Name: נהלים לטיפוח חוץ גופי של Treponema pallidum, עגבת Spirochete (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T12:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: למד שיטה לטיפוח חוץ גופי של Treponema pallidum בתרבית משותפת עם תאי יונקים. פרוטוקול זה מאפשר ייצור כמויות גדולות של החיידק ותרביות קלונליות לחקר עגבת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>ניתן להרחבה בגידול חוץ גופי של T. pallidum באמצעות תרבית תאי יונקים

<ol><li>Implementing the global health sector strategies on HIV, viral hepatitis and sexually transmitted infections, 2022-2030: Report on progress and gaps. World Health Organization. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.who.int/publications/i/item/9789240094925">https://www.who.int/publications/i/item/9789240094925</a> 2022-2030 (2024).</li>
<li>Antal, G. M., Lukehart, S. A., Meheus, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endemic+treponematoses%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">The endemic treponematoses.</a> Microbes Infect. 4 (1), 83-94 (2002).</li>
<li>Norris, S. J., Paster, B. J., Smibert, R. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNorris%2C+SJ+%22Bergey%27s+Manual+of+Systematic+Bacteriology%22">Bergey's Manual of Systematic Bacteriology</a>. 4, Springer. New York, NY. (2010).</li>
<li>Lumeij, J. T., Mikalová, L., Šmajs, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+there+a+difference+between+hare+syphilis+and+rabbit+syphilis%3F+Cross+infection+experiments+between+rabbits+and+hares%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Is there a difference between hare syphilis and rabbit syphilis? Cross infection experiments between rabbits and hares.</a> Vet Microbiol. 164 (1-2), 190-194 (2013).</li>
<li>Knauf, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+prevalence+and+genetic+diversity+of+Treponema+paraluisleporidarum+isolates+in+European+lagomorphs%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">High prevalence and genetic diversity of Treponema paraluisleporidarum isolates in European lagomorphs.</a> Microbiol Spectr. 12 (1), e0177423(2024).</li>
<li>Šmajs, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+genome+sequence+of+Treponema+paraluiscuniculi%2C+strain+Cuniculi+A%3A+the+loss+of+infectivity+to+humans+is+associated+with+genome+decay%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Complete genome sequence of Treponema paraluiscuniculi, strain Cuniculi A: the loss of infectivity to humans is associated with genome decay.</a> PLoS One. 6 (5), e20415(2011).</li>
<li>Šmajs, D., Norris, S. J., Weinstock, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+diversity+in+Treponema+pallidum%3A+implications+for+pathogenesis%2C+evolution+and+molecular+diagnostics+of+syphilis+and+yaws%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Genet+Evol%22%5BJournal%5D)">Genetic diversity in Treponema pallidum: implications for pathogenesis, evolution and molecular diagnostics of syphilis and yaws.</a> Infect Genet Evol. 12 (2), 191-202 (2012).</li>
<li>Šmajs, D., Strouhal, M., Knauf, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+human+and+animal+uncultivable+treponemal+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Genet+Evol%22%5BJournal%5D)">Genetics of human and animal uncultivable treponemal pathogens.</a> Infect Genet Evol. 61, 92-107 (2018).</li>
<li>Norris, S. J., Cox, D. L., Weinstock, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+Treponema+pallidum%3A+correlation+of+functional+activities+with+genome+sequence+data%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Biology of Treponema pallidum: correlation of functional activities with genome sequence data.</a> J Mol Microbiol Biotechnol. 3 (1), 37-62 (2001).</li>
<li>Radolf, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treponema+pallidum%2C+the+syphilis+spirochete%3A+making+a+living+as+a+stealth+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Treponema pallidum, the syphilis spirochete: making a living as a stealth pathogen.</a> Nat Rev Microbiol. 14 (12), 744-759 (2016).</li>
