Name: טכניקה למתן תוך אפי של אגרגטים α-סינוקלאין (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: למד טכניקת מתן תוך אפי של אגרגטים α-סינוקלאין במודל עכברים לחקר מחלת פרקינסון. שיטה זו מאפשרת להעריך את התפשטות הפתולוגיה מרירית האף לבלוטת הריח ללא ניתוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>התפשטות α-סינוקלאין: מתן תוך אפי במחלת פרקינסון

<ol><li>Tysnes, O. B., Storstein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Parkinson's disease.</a> J Neural Transm (Vienna). 124 (8), 901-905 (2017).</li>
<li>Goedert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-synuclein+and+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Alpha-synuclein and neurodegenerative diseases.</a> Nature Rev Neurosci. 2, 492-501 (2001).</li>
<li>Conway, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+oligomerization%2C+not+fibrillization%2C+is+a+shared+property+of+both+alpha-synuclein+mutations+linked+to+early-onset+Parkinson%27s+disease%3A+implications+for+pathogenesis+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Acceleration of oligomerization, not fibrillization, is a shared property of both alpha-synuclein mutations linked to early-onset Parkinson's disease: implications for pathogenesis and therapy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (2), 571-576 (2000).</li>
<li>Braak, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+of+brain+pathology+related+to+sporadic+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson's disease.</a> Neurobiol Aging. 24 (2), 197-211 (2003).</li>
<li>Braak, H., Rüb, U., Gai, W. P., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+Parkinson%27s+disease%3A+possible+routes+by+which+vulnerable+neuronal+types+may+be+subject+to+neuroinvasion+by+an+unknown+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Idiopathic Parkinson's disease: possible routes by which vulnerable neuronal types may be subject to neuroinvasion by an unknown pathogen.</a> J Neural Transm (Vienna). 110 (5), 517-536 (2003).</li>
<li>Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T., Olanow, C. W. Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKordower%2C+JH+%22Nat+Med%22">Nat Med</a>. 14 (5), 504-506 (2008).</li>
<li>Li, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+bodies+in+grafted+neurons+in+subjects+with+Parkinson%27s+disease+suggest+host-to-graft+disease+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation.</a> Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).</li>
<li>Luk, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+%CE%B1-synuclein+transmission+initiates+Parkinson-like+neurodegeneration+in+nontransgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Pathological α-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice.</a> Science. 338, 949-953 (2012).</li>
<li>Desplats, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inclusion+formation+and+neuronal+cell+death+through+neuron-to-neuron+transmission+of+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Inclusion formation and neuronal cell death through neuron-to-neuron transmission of alpha-synuclein.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 13010-13015 (2009).</li>
<li>Sawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+disease+primate+model+with+%CE%B1-Synuclein+propagation+from+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">Lewy body disease primate model with α-Synuclein propagation from the olfactory bulb.</a> Mov Disord. 37 (10), 2033-2044 (2022).</li>
<li>Uemura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inoculation+of+%CE%B1-synuclein+preformed+fibrils+into+the+mouse+gastrointestinal+tract+induces+Lewy+body-like+aggregates+in+the+brainstem+via+the+vagus+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Inoculation of α-synuclein preformed fibrils into the mouse gastrointestinal tract induces Lewy body-like aggregates in the brainstem via the vagus nerve.</a> Mol Neurodegener. 13 (1), 21(2018).</li>
<li>Rey, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+transneuronal+propagation+of+alpha-synucleinopathy+triggered+in+olfactory+bulb+mimics+prodromal+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Widespread transneuronal propagation of alpha-synucleinopathy triggered in olfactory bulb mimics prodromal Parkinson's disease.</a> J Exp Med. 213 (9), 1759-1778 (2016).</li>
