Name: הכנה וניתוח של שקופיות היסטולוגיות של גלגלי עיניים של חולדה ועכבר להערכת הרשתית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: למדו הכנת שקופיות היסטולוגיות מגלגלי עיניים של מכרסמים להערכת הרשתית. שיטה זו מאפשרת הדמיה ברורה של הרשתית הפנימית ומספקת מידע תאי מפורט עם פחות חפצים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>הערכת עובי הרשתית וספירת שכבות תאי גנגליון בגלגלי עיניים של מכרסמים

<ol><li>Kels, B. D., Grzybowski, A., Grant-Kels, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ocular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Human ocular anatomy.</a> Clin Dermatol. 33 (2), 140-146 (2015).</li>
<li>Gupta, M. P., Herzlich, A. A., Sauer, T., Chan, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+anatomy+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Retinal anatomy and pathology.</a> Dev Ophthalmol. 55, 7-17 (2016).</li>
<li>Masland, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+diversity+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Neuronal diversity in the retina.</a> Curr Opin Neurobiol. 11 (4), 431-436 (2001).</li>
<li>Vecino, E., Rodriguez, F. D., Ruzafa, N., Pereiro, X., Sharma, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glia-neuron+interactions+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Glia-neuron interactions in the mammalian retina.</a> Prog Retin Eye Res. 51, 1-40 (2016).</li>
<li>Boulton, M., Dayhaw-Barker, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+retinal+pigment+epithelium%3A+Topographical+variation+and+ageing+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">The role of the retinal pigment epithelium: Topographical variation and ageing changes.</a> Eye (Lond). 15 (Pt 3), 384-389 (2001).</li>
<li>Baden, T., Euler, T., Berens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+retinal+basis+of+vision+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Understanding the retinal basis of vision across species.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (1), 5-20 (2020).</li>
<li>Nguyen-Ba-Charvet, K. T., Chédotal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+retinal+layers%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of retinal layers.</a> C R Biol. 337 (3), 153-159 (2014).</li>
<li>Adams, T., Chernoff, E., Wilson, J., Dharmarajan, S. Reactive muller glia as potential retinal progenitors. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAdams%2C+T+%22InTech%22">InTech</a>. , (2013).</li>
<li>Salman, A., Mcclements, M. E., Maclaren, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+on+the+regeneration+potential+of+m%C3%BCller+glia+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Insights on the regeneration potential of müller glia in the mammalian retina.</a> Cells. 10 (8), 1957(2021).</li>
<li>Marchesi, N., Fahmideh, F., Boschi, F., Pascale, A., Barbieri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+neurodegenerative+diseases%3A+Interconnection+between+retina+and+cortical+areas%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Ocular neurodegenerative diseases: Interconnection between retina and cortical areas.</a> Cells. 10 (9), 2394(2021).</li>
<li>Enoch, J., Mcdonald, L., Jones, L., Jones, P. R., Crabb, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+whether+sight+is+the+most+valued+sense%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Evaluating whether sight is the most valued sense.</a> JAMA Ophthalmol. 137 (11), 1317-1320 (2019).</li>
<li>Struebing, F. L., Geisert, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+animal+models+can+tell+us+about+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">What animal models can tell us about glaucoma.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 134, 365-380 (2015).</li>
<li>Bouhenni, R. A., Dunmire, J., Sewell, A., Edward, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal models of glaucoma.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 692609(2012).</li>
