Name: שיטות חלופיות לאיתור ייצור אניון סופראוקסיד בטסיות הדם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-29T14:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: חקור שיטות חלופיות לאיתור אניון סופראוקסיד בטסיות דם באמצעות DHE ו-CMH. טכניקות אלו מאפשרות זיהוי מדויק של מיני חמצן בתהליכי הפעלת טסיות ובמחלות תרומבוטיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>איתור אניון סופראוקסיד בטסיות באמצעות הדמיית פלואורסצנטיות ו-EPR

<table><tbody><tr><td>1-הידרוקסי-3-מתוקסיקרבוניל-2,2,5,5-טטרמתילפירולידין (CMH)</td> <td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-02.1-50mg</td><td>Reagent for EPR (spin probe)</td></tr><tr><td>BD FACSAria III</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>NA</td><td>זרימה ציטומטר</td></tr><tr><td>בקר סרום אלבומין</td><td>Merck / Sigma</td><td>A7030</td><td>עבור &mu;-ציפוי שקופיות</td></tr><tr><td>Bruker E-scan M (Noxyscan)</td> <td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>&nbsp; NOX-E.11-BES&nbsp;</td><td>ספקטרומטר EPR</td></tr><tr><td>קטלאז&ndash; פוליאתילן גליקול (PEG-Cat.)</td><td>Merck/Sigma</td><td>C4963</td><td>נבלות מי חמצן (בקרת ספציפיות)</td></tr><tr><td>ChronoLog דגם 490+4</td><td>Labmedics/Chronolog</td><td>NA</td><td>Aggregometer</td></tr><tr><td>CM רדיקלי</td><td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-20.1-100mg&nbsp;</td><td>מגיב ל- EPR (בקרת כיול)</td></tr><tr><td>דפרוקסאמין&nbsp;</td><td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-09.1-100mg&nbsp;</td><td>מגיב ל- EPR</td></tr><tr><td>דיאתילדיתיוקרבמט (DETC)&nbsp;</td><td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-10.1-1g&nbsp;</td><td>מגיב ל- EPR</td></tr><tr><td>Dihydroethidium</td><td>Thermo Fisher Scientifics</td><td>D11347</td><td>בדיקת אניון סופראוקסיד</td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד</td><td>Merck/Sigma</td><td>34869</td><td>להכנת תמיסת מלאי&nbsp;</td></tr><tr><td>צלחות שעווה איטום EPR</td><td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-A.3-VPM</td><td>מתכלה למים בדרגת EPR</td></tr><tr><td>EPR</td><td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-07.7.1-0.5L&nbsp;</td><td>מגיב ל- EPR</td></tr><tr><td>פיברינוגן מפלזמה אנושית</td><td>Merck/Sigma</td><td>F4883</td><td>לציפוי &mu;-slide</td></tr><tr><td>FITC אנטי אנושי CD41 נוגדן</td><td>BioLegend</td><td>303704</td><td>צביעה ספציפית לטסיות דם לזרימה ציטומטריה</td></tr><tr><td>קובטות זכוכית&nbsp;</td><td>Labmedics/Chronolog</td><td>P/N 312</td><td>מתכלה לדגירה באגרגומטר</td></tr><tr><td>הורם קולגן</td><td>Labmedics/Chronolog</td><td>P/N 385</td><td>לגירוי טסיות</td></tr><tr><td>דם ImageJ&nbsp;</td><td>המכונים הלאומיים לבריאות (NIH)</td><td>NA</td><td>ImageJ 1.53t (וויין רסבנד)</td></tr><tr><td>אינדומתצין</td><td>Merck/Sigma</td><td>I7378</td><td>לבידוד טסיות</td></tr><tr><td>מיקרופיפטות DURAN 50&micro; l</td><td>Noxygen Science trasfer and Diagnostics GmbH</td><td>NOX-G.6.1-50&micro; L</td><td>מתכלה עבור EPR</td></tr><tr><td>פולי-L-ליזין הידרוכלוריד</td><td>Merck/Sigma</td><td>P2658</td><td>לציפוי &mu;-slide</td></tr><tr><td>פרוסטגלנדין E1 (PGE1)</td><td>Merck/Sigma</td><td>P5515</td><td>לבידוד</td></tr><tr><td>טסיות דם נתרן ציטראט (תמיסה 4% w/v)</td><td>Merck/Sigma</td><td>S5770</td><td>לבידוד טסיות</td></tr><tr><td>מוטות ערבוב (מצופה טפלון)</td><td>Labmedics/Chronolog</td><td>P/N 313</td><td>מתכלה לדגירה באגרגומטר Superoxide</td></tr><tr><td>dismutase&ndash&ndash; פוליאתילן גליקול (PEG-SOD)</td> <td>Merck/Sigma</td><td>S9549</td><td>סופראוקסיד אניון נבלות (בקרת ספציפיות)</td></tr><tr><td>תרומבין מפלזמה אנושית</td><td>Merck/Sigma</td><td>T6884</td><td>לגירוי טסיות דם וציפוי &mu;-slide</td></tr><tr><td>VAS2870</td><td>Enzo Life Science</td><td>BML-EI395</td><td>מעכב NOX</td></tr><tr><td>Zeiss 510 LSM מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>Zeiss</td><td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטות חלופיות לאיתור ייצור אניון סופראוקסיד בטסיות הדם 