<li>Schaudinn, F. R., Hoffman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vorl%C3%A4ufiger+bericht+%C3%BCber+das+Vorkommen+f%C3%BCr+Spirochaeten+in+syphilitischen+Krankheitsprodukten+und+bei+Papillomen%5BTitle%5D)+AND+%22Arb+Gesundh+Amt+Berlin%22%5BJournal%5D)">Vorläufiger bericht über das Vorkommen für Spirochaeten in syphilitischen Krankheitsprodukten und bei Papillomen.</a> Arb Gesundh Amt Berlin. 22, 528-534 (1905).</li>
<li>Schaudinn, F., Hoffmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%C3%9Cber+Spirochaetenbefunde+im+Lymphdr%C3%BCsensaft+Syphilitischer%5BTitle%5D)+AND+%22Deut+Med+Wochenschr%22%5BJournal%5D)">Über Spirochaetenbefunde im Lymphdrüsensaft Syphilitischer.</a> Deut Med Wochenschr. 31 (18), 711-714 (1905).</li>
<li>Turner, T. B., Hollander, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+the+treponematoses%5BTitle%5D)+AND+%22World+Health+Organization%22%5BJournal%5D)">Biology of the treponematoses.</a> World Health Organization. , (1957).</li>
<li>Lukehart, S. A., Marra, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+laboratory+maintenance+of+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Isolation and laboratory maintenance of Treponema pallidum.</a> Curr Protoc Microbiol. , Chapter 12, Unit 12A.1 (2007).</li>
<li>Fieldsteel, A. H., Cox, D. L., Moeckli, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+of+virulent+Treponema+pallidum+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Cultivation of virulent Treponema pallidum in tissue culture.</a> Infect Immun. 32, 908-915 (1981).</li>
<li>Cox, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Culture of Treponema pallidum.</a> Meth Enzymol. 236, 390-405 (1994).</li>
<li>Edmondson, D. G., Hu, B., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vitro+culture+of+the+syphilis+spirochete+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Long-term in vitro culture of the syphilis spirochete Treponema pallidum subsp. pallidum.</a> mBio. 9 (3), e01153-e01218 (2018).</li>
<li>Edmondson, D. G., DeLay, B. D., Kowis, L. E., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameters+affecting+continuous+in+vitro+culture+of+Treponema+pallidum+strains%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Parameters affecting continuous in vitro culture of Treponema pallidum strains.</a> mBio. 12 (1), e03536-e03620 (2021).</li>
<li>Edmondson, D. G., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cultivation+of+the+syphilis+spirochete+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro cultivation of the syphilis spirochete Treponema pallidum.</a> Curr Protoc. 1 (2), e44(2021).</li>
<li>Edmondson, D. G., Wormser, G. P., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+susceptibility+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+to+doxycycline%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">In vitro susceptibility of Treponema pallidum subsp. pallidum to doxycycline.</a> Antimicrob Agents Chemother. 64 (10), e00979-e01020 (2020).</li>
<li>Leimer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+selective+antibiotic+for+Lyme+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A selective antibiotic for Lyme disease.</a> Cell. 184 (21), 5405-5418 (2021).</li>
<li>Haynes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+linezolid+on+Treponema+pallidum%2C+the+syphilis+agent%3A+A+preclinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Efficacy of linezolid on Treponema pallidum, the syphilis agent: A preclinical study.</a> EBioMedicine. 65, 103281(2021).</li>
<li>Houston, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+functional+characterization+of+peptides+with+antimicrobial+activity+From+the+syphilis+spirochete%2C+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Identification and functional characterization of peptides with antimicrobial activity From the syphilis spirochete, Treponema pallidum.</a> Front Microbiol. 13, 888525(2022).</li>
<li>Tantalo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+susceptibility+of+Treponema+pallidum+subspecies+pallidum%3A+an+in-vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Microbe%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial susceptibility of Treponema pallidum subspecies pallidum: an in-vitro study.</a> Lancet Microbe. 4 (12), e994-e1004 (2023).</li>