<li>Wilding, L. A., Uchihashi, M., Bergin, I. L., Nowland, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enucleation+for+treating+rodent+ocular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Enucleation for treating rodent ocular disease.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 54 (3), 328-332 (2015).</li>
<li>Lin, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+to+inject+ocular+drug+implants+into+mouse+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol to inject ocular drug implants into mouse eyes.</a> STAR Protoc. 3 (1), 101143(2022).</li>
<li>Lozano, D. C., Twa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+rat+schematic+eye+from+in+vivo+biometry+and+the+correction+of+lateral+magnification+in+sd-oct+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Development of a rat schematic eye from in vivo biometry and the correction of lateral magnification in sd-oct imaging.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (9), 6446-6455 (2013).</li>
<li>Castro, G., Navajas, E., Farah, M. E., Maia, M., Rodrigues, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration%2C+integration%2C+survival%2C+and+differentiation+of+stem+cell-derived+neural+progenitors+in+the+retina+in+a+pharmacological+model+of+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22ISRN+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Migration, integration, survival, and differentiation of stem cell-derived neural progenitors in the retina in a pharmacological model of retinal degeneration.</a> ISRN Ophthalmol. 2013, 752161(2013).</li>
<li>Chai, G. R., Liu, S., Yang, H. W., Chen, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin+protects+against+diabetic+retinopathy+in+rats+by+inducing+heme+oxygenase-1+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Quercetin protects against diabetic retinopathy in rats by inducing heme oxygenase-1 expression.</a> Neural Regen Res. 16 (7), 1344-1350 (2021).</li>
<li>Igarashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tyrosine+triple+mutated+aav2-bdnf+gene+therapy+in+a+rat+model+of+transient+iop+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Tyrosine triple mutated aav2-bdnf gene therapy in a rat model of transient iop elevation.</a> Mol Vis. 22, 816-826 (2016).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+efficacy+of+neural+stem+cells+originating+from+umbilical+cord-derived+mesenchymal+stem+cells+in+diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Therapeutic efficacy of neural stem cells originating from umbilical cord-derived mesenchymal stem cells in diabetic retinopathy.</a> Sci Rep. 7 (1), 408(2017).</li>
<li>Dorfman, D., Aranda, M. L., Rosenstein, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enriched+environment+protects+the+optic+nerve+from+early+diabetes-induced+damage+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Enriched environment protects the optic nerve from early diabetes-induced damage in adult rats.</a> PLoS One. 10 (8), e0136637(2015).</li>
<li>Barber, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+apoptosis+in+the+retina+during+experimental+and+human+diabetes.+Early+onset+and+effect+of+insulin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Neural apoptosis in the retina during experimental and human diabetes. Early onset and effect of insulin.</a> J Clin Invest. 102 (4), 783-791 (1998).</li>
<li>Steinle, J. J., Kern, T. S., Thomas, S. A., Mcfadyen-Ketchum, L. S., Smith, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+basement+membrane+thickness%2C+pericyte+ghosts%2C+and+loss+of+retinal+thickness+and+cells+in+dopamine+beta+hydroxylase+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Increased basement membrane thickness, pericyte ghosts, and loss of retinal thickness and cells in dopamine beta hydroxylase knockout mice.</a> Exp Eye Res. 88 (6), 1014-1019 (2009).</li>
<li>Polley, E. H., Walsh, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+flat+embedding+and+en+face+sectioning+of+the+mammalian+retina+for+autoradiography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Method%22%5BJournal%5D)">A technique for flat embedding and en face sectioning of the mammalian retina for autoradiography.</a> J Neurosci Method. 12 (1), 57-64 (1984).</li>