<li>Rey, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spread+of+aggregates+after+olfactory+bulb+injection+of+%CE%B1-synuclein+fibrils+is+associated+with+early+neuronal+loss+and+is+reduced+long+term%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Spread of aggregates after olfactory bulb injection of α-synuclein fibrils is associated with early neuronal loss and is reduced long term.</a> Acta Neuropathol. 135 (1), 65-83 (2018).</li>
<li>Uemura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Synuclein+spread+from+olfactory+bulb+causes+hyposmia%2C+anxiety%2C+and+memory+loss+in+BAC-SNCA+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">α-Synuclein spread from olfactory bulb causes hyposmia, anxiety, and memory loss in BAC-SNCA mice.</a> Mov Disord. 36 (9), 2036-2047 (2021).</li>
<li>Saito, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+pathology+involves+the+olfactory+cells+in+Parkinson%27s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">Lewy body pathology involves the olfactory cells in Parkinson's disease and related disorders.</a> Mov Disord. 31 (1), 135-138 (2016).</li>
<li>De Luca, C. M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+RT-QuIC+seeding+activity+for+%CE%B1-synuclein+in+olfactory+mucosa+samples+of+patients+with+Parkinson%27s+disease+and+multiple+system+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Efficient RT-QuIC seeding activity for α-synuclein in olfactory mucosa samples of patients with Parkinson's disease and multiple system atrophy.</a> Transl Neurodegener. 8, 24(2019).</li>
<li>Stefani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-synuclein+seeds+in+olfactory+mucosa+of+patients+with+isolated+REM+sleep+behaviour+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Alpha-synuclein seeds in olfactory mucosa of patients with isolated REM sleep behaviour disorder.</a> Brain. 144 (4), 1118-1126 (2021).</li>
<li>Ucciferri, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scoring+central+nervous+system+inflammation%2C+demyelination%2C+and+axon+injury+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Scoring central nervous system inflammation, demyelination, and axon injury in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J Vis Exp. (204), e65738(2024).</li>
<li>Masuda-Suzukake, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-like+spreading+of+pathological+%CE%B1-synuclein+in+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Prion-like spreading of pathological α-synuclein in brain.</a> Brain. 136 (Pt 4), 1128-1138 (2013).</li>
<li>Sawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-dose+intranasal+administration+of+%CE%B1-syn+PFFs+induce+lewy+neurite-like+pathology+in+olfactory+bulbs%5BTitle%5D)+AND+%22Parkinsonism+Relat+Disord%22%5BJournal%5D)">Single-dose intranasal administration of α-syn PFFs induce lewy neurite-like pathology in olfactory bulbs.</a> Parkinsonism Relat Disord. 112, 105440(2023).</li>
<li>Guo, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+administration+of+%CE%B1-synuclein+preformed+fibrils+triggers+microglial+iron+deposition+in+the+substantia+nigra+of+Macaca+fascicularis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Intranasal administration of α-synuclein preformed fibrils triggers microglial iron deposition in the substantia nigra of Macaca fascicularis.</a> Cell Death Dis. 12 (1), 81(2021).</li>
<li>Macdonald, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assembly+of+%CE%B1-synuclein+and+neurodegeneration+in+the+central+nervous+system+of+heterozygous+M83+mice+following+the+peripheral+administration+of+%CE%B1-synuclein+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Assembly of α-synuclein and neurodegeneration in the central nervous system of heterozygous M83 mice following the peripheral administration of α-synuclein seeds.</a> Acta Neuropathol Commun. 9 (1), 189(2021).</li>
<li>Abdelmotilib, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Synuclein+fibril-induced+inclusion+spread+in+rats+and+mice+correlates+with+dopaminergic+Neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">α-Synuclein fibril-induced inclusion spread in rats and mice correlates with dopaminergic Neurodegeneration.</a> Neurobiol Dis. 105, 84-98 (2017).</li>
