Name: ניטור פעילות חוזרת עשירה בלאוצין המכילה 8 ערוצים (LRRC8/VRAC) באמצעות העברת אנרגיית תהודה של Förster עם פליטה רגישה (SE-FRET) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: למדו ניטור פעילות ערוצי LRRC8 באמצעות SE-FRET בתאי HeLa חיים. שיטה זו מאפשרת מעקב רציף בתגובה לשינויים אוסמוטיים וחושפת מנגנוני ויסות תאיים חשובים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>שיטה מבוססת FRET לניטור פעילות ערוץ LRRC8 ללא אלקטרופיזיולוגיה

תעלות יונים המורכבות מהטרומרים של חלבונים חוזרים עשירים בלאוצין המכילים 8 (LRRC8) חלבונים ממשפחת בעלי החוליות נמצאות בכל תאי חולייתנים, ומשתתפות במגוון רחב של תפקודים פיזיולוגיים 1,2. ערוצי LRRC8 אלה, שזוהו לראשונה כערוצי אניון מווסתים עוצמת קול (VRACs) או ערוצי תיקון חיצוניים רגישים לעוצמת הקול (VSOR), ממלאים תפקיד מכריע בהפחתת נפח הבקרה התאית 3,4. הם מאפשרים גירוש של יוני כלוריד ואוסמוליטים אורגניים, אשר ואחריו זרם מים בתגובה לנפיחות אוסמוטית. מעבר לתפקידם בתגובת עקה אוסמוטית, תפקידם בוויסות נפח התא נקשר להתרבות ונדידת תאים, אפופטוזיס, ספרמיוגנזה ושלמות אפיתל 5,6,7. שינוי פוטנציאל הממברנה בעת הפעלת LRRC8/VRAC הוכח כתורם להתמיינות מיוצינור8 ולהפרשת אינסולין על ידי תאי β הלבלב 9,10,11. יתר על כן, תעלות LRRC8 מוליכות מגוון אוסמוליטים אורגניים כגון מולקולות איתות פורינרגיות ATP ו-cGAMP או חומצת האמינו המעוררת גלוטמט, וממקמות תעלות אלה בתקשורת תא-תא במערכת החיסון או באינטראקציה גליה-נוירון 12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22. אפילו קסנוביוטים, כגון הצבע פלואורסצאין, האנטיביוטיקה בלסטיצידין S או התרופה האנטי-סרטנית ציספלטין, מבוצעים על ידי תעלות LRRC8 23,24,25.
ישנם דיווחים רבים על העברת האות המוביל להפעלת LRRC8/VRAC 26,27,28. עם זאת, המנגנון עדיין אינו ברור, והספרות מציגה מגוון רחב של מנגנונים אפשריים שעשויים להיות תלויים בתהליך הפיזיולוגי הספציפי. אלה כוללים שינויים בחוזק היונים הציטוסוליים, אינטראקציה עם השלד הציטוסולי, הרכב הממברנה, חלבוני G, מצב החיזור ומפל הזרחן 2,27,29,30,31.
ערוצי LRRC8/VRAC מכילים את LRRC8A כתת-יחידה חיונית 3,4 שחייבת להתמזג עם לפחות אחד מהפרלוגים שלה, LRRC8B-E, כדי ליצור ערוצים פונקציונליים פיזיולוגית 4,14,32. הרכב תת-היחידות קובע תכונות ביופיזיקליות של התעלה, כגון אי-הפעלה תלוית תיקון ודפולריזציה 4,29,32,33,34, ספציפיות המצע 15,17,20,21,24,35, וכמה מסלולי הפעלה36,37. מבני מיקרוסקופ קריו-אלקטרונים (cryo-EM) מראים כי הומומרים LRRC8A, כמו גם הטרומרים, מתאספים כהקסמרים38,39,40, בעוד שכימרות LRRC8A/LRRC8C היוצרות תעלות פונקציונליות הן הפטמרים41. החלק N-terminal של כל חלבוני LRRC8 מורכב מארבעה סלילים טרנסממברנליים, והחלק C-terminal מכיל תחום עם חזרות עשירות בלאוצין (LRRD). המבנים המורכבים הזמינים של LRRC8 מספקים ראיות לכך שה-LRRDs, המשתרעים לתוך הציטוזול 3,4,23, עשויים לעבור סידורים מחדש קונפורמטיביים במהלך תעלות 34,42,43. רעיון זה מאושש על ידי הממצא כי היתוך C-terminal של חלבונים פלואורסצנטיים גורם לפעילות תעלת הבסיס14 וכי קשירה של ננו-גופים לתחומים יכולה לווסת את פעילות הערוץ44. יתר על כן, שינויים קונפורמטיביים של C-termini הודגמו על ידי העברת אנרגיית תהודה תוך מורכבת של Förster (FRET)45.