<li>Hayes, K. A., Dressler, J. M., Norris, S. J., Edmondson, D. G., Jutras, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large+screen+identifies+beta-lactam+antibiotics+which+can+be+repurposed+to+target+the+syphilis+agent%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Antimicrob+Resist%22%5BJournal%5D)">A large screen identifies beta-lactam antibiotics which can be repurposed to target the syphilis agent.</a> NPJ Antimicrob Resist. 1 (1), 4(2023).</li>
<li>Tantalo, L. C., Molini, B. J., Bose, M., Klausner, J. D., Giacani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+isolation+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+from+fresh+and+frozen+needle+aspirates+of+primary+experimental+syphilis+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Sex+Transm+Dis%22%5BJournal%5D)">In vitro isolation of Treponema pallidum subsp. pallidum from fresh and frozen needle aspirates of primary experimental syphilis lesions.</a> Sex Transm Dis. 50 (3), 180-183 (2023).</li>
<li>Edmondson, D. G., De Lay, B. D., Hanson, B. M., Kowis, L. E., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+isolates+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+Nichols+provide+evidence+for+the+occurrence+of+microevolution+during+experimental+rabbit+infection+and+in+vitro+culture%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Clonal isolates of Treponema pallidum subsp. pallidum Nichols provide evidence for the occurrence of microevolution during experimental rabbit infection and in vitro culture.</a> PLoS One. 18 (3), e0281187(2023).</li>
<li>Lin, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+TprK+profiling+of+in+vivo+and+in+vitro-propagated+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+reveals+accumulation+of+antigenic+variants+in+absence+of+immune+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Longitudinal TprK profiling of in vivo and in vitro-propagated Treponema pallidum subsp. pallidum reveals accumulation of antigenic variants in absence of immune pressure.</a> PLoS Negl Trop Dis. 15 (9), e0009753(2021).</li>
<li>De Lay, B. D., Cameron, T. A., De Lay, N. R., Norris, S. J., Edmondson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+transcriptional+profiles+of+Treponema+pallidum+during+experimental+infection+of+rabbits+and+in+vitro+culture%3A+Highly+similar%2C+yet+different%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Comparison of transcriptional profiles of Treponema pallidum during experimental infection of rabbits and in vitro culture: Highly similar, yet different.</a> PLoS Pathog. 17 (9), e1009949(2021).</li>
<li>Romeis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+engineering+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%2C+the+syphilis+spirochete%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Genetic engineering of Treponema pallidum subsp. pallidum, the syphilis spirochete.</a> PLoS Pathog. 17 (7), e1009612(2021).</li>
<li>Phan, A., Romeis, E., Tantalo, L., Giacani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+transformation+and+selection+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro transformation and selection of Treponema pallidum subsp. pallidum.</a> Curr Protoc. 2 (8), e507(2022).</li>
<li>Romeis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+with+an+artificially+impaired+TprK+antigenic+variation+system+is+attenuated+in+the+rabbit+model+of+syphilis%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Treponema pallidum subsp. pallidum with an artificially impaired TprK antigenic variation system is attenuated in the rabbit model of syphilis.</a> bioRxiv. , 524629(2023).</li>
<li>Fieldsteel, A. H., Becker, F. A., Stout, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+survival+of+virulent+Treponema+pallidum+%28Nichols+strain%29+in+cell-free+and+tissue+culture+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Prolonged survival of virulent Treponema pallidum (Nichols strain) in cell-free and tissue culture systems.</a> Infect Immun. 18, 173-182 (1977).</li>
<li>U.S. Department of Health and Human Services. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) 6th Edition. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22U.S.+Department+of+Health+and+Human+Services%2C+Centers+for+Disease+Control+and+Prevention%2C+National+Institutes+of+Health%22">U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health</a>. , (2020).</li>
