת לאחר תחילת ההדמיה, ואילו 10 מיקרומטר VAS2870 נוסף 5 דקות מתחילת אוסף התמונות. (B) קינטיקה של ייצור אניון סופראוקסיד לטסיות דם בעת גירוי עם טרומבין. טסיות הדם הורשו להיצמד לשקופיות μ מצופות PLL במשך 10 דקות לפני תחילת אוסף התמונות. לאחר 2 דקות נוסף תרומבין 0.1 יחידה/מ"ל, ולאחר 5 דקות נוספות נוסף 10 מיקרומטר VAS2870 (כלומר, 7 דקות מתחילת ההדמיה). ערכת הניסוי מוצגת בחלק העליון של הלוחות, בעוד תמונות מייצגות מ 0 דקות, 1 דקה, 3 דקות, 6 דקות ו 9 דקות מוצגות באמצע הלוחות. כימות פלואורסצנטי DHE חד-טסיות מוצג בתחתית הלוחות והתקבל על ידי ניתוח עוצמת פלואורסצנטיות באמצעות ImageJ. הנתונים הם ממוצע ± SEM מ 8-12 טסיות לכל מצב ב 4 ניסויים עצמאיים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66647/66647fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66647/66647fig05.jpg"> איור 5: חישובי עקומת כיול וקצב חמצון CMH. (A) מבנה כימי ותכונות EPR של CMH ו-CM●. (B) דוגמאות מייצגות של נתוני EPR עבור ריכוזים שונים של CM● (100 ננומטר עד 10 מיקרומטר). (C) עקומת כיול של עוצמת EPR לעומת ריכוז CM● . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66647/66647fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66647/66647fig06.jpg"> איור 6: זיהוי של ייצור אניון סופראוקסיד על-ידי טסיות דם לאחר גירוי טרומבין או קולגן. תפוקת האניון הסופראוקסיד נמדדה על ידי EPR עם בדיקת הספין CMH בטסיות הדם שעוררו עם (A) 0.1 יחידה/מ"ל תרומבין או (B) 3 מיקרוגרם/מ"ל קולגן. (ג, ד) ריכוז של 100 יחידות / מ"ל של מסלק אניון סופראוקסיד PEG-SOD או 100 יחידות / מ"ל של מי חמצן scavenger pegylated catalase (PEG-Cat.) נכלל בתנאים שנבדקו עבור שני האגוניסטים. המקור של אניון סופראוקסיד נחקר על ידי דגירה משותפת עם מעכב NOX VAS2870 (10 מיקרומטר). גם תרומבין (E) וגם קולגן (F) תלויים בפעילות NOX לייצור אניון סופראוקסיד. לאורך כל האיור, קצב התגובה של אניון CMH/סופראוקסיד חושב מתוך עקבות EPR, כמתואר בכתב היד (משוואה 4). הנתונים הם ממוצעים ± SEM מ 5 (C,D) ו 4 ניסויים עצמאיים (E,F). המובהקות הסטטיסטית הוערכה על ידי ANOVA חד-כיווני עם מבחן Tukey לאחר השוואות זוגיות (** = p &lt; 0.01, *** = p &lt; 0.001). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66647/66647fig06large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
קובץ משלים 1: סרט מייצג לפלואורסצנטיות DHE (עירור 405 ננומטר) בתגובה להידבקות בקולגן. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66647/Suppl%20file%201.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>
קובץ משלים 2: סרט מייצג עבור פלואורסצנטיות DHE (עירור 405 ננומטר) בתגובה להידבקות פיברינוגן. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66647/Suppl%20file%202.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>
קובץ משלים 3: סרט מייצג עבור פלואורסצנטיות DHE (עירור 405 ננומטר) בתגובה לגירוי על ידי טרומבין של טסיות הנצמדות ל- PLL. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66647/Suppl%20file%203.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>

Reactive oxygen species (ROS) are highly unstable oxygen-containing molecules. Their chemical instability makes them extremely reactive and gives them the ...

alternative-methods-for-detection-superoxide-anion-generation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

פאראמגנטיים אלקטרונים תהודה (EPR) ספקטרוסקופיה הועסק לזהות תחמוצת החנקן מתאי אנדותל העורקים שור ו אניון קיצוני superoxide של נויטרופילים האדם באמצעות ברזל (II)-N-methyl-D-glucamine dithiocarbamate, Fe...

זיהוי של תחמוצת החנקן אניון קיצוני superoxide ידי ספקטרוסקופיה פאראמגנטיים אלקטרונים תהודה בין תאים באמצעות מלכודות ספין

סרטון זה מדגים את השיטה להעריך את ההשפעה של לחץ גזירה על טסיות הדם. טיפול בנוגדנים גורם לדיסוציאציה ולשינויים קונפורמטיביים בקומפלקסים מכניים, מפעיל את טסיות הדם ומבטא סמנים על פני השטח. סמנים אלה נצפים באמצעות immunostaining ו cytometry זרימה.