<li>Turner, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+toluidine+blue-phloxinate+staining+of+glycol+methacrylate+sections+of+retina+and+other+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Stain+Technol%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin toluidine blue-phloxinate staining of glycol methacrylate sections of retina and other tissues.</a> Stain Technol. 55 (4), 229-233 (1980).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+optical+coherence+tomography+and+retinal+histology+in+normal+and+pro23his+retinal+degeneration+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Vis+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Correlation of optical coherence tomography and retinal histology in normal and pro23his retinal degeneration pig.</a> Transl Vis Sci Technol. 7 (6), 18(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>אצטון&nbsp;</td><td>צ'מפור&nbsp;</td><td></td><td></td>111024800</tr><tr><td>פינצטה של דומונט #5, 11 ס"מ, 0.05 x 0.01 מ"מ טיפים</td><td>מכשירים מדויקים בעולם</td><td>14095</td><td>מלקחיים קטנים ומיקרו-כירורגיים</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Mar-Four</td><td>4P.05.2001/L</td><td>תמיסה</td></tr><tr><td>מימית אלכוהול אתילי 96</td>% <td>Chempur&nbsp;</td><td>CH.ET. AL.96% CZDA. </td><td></td></tr><tr><td>CH אלכוהול אתילי 99.9</td>% <td>Chempur&nbsp;</td><td>ח. אטיל. ALK.99,9% BW</td><td>השתמש להכנת תמיסות של 70% ו-80% של</td></tr><tr><td>קרחון EtOH - 86 & deg; C מקפיא בטמפרטורה נמוכה במיוחד NU-9483E</td><td>NuAire</td><td>13027D0034</td><td>טמפרטורת הקפאה - 80 & deg; מגלשות זכוכית</td></tr><tr><td></td><td>C Mar-Four</td><td>MI.15.01673</td><td>מגלשות זכוכית קרקע עם שדה מט דו צדדי לתיאור</td></tr><tr><td>Leica CV5030 כיסוי זכוכית אוטומטי לחלוטין Leica</td><td>Biosystems&nbsp;</td><td>14,04,78,80,101</td><td>אוטם שקופיות אוטומטי&nbsp;</td></tr><tr><td>המטוקסילין מאייר</td><td>Chempur&nbsp;</td><td></td><td></td>124687402</tr><tr><td>תבניות בסיס מתכת 15 מ"מ&nbsp; x 15 מ"מ</td><td>Leica Biosystems&nbsp;</td><td></td><td></td>3803081</tr><tr><td>Microme HM 340 E</td><td>Thermo Scientific</td><td>90-519-0</td><td></td></tr><tr><td>סכיני גילוח Microtome Microtome</td><td>Mar-Four</td><td>HI. N.35</td><td>זווית חיתוך 35&deg;</td></tr><tr><td>קלטת ביופסיה Micro-Twin</td><td>Mar-Four</td><td>LN.13874550</td><td></td></tr><tr><td>מעבד רקמות היברידי למיקרוגל</td><td>Milestone</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multistainer Leica ST5020</td><td>Leica Biosystems&nbsp;</td><td></td><td>מכתים שקופיות אוטומטיים&nbsp;</td></tr><tr><td>סורק שקופיות NanoZoomer 2.0-HT</td><td>Hamamatsu</td><td>C9600</td><td>סורק שקופיות היסטופתולוגי</td></tr><tr><td>NDP.view2 תוכנת צפייה בתמונות</td><td>Hamamatsu</td><td>U12388-01</td><td>תוכנת צפייה בתמונות</td></tr><tr><td>Paraffin Pathowax Plus</td><td>Mar-Four</td><td>4P. PWP.010</td><td>טמפרטורת התכה 56 מעלות; C - 58 &deg; C</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>441244-1KG</td><td>הכן תמיסה של 4% בטבליות PBS</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Merck Millipore</td><td>524650-1EA</td><td>השתמש להכנת תמיסה של מי מלח חוצץ פוספט, לפי הוראות היצרן</td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה פירס, 1.5 מ"ל</td><td>Thermo Scientific</td><td>69715</td><td></td></tr><tr><td>מקרר-מקפיא EN14000AW</td><td>אלקטרולוקס</td><td>925032562-00</td><td>קירור 4 &deg; להב</td></tr><tr><td>אזמל</td> C <td>Swann-Morton</td><td>T.OST. SKAL00.024</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>צ'מפור&nbsp;</td><td></td><td></td>427720906</tr><tr><td>מספריים קפיציים SuperCut, 12.5 ס"מ,</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td></td><td>מעוקלים 501925 מספריים מיקרוכירורגיים מעוקלים וקטנים</td></tr><tr><td>סרט לאוטמים אוטומטיים</td><td>Mar-Four</td><td>KP-3020 / SMRH001</td><td></td></tr><tr><td>קסילן</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>ח. KSYL.5l.METAL.OP&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