<li>Norris, S. J., Miller, J. N., Sykes, J. A., Fitzgerald, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+oxygen+tension%2C+sulfhydryl+compounds%2C+and+serum+on+the+motility+and+virulence+of+Treponema+pallidum+%28Nichols+strain%29+in+a+cell-+free+system%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Influence of oxygen tension, sulfhydryl compounds, and serum on the motility and virulence of Treponema pallidum (Nichols strain) in a cell- free system.</a> Infect Immun. 22 (3), 689-697 (1978).</li>
<li>Cox, C. D., Barber, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+uptake+by+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Oxygen uptake by Treponema pallidum.</a> Infect Immun. 10 (1), 123-127 (1974).</li>
<li>Magnuson, H. J., Eagle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+minimal+infectious+inoculum+of+Spirochaeta+pallida+%28Nichols+strain%29%2C+and+a+consideration+of+its+rate+of+multiplication+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Syph%22%5BJournal%5D)">The minimal infectious inoculum of Spirochaeta pallida (Nichols strain), and a consideration of its rate of multiplication in vivo.</a> Am J Syph. 32, 1-18 (1948).</li>
<li>Cumberland, M. C., Turner, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rate+of+multiplication+of+Treponema+pallidum+in+normal+and+immune+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Syph%22%5BJournal%5D)">The rate of multiplication of Treponema pallidum in normal and immune rabbits.</a> Am J Syph. 33, 201-211 (1949).</li>
<li>Norris, S. J., Edmondson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+multiplication+and+subculture+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+in+a+tissue+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the multiplication and subculture of Treponema pallidum subsp. pallidum in a tissue culture system.</a> Infect Immun. 53, 534-539 (1987).</li>
<li>Baseman, J. B., Nichols, J. C., Rumpp, O., Hayes, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Treponema+pallidum+from+infected+rabbit+tissue%3A+resolution+into+two+treponemal+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Purification of Treponema pallidum from infected rabbit tissue: resolution into two treponemal populations.</a> Infect Immun. 10, 1062-1067 (1974).</li>
<li>Hanff, P. A., Norris, S. J., Lovett, M. A., Miller, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Treponema+pallidum%2C+Nichols+strain%2C+by+Percoll+density+gradient+centrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Sex+Transm+Dis%22%5BJournal%5D)">Purification of Treponema pallidum, Nichols strain, by Percoll density gradient centrifugation.</a> Sex Transm Dis. 11, 275-286 (1984).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5 מ' EDTA, pH 8.0</td><td>סיגמא&nbsp;</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>10x ארל' מלחים מאוזנים, ללא Mg2+, Ca2+</td><td>Gibco</td><td>14155063</td><td></td></tr><tr><td>15 ו-50 מ"ל צינורות צנטריפוגות חד פעמיות סטריליות חרוטיות&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>2 מ"ל בקבוקונים קריוגניים&nbsp;</td><td>קורנינג</td><td>430659</td><td></td></tr><tr><td>צלחות תרבית תאים עם 6 בארות לגידול T. pallidum</td><td>פלקון</td><td>353046</td><td>הצלחות חייבות להיות בעלות מכסי אידוי נמוכים.</td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>75 ס"מ <>2 צלוחיות תרבית רקמה עם כובעים מאווררים</td><td>Corning</td><td>43061U</td><td></td></tr><tr><td>93.5% חנקן, 5% CO2, ו-1.5% חמצן למדיום שיווי משקל מראש ותרביות</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>95% חנקן ו-5% CO2 למדיום שיווי משקל מראש ותרביות</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>96 בארות אידוי נמוך, תחתית שטוחה מטופלת בתרבית מיקרו-פלטות</td><td>קורנינג פלקון</td><td>353072</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה רב-ערוצית מתכווננת עם קיבולת 200 UL&nbsp;</td><td></td><td>לא ישים</td><td>לא אופציונלי, אך מועיל מאוד לשיבוט</td></tr><tr><td>מים בדרגת תרבית תאים</td><td>Sigma</td><td>W3500</td><td></td></tr><tr><td>CMRL 1066 ללא L-גלוטמין או פנול אדום</td><td>US</td><td>Biological