<li>Tarutani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+fragmented+pathogenic+%CE%B1-Synuclein+seeds+on+prion-like+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The effect of fragmented pathogenic α-Synuclein seeds on prion-like propagation.</a> J Biol Chem. 291 (36), 18675-18688 (2016).</li>
<li>Taguchi, T., Ikuno, M., Yamakado, H., Takahashi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+prodromal+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Animal model for prodromal Parkinson's disease.</a> Int J Mol Sci. 21 (6), 1961(2020).</li>
<li>Bousset, L., Brundin, P., Böckmann, A., Meier, B., Melki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+procedure+for+removal+and+inactivation+of+alpha-Synuclein+assemblies+from+laboratory+materials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">An efficient procedure for removal and inactivation of alpha-Synuclein assemblies from laboratory materials.</a> J Parkinsons Dis. 6 (1), 143-151 (2016).</li>
<li>Fenyi, A., Coens, A., Bellande, T., Melki, R., Bousset, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+efficacy+of+different+procedures+that+remove+and+disassemble+alpha-synuclein%2C+tau+and+A-beta+fibrils+from+laboratory+material+and+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Assessment of the efficacy of different procedures that remove and disassemble alpha-synuclein, tau and A-beta fibrils from laboratory material and surfaces.</a> Sci Rep. 8, 10788(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי All-in-One BZ-X710</td><td>KEYENCE</td><td>N/A</td><td>מיקרוסקופ All-in-One</td></tr><tr><td>Ampicillin נתרן מלח</td><td>נקלאי טסק</td><td>02739-32</td><td></td></tr><tr><td>Bioruptor II</td><td>Sonicbio</td><td>BR2006A</td><td>סוניקטור מסוג אמבט מים.</td></tr><tr><td>Butorphanol tartrate</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>WAK-52850</td><td></td></tr><tr><td>שפופרת תאית</td><td>MISUMI</td><td>UC20-32-100</td><td></td></tr><tr><td>DeepWellMaximizer</td><td>TAITEC</td><td>MBR-022UP</td><td>שייקר</td></tr><tr><td>DynaQualified Cells Zip BL21(DE3)</td><td>BioDynamics Laboratory Inc.</td><td>DS255</td><td>תא מוכשר</td></tr><tr><td>Entellan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>107961</td><td>מדיום הרכבה מהיר למיקרוסקופיה</td></tr><tr><td>Graefe מלקחיים עדינים במיוחד מעוקל</td><td>FST</td><td>11152-10&nbsp;</td><td>מלקחיים</td></tr><tr><td>מספריים עדינים מוקשים</td><td>FST</td><td>14090-09</td><td>מספריים</td></tr><tr><td>היסטופין עכבר כתמים פשוט MAX-PO (R)</td> <td>Nichirei Bioscience</td><td>414341</td><td>פולימר אימונו-פרוקסידאז אוניברסלי, אנטי ארנב</td></tr><tr><td>ImageJ ver 1.52p</td><td>NA</td><td>NA</td><td>https://imagej.net/</td></tr> <tr><td>innova4200</td><td>ניו ברונסוויק</td><td>9105085</td><td>מדעי שייקר אינקובטור</td></tr><tr><td>איזופרופיל-&בטא;- D-thiogalactopyranoside</td><td>Nacalai tesque</td><td>19742-94</td><td></td></tr><tr><td>LB broth, Lennox</td><td>Nacalai tesque</td><td>20066-24</td><td></td></tr><tr><td>Leica EG 1150 H</td><td>Leica</td><td>14 0388 86 108</td><td>מרכז הטמעת רקמות מודולרי</td></tr><tr><td>Leica TP 1020</td><td>Leica</td><td>14 0422 85108</td><td>מעבד רקמות אוטומטי&nbsp;</td></tr><tr><td>Medetomidine</td><td>Fuji Film</td><td>135-17473</td><td></td></tr><tr><td>Microm HM325 Rotary Microtome</td><td>Thermo Scientific</td><td>902100</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Maruishi Seiyaku</td><td>4987-211-76210-0</td><td></td></tr><tr><td>המטוקסילין חדש מסוג</td><td>G Muto</td><td>65-9197-38</td><td>תמיסת המטוקסילין</td></tr><tr><td>מחט מכונפת רגילה לווריד מסוג D, מחט 25G</td><td>TERUMO</td><td>NN2332R</td><td>25G</td></tr><tr><td>אופטימה TLX אולטרה-צנטריפוגה</td><td>בקמן קולר</td><td>8043-30-1197</td><td>אולטרה-צנטריפוגה</td></tr><tr><td>P10 פיפטה</td><td>גילסון</td><td>FA10002P</td><td></td></tr><tr><td>פרפין</td><td>לייקה</td><td>39601095</td><td></td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד</td><td>נקלאי טסק</td><td>30525-89-4</td><td></td></tr><tr><td>ערכת DAB כתם פרוקסידאז</td><td>Nacalai tesque</td><td>25985-50</td><td></td></tr><tr><td>ערכות בדיקת חלבון Pirece BCA</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td>BCA assay</td></tr><tr><td>pRK172</td><td>Addgene</td><td>#134504</td><td>פלסמיד</td></tr><tr><td>Q-Sepharose זרימה מהירה.&nbsp;</td><td>cytiva</td><td>17051001</td><td>שרף חילופי יונים</td></tr></tbody></table>