הכנה וניתוח של שקופיות היסטולוגיות של גלגלי עיניים של חולדה ועכבר להערכת הרשתית

Preparation and Analysis of Histological Slides of Rat and Mouse Eyeballs to Evaluate the Retina

עם השימוש בפרוטוקול המוצג, ניתן להעריך בפירוט את האנטומיה והמורפולוגיה של מבנים ספציפיים של גלגל העין. הצוות שלנו מתמקד בחקר הפתומנגנונים של ניוון עצבי בהפרעות רשתית, כגון גלאוקומה, רטינופתיה סוכרתית ורטינופתיה יתר לחץ דם. כדי להעריך את המאפיינים של ניוון עצבי ברשתית, הערכנו את RT (גלגל עין של עכבר -איור 2, גלגל עין של חולדה -איור 3), ONL, OPL, INL ו-IPL (גלגל עין של עכבר -איור 4, גלגל עין של חולדה -איור 5), ואת מספר התאים של GCL (גלגל עין של עכבר -איור 6, גלגל עין של חולדה -איור 7). RT ותאי GCL צפויים להיות הגבוהים ביותר ברשתית המרכזית והנמוכים ביותר בפריפריה. על ידי חיתוך גלגל העין בגובה האישון, חתכים דרך הרשתית המרכזית (בקוטב האחורי של גלגל העין) וההיקפית (קרוב לגוף הרירי) מושגות בשקופית אחת.
בעוד שספירת תאי GCL יכולה להיחשב אובייקטיבית למדי, הטיה הנגרמת על ידי חתך מוטה עשויה להשפיע על תוצאות מדידת שכבות הרשתית הספציפיות. כדי למנוע הטיה, ניתן להציג את המדידות כיחס בין עובי שכבה נתונה לערך RT: ONL/RT, OPL/RT, INL/RT ו- IPL/RT.
<img alt="תרשים אנטומיה של העין המציג חלקים מסומנים: רשתית, סקלרה, עדשה, קרנית, עצב הראייה, מקולה." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 
איור 1: אנטומיה של גלגל העין. חתך קשת של גלגל עין עם תיוג המבנים הגדולים ביותר שלו. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="תמונת מיקרוסקופ של חתך רשתית, המציגה שכבות רקמה, מדידת עובי 125 מיקרומטר." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 
איור 2: עובי הרשתית בעכבר. מדידת עובי הרשתית (RT) מהקרום המגביל החיצוני לקרום המגביל הפנימי בנקודה הרחבה ביותר, המסומנת בסרגל הירוק. גלגל עין עכבר (מתח: C57Bl/6, גיל: 44 שבועות). סרגל קנה המידה בפינה השמאלית מראה את האורך של 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig02large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="חתך היסטולוגי המציג שכבות רשתית, בעובי 53.4 מיקרומטר; תמונת מיקרוסקופיה, מחקר רקמות." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 
איור 3: עובי הרשתית בחולדה. מדידת עובי הרשתית (RT) מהקרום המגביל החיצוני לקרום המגביל הפנימי בנקודה הרחבה ביותר, המסומנת בסרגל הירוק. גלגל עין עכברוש (זן: לואיס, גיל: 16 שבועות). סרגל קנה המידה בפינה השמאלית מראה את האורך של 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig03large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="דיאגרמת חתך רקמת רשתית; שכבות שנמדדו: IPL, INL, OPL, ONL; ניתוח מיקרוסקופיה." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig04.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> 
איור 4: שכבות רשתית בעכבר. מדידת העובי של שכבות רשתית בודדות: שכבה גרעינית חיצונית (ONL), שכבת פרספקס חיצונית (OPL), שכבה גרעינית פנימית (INL) ושכבת פרספקס פנימית (IPL), המסומנות בפסים ירוקים. גלגל עין עכבר (מתח: C57Bl/6, גיל: 44 שבועות). סרגל קנה המידה בפינה השמאלית מראה את האורך של 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig04large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="תמונת מיקרוסקופ של חתך רשתית עם שכבות מסומנות: OPL, ONL, IPL, INL; סרגל קנה מידה 100 מיקרומטר." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig05.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> 
איור 5: שכבות רשתית בחולדה. מדידת העובי של שכבות רשתית בודדות: שכבה גרעינית חיצונית (ONL), שכבת פרספקס חיצונית (OPL), שכבה גרעינית פנימית (INL) ושכבת פרספקס פנימית (IPL), המסומנות בפסים ירוקים. גלגל עין עכברוש (זן: לואיס, גיל: 16 שבועות). סרגל קנה המידה בפינה השמאלית מראה את האורך של 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig05large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="קטע היסטולוגיה המציג מבנה סלולרי שכבתי, תמונת מיקרוסקופ, ניתוח רקמות, קנה מידה של 500 מיקרומטר." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig06.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> 
איור 6: ספירת תאים של שכבת תאי גנגליון בעכבר. שיטת ספירת התאים של שכבת תאי הגנגליון (GCL) לאורך הרשתית באורך של 500 מיקרומטר. גופים חד-תאיים זוהו כגופים עגולים, מוכתמים בהמטוקסילין, הממוקמים בתוך שכבת תאי הגנגליון. התאים מסומנים בעיגולים שחורים. גלגל עין עכבר (מתח: DBA/2, גיל: 44 שבועות). סרגל קנה המידה בפינה השמאלית מראה את האורך של 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig06large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="שקופית היסטולוגיה, חתך רשתית; שכבות רקמה גלויות; בדיקה מיקרוסקופית, סולם 100 מיקרומטר." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig07.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> 
איור 7: ספירת תאים של שכבת תאי גנגליון בחולדה. שיטת ספירת התאים של שכבת תאי הגנגליון (GCL) לאורך הרשתית באורך של 100 מיקרומטר. גופים חד-תאיים זוהו כגופים עגולים, מוכתמים בהמטוקסילין, הממוקמים בתוך שכבת תאי הגנגליון. התאים מסומנים בעיגולים שחורים. גלגל עין עכברוש (זן: לואיס, גיל: 16 שבועות). סרגל קנה המידה בפינה השמאלית מראה את האורך של 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig07large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