C5900-03A</td><td></td></tr><tr><td>CO2 עבור אינקובטורים של תלת-גזים ותרביות רקמות&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>מיכל אחסון תרבית תאי חנקן נוזלי קריוגני</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>D-גלוקוז</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>יחידות סינון חד פעמיות, 0.2 ומיקרו; m , > קיבולת 100 מ"ל</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>צנרת חד פעמית: 25 מ"ל, 10 מ"ל, 5 מ"ל, שאיבת</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DL-Dithiothreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>D-Mannitol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1902</td><td></td></tr><tr><td>DMSO (דרגת תרבית תאים סטרילית)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Eagle' s MEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4655</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי, מושבת בחום&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>F4135</td><td>אנו ממליצים בחום על מוצר זה. יש לסנן מראש תאימות לתרבית T. pallidum אם משתמשים במותג או במספר קטלוגי אחר.</td></tr><tr><td>מקפיא עם יכולת שמירה על -70 מעלות; C או -80 ו-deg; C</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>לאחסון T. pallidum; ניתן להשתמש במקום באחסון חנקן נוזלי</td></tr><tr><td>מדיום הקפאה (Sf1Ep בינוני + 10% [v/v] DMSO)</td> <td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>בלוני גז עם אביזרים מתאימים</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>GasPak 150 צנצנת אנאירובית מאווררת (צנצנת בירה)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-816</td><td></td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>תאי ספירת הלבר עם פסיקות תומא</td> הוקסלי ציוד <td></td><td>רפואי ומעבדתי</td><td>לכימות T. pallidum</td></tr><tr><td>Hemocytometer</td><td>N/</td><td>A N/A</td><td>&NBSP; עבור מתג מיכל חממה לכימות תאים Sf1Ep</td></tr><tr><td></td><td>NuAire&nbsp;</td><td>מתג טנק חממת CO2 אוטומטי NU-1550 TankGuard</td><td>אופציונלי, אך מועיל מאוד בשמירה על תנאי O2 מתאימים.</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ הפוך עם אופטיקה של ניגודיות פאזה</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>לצפייה בתרביות תאים Sf1Ep</td></tr><tr><td>L-גלוטמין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>L-היסטידין&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034</td><td></td></tr><tr><td>MEM חומצות אמינו לא חיוניות</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ עם מעבה שדה כהה</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>המיקרוסקופ צריך להיות בעל מטרה של פי 40 ועיניות פי 15.</td></tr><tr><td>MOPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3183</td><td></td></tr><tr><td>מתאם רב ערוצי לשואב&nbsp;</td><td>Integra</td><td>155520</td><td>אופציונלי, אך שימושי לשיבוט</td></tr><tr><td>תאי NaHCO3 (7.5%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>חנקן לחממת תלת-גז</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Resazurin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R7017</td><td></td></tr><tr><td>Sf1Ep (NBL-11) תאים</td> אוסף <td>תרבית מסוג אמריקאי</td><td>CCL-68</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פירובט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8636</td><td></td></tr><tr><td>PBS סטרילי (ללא סידן כלורי ומגנזיום כלוריד)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>מאגרי ריאגנטים סטריליים, 50 או 100 מ"ל גודל</td><td>N/A</td><td>N/A</td><EM<td></td></tr><tr><td>>T. PALLIDUM sample, קפוא או טרי&nbsp;</td><td></td><td></td><td>מזיהום ארנב או מתרבית במבחנה</td></tr><tr><td>אינקובטור תרבית רקמות נשמר ב-37 מעלות; C, 5% CO2</td><td>N/A</td><td>N/A N/A</td><td></td></tr><tr><td>חממת תרבית רקמה תלת-גזית נשמרת ב-34 מעלות; C, 5% CO2, 1.5% O2</td><td>Thermofisher</td><td>Heracell&trade; VIOS 160i Tri-Gas CO2 Incubator</td><td>אופציונלי; ניתן להשתמש בצנצנות אנאירוביות במקום (ראה הפניה 17)</td></tr><tr><td>תמיסת טריפסין-EDTA&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td></td></tr><tr><td>מקור ואקום (למשל ואקום ביתי), צינורות ואקום, מד ואקום ומחברים</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>מים, מתאים לתרבית תאים, מעוקר בפילטר, מטוהר</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W3500</td><td>מומלץ להכנה בינונית; מפחית את שונות התרבית</td></tr></tbody></table>