השיטה הנפוצה ביותר לחקר פעילות תעלות היונים היא מדידות אלקטרופיזיולוגיות46, אשר יושמו בהרחבה בחקר VRACs לפני זיהויים המולקולרי47. עם זאת, ישנן דרכים שונות נוספות לנטר את פעילות VRAC באופן עקיף, כולל מדידת המצע המוליך שלו - יוני הליד או אוסמוליטים אורגניים - או השפעתו על נפח התא48. למעשה, הזיהוי של חלבוני LRRC8 כ-VRAC הסתמך על בדיקה המבוססת על מרווה של חלבון פלואורסצנטי רגיש להליד49 על ידי כניסת יודיד לתא דרך VRACsמופעלים 3,4. שיטה נוספת לניטור פעילות ערוץ LRRC8/VRAC עושה שימוש בתנועה של התחומים הציטוסוליים שניתן לראות, כמו בתעלות יונים אחרות 50,51,52,53, על ידי שינויים ב-FRET 45. לשם כך, חלבונים פלואורסצנטיים המשמשים כזוגות FET, כגון חלבון ציאן-פלואורסצנטי (CFP)/mCerulean3 כתורם וחלבון צהוב-פלואורסצנטי (YFP)/mVenus כמקבל, אוחדו ל-C-termini של חלבוני LRRC8 (איור 1). FRET תוך-מורכב בין תת-יחידות LRRC8 הוכח בניסויי פוטו-הלבנה45. הימנעות משיטת ההלבנה ההרסנית, שינויי FRET לאורך זמן נוטרו על ידי FRET (SE-FRET), כאשר בעצם נמדדת הפליטה הרגישה של המקבל בעת עירור התורם עקב חפיפה של ספקטרום הפליטה של התורם עם ספקטרום העירור של המקבל. יישום היפוטוניות חוץ-תאית, גירוי להפעלת LRRC8/VRAC, הביא לירידה הפיכה בעוצמת SE-FRET45. חשוב לציין, מדידות סימולטניות של מהדק טלאי על תאים שלמים וניטור FRET במהלך טיפול היפוטוני הראו כי ירידה זו ב- FRET אכן שיקפה את הפעלת LRRC8/VRAC45. שיטה זו, המונעת שיבוש קרום הפלזמה או שינוי הסביבה התוך-תאית על ידי תמיסת פיפטה, מציעה חלופה לניטור פעילות LRRC8/VRAC. הוא שימושי במיוחד בסביבות פיזיולוגיות שבהן שמירה על הציטוזול המקומי היא חיונית, יש צורך ברזולוציה תת-תאית, או נדרשת תצפית ממושכת על פעילות הערוץ.
כאן, אנו מציגים פרוטוקול לחקר LRRC8/VRAC עם קריאה מבוססת FRET. הפרוטוקול מתאר כיצד לטפל ולהדביק תאים, לרכוש תמונות דגימה ובקרה, לנתח את הנתונים ולחשב ערכי FRET (SE-FRET) של פליטה רגישה.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66953/66953fig01v2.jpg"> 
איור 1: סכמה של מערכת הזוג LRRC8 FET. mCerulean3 מוצג בציאן, ו-mVenus מוצג בצהוב. לאחר פתיחת VRAC, המרחק (ו / או הכיוון המרחבי) בין הפלואורופורים משתנה, וכתוצאה מכך העברת אנרגיה מופחתת בין תורם (דון) ומקבל (Acc), ובתורו, מורידה את FRET שנצפה. נוצר באמצעות BioRender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66953/66953fig01largev2.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