טכניקה למתן תוך אפי של אגרגטים α-סינוקלאין

Technique for Intranasal Administration of &#945;-Synuclein Aggregates

איור 3 מראה כמה דוגמאות לצברי α-Syn ב-OB. במחקר הנוכחי נתנו צברי α-Syn לתוך הנחיר החד-צדדי. שני חללי האף מופרדים על ידי מחיצת האף, וכל OB מקרין את נוירוני חוש הריח לכל חלל אף בנפרד. לכן, OB בצד הנגדי יכול לשמש כבקרה.
פתולוגיה של P-α-Syn לא נצפתה ב-OB בצד המטופל לאחר חודש ושלושה חודשים (איור 3A, B). אגרגטים דמויי נויריט לוי p-α-Syn נצפו בגלומרולי בצד המטופל לאחר 6 ו -12 חודשים. (איור 3C,D,F,G). הצברים האלה לא נצפו ב-OB בצד הבקרה (איור 3E).
אנו יכולים להעריך את הפתולוגיה של α-Syn על ידי ספירת אגרגטים של α-Syn או בחינת הגודל, וכו ', באמצעות ImageJ (טבלה של חומרים). לדוגמה, בעבר ספרנו ודיווחנו על מספר צברי α-Syn במודלזה 20. ב- OB בצד המטופל, אגרגטים דמויי נויריט לוי ב- OB גדלו באופן משמעותי במשך 12 חודשים (ANOVA חד כיוונית, ואחריה מבחן דנט, p &lt; 0.01; איור 3H). ב- OB בצד הבקרה, ישנם מעט צברי α-Syn.
מחקר קודם הראה כי PFFs שהוזרקו למוח העכבר התפרקו תוך שבוע, ועכבר אנדוגני α-Syn הומר לצברי α-Syn19. במחקר הנוכחי, העלייה בפתולוגיה של α-Syn לאורך זמן מצביעה על כך שעכבר אנדוגני α-Syn הומר לצברי α-Syn על ידי מתן תוך-אפי במינון יחיד של PFFs. תוצאות אלה הצביעו על כך שהפתולוגיה של α-Syn עלולה להתפשט מרירית חוש הריח ל- OB.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig01.jpg"> 
איור 1: שיטת ניהול חלל האף של עכבר. (A) העכבר ממוקם במצב שכיבה כשהראש מוטה מעט כלפי מטה. (B) נחירי העכבר מסומנים על-ידי ראשי חץ צהובים. (ג, ד) תמיסת הפיבריל α-Syn נשללת לנחיר העכבר (C, חץ אדום) ונשאפת במהירות (D, חיצים אדומים). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig02.jpg"> 
איור 2: תיאור השלבים להשגת נורות הריח השלמות. (A) באמצעות מספריים, חותכים את עצם הגולגולת בצורה חדה ורוחבית (קו מקף צהוב). (B) הסר לחלוטין את עצם הגולגולת שעל פקעות הריח (OBs). (C) להפוך את הראש ולהסיר בזהירות את המוח. לנתק את עצבי המוח. (D) לחתוך את עצבי הריח המחוברים לעצם הגולגולת. (E) המוח כולו עם OBs שלמים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig03.jpg"> 
איור 3: P-α-Syn מצטבר בגלומרולי של פקעת הריח. (A-G) P -α-Syn (EP1536Y) אימונוהיסטוכימיה של OB על (A-D) בצד המטופל 1, 3, 6 ו-12 חודשים (1 מ', 3 מ', 6 מ' ו-12 מ', בהתאמה) לאחר מתן תוך-אפי ו-(E) בצד הבקרה 12 חודשים לאחר מתן תוך-אף. (ג, ד) צברי α-Syn דמויי חוט דמוי חוט Lewy neurite מופיעים סביב הגלומרולי. (ו, ז) תמונות מוגדלות הן תמונות בהגדלה גבוהה של p-α-Syn דמוי Lewy neurite 6 ו-12 חודשים לאחר מתן תוך האף. (H) כמות התצהיר p-α-Syn דמוי נויריט לוי ב-OB בצד המטופל והבקרה (n = 4-5). גרפים מראים ממוצע ± SEM. ANOVA חד-כיווני ואחריו מבחן דנט; **&lt;0.01. נתון זה שונה מדוחקודם 20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Parkinson's disease (PD) is a neurodegenerative disorder characterized by the presence of Lewy bodies, which are aggregates of &#945;-synuclein ...