נהלים לטיפוח חוץ גופי של treponema pallidum, עגבת spirochete

Procedures for In Vitro Cultivation of Treponema pallidum, the Syphilis Spirochete

באמצעות התנאים המתוארים, T. pallidum בדרך כלל שומר על תנועתיות של &gt;90% ומתרבה לוגריתמית עם זמן הכפלה של 33 שעות עד 45 שעות במשך כ-7 ימים לפני הכניסה לשלב הנייח (איור 3). במהלך שבוע אחד הספירוכטות עוברות כ-4-5 הכפלות (איור 4). ). בנוסף, זנים שונים של T. pallidum עשויים לגדול בקצב שונה. זנים של קבוצת SS14 של T. pallidum נוטים להיות בעלי זמני הכפלה איטיים יותר מאלה של קבוצת ניקולס17.
האכלת תרביות עשויה להאריך את זמן התרבית במספר ימים, אך שכבת תאי Sf1Ep נכשלת לעתים קרובות לאחר שבוע של תרבית. יתר על כן, הטרפונמות מגיעות לגבול עליון של אורגניזמים של כ 5 x 107 / מ"ל. תרביות המועברות במרווחים של 7 ימים ממשיכות בדרך כלל את הכפל הלוגריתמי עם שלב פיגור קטן או ללא שלב השהיה. אורגניזמים בשלב הנייח לעתים קרובות הופכים קשים למעבר.
רוב T. pallidum מחוברים לתאי Sf1Ep. עם זאת, מספיק T. pallidum נשאר supernatant כי דגימות בינוניות ניתן להסיר מעת לעת כדי לבדוק את הכדאיות ואת הכפל. אם נדרשת כימות זהיר, יש למדוד את נפח התווך שהוסר, לכמת את מספר T. pallidum ולהוסיף לספירה הסופית בספירה הסופית בעת הקציר.
במחקרים קודמים, יעילות השיבוט (מספר התרביות החיוביות לכל אורגניזם שחוסן) הייתה 12.5% עבור 2 T. pallidum מחוסן לכל באר ו-6.7% עבור 0.5 T. pallidum מחוסן לכל באר27. לכן, סביר להניח שכל באר חיובית מייצגת את הצמיחה של אורגניזם יחיד באחד מהחיסונים האלה. עם זאת, יש לאמת את השיבוט של האוכלוסיות המתקבלות על ידי בחינת התרבות להומוגניות באתרים הטרוגניים בתרבות האם. הדרך הוודאית ביותר להוכיח שהתרבית היא איזוגנית היא באמצעות ריצוף גנום שלם27.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig01.jpg"> איור 1: תרשים זרימה של הליך גידול T. pallidumin vitro . נתון זה הודפס מחדש באישור Edmondson and Norris (2021)19. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig02.jpg"> איור 2: דיאגרמה של המערכת לשיווי משקל ריאגנטים של תרביות T. pallidum לסביבה דלת חמצן. פתח אוורור של צנצנת בירה מחובר באמצעות מפרק T למקור ואקום (כגון ואקום ביתי) ולבלוני גז המכילים תערובות גז מותאמות אישית (5% CO2, חנקן איזון ו-1.5% O2, 5% CO2, חנקן מאוזן). מד ואקום מובנה מודד את הוואקום הנמשך בצנצנת. הוואקום נמשך בצנצנת לכ-58- kPa. הצנצנת המפונה מתמלאת מחדש בהדרגה בתערובות הגז. צנצנת הבירה ממולאת מחדש שלוש פעמים ב-5% CO2, מאזנת חנקן לפני פינוי סופי, וממלאת מחדש ב-95% N2, 5% CO2, 1.5% O2. לאחר מכן מוציאים תרביות או מדיה מהצנצנת ומעבירים במהירות לאינקובטור דל חמצן. לחילופין, ניתן להדק היטב את הצינור בין צנצנת Brewer לבין מפרק ה-T הראשון, לנתק את הצינור ממפרק ה-T, ולהעביר את כל צנצנת Brewer לאינקובטור בטמפרטורה של 34°C. נתון זה הודפס מחדש באישור Edmondson and Norris (2021)19. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig03.jpg"> איור 3: עקומות גדילה של T. pallidum בתרבית עם תאי Sf1Ep עם תווך TpCM-2. תרביות משולשות מקבילות נזרעו עם T. pallidum. העתקים נקטפו בכל נקודת זמן; התוצאות מייצגות את הממוצע + SEM עבור תרבויות אלה. (A) השינויים ב-T. pallidum לכל תרבית ו-(B) אחוזי תנועתיות מוצגים. נתון זה הותאם באישור אדמונדסון ואחרים 18. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig04.jpg"> איור 4: דוגמה למעבר של תרבית חוץ גופית של T. pallidum, זן ניקולס. תרביות משולשות מקבילות נזרעו עם T. pallidum והועברו מדי שבוע באמצעות דילול של 1:20. תרשים שיני המסור מראה את המספרים של T. pallidum לכל תרבית ואת המספר שהועבר לתרבויות חדשות בכל נקודת זמן. התוצאות מייצגות את הממוצע ± SEM עבור שלושה שכפולים ביולוגיים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
טבלה 1: נפח בינוני ויחסי זריעה לכלי תרבית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/Table%201.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.</a>
טבלה 2: מדיה לגידול T. pallidum . יש לעקר את כל המדיה לאחר ההכנה. ניתן לאחסן מדיום Sf1Ep בטמפרטורה של 4°C למשך עד חודשיים. TpCM-2 מיוצר בדרך כלל יום אחד לפני השימוש. מדיום הדיסוציאציה צריך להיות מוקפא ולהקפיא. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/Table%202.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.</a>