<table><tbody><tr><td>0.05% Trypsin-EDTA</td><td>gibco</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>מצלמה DFC9000GTC</td><td>Leica</td><td>11547007</td><td></td></tr><tr><td>CFP-18aa-YFP</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Elder et al. 2009 PMCID: PMC2706461; מתנה מאת C.F. קמינסקי (אוניברסיטת קיימברידג', בריטניה)</td></tr><tr><td>ציקלוהקסימיד (CHX)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>66-81-9</td><td></td></tr><tr><td>D(-)-מניטול</td><td>קארל רות'</td><td>4175.1</td><td></td></tr><tr><td>D(+)-גלוקוז</td><td>קארל רוט</td><td>HN06.1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM (מדיום נשר שונה של דולבקו)</td><td>PAN-Biotech</td><td>P04-03590</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (מי מלח מאגר פוספט של דולבקו)</td><td>PAN-Biotech</td><td>P04-36500</td><td></td></tr><tr><td>גלגל מסנן פליטה (460/80, 535/70, 590/50, 642/80, 100%)</td><td>Leica</td><td>11525480</td><td></td></tr><tr><td>FBS (סרום בקר עוברי)</td><td>PAN-Biotech</td><td>P30-3302</td><td></td></tr><tr><td>קוביית סינון CYR71010</td><td>Leica</td><td>11525416</td><td></td></tr><tr><td>FuGENE</td><td>Promega</td><td>E2691</td><td></td></tr><tr><td>Glas תחתון צלחות תרבות 35 מ"מ</td><td>MatTek</td><td>P35G-0-10-C</td><td></td></tr><tr><td>תאי HeLa</td><td>לייבניץ Forschungsinstitut DSMZ</td><td>ACC 57</td><td>קרצינומה של צוואר הרחם של יונקים/ מתקבל ממכון לייבניץ Forschungsinstitut DSMZ</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Carl Roth</td><td>9105.4</td><td></td></tr><tr><td>ibidi &micro;-Disch 35 מ"מ</td><td>ibidi</td><td>81156</td><td></td></tr><tr><td>KCl (אשלגן כלורי)</td><td>Carl Roth</td><td>6781.1</td><td></td></tr><tr><td>LAS X FRET Wizard</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>11640862 מקור אור LED8</td><td>Leica</td><td>11504256</td><td></td></tr><tr><td>LRRC8A-mCerulean3</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>K&ouml; nig et al. 2019</td></tr><tr><td>LRRC8E-mVenus</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>K&ouml; nig et al. 2019</td></tr><tr><td>Luna-II Automated Cell Counter</td><td>logos biosystems</td><td>L40002</td><td></td></tr><tr><td>Luna-II Cell Counter Slides</td><td>logos biosystems</td><td>L12001</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 (מגנזיום כלוריד)</td><td>Carl Roth</td><td>KK36.1</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ THUNDER Imager תא חי</td><td>Leica</td><td>11525681</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (נתרן כלורי)</td><td>קארל רוט</td><td>9263</td><td></td></tr><tr><td>אובייקטיבי HC PL APO 63x/1.40 שמן</td><td>Leica</td><td>11506349</td><td></td></tr><tr><td>Opti-Minimal Essential Medium (MEM)</td><td>gibco</td><td>11058</td><td></td></tr><tr><td>אוסמומטר OM807</td><td>Vogel</td><td>V04807</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין סטרפטומיצין (Pen Step)</td><td>gibco</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>תמיסה כחולה טריפן (0,4%)</td><td>Sigma</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>גורם נמק גידול (TNF)-A</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>94948-59-1</td><td></td></tr><tr><td>מערכת זלוף כבידה מבוקרת שסתומים</td><td>ALA Scientific Instruments</td><td>VC3-4xG</td><td></td></tr></tbody></table>