ההשפעות של לחץ גזירה על טסיות שטופלו בנוגדנים נגד קולטנים מכנו-סנסוריים

כאן אנו מראים טסיות אדם מבודדים יכולים לשמש נגיש vivo לשעבר מודל ללמוד עיבודים מטבוליים בתגובה במתחם שאני מעכב rotenone. גישה זו מעסיקה עקיבת איזוטופי וכימות ביחס ידי ספקטרומטריית כרומטוגרפיה-מסה הנוזלית וניתן ליישם במגוון רחב של עיצובי מחקר.

ניתוח LC-MS של טסיות האדם כפלטפורמה ללימוד מטבוליזם מיטוכונדריאלי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לטפל להשתמש הפוטנציאל של טסיות דם כמו חיישן רגיש מאוד תחמוצת החנקן בדם. זה מתאר טסיות הראשונית הכנה ושימוש חנקיתי ו רווית תאי דם אדומים גנרטורים תחמוצת החנקן.

זיהוי מבוסס על טסית דם של תחמוצת החנקן בדם על ידי מדידת זרחון VASP

היווצרות טסיות דם מעודדות נקשרה עם סיכון מוגבר לפקקת. מוצג כאן פרוטוקול מדויק לבידוד טסיות דם שטופות מדם אדם, שנועד לכמת את החשיפה של פוספטידיל-סרין ושחרור מיקרו-שלפוחית, שהם מאפיינים ייחודיים של טסיות מעודדות.

אפיון טסיות מעודדות קרישה על ידי מדידת חשיפה לפוספטידיל-סרין ושחרור מיקרו-שלפוחיות מטסיות אדם מטוהרות

ציטומטריית זרימה רב-צבעונית עבור טסיות יכולה לזהות תת-סוגים חדשים של טסיות דם בתוך תת-אוכלוסיות טסיות קלאסיות, כגון טסיות מנוחה, אגרגטוריות, פרוקו-קרישה ואפופטוטיות. זה מאפשר השוואה של דפוסי תת-אוכלוסייה שונים המושרים על ידי אגוניסטים שונים של טסיות דם. כאן מתואר בפירוט הליך להקמת פאנל ציטומטריית זרימה רב צבעוני.

ניתוח תת-אוכלוסיות טסיות על ידי ציטומטריית זרימה רב-צבעונית

הפרוטוקול הנוכחי מספק מערך מקיף של נהלים הדרושים לניתוח טסיות דם פרו-קרישיות, המציגות תכונות חופפות של נמק, אפופטוזיס והפעלת טסיות דם.

ניתוח מקיף של טסיות דם מקרישות המציגות מאפיינים של נמק, אפופטוזיס והפעלת טסיות דם

פרוטוקול זה מתאר גישה פשוטה דבק, סרט המבוסס על מדגם של עגבניות ושאר משטחים תוצרת טרייה, ואחריו איתור מהיר של כל...

שילוב של הדגימה דבק קלטת מבוססי פלואורסצנטי באתרו הכלאה עבור איתור מהיר של סלמונלה על תוצרת טרייה

הצלת Arenaviruses רקומביננטי מcDNAs המשובטים, גישה המכונה להפוך גנטיקה, מאפשרת לחוקרים לחקור את התפקיד של מוצרים גנטיים נגיפיים ספציפיים, כמו גם את תרומתו של תחומים ושאריות הספציפיים השונים שלהם, להיבטים רבים ושונים של הביולוגיה של arenavirus . כמו כן, להפוך טכניקות גנטיקה בשורות תאי ה-FDA (Vero) לפיתוח חיסון מספק אפשרויות חדשות לייצור חיסונים יעילים ובטוחים כדי להילחם Arenaviruses פתוגניים אדם.

דור של Arenavirus רקומביננטי לפיתוח חיסון בתאי Vero-FDA

חברים של סוג Burkholderia הם פתוגנים חשיבות קלינית. אנו מתארים שיטה לסך מיצוי חלבון חיידקים, תוך שימוש בהפרעה מכאנית, וג'ל אלקטרופורזה 2-D לניתוח proteomic שלאחר מכן.

הפקת חלבון סה&quot;כ ו2-D שיטות ג&#39;ל אלקטרופורזה עבור<em&gt; Burkholderia</em&gt; מינים

חקור שיטות חלופיות לאיתור אניון סופראוקסיד בטסיות דם באמצעות DHE ו-CMH. טכניקות אלו מאפשרות זיהוי מדויק של מיני חמצן בתהליכי הפעלת טסיות ובמחלות תרומבוטיות.

שיטות חלופיות לאיתור ייצור אניון סופראוקסיד בטסיות הדם

גלה סרטונים נוספים