נהלים לטיפוח חוץ גופי של Treponema pallidum, עגבת Spirochete

For over a century, Treponema pallidum subsp. pallidum, the spiral-shaped bacterium that causes syphilis, could only be propagated by inoculation and ...

procedures-for-vitro-cultivation-treponema-pallidum-syphilis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מקור: Eggers, C. H. מניפולציה גנטית בתיווך פאג'ים של מחלת ליים Spirochete Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022)סרטון זה מדגים את הכנת תרבית Borrelia burgdorferi מהונדסת גנטית עם DNA בקטריופאג'י רדום הנושא גן עמידות לאנטיביוטיקה. לאחר בחירת אנטיביוטיקה ודגירה, גורם כימי מעורר נזק ל-DNA, מה שמוביל לכריתה, שכפול והרכבה של נגיפים חדשים המכילים את גן העמידות. לאחר צנטריפוגה שנייה והשעיה מחדש, תאי החיידקים המכילים חלקיקים נגיפיים בוגרים מוכנים ליישומים במורד הזרם.

הכנה ואינדוקציה של תרביות Borrelia burgdorferi לייצור חלקיקים נגיפיים

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Cultivation of Pathogenic Spirochetes to Investigate Skin Infection

כימות מהיר ויעיל של גדילת שחפת M. תוך תאית הוא חיוני להמשך טיפולים משופרים נגד שחפת ( שחפת ). פרוטוקול זה מתאר בדיקת זיהוי קולורימטרית מבוססת מרק באמצעות מערכת תרבית נוזלית אוטומטית כדי לכמת את גידול ה-Mtb במקרופאגים שטופלו בטיפולים מוכווני מארח מועמדים.