ניטור פעילות חוזרת עשירה בלאוצין המכילה 8 ערוצים (lrrc8/vrac) באמצעות העברת אנרגיית תהודה של förster עם פליטה רגישה (se-fret)

Monitoring Leucine-Rich Repeat Containing 8 Channel (LRRC8/VRAC) Activity Using Sensitized-Emission F&#246;rster Resonance Energy Transfer (SE-FRET)

בשיטה מבוססת FRET זו, ניתן לנטר את פעילות LRRC8/VRAC במהלך גירוי אוסמוטי, והירידה ב- SE-FRET מתואמת עם מידת ההיפוטוניות החוץ תאית45. תוצאות מייצגות של הפעלת ערוצים הנגרמת על ידי היפוטוניות מוצגות גם כאן (איור 3 ואיור 4). בנוסף, ניתן לצפות בהפעלת LRRC8/VRAC על ידי גירויים איזוסמוטיים שונים, כגון מניפולציה של איתות דיאצילגליצרול45 או במהלך הפעלת מיוציטים56.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66953/66953fig04.jpg"> 
איור 4: עקבות SE-FRET. (A) עקבות SE-FRET לכאורה מ-5 ניסויים בלתי תלויים. הנתונים מייצגים ממוצע ± SD של N = 2 עד N = 7 תאים לכל שדה ראייה (FOV). (B) ממוצע ± SD של כל התאים (N = 31 תאים). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66953/66953fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
מכיוון שתעלות LRRC8/VRAC מעורבות גם בהפחתת נפח אפופטוטי24,57, צפייה בפעילות הערוץ עם השראת אפופטוזיס תהיה יישום נוסף לשיטה המתוארת כאן. בהתאם לכך, פרוטוקול ניטור SE-FRET בתאי HeLa המבטאים LRRC8A-mCerulean3 ו-LRRC8E-mVenus בוצע תוך יישום תרופות הגורמות לאפופטוזיס בתיווך קולטן מוות. גורם נמק הגידול (TNF)-α וציקלוהקסמיד (CHX) הוכחו בעבר כמעוררים זרמי VRAC תוך מספר דקות58. לאחר תוספת של 2 ננוגרם/מ"ל TNF-α ו-1 מיקרוגרם/מ"ל CHX במאגר איזוטוני, חלה ירידה חזקה ב-SE-FRET (איור 5). החלפת החיץ בתווך היפרטוני, אף על פי שהכיל TNF-α ו-CHX, ערכי SE-FRET התאוששו קרוב לקו הבסיס (איור 5A), בהתאמה להפחתת זרמי VRAC בתמיסת אמבטיה היפרטונית במהלך הטיפול בליגנד Fas58 הגורם לאפופטוזיס. הטיפול בתאים עם DMSO, הממס עבור TNF-α ו- CHX, לא הביא להפחתת SE-FRET. TNF-α + CHX לא השפיעו על SE-FRET של CFP-18aa-YFP, מבנה טנדם של EYFP ו-ECFP כבקרת FRET59, מה שמדגים את הספציפיות של LRRC8/VRAC (איור 5B).
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66953/66953fig05v2.jpg"> 
איור 5: הפעלת VRAC איזוסמוטית על-ידי אפופטוזיס בתיווך קולטן מוות. (A) ערכי SE-FRET מנורמלים מתאי HeLa המבטאים LRRC8A-mCer/LRRC8E-mVen (n = 8 מנות, 23 תאים) לאורך זמן. לאחר 15 מחזורים במאגר הדמיה איזוטוני (קו בסיס), פתרון האמבטיה הוחלף בחיץ איזוטוני בתוספת 2 ng/mL TNF-α ו-1 μg/mL cycloheximide (CHX) למשך 30 מחזורים ולאחר מכן 20 מחזורים חיץ הדמיה היפרטוני עם TNF-α ו-CHX. ערך SE-FRET הממוצע הגולמי של כל החזר השקעה ונקודת זמן נורמל לממוצע של הערך הבסיסי (איזוטוני) עבור החזר ההשקעה המתאים. (B) כימות ערכי SE-FRET מנורמלים של תאי HeLa המבטאים LRRC8A/E כמו ב-A עם תמיסה איזוטונית המכילה DMSO כבקרת רכב עבור CHX (n = 5 כלים, 12 תאים) או חיץ איזוטוני המכיל השראות אפופטוזיס כמו ב-A (n = 8 כלים, 23 תאים), או של תאי HeLa המבטאים CFP-18aa-YFP עם השראות אפופטוזיס (n = 3 כלים, 9 תאים). הנתונים מייצגים את הממוצע של 10 נקודות הזמן האחרונות במאגר המתאים של תאים בודדים (סמלים) ואת הממוצע של כל התאים ± SD; ** p &lt; 0.01 ANOVA חד-כיווני רגיל ואחריו מבחן ההשוואה המרובים של Tukey לאחר הוק. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66953/66953fig05largev2.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