Alternative Methods for the Detection of Superoxide Anion Generation in Platelets

עבור זיהוי ציטומטריית זרימה של פלואורסצנטיות DHE, אנו מראים תוצאות מייצגות עבור טסיות דם במנוחה (איור 3A) או מגורות עם תרומבין של 0.1 יחידה/מ"ל (איור 3B). תפוקת O2•- כומתה כעוצמת פלואורסצנטיות ממוצעת של טסיות (MFI), כפי שמוצג עבור גירוי עם תרומבין של 0.1 יחידה/מ"ל (איור 3C) או פפטיד הקשור לקולגן (CRP) של 3 מיקרוגרם/מ"ל (איור 3D). נצפתה עלייה של פי שניים / שלושה בצביעת DH...

Reactive oxygen species (ROS) are highly unstable oxygen-containing molecules. Their chemical instability makes them extremely reactive and gives them the ...

alternative-methods-for-detection-superoxide-anion-generation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

פאראמגנטיים אלקטרונים תהודה (EPR) ספקטרוסקופיה הועסק לזהות תחמוצת החנקן מתאי אנדותל העורקים שור ו אניון קיצוני superoxide של נויטרופילים האדם באמצעות ברזל (II)-N-methyl-D-glucamine dithiocarbamate, Fe...

זיהוי של תחמוצת החנקן אניון קיצוני superoxide ידי ספקטרוסקופיה פאראמגנטיים אלקטרונים תהודה בין תאים באמצעות מלכודות ספין

סרטון זה מדגים את השיטה להעריך את ההשפעה של לחץ גזירה על טסיות הדם. טיפול בנוגדנים גורם לדיסוציאציה ולשינויים קונפורמטיביים בקומפלקסים מכניים, מפעיל את טסיות הדם ומבטא סמנים על פני השטח. סמנים אלה נצפים באמצעות immunostaining ו cytometry זרימה.

ההשפעות של לחץ גזירה על טסיות שטופלו בנוגדנים נגד קולטנים מכנו-סנסוריים

כאן אנו מראים טסיות אדם מבודדים יכולים לשמש נגיש vivo לשעבר מודל ללמוד עיבודים מטבוליים בתגובה במתחם שאני מעכב rotenone. גישה זו מעסיקה עקיבת איזוטופי וכימות ביחס ידי ספקטרומטריית כרומטוגרפיה-מסה הנוזלית וניתן ליישם במגוון רחב של עיצובי מחקר.