A rodent eyeball is a powerful tool for researching the pathomechanisms of many ophthalmic diseases, such as glaucoma, hypertensive retinopathy, and many ...

preparation-analysis-histological-slides-rat-mouse-eyeballs-to

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הפרוטוקול המתואר כאן מיועד להערכה מבנית של תכשיר רשתית שלם. זה כולל תיאורים של דיסקציה של רקמות, הרכבה על תוספת ממברנה פוליטטרפלואורואתילן הידרופילית (PTFE), העמסת בולוס עם סמנים פלואורסצנטיים, והשוואה של קיבוע עם קרבודימיד ופרפורמלדהיד לניתוח אימונוהיסטוכימי של רכיבים תאיים וסינפטיים.

פרוטוקול אופטימלי עבור רשתית Wholemount הכנה להדמיה ואימונוהיסטוכימיה

הרשתית המכרסם כבר זמן רב מוכרת כחלון נגיש למוח. במאמר זה טכני אנו מספקים פרוטוקול אשר מעסיק את מודל העכבר של מחלת רשתית הנגרמת חמצן כדי ללמוד את המנגנונים שיובילו לכישלון של התחדשות כלי דם במערכת העצבים המרכזית, לאחר פגיעה איסכמית. המערכת המתוארת גם ניתן לרתום לבחון אסטרטגיות לקידום צמיחה מחודשת של כלי דם פונקציונליים בתוך הרשתית ומערכת העצבים המרכזית.

הערכה של כלי דם התחדשות במערכת העצבים המרכזית באמצעות רשתית העכבר

נדגים שלוש טכניקות להכנת רקמות שונות להמחשת immunohistochemical של pericytes microvascular ברשתית עכברוש, קרי, הקפאה-סעיפים, שלם-טעינות בידוד היפוטוניק של רשת כלי הדם.