ניטור פעילות חוזרת עשירה בלאוצין המכילה 8 ערוצים (LRRC8/VRAC) באמצעות העברת אנרגיית תהודה של Förster עם פליטה רגישה (SE-FRET)

Members of the LRRC8 protein family form heteromeric ion and osmolyte channels with roles in numerous physiological processes. As volume-regulated anion ...

monitoring-leucine-rich-repeat-containing-8-channel-lrrc8vrac

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

אנחנו מדגימים סריג בין polydiacetylene מצומדת פולימר (PDA) וfluorophore מחובר אל פני השטח של כף יד ליפוזומים את החישה של ביומולקולות. יפוזומים PDA הכילו גם מולקולות הקולטן על משטחיהם לביומולקולות כדי לשמש כחלליות. אינטראקציות יגנד רצפטור להוביל לשינויים ביעילות סריג בין fluorophore ומחשבי כף היד, שהוא הבסיס של מנגנון החישה.

ניטור בזמן אמת של אינטראקציות יגנד רצפטור עם פלואורסצנטי תהודת העברת אנרגיה

אנו מתארים כאן שיטת ההעברה השתפרה הארת תהודת אנרגיה (LRET) שבו אנחנו מציגים את אתר מחשוף פרוטאז בין אתרי fluorophore תורם acceptor. שינוי זה מאפשר לנו להשיג אותות LRET ספציפיים הנובעים מחלבונים קרום של עניין, המאפשרים המחקר של חלבונים בממברנה ללא טיהור חלבון.

הארה תהודת אנרגיה העבר לחקר שינויי קונפורמציה בחלבונים בממברנה שבאו לידי ביטוי בתאי יונקים

נכון לעכשיו, רוב מדדי הסידן הזמינים משמשים לכימות מעברי סידן ציטופלזמיים כמדדים עקיפים של סידן המשתחרר מהרטיקולום הסרקופלזמי בתאי שריר חלק מתורבתים. פרוטוקול זה מתאר את השימוש באינדיקטור ספציפי מבוסס FRET המאפשר מדידה ישירה של אותות סידן בתוך לומן הרטיקולום הסרקופלזמי.

מדידת תנודות סידן בתוך הרטיקולום sarcoplasmic של בתאי שריר חלק בתרבית באמצעות מבוססי סריג הדמיה Confocal

המחקר הנוכחי מתאר שיטה פשוטה של גילוי רמות אנדוגני של זרחון Rab10 על ידי לאוצין-עשיר אני חוזר קינאז 2.