ניתוח LC-MS של טסיות האדם כפלטפורמה ללימוד מטבוליזם מיטוכונדריאלי

פרוטוקול הטיפול פלזמה הפיזי קר תפוקה גבוהה של נוזלים ותאים מוצג. זה כרוך בהגדרת גז הזנה שונים יצירות להצתה פלזמה, מדידת ספקטרום הפליטה של הפלזמה, וניתוח עוקבות של נוזלים ופעילות הסלולר לאחר טיפול פלזמה.

מחקר בסיסי ברפואה פלזמה - הגישה של תפוקה של נוזלים תאים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לטפל להשתמש הפוטנציאל של טסיות דם כמו חיישן רגיש מאוד תחמוצת החנקן בדם. זה מתאר טסיות הראשונית הכנה ושימוש חנקיתי ו רווית תאי דם אדומים גנרטורים תחמוצת החנקן.

זיהוי מבוסס על טסית דם של תחמוצת החנקן בדם על ידי מדידת זרחון VASP

היווצרות טסיות דם מעודדות נקשרה עם סיכון מוגבר לפקקת. מוצג כאן פרוטוקול מדויק לבידוד טסיות דם שטופות מדם אדם, שנועד לכמת את החשיפה של פוספטידיל-סרין ושחרור מיקרו-שלפוחית, שהם מאפיינים ייחודיים של טסיות מעודדות.

אפיון טסיות מעודדות קרישה על ידי מדידת חשיפה לפוספטידיל-סרין ושחרור מיקרו-שלפוחיות מטסיות אדם מטוהרות

חילוף החומרים של טסיות הדם מעניין, במיוחד בכל הנוגע לתפקיד של היפראקטיביות והיפראקטיביות של טסיות דם בדימום והפרעות פקקת. בידוד טסיות הדם מפלזמה הכרחי לכמה בדיקות מטבוליות; מוצגת כאן שיטה לבידוד מטבוליטים תוך-תאיים מטסיות דם שטופות.

הכנת טסיות דם אנושיות שטופות למחקרי שטף מטבולי כמותי

ציטומטריית זרימה רב-צבעונית עבור טסיות יכולה לזהות תת-סוגים חדשים של טסיות דם בתוך תת-אוכלוסיות טסיות קלאסיות, כגון טסיות מנוחה, אגרגטוריות, פרוקו-קרישה ואפופטוטיות. זה מאפשר השוואה של דפוסי תת-אוכלוסייה שונים המושרים על ידי אגוניסטים שונים של טסיות דם. כאן מתואר בפירוט הליך להקמת פאנל ציטומטריית זרימה רב צבעוני.

ניתוח תת-אוכלוסיות טסיות על ידי ציטומטריית זרימה רב-צבעונית

הפרוטוקול הנוכחי מספק מערך מקיף של נהלים הדרושים לניתוח טסיות דם פרו-קרישיות, המציגות תכונות חופפות של נמק, אפופטוזיס והפעלת טסיות דם.

ניתוח מקיף של טסיות דם מקרישות המציגות מאפיינים של נמק, אפופטוזיס והפעלת טסיות דם

פרוטוקול זה מתאר גישה פשוטה דבק, סרט המבוסס על מדגם של עגבניות ושאר משטחים תוצרת טרייה, ואחריו איתור מהיר של כל...

שילוב של הדגימה דבק קלטת מבוססי פלואורסצנטי באתרו הכלאה עבור איתור מהיר של סלמונלה על תוצרת טרייה

חקור שיטות חלופיות לאיתור אניון סופראוקסיד בטסיות דם באמצעות DHE ו-CMH. טכניקות אלו מאפשרות זיהוי מדויק של מיני חמצן בתהליכי הפעלת טסיות ובמחלות תרומבוטיות.

שיטות חלופיות לאיתור ייצור אניון סופראוקסיד בטסיות הדם

גלה סרטונים נוספים