מערכת תרבית אוטומטית לשימוש בבדיקות פרה-קליניות של טיפולים מכווני מארח לשחפת

בשל האטימות של האדמה, לא ניתן לדמיין בקלות אינטראקציות בין המיקרובים המרכיבים אותה עם רזולוציה תאית. כאן מוצגים שני כלים מיקרופלואידיים, המציעים הזדמנויות חדשות לחקר אינטראקציות פטרייתיות-מיקרוביאליות. המכשירים הם רב-תכליתיים ופשוטים לשימוש, ומאפשרים שליטה מרחבית-טמפורלית גבוהה והדמיה ברזולוציה גבוהה ברמה התאית.

כלים מיקרופלואידיים לחקר אינטראקציות פטרייתיות-מיקרוביאליות ברמה התאית

היכולת של בקטריופאג' להעביר דנ"א בין תאי חיידקים הופכת אותם לכלים יעילים למניפולציה גנטית של החיידקים המארחים שלהם. מוצגת כאן מתודולוגיה לגרום, לשקם ולהשתמש ב-φBB-1, בקטריופאג' של בורליה בורגדורפרי, כדי להמיר דנ"א הטרולוגי בין זנים שונים של ספירוצ'טה של מחלת ליים.

מניפולציה גנטית בתיווך פאגים של מחלת ליים ספירוכטה בורליה בורגדורפרי

תרבית חוץ גופית היא שיטת זיהוי ישירה לנוכחות חיידקים חיים. פרוטוקול זה מתאר שיטות לתרבית של מגוון סוגי Borrelia spirochetes, כולל אלה של Borrelia burgdorferi sensu lato complex, קדחת התקפית של מיני Borrelia ו- Borrelia miyamotoi.  מינים אלה הם חסונים וגדלים לאט, אך ניתן לתרבית אותם.

שיטות גידול של Spirochetes מ Borrelia burgdorferi Sensu Lato קומפלקס קדחת התקפית Borrelia

אלקטרופורציה היא שיטה מהירה שאומצה באופן נרחב להחדרת דנ"א אקסוגני לסוג ריקטסיה. פרוטוקול זה מספק שיטת אלקטרופורציה שימושית לטרנספורמציה של חיידקים תוך תאיים מהסוג Rickettsia.

שיטת אלקטרופורציה להפיכת ריקטסיה spp. עם וקטור מעבורת המבטא חלבון פלואורסצנטי בקווי תאי קרציות

מחקר זה מראה פרוטוקול מפורט לביצוע מיקרוסקופ הרחבת אולטרה-מבנה בשלושה שלבי מחזור חיים במבחנה של טריפנוזומה קרוזי, הפתוגן האחראי למחלת צ'אגאס. אנו כוללים את הטכניקה האופטימלית עבור חלבונים ציטו-שלד ותיוג פאן-פרוטאום.

מיקרוסקופ הרחבה אולטרה-סטרוקטורלי בשלושה שלבי מחזור חיים חוץ גופי של טריפנוזומה קרוזי

מאמר זה מתאר את הליך הקמת ויזואליזציה של biofilm חיידקי גדל בתוך שקופית 8-גם...

ב גיבוש biofilm חוץ גופית ב 8-Slide גם לשכת

טרנספורמציה Cercarial ו במבחנה טיפוח Schistosoma mansoni Schistosomules

למד שיטה לטיפוח חוץ גופי של Treponema pallidum בתרבית משותפת עם תאי יונקים. פרוטוקול זה מאפשר ייצור כמויות גדולות של החיידק ותרביות קלונליות לחקר עגבת.

נהלים לטיפוח חוץ גופי של Treponema pallidum, עגבת Spirochete

גלה סרטונים נוספים