Rab10 זיהוי זרחון על-ידי פעילות LRRK2 באמצעות מרחביות-דף עם תג מחייב פוספט

מחקר זה מציג הליך מפורט לביצוע ניסויים של העברת אנרגיה בתהודה פלואורסצנטית של מולקולה בודדת (smFRET) על קולטנים מצומדים לחלבון G (GPCRs) באמצעות תיוג ספציפי לאתר באמצעות שילוב חומצות אמינו לא טבעיות (UAA). הפרוטוקול מספק מדריך שלב אחר שלב להכנת דגימות smFRET, ניסויים וניתוח נתונים.

הדמיה של הדינמיקה הקונפורמציונית של קולטני ממברנה באמצעות FRET של מולקולה בודדת

העברת אנרגיית תהודה פלואורסצנטית (FRET) היא טכניקת הדמיה לאיתור אינטראקציות של חלבונים בתאים חיים. כאן מוצג פרוטוקול FRET כדי לחקור את הקשר של אנזימים משני היסטון עם גורמי שעתוק המגייסים אותם למקדמי היעד לוויסות אפיגנטי של ביטוי גנים ברקמות צמחים.

חקירת אינטראקציות בין אנזימים המשנים היסטון לבין גורמי שעתוק in vivo על ידי העברת אנרגיה בתהודה פלואורסצנטית

אזורים לא מסודרים מהותיים (IDR) הם תחומי חלבון גמישים המשנים את הקונפורמציה שלהם בתגובה לשינויים סביבתיים. Ensemble Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) יכול להעריך את ממדי החלבונים בתנאים שונים. אנו מציגים גישת FRET להערכת רגישות מבנית IDR בתאי Saccharomyces cerevisiae חיים תחת לחץ היפראוסמוטי.

הערכת רגישות מבנית של אזורים לא מסודרים במהותם בתגובה לעקה היפראוסמוטית בתאים חיים באמצעות FRET

פרוטוקול זה מתאר בדיקה מבוססת BRET למדידת האינטראקציות של קינאז CRAF עם 14-3-3 חלבונים בתאים חיים. הפרוטוקול מתאר שלבים להכנת התאים, קריאת פליטות BRET וניתוח נתונים. מוצגת גם תוצאה לדוגמה עם זיהוי בקרות מתאימות ופתרון בעיות עבור מיטוב מבחן.

Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) - בדיקה מבוססת למדידת אינטראקציות של CRAF עם 14-3-3 חלבונים בתאים חיים

אנו מתארים פרוטוקול זמן התגובה. ממפה את התפוצה המרחבית של אנזימטי לפעילות אנזימים המייצרים nicotinatmide אדנין dinucleotide פוספט (NAD(P)H) + H + ישירות בדגימות רקמה.

מיפוי החומרים: פיקוח על פעילות לקטט דהידרוגנאז ישירות בתוך הרקמה

אינטראקציות חלבון-חלבון קריטי עבור מערכות ביולוגיות, מחקרים של קינטיקה איגוד לספק תובנות הדינמיקה והתפקוד של מתחמי חלבון. אנו מתארים שיטה מכמת את הפרמטרים קינטי של חלבון מורכב באמצעות קרינה פלואורסצנטית והעברת אנרגיה תהודה הטכניקה זרימה עצר.

שימוש בהעברת אנרגיה פלורסצנטיות תהודה חוץ גופית ללמוד את הדינמיקה של חלבון מתחמי בקנה מידה הזמן אלפיות השנייה

למדו ניטור פעילות ערוצי LRRC8 באמצעות SE-FRET בתאי HeLa חיים. שיטה זו מאפשרת מעקב רציף בתגובה לשינויים אוסמוטיים וחושפת מנגנוני ויסות תאיים חשובים.

ניטור פעילות חוזרת עשירה בלאוצין המכילה 8 ערוצים (LRRC8/VRAC) באמצעות העברת אנרגיית תהודה של Förster עם פליטה רגישה (SE-FRET)

גלה סרטונים נוספים