technique-for-intranasal-administration-of-synuclein-aggregates

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מחלת פרקינסון כבר קשור לחשיפה לחומרי הדברה. כאן אנו מציגים שיטה כדי לספק חומרי הדברה באמצעות צינור קיבה בריכוז הרצוי שיטה לנתח את ההשפעה שלהם הצטברות אלפא synuclein במערכת העצבים enteric.

אוראלית של Rotenone באמצעות Gavage וניתוח מקדימה של Alpha-synuclein תכלילים במערכת העצבים enteric

שיטת intranasally מנת להחדיר תרופות לעכברים ערים לצורך מיקוד המוח מתוארת. שיטה זו מאפשרת למינון חוזר לאורך תקופות ארוכות באמצעות ממשל אפי של תרופה ללא הרדמה, ומשלוח אף למוח עם חשיפה מינימאלית מערכתית.

מנהל אפי של Therapeutics CNS לעכברי Awake

סרטון זה מדגים את ההכתמה החיסונית של תאי עצב המטופלים בצברי אלפא-סינוקלאין (αS). תאי העצב מטופלים תחילה באמצעות אגרגטים αS. לאחר מכן הם קבועים, חדירים ומטופלים בתמיסת חסימה. נוגדנים ראשוניים מתווספים, ואחריו נוגדנים משניים המסומנים פלואורסצנטית וכתם גרעיני. לאחר מכן הדגימה מורכבת ונצפית תחת מיקרוסקופ.

אימונוסטיין של נוירונים שטופלו בצברי אלפא-סינוקלאין

סרטון זה מדגים הזרקה של סיבי אלפא-סינוקלאין לעכבר כדי לגרום לדלקת עצבית. הסיבים מוזרקים תוך צפקית לעכבר מהונדס המבטא חלבוני אלפא-סינוקלאין שעברו מוטציה. עם הגעתם למערכת העצבים המרכזית, הסיבים נכנסים לנוירונים וגורמים לצבירה של החלבונים שעברו מוטציה. הצברים התפשטו לתאי עצב שכנים, מיקרוגליה ואסטרוציטים. זיהוי הצברים מעורר תאי מיקרוגליה לגרום לדלקת עצבית, ולפגוע בנוירונים.

השראת דלקת עצבית בעכברים באמצעות הזרקת סיבי אלפא-סינוקלאין

מקור: Ullah, I., et.al. מכשיר מיקום למיקום עכברים במהלך העברת siRNA תוך-אף למערכת העצבים המרכזית. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים טכניקת מתן תוך-אף מדויקת להעברת קומפלקסים של פפטיד-siRNA המכוונים לתאי עצב למוח העכבר באמצעות מכשיר מיקום מיוחד. עכברים מורדמים מאובטחים במצב ראש למטה וקדימה כדי לייעל את שאיפת ה-siRNA תוך מניעת ניקוז ריאות. פפטיד המטרה מקל על ספיגה מתווכת קולטנים בנוירונים, ומאפשר העברת siRNA ממוקדת והשתקת גנים במוח.