הקפאה-מקטעי רשתית, שלם-טעינות, וההכנות להערכת מבודד היפוטוניק להמחשת Immunohistochemical של Microvascular Pericytes

דו ח זה מתאר שיטות מקיפות של הכנת העכבר הקפוא מקטעים רשתית עבור אימונוהיסטוכימיה (IHC).  השיטות שתוארו כוללות ניתוח של הספל האחורי העינית, קיבעון הפרפורמלדהיד, הטבעה של טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT) מדיה ורקמות כיוון, הסרת וכתמים חיסוני.

הכנת שאיפה של העכבר רשתית-סעיפים עבור אימונוהיסטוכימיה

רטינופתיה סוכרתית היא אחד הגורמים המובילים לעיוורון. היסטולוגיה, בדיקת פירוק מחסום רשתית דם, ואנגיוגרפיה פלואורסצנטית הן טכניקות בעלות ערך להבנת הפתופיזיולוגיה של הרשתית, אשר יכול לשפר עוד יותר את ההקרנה היעילה של סמים נגד רטינופתיה סוכרתית.

הערכה פתופיפיזיולוגית של רשתית במודל חולדה

מטרת פרוטוקול זה היא לאפיין מודל חדשני של ניוון עצבי גלאוקומטי המבוסס על צריבה תרמית של 360° של מקלעת כלי הדם הלימבלית, הגורמת ליתר לחץ דם עיני תת-חריף.

צריבה במעגל מלא של מקלעת כלי הדם הלימבלית לגלאוקומה הנגרמת בניתוח במכרסמים

מאמר זה מציג פרוטוקול למיקרו-דיסקציה עינית במכרסמים. התהליך כולל את האינקולציה של גלגל העין יחד עם הממברנה הניקטיבית (כלומר, העפעף השלישי). לאחר מכן מתבצעת הפרדה של המשקפיים האחוריים והקדמיים.

מיקרודיסקציה של עין המכרסם

מודלים של עכברים יכולים להיות כלים שימושיים לחקר הביולוגיה של אפיתל פיגמנטי ברשתית (RPE). נקבע כי עכברים יכולים לפתח מערך של פתולוגיות RPE. כאן, אנו מתארים פרוטוקול פנוטיפ כדי להבהיר ולכמת פתולוגיות RPE בעכברים באמצעות אור, אלקטרונים הולכה ומיקרוסקופ קונפוקלי.

פרוטוקול להערכה וכימות של פתולוגיות אפיתל פיגמנטי ברשתית במודלים עכבריים של ניוון מקולרי הקשור לגיל

מתואר פרוטוקול להכנת הקפאות רשתית של עכברים וביצוע צביעה חיסונית על קולטני אור. מאמר זה מאפשר לחוקרים לייצר באופן עקבי חלקים קפואים ברשתית של עכברים עם מורפולוגיה שמורה היטב ותוצאות צביעה חיסונית באיכות גבוהה.

הקפאה וצביעה חיסונית של רשתית העכבר

B7-H1 (PD-L1) ומחייבה לPD-1 יהווה איתות משמעותית לדיכוי מערכת חיסונית גידול מושרה בmicroenvironment של הגידול. טכניקת immunohistochemical מכתים לאפיין הביטוי והלוקליזציה של B7-H1 באדנוקרצינומה לבלב מתוארת כאן.

Immunohistochemical המכתים של B7-H1 (PD-L1) בפרפין מוטבע-שקופיות של רקמת לבלב אדנוקרצינומה

למדו הכנת שקופיות היסטולוגיות מגלגלי עיניים של מכרסמים להערכת הרשתית. שיטה זו מאפשרת הדמיה ברורה של הרשתית הפנימית ומספקת מידע תאי מפורט עם פחות חפצים.

הכנה וניתוח של שקופיות היסטולוגיות של גלגלי עיניים של חולדה ועכבר להערכת הרשתית

גלה סרטונים נוספים