אספקה תוך-אפית של siRNA למוח העכבר באמצעות מכשיר מיקום

מקור: Kanazawa, T., et al. שיטות חדשניות למתן תוך-אף בהרדמה באינהלציה להערכת מתן תרופות מהאף למוח. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים מתן תוך-אף של תרופות עם תווית רדיו בעכבר מורדם כדי להשיג העברת תרופות מהאף למוח. הוא מסביר כיצד תרופות חוצות את אפיתל האף ונעות דרך מסלולים עצביים כדי להגיע למוח, כמו גם כיצד תנועת הריסים משפיעה על שימור ופינוי תרופות. בנוסף, הסרטון מתאר שיטת קנולציה הפוכה חלופית, הכוללת החדרת צינורית דרך הוושט כדי להעביר תרופות כנגד תנועת הריסים, שיפור השמירה ושיפור יעילות ההובלה.

מתן תרופות תוך-אף בעכברים באמצעות פיפטה וקנולציה הפוכה להעברת תרופות מאף למוח

הזרקה היקפית של סיבים-synuclein אלפא לתוך הצפק או הלשון של Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) עכברים, המבטאים אלפא-synuclein אדם עם מוטצית A53T משפחתית בלוציפראז גחלילית, יכול לגרום בנוירופתולוגיה, כולל neuroinflammation , במערכת העצבים המרכזית שלהם.

הדמית פליטת אור של neuroinflammation בעכברים טרנסגניים לאחר היקפיים הרכבה של אלפא-Synuclein סיבים

המטרה של פרוטוקול זה נועד לספק מערכת מבוססת תא משכפל היווצרות של אלפא-synuclein אגרגטים ויוו. תכלילים תאיים אלפא-synuclein הם זרועה בנוירונים הראשי על-ידי הפנמת האמונה, הפצת אקסוגני מנוהל אגרגטים מקורי microsomes-הקשורים אלפא-synuclein מבודד מן העכברים הטרנסגניים חולה אלפא-synuclein.

הממשל אקסוגני של אלפא-synuclein Microsomes-הקשורים אגרגטים כדי נוירונים העיקרי כמודל תא עוצמה היווצרות הסיבים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול באמצעות התקן מיקום העכבר המאפשר את המיקום המתאים של עכברים עבור המינהל intranasal של המוח מיקוד פפטיד-siRNA המאפשר גנים יעילים השתקה במערכת העצבים המרכזית.

מתקן מיקום להצבת עכברים במהלך המסירה Intranasal siRNA למערכת העצבים המרכזית

המטרה של מאמר זה היא לתאר את השלבים הדרושים עבור הדור של סיבים אלפא-synuclein, בקרת איכות הבאים, והשימוש של סיבים מראש בvivo.

דור של אלפא-סינונוקלאומין מראש בנוי ממונמרים והשימוש ב Vivo

פרוטוקול זה מציג את פירוק ריילי כתהליך קל לאירוסול וקטורי mRNA שאינם ויראליים. השקיעה אזורית עבור וקטורי mRNA אירוסוליים מוערכת על ידי מודל כניסת האף האידיאלית של אלברטה (AINI). ביטוי חלבון פלואורסצנציה ירוק (GFP) בתאי ריאה אנושיים מייצג שמירה על תפקודים פיזיקוכימיים וביולוגיים של וקטורי mRNA לאחר אירוסול.

העברה תוך-אפית של פוליפלקסי mRNA באמצעות אירוסולים של פריקת ריילי: שיטה במבחנה לשקיעת אף ובדיקות פונקציונליות

למד טכניקת מתן תוך אפי של אגרגטים α-סינוקלאין במודל עכברים לחקר מחלת פרקינסון. שיטה זו מאפשרת להעריך את התפשטות הפתולוגיה מרירית האף לבלוטת הריח ללא ניתוח.

טכניקה למתן תוך אפי של אגרגטים α-סינוקלאין

גלה סרטונים נוספים